तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं और उम्र बढ़ने चूहों भाग 2 पर पसलियों मेयेरी एंथोसायनिन के एंटी-एजिंग प्रभाव

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नार 23M-NSCs के सेन्सेंट फेनोटाइप को बचाता है

आर. मेयर एंथोसायनिन कई प्रकार के फ्लेवोनोइड्स और बायोएक्टिव घटकों में समृद्ध हैं [1,3-5]। यह निर्धारित करने के लिए कि आर। मेयर एंथोसायनिन का कौन सा घटक एंटी-एजिंग में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, हमने आर का मेटाबॉलिक विश्लेषण किया। मेयर एंथोसायनिन। हमने खुलासा किया कि नार एक महत्वपूर्ण फ्लेवोनोइड मेटाबोलाइट हो सकता है क्योंकि फ्लेवोनोइड बायोसिंथेटिक मार्ग आर। मेयर एंथोसायनिन (पूरक तालिका 1) में अत्यधिक समृद्ध था। नार के एंटी-सीनसेंट प्रभावों को निर्धारित करने के लिए, विभिन्न सांद्रता (0, 1.7,3.4,6.8,13.6, और 27.2 ug/mL） को 23M-NSCs पर लागू किया गया था और CCK-8 assays का उपयोग किया गया था। सेल व्यवहार्यता की जांच करें। जैसा कि पूरक चित्रा 3 से पता चलता है, 6.8 यूजी / एमएल नार उपचार ने सेल व्यवहार्यता में 150 प्रतिशत की वृद्धि की। नर के एंटी-सेन्सेंट प्रभावों का और पता लगाने के लिए, 23 एम-एनएससी को नार के साथ इलाज किया गया, और उम्र बढ़ने से संबंधित संकेतकों का पता लगाया गया .हेस्परिडिन का उपयोग करता है23एम-एनएससी में 6.8 कुरूप/एमएल नर के साथ इलाज किया गया, पी16एनके4ए एमआरएनए अभिव्यक्ति कम हो गई (चित्र 3ए)। नर ने सुसंस्कृत एमएनएससी के टेलोमेरेस को भी बढ़ाया और डीएनए संश्लेषण (चित्रा 3बी,3सी) में वृद्धि की। सेल प्रसार पर नार के प्रभावों का और पता लगाने के लिए, हमने Ki67 का इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला प्रदर्शन किया, जो कि जी 0 [19,27] को छोड़कर, पूरे सेल चक्र में व्यक्त किए जाने वाले माइटोटिक कोशिकाओं का एक परमाणु प्रतिजन है। नार एन्हांस्ड सेल प्रसार के साथ उपचार, जैसा कि की 67- सकारात्मक कोशिकाओं (चित्रा 3डी, 3ई) की बढ़ी हुई संख्या द्वारा मापा जाता है। इसके बाद, हमने न्यूरॉन्स में एनएससी की विभेदन क्षमता का भी पता लगाया। वास्तव में, 6.8ug/mL नार उपचार ने MAP2-सकारात्मक कोशिकाओं की संख्या में भी वृद्धि की (चित्र 3एफ,3जी)। ये परिणाम लगातार प्रदर्शित करते हैं कि नार 23M-NSC सेनेसेंस को उलट सकता है।

चित्रा 2. रिब्स मेयर एंथोसायनिन तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (एनएससी) को बढ़ाकर माउस मेमोरी और सीखने की क्षमता को बढ़ाते हैं। (ए) मंच खोजने में समय लगता है। (बी) पहले प्लेटफॉर्म तक पहुंचने में समय लगता है। (सी) मंच खोजने के लिए वेग का मतलब है। (डी) प्लेटफार्म खोजने से पहले दूरी तैर गई। (ई. एफ) आर के साथ उपचार।खोया साम्राज्यप्रत्येक एंथोसायनिन ने नियंत्रणों की तुलना में न्यूरोस्फीयर संख्या और आकार में वृद्धि की। (जी) न्यूरोस्फीयर ओटी 50-100 आकार में चूहों में आर मेयर एंथोसायनिन उपचार द्वारा संख्या में वृद्धि की गई थी। डेटा को तीन स्वतंत्र प्रयोगों के औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। *पी<><0.01, and=""><0.0001 compared="" with="" untreated="" cells."n"="" indicates="" the="" number="" of="" animals="" in="" each="" experimental="">

चित्रा 3. माउस तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (बहुराष्ट्रीय कंपनियों) की बुढ़ापा पर naringenin (Nar) का प्रभाव। (ए) p16k4a mRNA अभिव्यक्ति को 23 एम-एनएससी में क्यूआरटी-पीसीआर द्वारा 48 घंटे के लिए 6.8 कुरूप/एमएल नार के उपचार के साथ और बिना मापा गया था। (बी) 23 एम-एनएससी के सेल चक्र चरण वितरण 48 घंटे और नियंत्रण कोशिकाओं के लिए नार के साथ इलाज किया। (सी) नार उपचार के साथ 23 एम-एनएससी की सापेक्ष टेलोमेयर लंबाई में काफी वृद्धि हुई है, (डी) इम्यूनोफ्लोरेसेंस Ki67 मांसपेशियों का धुंधलापन 48 घंटे के लिए नार के साथ, डीएपीआई परमाणु लेबलिंग के साथ, (ई) की मात्रा का ठहराव (डी), (एफ) प्रतिनिधि नियंत्रण और नार उपचार के बाद सुसंस्कृत mNSCs के MAP2 और GFAPimmunofluorescence धुंधला के क्षेत्र। (जी) (एफ) की मात्रा का ठहराव। डेटा को तीन स्वतंत्र प्रयोगों के औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। *पी<>< 0.01,="" and="">< 0.0001="" compared="" with="" untreated="">

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नर उम्र बढ़ने वाले चूहों में स्मृति और अनुभूति में सुधार करता है

उम्र बढ़ने के साथ संज्ञानात्मक स्तर में गिरावट आती है, और एंटी-एजिंग उपचार संज्ञानात्मक स्तर [11, 28] में सुधार कर सकते हैं। विवो में नार के एंटी-एजिंग प्रभावों को सत्यापित करने के लिए, हमने टेल नस के माध्यम से उम्र बढ़ने वाले C57BL/6 चूहों (12 महीने पुराने) में 20 मिलीग्राम/किलोग्राम नार इंजेक्ट किया। MWM परीक्षण का उपयोग चूहों की स्थानिक स्मृति और संज्ञानात्मक क्षमताओं की जांच के लिए किया गया था।माइक्रोनाइज़्ड शुद्ध फ्लेवोनोइड अंश 1000 मिलीग्राम उपयोगबार-बार प्रशिक्षण के 5 दिनों में, मंच को खोजने के लिए नार-उपचारित उम्र बढ़ने वाले चूहों के लिए लिया गया समय धीरे-धीरे नियंत्रण समूह (चित्रा 4 ए) की तुलना में कम हो गया। परीक्षण के परिणामों से पता चला कि प्लेटफॉर्म तक पहुंचने में लगने वाला समय कम हो गया था (चित्र 4बी), जबकि प्लेटफॉर्म क्षेत्र में बिताया गया समय बढ़ा दिया गया था (चित्र 4सी)। इसके अलावा, नियंत्रण समूह (चित्रा 4डी) की तुलना में मंच क्षेत्र के भीतर नार-उपचारित उम्र बढ़ने वाले चूहों को उच्च आवृत्ति पर देखा गया था। साथ में, ये परिणाम बताते हैं कि नर उम्र बढ़ने वाले चूहों में स्थानिक स्मृति और संज्ञानात्मक क्षमताओं में सुधार कर सकते हैं।

उम्र बढ़ने वाले चूहों से नार-उपचारित रक्त का आरएनए अनुक्रमण विश्लेषण

नार-विशिष्ट एंटी-एजिंग तंत्र की जांच करने के लिए, हमने आरएनए अनुक्रमण (आरएनए-सीक्यू) का उपयोग करके उम्र बढ़ने वाले चूहों से नार-उपचारित रक्त की जीन अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल का विश्लेषण किया। परिणामों से पता चला कि 1,961 विभेदित रूप से व्यक्त जीन (डीईजी) हैं। आम तौर पर, नर डाउनरेगुलेटेड जीन अभिव्यक्ति, और अनुपचारित नियंत्रण समूह (चित्रा 5ए, 5बी) की तुलना में केवल कुछ ही जीनों को विनियमित किया गया था। इसके अतिरिक्त, उम्र बढ़ने से संबंधित महत्वपूर्ण सिग्नलिंग पाथवे जीन को डाउनग्रेड किया गया था, विशेष रूप से टीएनएफ सिग्नलिंग पाथवे (चित्रा 5सी) में।ओटेफ्लेवोनॉयडइन परिणामों का अर्थ है कि नार टीएनएफ सिग्नलिंग मार्ग को प्रभावित करता है, इस प्रकार टीएनएफ-ए के कार्य को गहराई से प्रभावित करता है, जो उम्र बढ़ने से संबंधित संज्ञानात्मक हानि [29, 30] में शामिल है। इसलिए, हमने चूहों के प्लाज्मा में TNF- स्तरों की जांच की। डी इम्युनोसॉरबेंट एसेज़ (एलिसा) एंजाइम से जुड़े परिणाम

चित्रा 4. नारिंगिनिन (नार) उम्र बढ़ने वाले चूहों में स्मृति और सीखने की क्षमता को बढ़ाता है। (ए) नार-उपचारित उम्र बढ़ने वाले चूहों की भागने की विलंबता नियंत्रण समूह की तुलना में कम थी। (बी) पहली बार प्लेटफॉर्म तक पहुंचने में लगने वाला समय नियंत्रण समूह की तुलना में नर-उपचारित उम्र बढ़ने वाले चूहों में कम था। (सी) मंच क्षेत्र में बिताए गए समय की अवधि। (डी) नियंत्रण समूह की तुलना में नार-उपचारित उम्र बढ़ने वाले चूहों के लिए मंच क्षेत्र में देखे जाने की आवृत्ति। डेटा को तीन स्वतंत्र प्रयोगों के औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। * पी<>< 0.01,=""><0.0001 compared="" with="" the="" control="" group."n"="" indicates="" the="" number="" of="" animals="" used="" for="" each="" experimental="" group.="" revealed="" that="" nar="" treatment="" led="" to="" the="" downregulation="" of="" plasma="" tnf-a="" levels="" (figure="" 5d).="" we="" also="" examined="" pl6ink4agene="" expression="" in="" the="" hippocampus="" of="" mice="" and="" demonstrated="" that="" nar="" treatment="" downregulates="" pl6ink4amrna="" expression(figure="">

सिस्टैन्च एंटी-एजिंग कर सकता है

बहस

बुढ़ापा संज्ञानात्मक गिरावट के बढ़ते जोखिम के साथ-साथ सीखने और स्मृति क्षमता [22,23] के नुकसान से जुड़ा है। न्यूरोनल हानि और बिगड़ा हुआ न्यूरोजेनेसिस उम्र से संबंधित मस्तिष्क की शिथिलता [11-13] से निकटता से संबंधित है। इस प्रकार, एंटी-एजिंग उपचार के लिए न्यूरॉन्स की संख्या बढ़ाना और न्यूरोजेनेसिस में सुधार करना महत्वपूर्ण है। आर. मेयर, फ्लेवोनोइड्स और अन्य बायोएक्टिव पदार्थों [1, 3-6] से भरपूर एक पौधा है, जिसके कई कार्य हैं जिनका अभी तक वर्णन नहीं किया गया है। वर्तमान अध्ययन में, आर मेयर एंथोसायनिन ने एनएससी प्रसार को बढ़ावा दिया और एक समान आकारिकी के साथ न्यूरोस्फीयर के गठन में वृद्धि की। आर। मेयर एंथोसायनिन उपचार ने सेलुलर उम्र बढ़ने के फेनोटाइप में भी सुधार किया, आरओएस के कम स्तर और उम्र बढ़ने से संबंधित P16nk4 जीन अभिव्यक्ति, डीएनए संश्लेषण चरण में वृद्धि, और लंबे टेलोमेरेस के साथ।प्यूरिटन विटामिन सीइसके अलावा, इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला परिणामों से पता चला है कि आर मेयर एंथोसायनिन ने न्यूरॉन्स के गठन को प्रेरित किया। इन परिणामों से पता चलता है कि आर. मेयर एंथोसायनिन का mNSCs पर बुढ़ापा रोधी प्रभाव पड़ता है, और यह सीधे इन विट्रो में न्यूरॉन्स के गठन को बढ़ावा दे सकता है। इसके अलावा, संज्ञानात्मक गिरावट उम्र बढ़ने से निकटता से संबंधित है [22, 23]। हमारे एमडब्ल्यूएम परिणामों ने प्रदर्शित किया कि आर मेयर एंथोसायनिन के इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन ने उम्र बढ़ने वाले चूहों में स्थानिक स्मृति और सीखने की क्षमता में सुधार किया, और यह भी बढ़ाया

Figure 5. Tumor necrosis factor(TNF)-a plays an essential role in naringenin (Nar)-mediated anti-aging effects. (A) Summary of gene expressions in mouse blood, as determined by RNA-seq. (B)Heatmap showing differentially expressed genes (DEGs) in the blood between control and Nar-treated mice. DEGs were identified by a fold change of >2.0 या<0.5. (c)bar="" graph="" showing="" the="" major="" correlated="" signaling="" pathways.="" (d)="" heatmap="" showing="" degs="" in="" the="" tnf="" signaling="" pathway="" (e)="" plasma="" tnf-a="" levels="" determined="" by="" enzyme-linked="" immunosorbent="" assay.="" (e)="" p16hka="" gene="" expression="" levels,="" as="" determined="" by="" qrt-pcr.="" data="" are="" presented="" as="" the="" mean="" ±="" sd="" of="" three="" independent=""><><><0.0001 compared="" with="" the="" control="" group.="" nsc="" and="" neuronal="" numbers="" in="" the="" hippocampus="" of="" aging="" mice.="" these="" results="" suggest="" that="" r.="" meyer="" anthocyanins="" may="" enhance="" cognitive="" function="" by="" increasing="" nsc="" proliferation="" and="">

आर मेयर एंथोसायनिन की विशिष्ट संरचना की जांच के लिए चयापचय विश्लेषण के उपयोग से पता चला कि नार एक महत्वपूर्ण फ्लेवोनोइड मेटाबोलाइट हो सकता है। नर को पहले मायोकार्डियल सेल सेनेसेंस [31] को सुधारने, आंतों के मार्ग की चयापचय क्षमता में सुधार [32], और एंटी-इंफ्लेमेटरी [33] और कैंसर-विरोधी [34] प्रभावों को बढ़ाने के लिए सूचित किया गया है। हालाँकि, उम्र बढ़ने के दौरान NSCs पर नार का प्रभाव अज्ञात रहता है। आर. मेयर एंथोसायनिन के एंटी-एजिंग प्रभावों का पता लगाने के लिए, हमने नार का उपयोग करके आगे के अध्ययन किए। 6.8 ug/mL नार के साथ उपचार ने सेल व्यवहार्यता में वृद्धि की, P16ink4a जीन अभिव्यक्ति को कम किया, टेलोमेरेस को लंबा किया, और इन विट्रो में न्यूरॉन्स में एनएससी भेदभाव को बढ़ावा दिया। सेल प्रसार पर नार के प्रभावों का और अधिक आकलन करने के लिए, हमने इम्यूनोफ्लोरेसेंस अध्ययन किया। परिणामों ने संकेत दिया कि नार उपचार ने Ki 67- सकारात्मक कोशिकाओं की संख्या और MAP 2- सकारात्मक कोशिकाओं के अनुपात में वृद्धि की, यह सुझाव देते हुए कि नार न्यूरोजेनेसिस को बढ़ावा दे सकता है। इसके अलावा, उम्र बढ़ने वाले चूहों में सीखने और स्मृति पर नार के प्रभावों का भी मूल्यांकन किया गया था। MWM परीक्षण के परिणामों ने लगातार प्रदर्शित किया कि नार उपचार उम्र बढ़ने वाले चूहों में स्थानिक लीमिंग को बढ़ाता है। दिलचस्प बात यह है कि आरएनए-सीक्यू विश्लेषण से पता चला है कि नर टीएनएफ सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से बुढ़ापा को प्रभावित कर सकता है, विशेष रूप से उम्र बढ़ने वाले चूहों के रक्त में टीएनएफ-एक अभिव्यक्ति को कम करके। एलिसा परीक्षणों ने यह भी संकेत दिया कि नर उपचार ने नियंत्रण उम्र बढ़ने वाले चूहों की तुलना में प्लाज्मा टीएनएफ-ए के स्तर को कम कर दिया। टीएनएफ-ए टीएनएफ सिग्नलिंग मार्ग में एक महत्वपूर्ण कारक है और संज्ञानात्मक उम्र बढ़ने से निकटता से संबंधित है। इसके कार्यों में हिप्पोकैम्पस सिनैप्स [29] में रोग संबंधी परिवर्तनों को बढ़ावा देना और अग्रदूत कोशिका प्रसार [35] का निषेध शामिल है। परिवर्तित TNF स्तर अवसाद, सिज़ोफ्रेनिया, द्विध्रुवी विकार और अल्जाइमर रोग [30,36,37] में संज्ञानात्मक हानि से जुड़े हैं। अधिक विशेष रूप से, टीएनएफ-ए अल्जाइमर रोग [38] के रोगियों में अपग्रेड किया जाता है।

सारांश में, हमारे अध्ययन से पता चलता है कि आर। मेयर एंथोसायनिन नार के माध्यम से एनएससी में उम्र बढ़ने के प्रभावों में सुधार करते हैं, जो विवो में टीएनएफ-ए के स्तर को कम करता है और उम्र बढ़ने वाले चूहों में अनुभूति में सुधार करता है। सामूहिक रूप से, हमारे निष्कर्ष नैदानिक ​​​​उपचार के विकास के लिए एक नई रणनीति प्रदान करते हैं, जिसका उद्देश्य आर.मेयर एंथोसायनिन के औषधीय मूल्य की अधिक से अधिक प्राप्ति है।

सामग्री और तरीके

प्रायोगिक जानवर

इस अध्ययन को तोंगजी विश्वविद्यालय पशु देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया था। आर. मेयर एंथोसायनिन को 2 महीने के लिए इंट्रागैस्ट्रिक रूप से प्रशासित किया गया था 12-महीने के चूहों को C57BL/6 पृष्ठभूमि पर बनाए रखा गया था। नर को 1-महीने से 12- महीने पुराने चूहों को C57BL/6 बैकग्राउंड पर बनाए रखने के लिए दुम की नस में इंजेक्ट किया गया था। नियंत्रण चूहों को फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) की समान मात्रा दी गई थी।

आर मेयर एंथोसायनिन और नारो की तैयारी

आर. मेयर फल(500 ग्राम) को टिश्यू होमोजेनाइज़र का उपयोग करके समरूप बनाया गया था और 0.1 प्रतिशत एचवीड्रोक्लोरिक एसिड युक्त 1 एल मेथनॉल में निलंबित कर दिया गया था। कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए तीन बार अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण किया गया था। अर्क संयुक्त थे, और आर मेयर के अर्क प्राप्त करने के लिए मेथनॉल को कम दबाव में केंद्रित किया गया था। एंथोसायनिन सामग्री को बढ़ाने के लिए अर्क को एबी -8 मैक्रोपोरस राल के साथ शुद्ध किया गया था।

Naringenin(C15H1205; MW:272.25; शुद्धता: 98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर; HPLC ग्रेड) चेंगदू पुश बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (सिचुआन, चीन) से खरीदा गया था और 2 डिग्री {{6 पर संग्रहीत किया गया था। }} बिना प्रकाश के शुष्क वातावरण में डिग्री। डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO) में स्टॉक समाधान की सांद्रता 100 mM थी। अंतिम डीएमएसओ एकाग्रता संस्कृति माध्यम में 0.1 प्रतिशत से अधिक नहीं थी ।

न्यूरोस्फीयर और विभेदन परख

NSCs को माउस SVZ से प्राप्त किया गया था। एनेस्थीसिया के बाद चूहे की बलि दी गई और एसवीजेड को सावधानीपूर्वक विच्छेदित किया गया और 0.4 यू/एमएल पपैन (इमोजेन, अलेक्जेंड्रिया, वीए, यूएसए; कैट नं: LS003126) के साथ एकल कोशिकाओं में अलग कर दिया गया। एनएससी को 10 सेमी व्यंजन में 10 एमएल एनएससी बेसल माध्यम युक्त 10 एनजी / एमएल ईजीएफ (पेप्रोटेक, क्रैनबरी, एनजे, यूएसए; कैट नंबर: एएफ -100-15) और 10 एनजी / एमएल एफजीएफ (पेप्रोटेक, क्रैनबरी, एनजे) में चढ़ाया गया था। , यूएसए; कैट नं: एएफ -100-18बी)। हर 5 दिनों में न्यूरोस्फियर को पारित किया गया। ताजा अलग-अलग मार्ग से NSCs -2 न्यूरोस्फियर को लैमिनिन (गिब्को, गेथर्सबर्ग, एमडी, यूएसए; कैट नंबर: 23017015) और पॉली-एल-ऑर्निथिन हाइड्रोब्रोमाइड (पॉली-एल; सिग्मा एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) पर रखा गया था। ; कैट नं: P3655) - NSCBasalMedium में बिना डिफरेंशियल सप्लीमेंट्स के कोटेड ग्लास स्लाइड्स। टीयू 1 (बीटा-ट्यूबुलिन II; थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए; कैट नंबर: 480011), एमएपी 2 (थर्मो फिशर साइंटिफिक, कैट नंबर: एमए 5-12826), और ग्लियाल फाइब्रिलरी एसिडिक प्रोटीन के लिए विभेदित कोशिकाओं को प्रतिरक्षित किया गया। (जीएफएपी; थर्मो फिशर साइंटिफिक, कैट नं. पीए5-16291), और फिर 4'6-डायमिडीनो-2-फेनिलइंडोल (डीएपीआई; थर्मो फिशर साइंटिफिक, कैट नं: डी1306) के साथ काउंटरस्टैंड किया गया। एक ओलिंप BX53 माइक्रोस्कोप (ओलिंप, मैडिसन, WI, यूएसए) का उपयोग करके स्लाइड्स की जांच की गई। तीन स्वतंत्र प्रयोगों से लेबल वाली कोशिकाओं की गिनती करके टीयूजे 1- और एमएपी 2- सकारात्मक कोशिकाओं की मात्रा का प्रदर्शन किया गया। एक अयुग्मित t -est का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था।

यह लेख www.aging-us.com AGING 2020, वॉल्यूम से निकाला गया है। 12, नंबर 17