अमूर्त

पृष्ठभूमि:प्लेटलेट एकत्रीकरण और उन्नत ग्लाइकेशन अंत उत्पाद (एजीई) और ऑक्सीडेटिव तनाव को हृदय रोगों और मधुमेह संबंधी जटिलताओं के विकास के प्रमुख कारकों के रूप में जाना जाता है। इस संदर्भ में, एंटीऑक्सिडेंट यौगिकों के अच्छे स्रोत फलों और सब्जियों की खपत को बड़े पैमाने पर मनुष्यों को इन बीमारियों से बचाने का एक प्रभावी तरीका बताया गया है। वर्तमान अध्ययन अनार (पुनिका ग्रैनटम एल.) के फूलों (पीएफ), पत्तियों (पीएल), छिलके (पीपी) के रस (पीजे), और बीज के तेल (पीएसओ) की एंटीऑक्सीडेंट, एंटीप्लेटलेट और एंटी-ग्लाइकेशन गतिविधियों के मूल्यांकन पर केंद्रित है। .

सिस्टैंच का ग्लाइकोसाइड हृदय और यकृत के ऊतकों में एसओडी की गतिविधि को भी बढ़ा सकता है, और प्रत्येक ऊतक में लिपोफसिन और एमडीए की सामग्री को काफी कम कर सकता है, विभिन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन रेडिकल्स (ओएच-, एच₂ओ₂, आदि) को प्रभावी ढंग से हटा सकता है और डीएनए क्षति से बचा सकता है। ओएच-रेडिकल्स द्वारा। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में मुक्त कणों की एक मजबूत सफाई क्षमता होती है, विटामिन सी की तुलना में उच्च कम करने की क्षमता होती है, शुक्राणु निलंबन में एसओडी की गतिविधि में सुधार होता है, एमडीए की सामग्री कम होती है, और शुक्राणु झिल्ली समारोह पर एक निश्चित सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड डी-गैलेक्टोज के कारण प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों के एरिथ्रोसाइट्स और फेफड़ों के ऊतकों में एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, साथ ही फेफड़ों और प्लाज्मा में एमडीए और कोलेजन की सामग्री को कम कर सकते हैं और इलास्टिन की सामग्री को बढ़ा सकते हैं। डीपीपीएच पर एक अच्छा सफाई प्रभाव, वृद्ध चूहों में हाइपोक्सिया का समय बढ़ाना, सीरम में एसओडी की गतिविधि में सुधार करना, और प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों में फेफड़ों के शारीरिक अध: पतन में देरी करना, सेलुलर रूपात्मक अध: पतन के साथ, प्रयोगों से पता चला है कि सिस्टैंच में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है और त्वचा की उम्र बढ़ने वाली बीमारियों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए एक दवा बनने की क्षमता रखती है। साथ ही, सिस्टैंच में इचिनाकोसाइड में डीपीपीएच मुक्त कणों को साफ़ करने की एक महत्वपूर्ण क्षमता है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को साफ़ कर सकता है, मुक्त कट्टरपंथी प्रेरित कोलेजन गिरावट को रोक सकता है, और थाइमिन मुक्त कट्टरपंथी आयनों की क्षति पर भी अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ता है।

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तरीकों: एबीटीएस रेडिकल और लिपिड पेरोक्सीडेशन के खिलाफ एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों को मापा गया। बीएसए/राइबोस प्रणाली में एजीई प्रतिदीप्ति तीव्रता के गठन का उपयोग करके एंटीग्लाइकेशन गतिविधि निर्धारित की गई थी। एंटीप्लेटलेट गतिविधि को एडेनोसिन डाइफॉस्फेट (एडीपी), कोलेजन और एराकिडोनिक एसिड (एए) के खिलाफ प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी) में मापा गया था।

परिणाम:पीएफ अर्क ने एबीटीएस और लिपिड पेरोक्सीडेशन के खिलाफ उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रदर्शित की, जिसमें क्रमशः IC5{1}} मान 0.7mg/mL और {{9%).63mg/mL है। एंटी-ग्लाइकेशन गतिविधि के लिए, पीपी, पीएफ और पीएल ने 0.4 मिलीग्राम/एमएल के एजीई-आईसी50 मान के साथ सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में पेंटोसिडाइन जैसे एजीई गठन को मामूली रूप से रोक दिया। पीजे और पीएसओ में कोई एंटी-एजीई प्रभाव नहीं है। सभी अर्क खुराक पर निर्भर तरीके से एक, दो या तीन प्रेरकों के कारण होने वाले प्लेटलेट एकत्रीकरण को चुनिंदा रूप से रोकते हैं। पीएफ तीनों प्रेरकों के कारण होने वाला सबसे शक्तिशाली अवरोधक था, जिसका निरोधात्मक प्रभाव 35.6 से 66.6 प्रतिशत तक था। पीपी और पीजे ने एडीपी और कोलेजन दोनों के खिलाफ एंटीप्लेटलेट प्रभाव प्रदर्शित किया और पीएल और पीएसओ ने केवल एए के खिलाफ।

निष्कर्ष:इन परिणामों से पता चलता है कि कुछ अनार के अर्क इन विट्रो एंटीग्लाइकेशन और एंटीप्लेटलेट गतिविधियों में क्षमता रखते हैं

कीवर्ड:अनार, एंटीप्लेटलेट गतिविधि, उन्नत ग्लाइकेशन अंत-उत्पाद, ऑक्सीडेटिव तनाव, लिपिड पेरोक्सीडेशन

पृष्ठभूमि

अनार (पुनिका ग्रैनटम एल.), व्यापक रूप से एक बहुत शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट फल के रूप में जाना जाता है [1-3]। बताया गया है कि अनार के रस की एंटीऑक्सीडेंट शक्ति रेड वाइन या ग्रीन टी की तुलना में 3- गुना अधिक है [4] और संतरे के रस की तुलना में 8- गुना अधिक है [5]। इसके अलावा, एक प्राकृतिक फल जिस पर काफी शोध चल रहा है वह है अनार और इसके घटक जिनमें मजबूत जैविक गतिविधि और औषधीय महत्व बताया गया है। अनार का रस, छिलका, बीज का तेल, पत्तियां और फूलों के अर्क में इन विट्रो के साथ-साथ इन विवो एंटीडायबिटिक [6], एंटी-इंफ्लेमेटरी [7], एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-ओबेसिटी [8] और एंटीट्यूमर प्रभाव पाए जाते हैं। 9]. ये लाभकारी प्रभाव बहुत उच्च स्तर के एंटीऑक्सिडेंट जैसे पॉलीफेनोलिक यौगिकों की उपस्थिति से संबंधित हैं, जिनमें हाइड्रोलाइज़ेबल टैनिन, एंथोसायनिन और फ्लेवोनोल्स शामिल हैं [10]। अनार के मधुमेह विरोधी प्रभावों पर हमारे पिछले अध्ययनों में, परिणाम अनार के अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभावों को उजागर करते हैं और दर्शाते हैं कि अनार का दीर्घकालिक सेवन एचएफडी (उच्च वसा उच्च फ्रुक्टोज आहार) प्रेरित इंसुलिन की रोकथाम के लिए एक संभावित वैकल्पिक रणनीति हो सकता है। प्रतिरोध और ऑक्सीडेटिव तनाव [6, 11]। अनार के रस, पत्तियों और छिलके के सेवन से फास्ट प्लाज्मा ग्लूकोज और इंसुलिन के स्तर में उल्लेखनीय कमी आई। नतीजतन, इंसुलिन प्रतिरोध को मापने के लिए उपयोग किया जाने वाला इंसुलिन प्रतिरोध का होमोस्टैटिक सूचकांक (एचओएमए-आईआर) क्रमशः कम हो गया था, जो इंसुलिन संवेदनशीलता में महत्वपूर्ण सुधार का संकेत देता है।

इस संदर्भ में, हमने सबसे ज्ञात मधुमेह जटिलताओं जैसे प्लेटलेट एकत्रीकरण और उन्नत ग्लाइकेशन अंत उत्पादों (एजीई) के खिलाफ अनार के अर्क के प्रभाव का मूल्यांकन करने का प्रयास किया, जिन्हें मधुमेह और उम्र बढ़ने की प्रगति के साथ सहसंबद्ध बताया गया है [12, 13] . मधुमेह, हृदय रोग और इस्केमिक स्ट्रोक [14, 15] जैसे तीव्र संवहनी एथेरोथ्रोम्बोटिक रोगों के इलाज की रणनीति के रूप में प्लेटलेट फ़ंक्शन के निषेध को लंबे समय से अपनाया गया है। उन्नत ग्लाइकेशन अंत उत्पाद (एजीई) मधुमेह संबंधी जटिलताओं जैसे डायबिटिक रेटिनोपैथी, न्यूरोपैथी और नेफ्रोपैथी [16] के बड़े जोखिम से जुड़े हैं। इसके अलावा, एजीई गठन [17] या प्लेटलेट एकत्रीकरण [18] पर अनार के पेड़ के विभिन्न हिस्सों के निरोधात्मक प्रभाव पर कुछ रिपोर्टें जारी की गई हैं। इस कार्य में, हमने अनार के रस (पीजे), छिलके (पीपी), फूल (पीएफ), पत्तियों (पीएल), और बीज के तेल (पीएसओ) की एंटी-एजीई और एंटीप्लेटलेट क्षमताओं और कुछ एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों की इन विट्रो में जांच की।

तरीकों

पौधों की सामग्री और निष्कर्षण

ट्यूनीशिया के महदिया क्षेत्र से अक्टूबर 2021 में टौंसी अनार के पेड़ों से पत्तियां और फल तोड़े गए थे। विविधता की प्रामाणिकता की पुष्टि बागवानी विभाग, उच्च कृषि विज्ञान संस्थान, चॉट-मेरिम (सॉसे विश्वविद्यालय, ट्यूनीशिया) के टैक्सोनोमिस्ट डॉ. फेटेन ज़ौए द्वारा की गई थी, और एक वाउचर नमूना गेब्स और चॉट-मैरीम में डुप्लिकेट में बनाए गए हमारे राष्ट्रीय संग्रह में जमा किया गया था। (Sousse), कोड 'TNl, TN2, TN3, TN5, TN5' के साथ।

अनार का अर्क हमारे पिछले अध्ययन [11] में वर्णित अनुसार तैयार किया गया था। फलों को हाथ से धोया और छीला गया। एरिल्स को एक वाणिज्यिक ब्लेंडर (मौलीनेक्स, फ्रांस) का उपयोग करके निचोड़ा गया था। निकाले गए रस को 15000 आरपीएम पर 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। फिर सतह पर तैरनेवाला को पुनः प्राप्त किया गया और लियोफिलाइज़ किया गया। पत्तियों, फूलों और फलों के छिलके को 48 घंटों के लिए अंधेरे में मेथनॉल (MeOH) 50 ग्राम / 250 मिलीलीटर के साथ सुखाया गया, पाउडर बनाया गया और निकाला गया। प्रत्येक अर्क को व्हाटमैन नंबर 42 फिल्टर पेपर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था और 45 डिग्री पर वैक्यूम के तहत एक रोटरी बाष्पीकरणकर्ता (हीडॉल्फ, जर्मनी) का उपयोग करके सूखने के लिए वाष्पित किया गया था और आगे के निर्धारण के लिए -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था। अनार के दानों को सुखाकर पाउडर बना लिया गया। सॉक्सलेट विधि से तेल निकाला जाता था। कमरे के तापमान पर 6 घंटे के लिए 200 मिलीलीटर हेक्सेन के साथ लगभग 30 ग्राम बीज निकाले गए। विलायक को 40 डिग्री पर वाष्पीकरण द्वारा हटा दिया गया और तेल को नाइट्रोजन धारा के साथ प्रवाहित किया गया और सीलबंद ट्यूबों में -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

एबीटीएस रैडिकल स्केवेंजिंग परख

एबीटीएस (2,2′-कैसिनो-बीआईएस (3-एथिलबेनजोथियाजोलिन-6-सल्फोनिक एसिड) परख द्वारा अनार के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को पिछली विधि [19] का उपयोग करके मापा गया था। संक्षेप में, एबीटीएस• प्लस रेडिकल ABTS स्टॉक सॉल्यूशन (5mM) को पोटेशियम परसल्फेट (K2S2O8) सॉल्यूशन (2.7mM) के साथ प्रतिक्रिया करके समाधान तैयार किया गया था। एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के मूल्यांकन के लिए, ABTS• प्लस सॉल्यूशन को फॉस्फेट बफर (20mM) के साथ पतला किया गया था। पीएच 7.4) 660nm पर 0.700±0.020 का अवशोषण प्राप्त करने के लिए। दस, ABTS• प्लस घोल को विभिन्न सांद्रता में तैयार अनार के अर्क के साथ मिलाया गया था। ऊष्मायन के बाद, अवशोषण 734nm पर मापा गया था। एस्कॉर्बिक एसिड का उपयोग किया गया था सकारात्मक नियंत्रण के रूप में। ABTS• प्लस रेडिकल के निषेध का प्रतिशत निम्नलिखित सूत्र के साथ गणना की गई थी:

एककंट्रोल नमूने के बजाय शुद्ध MeOH युक्त समाधान को संदर्भित करता है, और एक नमूना अनार के अर्क युक्त समाधानों के अवशोषण को संदर्भित करता है। अवशोषण को कम करने के लिए नमूने की प्रभावी सांद्रता आवश्यक है एबीटीएस• प्लस 50 प्रतिशत (ईसी50) निर्धारित किया गया था।

फेरिक थायोसाइनेट विधि का उपयोग करके लिपिड पेरोक्सीडेशन

अनार के अर्क द्वारा लिपिड पेरोक्सीडेशन के निषेध की जांच पिछली प्रक्रिया [20] के अनुसार की गई थी। लिनोलिक एसिड (LA) का उपयोग लिपिड मैट्रिक्स के रूप में और 2,2′-एज़ोबिस (2-मिथाइलप्रोपियोनामिडाइन) डाइहाइड्रोक्लोराइड (AAPH) का उपयोग मुक्त रेडिकल सर्जक के रूप में किया गया था। प्रत्येक अनार के अर्क की अलग-अलग सांद्रता तैयार की गई। प्रत्येक सांद्रता को 1.3 प्रतिशत (w/v) मेथनॉलिक LA और 0.2M फॉस्फेट बफर (pH 7.0) के साथ मिलाया गया था और फॉस्फेट बफर में AAPH समाधान (55.3mM) जोड़कर पेरोक्सीडेशन शुरू किया गया था। नियंत्रण समाधान नमूने के बजाय शुद्ध MeOH जोड़कर तैयार किया गया था। अंधेरे में 24 घंटे तक 50 डिग्री पर ऊष्मायन के बाद, प्रतिक्रिया मिश्रण को 3:1 (v/v) H2O-MeOH घोल में घोल दिया गया। दस, NH4SCN का 10 प्रतिशत जलीय घोल और 3.5 प्रतिशत HCl में 20 mM FeCl2 मिलाया गया। कमरे के तापमान पर 3 मिनट के ऊष्मायन के बाद, संबंधित रिक्त स्थान के मुकाबले अवशोषण को 546 एनएम पर मापा गया था। एस्कॉर्बिक एसिड का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। परिणाम लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किए गए हैं:

एकनियंत्रणनमूने के बजाय शुद्ध MeOH युक्त समाधान को संदर्भित करता है, और एक नमूना तेल युक्त समाधानों के अवशोषण को संदर्भित करता है। Te EC50 निर्धारित किया गया था।

उन्नत ग्लाइकेशन अंत-उत्पाद निषेध परख

पेंटोसिडाइन-जैसे एजीई गठन और ईसी 5 0 मूल्यों का निषेध सेरो एट अल द्वारा पहले वर्णित विधि का उपयोग करके निर्धारित और गणना की गई थी। 2013, थोड़े से संशोधन के साथ [21]। संक्षेप में, बीएसए (10 मिलीग्राम/एमएल) को पीएच 7.4 (NaN3, 0.02 प्रतिशत) पर 50 मिमी फॉस्फेट बफर में परीक्षण किए गए अर्क के साथ डी-राइबोस (0.5M) के साथ जोड़ा गया था। एजीई प्रतिदीप्ति माप से पहले एक बंद प्रणाली में 24 घंटों के लिए 37 डिग्री पर अच्छी तरह से माइक्रोटिटर प्लेटों में समाधानों को ऊष्मायन किया गया था। उसी बीएसए (10 मिलीग्राम/एमएल) और परीक्षणित अर्क स्थितियों के तहत ऊष्मायन से उत्पन्न प्रतिदीप्ति को प्रत्येक माप के लिए घटाया गया था। पेंटोसिडाइन जैसा (λexc 335nm, λem 385nm) AGEs प्रतिदीप्ति को माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफ्लोरोमीटर का उपयोग करके मापा गया था। प्रत्येक अर्क सांद्रता के लिए AGEs गठन के प्रतिशत की गणना निम्नानुसार की गई और EC50 मान निर्धारित किए गए:

AGEs ( प्रतिशत )=[प्रतिदीप्ति तीव्रता (नमूना) - प्रतिदीप्ति तीव्रता (नमूने का रिक्त)] ∗100/[प्रतिदीप्ति तीव्रता (नियंत्रण) - प्रतिदीप्ति तीव्रता (नियंत्रण का रिक्त)]

एंटी-प्लेटलेट एकत्रीकरण गतिविधि का इन विट्रो मूल्यांकन

ताजा रक्त स्वस्थ स्वयंसेवकों से प्राप्त किया गया था, जिनके पास दवाओं, पेय पदार्थों या खाद्य पदार्थों के सेवन का नकारात्मक इतिहास था जो कम से कम 10 दिनों तक एकत्रीकरण को प्रभावित कर सकते थे और अधिमानतः रात भर उपवास करना चाहिए था क्योंकि काइलोमाइक्रोन की उपस्थिति भी एकत्रीकरण पैटर्न को परेशान कर सकती है। अध्ययन को ट्यूनीशिया के स्फ़ैक्स के यूनिवर्सिटी हॉस्पिटल हेडी चकर की स्थानीय आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।

शिरापरक रक्त को ट्राइसोडियम साइट्रेट 109mM युक्त एक प्लास्टिक ट्यूब में एकत्र किया गया था। पीआरपी को कमरे के तापमान पर 200×जी पर 12 मिनट तक सेंट्रीफ्यूज करके प्राप्त किया गया था। पीआरपी को लाल कोशिकाओं या बफी कोट के साथ संदूषण से बचने के लिए सावधानीपूर्वक हटा दिया गया था, और परीक्षण होने तक कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया गया था। पीआरपी तैयार करने के 3 घंटे के भीतर सभी परीक्षण पूरे हो जाने चाहिए। प्लेटलेट-खराब प्लाज्मा (पीपीपी) प्राप्त करने के लिए शेष रक्त को 20 मिनट के लिए 2000×g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। हमने एकत्रीकरण एजेंटों के एक स्क्रीनिंग पैनल का उपयोग किया: एडेनोसिन 5′-डिफॉस्फेट (एडीपी, 20μM), कोलेजन (5ug/mL), और एराकिडोनिक एसिड (2mM)।

पीआरपी और पीपीपी का उपयोग एग्रीगोमीटर में क्रमशः 0 और 100 प्रतिशत प्रकाश संचरण सेट करने के लिए किया गया था। एगोनिस्ट जोड़ने के बाद कम से कम 5 मिनट तक प्लेटलेट एकत्रीकरण की निगरानी की गई।

अनार के पत्तों (पीएल), फूलों (पीएफ), रस (पीजे), और छिलके (पीपी) के अर्क के लिए, डीएमएसओ में भंग किए गए प्रत्येक अर्क के लिए अलग-अलग सांद्रता पहले तैयार की गई थी ({0}} पर। 05 प्रतिशत अंतिम एकाग्रता)। पीएसओ के लिए, विभिन्न सांद्रता को 70 प्रतिशत पॉलीथीन ग्लाइकोल (पीईजी) में भंग कर दिया गया था जो कि पानी-अघुलनशील यौगिकों को भंग करने के लिए विवो में व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला विलायक है। प्रत्येक अर्क के दस माइक्रोलीटर को 260μL नियंत्रण पीआरपी में जोड़ा गया था, और फिर मिश्रण को एगोनिस्ट जोड़ने से पहले 37 डिग्री पर कम से कम 5 मिनट (30 मिनट तक) के लिए ऊष्मायन किया गया था। दस कोलेजन (5ug/mL), AA (2mM), या ADP (20μmol/L) मिलाया गया और 5 मिनट तक प्लेटलेट आकार में बदलाव और एकत्रीकरण की निगरानी की गई। डीएमएसओ (0.5 प्रतिशत वी/वी) का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था और एस्पिरिन का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

D=परीक्षण यौगिकों की उपस्थिति में प्लेटलेट एकत्रीकरण

S=एक विलायक की उपस्थिति में प्लेटलेट एकत्रीकरण।

प्लेटलेट एकत्रीकरण निरोधात्मक गतिविधि को अकेले वाहन (डीएमएसओ या पीईजी) के लिए मापी गई तुलना में प्रतिशत निषेध के रूप में व्यक्त किया गया था। प्रत्येक नमूने को तीन प्रतियों में मापा गया और डेटा को माध्य±एसडी के रूप में प्रस्तुत किया गया है। प्लेटलेट एकत्रीकरण (EC50) के 50 प्रतिशत निषेध के लिए आवश्यक प्रभावी सांद्रता के मान कम से कम तीन निर्धारणों से प्राप्त किए गए थे।

सांख्यिकीय विश्लेषण

परिणाम कम से कम तीन स्वतंत्र मापों के माध्य के रूप में व्यक्त किए गए थे, जब तक कि मानक विचलन की सूचना नहीं दी गई हो (मतलब ± एसडी) और एसपीएसएस वर् का उपयोग करके विश्लेषण नहीं किया गया हो। 21.0, व्यावसायिक संस्करण। एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों के लिए, 5 प्रतिशत संभाव्यता स्तर (पी) पर मुख्य प्रभावों के महत्व का अनुमान लगाने के लिए डंकन के परीक्षण का उपयोग किया गया था<0.05).

परिणाम और चर्चा

अनार के अर्क के एंटीऑक्सीडेंट गुण

अनार के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट क्षमताओं को एबीटीएस और लिपिड पेरोक्सीडेशन परख द्वारा मापा गया था। परिणामों को तालिका 1 में संक्षेपित किया गया था और EC50 मान के रूप में व्यक्त किया गया था। निचला EC5{{10}} उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का संकेत देता है। यह पाया गया कि अर्क अपने एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव के मामले में एक दूसरे से भिन्न होते हैं। उदाहरण के लिए, पीएफ ने 0.7 मिलीग्राम/एमएल के ईसी50 मूल्यों के साथ एबीटीएस के खिलाफ उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रदर्शित की, जो मानक एस्कॉर्बिक एसिड से भी बेहतर है, जिसका आईसी50 1.4 मिलीग्राम/एमएल था। पीएफ ने लिपिड पेरोक्सीडेशन परख (0.63 मिलीग्राम/एमएल) के लिए दूसरा सबसे कम ईसी50 दिखाया, जो मानक एस्कॉर्बिक एसिड (0.52 मिलीग्राम/एमएल) से थोड़ा बड़ा है, हालांकि, यह अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था (पी <0.05)। पीपी अर्क के बाद पीएल और पीजे अर्क मुक्त रेडिकल एबीटीएस को प्रभावी ढंग से कम कर सकते हैं। लिपिड पेरोक्सीडेशन परीक्षणों में भी यही क्रम पाया गया। हालाँकि, पीएसओ ने इन विट्रो परीक्षण दोनों में सबसे कमजोर एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का प्रदर्शन किया। यह बताया गया है कि फेनोलिक सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के बीच एक स्थापित संबंध है [22]। हमारे पिछले अध्ययन [23] में, हमने अनार के फूलों, पत्तियों, छिलके और रस की फेनोलिक सामग्री का अध्ययन किया और हमने उनकी कम करने वाली शक्ति और एंटी-डीपीपीएच गतिविधि की तुलना की। नतीजे बताते हैं कि सभी अंगों में प्रभावी कम करने की शक्ति और एंटीरेडिकल गतिविधि भी थी। फूल और पत्तियां फिनोल से भरपूर थीं और सबसे मजबूत एंटीऑक्सीडेंट साबित हुईं।

अनार के अर्क की एंटी-एजीई क्षमताएं

The anti-glycation capacities of pomegranate extracts evaluated by their inhibition of the formation of global fluorescent AGEs in the BSA/ribose system are depicted in Fig. 1 and Table 2. PP, PF, and PL extracts demonstrated a dose-response inhibition of the pentosidine-like AGEs formation (Fig. 1) with an AGE-EC50 value of 0.4mg/ml  (Table 2). This anti-AGEs capacity is considered moderate compared to that exhibited by Aminoguanidine (AGEEC50; 0.16-0.17mg/mL) and weak compared to Rutoside trihydrate (AGE-EC50; 0.05mg/mL). However, results show that PJ and PSO haven't any anti-AGE effect (AGEEC50; >1एमजी/एमएल)। एक डबल-ब्लाइंड अध्ययन में, सोहराब (2015) ने निष्कर्ष निकाला कि अनार (पुनिका ग्रैनटम) का रस लिपिड पेरोक्सीडेशन को कम करता है, लेकिन टाइप 2 मधुमेह वाले वयस्कों में प्लाज्मा उन्नत ग्लाइकेटेड अंत-उत्पादों पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है [24]। अनार के रस के संबंध में हमारे परिणाम लियू (2014) द्वारा रिपोर्ट किए गए कुछ पिछले निष्कर्षों के अनुरूप नहीं हैं, जिन्होंने पाया कि अनार के फल का अर्क (पीएफई) शक्तिशाली एंटी-ग्लाइकेशन गतिविधि दिखाता है [25]। विभिन्न अनार के अर्क की एंटी-ग्लाइकेशन गतिविधि को उनके फेनोलिक घटकों के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। कुमागाई (2015) ने दिखाया कि इन विट्रो में ग्लूकोज, फ्रुक्टोज और ग्लिसराल्डिहाइड के साथ बीएसए से प्राप्त एजीई गठन को अनार के फल के अर्क पीएफई और इसके फेनोलिक घटकों जैसे कि प्यूनिकलिन, प्यूनिकलागिन, एलाजिक एसिड और गैलिक के अतिरिक्त एकाग्रता-निर्भरता से दबा दिया गया था। अम्ल [17].

अनार के अर्क की एंटीप्लेटलेट गतिविधि

अनार के हिस्सों का मूल्यांकन शक्तिशाली एकत्रीकरण प्रेरकों के रूप में एडीपी, कोलेजन और एए द्वारा प्रेरित मानव पीआरपी के प्लेटलेट एकत्रीकरण को रोकने की उनकी क्षमता के लिए किया गया था। तालिका 3 विभिन्न सांद्रता में विभिन्न अर्क और एस्पिरिन के निरोधात्मक प्रभावों को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में दिखाती है और तालिका 4 में अनार के अर्क या यौगिकों के EC50 मूल्यों को तीन मापों के औसत मूल्यों के साथ सारांशित किया गया है। सभी अर्क खुराक पर निर्भर तरीके से एक, दो या तीन प्रेरकों के कारण होने वाले प्लेटलेट एकत्रीकरण को चुनिंदा रूप से रोकते हैं।

फूलों का अर्क तीनों प्रेरकों के कारण होने वाले प्लेटलेट एकत्रीकरण का सबसे शक्तिशाली अवरोधक पाया गया, जिसका निरोधात्मक प्रभाव 3.5 मिलीग्राम/एमएल पर 35.6 से 66.6 प्रतिशत तक था। यह 2.8 मिलीग्राम/एमएल के ईसी50 मान के साथ कोलेजन-प्रेरित प्लेटलेट एकत्रीकरण के खिलाफ सक्रिय था, फिर 3.85 मिलीग्राम/एमएल के ईसी5{{19%) मान के साथ एए-प्रेरित प्लेटलेट एकत्रीकरण के खिलाफ और 4 के साथ सक्रिय था। जब एडीपी द्वारा एकत्रीकरण को उत्तेजित किया गया तो {15}} मिलीग्राम/एमएल। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में एस्पिरिन की तुलना में, पीएफ, पीपी और पीजे में कोलेजन से प्रेरित एकत्रीकरण के खिलाफ निरोधात्मक प्रभाव होते हैं। हालाँकि, एस्पिरिन ने क्रमशः 0.42 और 0.66 मिलीग्राम/एमएल के ईसी50 के साथ एए और एडीपी द्वारा प्रेरित एकत्रीकरण को रोक दिया लेकिन कोलेजन के खिलाफ कोई प्रभाव नहीं पाया गया। इस अध्ययन और हमारे पिछले अध्ययन में [23], पीपी, पीएल और पीजे की तुलना में पीएफ को डीपीपीएच रेडिकल, एबीटीएस रेडिकल और लिपिड पेरोक्सीडेशन के खिलाफ सबसे अधिक एंटीऑक्सीडेंट अनार का हिस्सा पाया गया है। यह निष्कर्ष यह समझा सकता है कि इसीलिए पीएफ प्लेटलेट एकत्रीकरण का सबसे अच्छा अवरोधक था। इसके अलावा, पीएफ मुख्य रूप से हाइड्रोलाइज्ड टैनिन (एलागिटैनिन) और घुलनशील आहार फाइबर (30.2 प्रतिशत) सहित फिनोल (16.6 प्रतिशत) से समृद्ध है [26]। हाइड्रोलाइज्ड टैनिन को पहले प्लेटलेट फ़ंक्शन को बाधित करने में बहुत प्रभावी दिखाया गया है [18]। दूसरी ओर, आहार फाइबर की एंटीप्लेटलेट गतिविधि अनिश्चित थी [27, 28]। इसलिए, हमने अनुमान लगाया कि पीएफ की शक्तिशाली और बहु-लक्षित एंटीप्लेटलेट गतिविधि को हाइड्रोलाइज्ड टैनिन, इस अंग में पाए जाने वाले प्रमुख फिनोल के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।

पीपी और पीजे ने एडीपी और कोलेजन-प्रेरित प्लेटलेट एकत्रीकरण दोनों के खिलाफ अवरोधक प्रभाव प्रदर्शित किया। हालाँकि, जब एए का उपयोग एगोनिस्ट के रूप में किया गया तो दोनों अर्क का कोई प्रभाव नहीं दिखा। हमारे परिणाम मैटिएलो एट अल., 2009 द्वारा की गई खोज की पुष्टि नहीं करते हैं जो बताते हैं कि दोनों अर्क एए [18] के प्रति प्लेटलेट प्रतिक्रिया को रोकते हैं। EC50 मूल्यों की तुलना से पता चला कि पीपी ने पीजे की तुलना में एडीपी और कोलेजन-प्रेरित प्लेटलेट एकत्रीकरण को अधिक कुशलता से कम कर दिया।

दोनों अर्क के बीच निरोधात्मक प्रभाव में अंतर को एंटीऑक्सीडेंट क्षमता में अंतर से समझाया जा सकता है। इस अध्ययन में एबीटीएस रेडिकल और लिपिड पेरोक्सीडेशन के खिलाफ और डीपीपीएच रेडिकल और कम करने वाली शक्ति [23] के खिलाफ पीपी पीजे की तुलना में अधिक शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट था। यह स्पष्टीकरण पिछली कुछ रिपोर्टों से असंगत था जिसमें बताया गया था कि फलों की एंटीप्लेटलेट क्षमता उनकी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि से असंबंधित या विपरीत प्रतीत होती है [29, 30]। पीएल और पीएसओ केवल एडीपी-ट्रिगर प्लेटलेट एकत्रीकरण को रोकने में सक्षम थे, जबकि कोलेजन और एए को एगोनिस्ट के रूप में उपयोग किए जाने पर वे प्रभावी नहीं थे।

निष्कर्ष

निष्कर्ष में, अनार के फूल, पत्तियां और छिलके प्रोटीन ग्लाइकेशन और प्लेटलेट एकत्रीकरण पर इन विट्रो निरोधात्मक प्रभाव डालते हैं। इन प्रभावों को अनार के कई सक्रिय यौगिकों के एंटीऑक्सीडेंट गुणों के लिए जिम्मेदार ठहराया गया था। हालाँकि, प्राकृतिक AGE अवरोधक के रूप में प्रस्तावित होने से पहले, इन परिणामों की पुष्टि करने और इसकी क्रिया के तंत्र की गहरी समझ प्राप्त करने के लिए और अधिक शोध आवश्यक है। एंटीऑक्सीडेंट गुण? अनार में सक्रिय यौगिक संभावित रूप से/इन गुणों में योगदान करते हैं।

लघुरूप

एए: एराकिडोनिक एसिड; AAPH: 2,2′-एज़ोबिस (2-मिथाइलप्रोपियोनामिडाइन) डाइहाइड्रोक्लोराइड; एबीटीएस: 2,2′-कैसीनो-बीआईएस (3-एथिलबेनजोथियाज़ोलिन-6-सल्फोनिक एसिड; एडीपी: एडेनोसिन डिपोस्फेट (एडीपी); एजीई: उन्नत ग्लाइकेशन अंत उत्पाद; बीएसए: बोविन सीरम एल्ब्यूमिन; डीएमएसओ: डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड ; FeCl2: फेरस क्लोराइड; HCl: क्लोरहाइड्रिक एसिड; HFD: उच्च वसा उच्च फ्रुक्टोज आहार; K2S2O8: पोटेशियम परसल्फेट समाधान; LA: लिनोलिक एसिड; MeOH: मेथनॉल; NaN3: सोडियम एजाइड; NH4SCN: अमोनियम थायोसाइनेट; PEG: पॉलीइथाइलीन ग्लाइकोल; PRP : प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा; पीपीपी: प्लेटलेट खराब प्लाज्मा।

स्वीकृतियाँ

संयंत्र दिशानिर्देश वक्तव्य

विविधता की प्रामाणिकता की पुष्टि बागवानी विभाग, उच्च कृषि विज्ञान संस्थान, चॉट-मेरिम (सॉसे विश्वविद्यालय, ट्यूनीशिया) के टैक्सोनोमिस्ट डॉ. फातेन ज़ौए द्वारा की गई थी, और एक वाउचर नमूना गेब्स और चॉट-मैरीम में दो प्रतियों में बनाए गए हमारे राष्ट्रीय संग्रह में जमा किया गया था। (सूसे), कोड 'TNl, TN2, TN3, TN5, TN5' के साथ। अध्ययन प्रासंगिक संस्थागत, राष्ट्रीय और अंतर्राष्ट्रीय दिशानिर्देशों और कानून का अनुपालन करता है, और पुनिका ग्रैनटम एल को इकट्ठा करने की अनुमति क्षेत्रीय अनुसंधान केंद्र से प्राप्त की गई थी। बागवानी और जैविक चॉट-मैरीम, आईआरईएसए-सोसे विश्वविद्यालय, 8.पी.57-4042, ट्यूनीशिया।

लेखकों का योगदान

जेडए और आईए; कार्यप्रणाली, जेडए; और आईए; सॉफ़्टवेयर, AZ, और RC; सत्यापन, संसाधन, ZA; लेखन-मूल मसौदा तैयार करना, जेजी; पर्यवेक्षण, एमएच, और एसएच; लेखन-समीक्षा और संपादन। सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और उससे सहमत हैं।

अनुदान

इस कार्य को उच्च शिक्षा और वैज्ञानिक अनुसंधान-ट्यूनीशिया मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

डेटा और सामग्री की उपलब्धता

वर्तमान अध्ययन के दौरान उत्पन्न और/या विश्लेषण किए गए डेटासेट उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक से उपलब्ध हैं।

घोषणाओं

भाग लेने के लिए नैतिकता अनुमोदन और सहमति

इस अध्ययन को ट्यूनीशिया के स्फ़ैक्स के यूनिवर्सिटी हॉस्पिटल हेडी चकर की स्थानीय आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। सभी प्रयोग प्रासंगिक दिशानिर्देशों और विनियमों के अनुसार किए गए। सभी विषयों और/या उनके कानूनी अभिभावकों से सूचित सहमति प्राप्त की गई थी।

प्रकाशन हेतु सहमति

लागू नहीं।

प्रतिस्पर्धी रुचियां

लेखक किसी प्रकार के हित संघर्ष की घोषणा नहीं करते।

लेखक विवरण

1 जैव रसायन प्रयोगशाला, LR12ES05 "पोषण- कार्यात्मक खाद्य पदार्थ और संवहनी स्वास्थ्य", चिकित्सा संकाय, मोनास्टिर विश्वविद्यालय, 5019 मोनास्टिर, ट्यूनीशिया। 2 सेंटर रीजनल डी ट्रांसफ्यूजन सेंगुइन डी स्फ़ैक्स, रूट एल-ऐन किमी 0.5, सीपी 3003 एसफ़ैक्स, ट्यूनीशिया।

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प्रकाशक का नोट 

स्प्रिंगर नेचर प्रकाशित मानचित्रों और संस्थागत संबद्धताओं में क्षेत्राधिकार संबंधी दावों के बारे में तटस्थ रहता है।

【अधिक जानकारी के लिए: david.deng@wecistanche.com / व्हाट्सएप:86 13632399501】