टीएनबीसी भाग 2 में इम्यूनोथेरेपी को बढ़ावा देने के लिए एप्टैमर-आधारित रणनीतियाँ

इसके अलावा, aptamers कई रासायनिक संशोधनों को सहन करते हैं जो जैविक वातावरण में लक्ष्यीकरण प्रभावकारिता, फार्माकोकाइनेटिक प्रोफ़ाइल और स्थिरता में सुधार करते हैं, जो उनके इन विवो अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक हैं [47]। जैसा कि अन्यत्र बड़े पैमाने पर समीक्षा की गई है [27,48], सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले संशोधनों को aptamers पर लागू किया गया है, या तो SELEX के दौरान या SELEX के बाद, न्यूक्लीज़ के खिलाफ अपने प्रतिरोध को बढ़ाने के लिए शामिल हैं (चित्र 3): 2 0 - OH समूहों का प्रतिस्थापन फ्लोरो, मेथॉक्सी, थिओल या अमीनो समूहों के साथ राइबोज; कैपिंग या ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स का चक्र समाप्त होता है; फॉस्फोडिएस्टर बैकबोन का फॉस्फोरोथियोएट बैकबोन के साथ प्रतिस्थापन; और बंद न्यूक्लिक एसिड की शुरूआत। इसके अलावा, एल-एप्टैमर्स, जिन्हें स्पीगेलमर्स कहा जाता है, उत्पन्न किए जा सकते हैं जो न्यूक्लियस द्वारा मान्यता प्राप्त नहीं हैं क्योंकि वे प्राकृतिक न्यूक्लिक एसिड के एंटीनिओमर हैं। छोटे आकार के aptamers के तेजी से गुर्दे के निस्पंदन को दूर करने के लिए रासायनिक संशोधन भी लागू किए जाते हैं, जैसे कि पॉलीइथाइलीन ग्लाइकॉल (PEG) या कोलेस्ट्रॉल जैसे भारी अणुओं को संयुग्मित करके, इस प्रकार लक्ष्य तक पहुंच को प्रभावित किए बिना उनके संचलन समय को बढ़ाते हैं। संयोजन चिकित्सा में माध्यमिक चिकित्सीय के साथ रासायनिक रूप से संयुग्मित aptamers के लिए परिष्कृत दृष्टिकोण भी विकसित किए गए हैं, और दिलचस्प बात यह है कि aptamer अणु में विदेशी रासायनिक समूहों को उनकी कार्यक्षमता बढ़ाने और न्यूक्लिक एसिड में रासायनिक विविधता की कमी को दूर करने के लिए नवीन रणनीतियों का पता लगाया गया है [49] ]।

Nucleases उन एंजाइमों को संदर्भित करता है जो आरएनए या डीएनए की हाइड्रोलिसिस प्रतिक्रिया को तेज कर सकते हैं और जैविक कार्यों की एक विस्तृत श्रृंखला हो सकती है। प्रतिरक्षा प्रणाली में, वायरल संक्रमणों को पहचानने और साफ़ करने के लिए न्यूक्लीज़ महत्वपूर्ण उपकरण हैं। वायरस एक कोशिका को संक्रमित करने के बाद, यह आरएनए या डीएनए को कोशिका में छोड़ देगा। इन न्यूक्लिक एसिड अणुओं को संक्रमित कोशिका के न्यूक्लियस द्वारा पहचाना और हाइड्रोलाइज़ किया जाएगा, जिससे वायरस प्रतिकृति और संक्रमण के प्रसार को रोका जा सकेगा।

इसके अलावा, न्यूक्लीज़ जन्मजात और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के नियमन में भी शामिल हैं। न्यूक्लियस आरएनए या डीएनए की गिरावट और स्थिरता को विनियमित करके जीन अभिव्यक्ति के स्तर को नियंत्रित कर सकते हैं। प्रतिरक्षा कोशिकाओं में, न्यूक्लीज़ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं जैसे एपोप्टोसिस, एंटीजन प्रस्तुति और टी-सेल भेदभाव को नियंत्रित करते हैं।

कुल मिलाकर, न्यूक्लीज़ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, वायरल संक्रमण को पहचानते हैं, जीन अभिव्यक्ति को संशोधित करते हैं, और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को संशोधित करते हैं। इस प्रकार, प्रतिरक्षा पर प्रभाव के लिए कई तंत्र मौजूद हैं। इस दृष्टि से रोग प्रतिरोधक क्षमता में सुधार पर ध्यान देना आवश्यक है। धनिया रोग प्रतिरोधक क्षमता को बढ़ाता है। Cistanche विभिन्न एंटीऑक्सीडेंट पदार्थों, जैसे विटामिन सी, विटामिन सी, कैरोटीनॉयड आदि से भरपूर होता है। ये तत्व मुक्त कणों को हटा सकते हैं, ऑक्सीडेटिव तनाव को कम कर सकते हैं और प्रतिरक्षा में सुधार कर सकते हैं। प्रतिरक्षा प्रणाली प्रतिरोध।

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बाध्यकारी आत्मीयता में सुधार करने के लिए एक और रणनीति, लक्ष्य चयनात्मकता, और aptamers की विवो जैवउपलब्धता में धीमी-बंद-दर संशोधित aptamers (SOMAmers) की पीढ़ी द्वारा प्रतिनिधित्व किया जाता है। ये डीएनए एप्टामर्स हैं जो रासायनिक रूप से संशोधित न्यूक्लियोटाइड्स को सहन करते हैं 5- यूरिडीन की स्थिति में सक्रिय होते हैं जो न केवल लक्ष्य प्रोटीन के साथ बातचीत में भाग ले सकते हैं बल्कि नए माध्यमिक और तृतीयक संरचनात्मक रूपांकनों का भी निर्माण करते हैं जो लक्ष्यों के प्रदर्शनों की सूची को बहुत बढ़ाते हैं। aptamers [50] के लिए।

आज तक, एक बड़े पैमाने पर रासायनिक रूप से संशोधित aptamer (Macugen नाम), संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर के isoform 165 को लक्षित करता है, उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन के उपचार के लिए अनुमोदित किया गया है, और ग्यारह aptamers विभिन्न मानव रोगों के उपचार के लिए नैदानिक ​​परीक्षणों में हैं। [51,52]। उनमें से, एंटी-न्यूक्लियोलिन AS1411 aptamer और एंटी-स्ट्रोमल सेल-व्युत्पन्न कारक 1 NOX-A12 aptamer पहले ही कैंसर थेरेपी के लिए चरण II नैदानिक ​​परीक्षण पूरा कर चुके हैं। इसके अलावा, एंटी-प्रोटीन टाइरोसिन किनेज -7 Sgc8 DNA aptamer, जिसे 68 Ga के साथ लेबल किया गया है, कोलोरेक्टल रोगियों (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03385148) में इसके नैदानिक ​​मूल्य का आकलन करने के लिए प्रारंभिक चरण I में है।

3. टीएनबीसी उपचार के लिए एप्टैमर-आधारित प्रतिरक्षा रणनीतियाँ

कैंसर कोशिकाओं में आनुवंशिक और एपिजेनेटिक म्यूटेशन कई ट्यूमर से जुड़े एंटीजन की उपस्थिति की ओर ले जाते हैं जिन्हें आईएस स्वयं के रूप में पहचानता है और इसलिए, उत्परिवर्तित कोशिकाओं को नष्ट कर देता है। हालांकि, यह सर्वविदित है कि कैंसर कोशिकाएं प्रतिरक्षा विनाश से बचने और आसपास के सूक्ष्म पर्यावरण को अपने पक्ष में बदलने के लिए कई तंत्र विकसित करती हैं जिसके परिणामस्वरूप ट्यूमर का विकास, आक्रमण और मेटास्टेसिस (53 55] होता है।

कैंसर इम्यूनोथेरेपी का लक्ष्य उन तंत्रों पर काबू पाने के द्वारा कैंसर कोशिकाओं का पता लगाने और नष्ट करने की आईएस की क्षमता को बढ़ाना या पुनर्स्थापित करना है जिससे ट्यूमर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से बच जाते हैं और दबा देते हैं। TNBC में एक एंटीट्यूमर स्थिति की ओर पुनर्स्थापित करने के लिए पिछले कुछ वर्षों में हड़ताली aptamer- आधारित रणनीतियों का विकास किया गया है। जैसा कि बढ़ते साक्ष्य के नीचे चर्चा की गई है, एप्टामर की प्रतिरक्षा कोशिकाओं की साइटोटोक्सिक गतिविधि को प्रबल करने, प्रतिरक्षा चौकियों को अवरुद्ध करने, या कैंसर कोशिकाओं के लिए प्रतिरक्षा कोशिकाओं की भर्ती करने की क्षमता दर्शाती है (चित्र 4)।

3.1। ट्यूमर-घुसपैठ लिम्फोसाइट्स

टीएनबीसी माइक्रोएन्वायरमेंट में प्रमुख प्रकार की प्रतिरक्षा कोशिकाएं टीआईएल हैं, और उनकी उपस्थिति शुरुआती चरण के अनुपचारित ट्यूमर [56] वाले रोगियों में बेहतर उत्तरजीविता परिणामों से महत्वपूर्ण रूप से जुड़ी हुई है। टीआईएल में सभी सीडी3 प्लस टी कोशिकाएं शामिल हैं, जो ट्यूमर के विनाश (सीडी8 प्लस साइटोटॉक्सिक टी कोशिकाएं) और एक एंटीट्यूमर प्रतिक्रिया (सीडी4 प्लस टी-हेल्पर 1) को बढ़ावा दे सकती हैं या फोर्कहेड बॉक्स पी3 (सीडी4 प्लस टी-हेल्पर 2) सहित एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (सीडी4 प्लस टी-हेल्पर 2) को सीमित कर सकती हैं। FOXP3), सीडी 4 प्लस नियामक टी कोशिकाएं)।

हाल ही में, झाओ एट अल। एक मूल रणनीति प्रस्तावित की जो कैंसर इम्यूनोथेरेपी [59] में उन्नत एंटीट्यूमर प्रतिक्रिया के लिए "सुपर-साइटोटॉक्सिक टी लिम्फोसाइट" बनाने के लिए एप्टामर्स की लक्ष्यीकरण क्षमता का शोषण करती है। उन्होंने एसिड-डिग्रेडेबल मेटल-ऑर्गेनिक-आधारित और लाइसोसोम-टारगेटिंग नैनोकणों को उत्पन्न किया जो पेर्फोरिन और ग्रैनजाइम बी से भरे हुए थे, सीडी8 प्लस टी कोशिकाओं के लाइसोसोम में निहित दो एंटीट्यूमर टॉक्सिन्स, और लाइसोसोम पर सीडी63 रिसेप्टर को लक्षित करने वाले एप्टैमर के साथ कार्यात्मक। Ca2 प्लस नैनो प्लेटफॉर्म पर जमा किया गया था ताकि इसकी जैव-अनुकूलता और स्थिरता में सुधार किया जा सके और टॉक्सिन गतिविधि को प्रबल किया जा सके। सीडी8 प्लस टी कोशिकाओं के लाइसोसोम की साइटोटॉक्सिक सामग्री को समृद्ध करने के लिए लेखक इस तरह के एप्टामर-निर्देशित प्लेटफॉर्म (एलवाईएस-एनपी नाम) का उपयोग करने में सफल रहे।

जब TNBC 4T1 माउस मॉडल में परीक्षण किया गया, तो T कोशिकाओं ने संसाधित 4T 1- विशिष्ट एंटीजन के साथ प्रचार किया और LYS-NPs द्वारा पुनर्संयोजित किया और लाइसोसोमल सामग्री को इम्यूनोलॉजिकल सिनैप्स में जारी किया, जिससे एक मजबूत एंटीट्यूमर रिएक्शन (चित्र 4) शुरू हो गया। प्रस्तावित aptamer- आधारित इम्यूनोथेरेपी में ठोस ट्यूमर के लिए टी सेल इम्यूनोथेरेपी में महत्वपूर्ण चुनौतियों को दूर करने की काफी क्षमता है, जो मुख्य रूप से मजबूत इम्यूनोसप्रेसेरिव सिग्नल द्वारा दर्शाए जाते हैं, जो कम टी सेल सक्रियण को प्रेरित करते हैं और साइटोटॉक्सिक प्रोटीन [60] के संश्लेषण और रिलीज को कम करते हैं।

3.2। इम्यून चेकपॉइंट-एक्सप्रेसिंग सेल

अलात्रश के समूह ने बताया कि TNBC रोगियों में PD-L1 जीन की अभिव्यक्ति गैर-TNBC (19) की तुलना में काफी अधिक है। PD-L1, प्रमुख ट्यूमर सेल से जुड़े प्रतिरक्षा चौकियों में से एक है, जो विभिन्न प्रकार की प्रतिरक्षा कोशिकाओं में व्यक्त किया जाता है। , जैसे कि मैक्रोफेज, कुछ सक्रिय टी कोशिकाएं, बी कोशिकाएं, और कई ठोस ट्यूमर कोशिकाओं में, जिनमें बीसी कोशिकाएं भी शामिल हैं। इसका रिसेप्टर ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन पीडी -1, टीआईएल, एनके कोशिकाओं, मैक्रोफेज की झिल्ली सतह पर व्यक्त किया गया है, वृक्ष के समान कोशिकाएं, और मोनोसाइट्स [61] पीडी-एल 1 और पीडी -1 के बीच बाध्यकारी सीडी 8 प्लस टीआईएल के अवरोध का कारण बनता है, जिससे उन्हें एक एनर्जिक रूप में बदल दिया जाता है और इसके परिणामस्वरूप कैंसर प्रतिरक्षा चोरी होती है।

इसके अलावा, PD-1/PD-L1 अक्ष ट्यूमर कोशिकाओं के भीतर विभिन्न प्रोलिफेरेटिव और सर्वाइवल सिग्नलिंग पाथवे जैसे PI3K/AKT, MAPK, और JAK/STAT [62] को नियंत्रित करता है, और, बहुत महत्वपूर्ण, TNBC में, सक्रियण इस धुरी के उपकला-मेसेनचिमल संक्रमण (ईएमटी) को बढ़ावा देता है, अत्यधिक आक्रामक और मेटास्टैटिक ट्यूमर [63] से जुड़ा एक फेनोटाइप।

पीडी -1/पीडी-एल1 प्रभावों (चित्र 5) को वापस लाने के लिए टीएनबीसी में विभिन्न एप्टामर-आधारित दृष्टिकोणों का वर्तमान में पता लगाया जा रहा है।

चित्र 5. TNBC में PD-1/PD-L1 अक्ष को ब्लॉक करने के लिए aptamer-आधारित रणनीतियों का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। (ए) टीएनबीसी एपटामर-सजाए गए नैनोकणों को एंटी-पीडी-एल1 सीआरएनए से लोड किया गया है; (बी) एंटी-सीडी44 और एंटीपीडी-एल1 एप्टामर-डेकोरेटेड लिपोसोम्स डॉक्सोरूबिसिन और एंटी-आईडीओ1 सीआरएनए दोनों से भरे हुए हैं; (c) पैक्लिटैक्सेल से संयुग्मित एंटीपीडी-एल1 एपटामर; (डी) एंटी-ईजीएफआर एप्टैमर सहसंयोजक एंटी-पीडी-एल1 या एंटी-सीटीएलए -4 एमएबी से जुड़ा हुआ है (विवरण के लिए टेक्स्ट देखें)। BioRender.com के साथ बनाया गया (2 मार्च 2023 को एक्सेस किया गया)।

इस संदर्भ में, हमारे समूह ने पहली बार TNBC [64] में Gint4.T नाम के एक एंटी-प्लेटलेट-व्युत्पन्न वृद्धि कारक रिसेप्टर (PDGFR ) aptamer के साथ एक एंटी-PD-L1 mAb के बीच एक संयोजन की जांच की। Gint4.T एक न्यूक्लियस-प्रतिरोधी 20 -फ्लोरोपाइरीमिडीन्स (20F-Py) RNA aptamer है जो TNBC कोशिकाओं [65], और TNBC TME घटकों सहित विभिन्न मानव कैंसर कोशिकाओं की सतह पर व्यक्त PDGFR को बांधता और रोकता है। मेसेनकाइमल स्टेम सेल [66], और टी सेल [64]। दिलचस्प बात यह है कि जब TNBC 4T1 सिन्जेनिक चूहों में अंतःशिरा में इंजेक्ट किया जाता है, तो aptamer ट्यूमर कोशिकाओं और TME घटकों [64] दोनों पर कार्य करके ट्यूमर के विकास और फेफड़े के मेटास्टेस के गठन को रोकने में एंटीपीडी-एल1 mAbs के प्रभाव को दृढ़ता से प्रबल करता है।

इसके अलावा, PDGFR और PD-L1 की संयुक्त नाकाबंदी FOXP3 प्लस Treg कोशिकाओं की कमी और CD8 प्लस T कोशिकाओं और ग्रैनजाइम B में एकल मोनोथेरापी की तुलना में लगातार वृद्धि का कारण बनती है। ये परिणाम Gint4.T aptamer से सहसंयोजक रूप से जुड़े एक एंटी-पीडी-एल1 एंटीबॉडी से युक्त एक विशिष्ट इम्यूनोकोनजुगेट के निर्माण की नींव रखते हैं, इस प्रकार संयोजन चिकित्सा की प्रभावशीलता को अनुकूलित करते हैं। एंटी-एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर रिसेप्टर (EGFR) 20F-Py RNA aptamer को इम्युनोमॉड्यूलेटर्स एंटी-PD-L1 (10_12) [67] या एंटी-CTLA -4 (ipilimumab) से जोड़कर सहसंयोजक द्वारा प्राप्त विशिष्ट निर्माण [68] mAbs Passariello et al द्वारा उत्पन्न किए गए थे। और माता-पिता दोनों मौकों के जैविक कार्यों को बनाए रखने के लिए साबित हुआ, इस प्रकार बीसी कोशिकाओं के खिलाफ एक शक्तिशाली साइटोटॉक्सिक गतिविधि को बढ़ाता है।

PD-L1 लक्ष्यीकरण के लिए PD-L1 mAbs के लिए एक वैकल्पिक रणनीति जीन साइलेंसिंग के माध्यम से PD-L1 के दमन द्वारा प्रस्तुत की जाती है, जिसमें mAbs-आधारित उपचारों की कुछ आवर्ती बाधाओं को दूर करने की क्षमता होती है, जैसे कि उनका समय और लागत -उत्पादन की खपत, इम्यूनोजेनेसिटी की संभावना और कम स्थिरता। इसके अलावा, यह रणनीति साइटोप्लाज्मिक पीडी-एल1 [69] की आंतरिक प्रो-ट्यूमरजेनिक भूमिका को अवरुद्ध करने की अनुमति देती है, इसके बजाय, एंटीबॉडी द्वारा पहुंच योग्य नहीं है। अपने चरम पर कार्यात्मक समूहों के साथ कैंसर-कोशिका-लक्ष्यीकरण aptamers को संश्लेषित करने की संभावना, नैनो वैक्टर के संयुग्मन की अनुमति देता है, विशेष रूप से ट्यूमर, छोटे-हस्तक्षेप करने वाले आरएनए (siRNA) कार्गो, नैनो वेक्टर में लोड करने के लिए एक हड़ताली दृष्टिकोण है। , इस प्रकार न्यूक्लीज़ के लिए siRNAs की भेद्यता और लक्ष्य कोशिकाओं में प्रवेश करने में उनकी अक्षमता पर काबू पाना। हाल ही में, पॉली (लैक्टिक-को-ग्लाइकोलिक)-ब्लॉक-पीईजी (पीएलजीएबी-पीईजी)-आधारित नैनोकणों को एंटी-पीडी-एल1 सीआरएनए के साथ लोड किया गया है और विशेष रूप से टीएनबीसी कोशिकाओं में बाइंड और आंतरिक करने में सक्षम 20एफ-पीई आरएनए एप्टैमर के साथ सजाया गया है। [70,71]।

परिणामी aptamer-संयुग्मित नैनो वैक्टर, TNBC कोशिकाओं पर 90 मिनट ऊष्मायन पर, लक्ष्य कोशिकाओं में siRNA को कुशलता से वितरित करते हैं, जो PD-L1 अभिव्यक्ति [72] के लगभग पूर्ण दमन का कारण बनने में सक्षम था। विशेष रूप से, aptamer-सजाए गए नैनोकैरियर्स एनपी की सतह पर विभिन्न लिगेंड को जोड़ने की संभावना प्रदान करते हैं, इस प्रकार लक्ष्यीकरण की विशिष्टता को बढ़ाते हैं, और एनपी में कई चिकित्सीय को एनकैप्सुलेट करते हैं, इस प्रकार प्रभावोत्पादक संयुक्त उपचारों की अनुमति देते हैं। उदाहरण के लिए, PLGA पॉलीमेरिक नैनोकणों द्वारा सिस्प्लैटिन [40] और siPD-L1 [72] का सहवर्ती प्रशासन, जिसे हम TNBC aptamers से लैस करते हैं, न केवल विषाक्त दुष्प्रभावों में कमी को बढ़ावा दे सकते हैं बल्कि सिस्प्लैटिन के रिपोर्ट किए गए नकारात्मक प्रभाव का प्रतिकार भी कर सकते हैं। PD-L1 प्लस इम्यून इवेसिव TNBC कोशिकाओं [73] के संवर्धन पर प्रशासन।

इस संबंध में किम एट अल। टीएनबीसी [74] में सिनर्जिस्टिक कीमोइम्यूनोथेरेपी के लिए नैनो वैक्टर के अंदर लिपोसोम्स की बाहरी सतह पर संयुग्मित दो डीएनए एप्टामर्स वाले एक बहुक्रियाशील नैनोसिस्टम को तैयार किया। विशेष रूप से, उन्होंने टीएनबीसी कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए, पहले से चयनित एंटी-सीडी44 [75] और एंटी-पीडी-एल1 [76] डीएनए एप्टामर्स का इस्तेमाल किया, प्रत्येक थिओल-संशोधित और थिओल-मेलिमाइड द्वारा पेगीलेटेड-डीएसपीई मिसेलस के मैनिमाइड समूहों के लिए सहसंयोजक संयुग्मित रसायन विज्ञान। नैनोसाइज्ड लिपोसोम डॉक्सोरूबिसिन और सीआरएनए दोनों से भरे हुए थे, जो आईडीओ1 की अभिव्यक्ति में हस्तक्षेप करते हैं, एक प्रोटीन जो इम्यूनोसप्रेसेरिव टीएमई का समर्थन करता है और डॉक्सोरूबिसिन उपचार द्वारा अपग्रेड किया जाता है। जब TNBC 4T1 ट्यूमर-एक्सनोग्राफ़्ट चूहों में अंतःशिरा में इंजेक्ट किया जाता है, तो नैनो वैक्टर ने ट्यूमर के विकास को दृढ़ता से कम कर दिया और कैंसर-सेल-लक्षित इम्युनोजेनिक सेल डेथ इंडक्शन और इम्यूनोसप्रेशन के उत्क्रमण [74] को सहक्रियात्मक रूप से जोड़कर मेटास्टेसिस गठन को रोक दिया।

हाल ही में, अलग-अलग PD-L1 aptamers उत्पन्न किए गए हैं और फेफड़े, यकृत, और कोलन ट्यूमर माउस मॉडल में स्टैंड-अलोन प्रतिपक्षी, द्विविशिष्ट संयुग्म, और चिकित्सीय के वितरण एजेंट के रूप में परीक्षण किए गए हैं, जो एंटी-PD-L1 एंटीबॉडी के समान हस्तक्षेप करते हैं। PD-L1 (तालिका 2) को अवरुद्ध करके PD-1/PD-L1 अक्ष। XQ-P3 नाम का एक aptamer, PD-L1 ओवरएक्सप्रेसिंग MDA-MB -231 कोशिकाओं पर सकारात्मक चयन द्वारा उत्पन्न किया गया है, जो PD-L1 नॉकआउट सेल का उपयोग करके प्रतिचयन [77] के लिए किया गया है। यहां तक ​​​​कि अगर अभी तक विवो में परीक्षण नहीं किया गया है, तो यह पीडी -1 के साथ बातचीत को अवरुद्ध करके और टी सेल फ़ंक्शन को बहाल करके टीएनबीसी एमडीए-एमबी -231 कोशिकाओं और प्रतिरक्षा जर्कैट कोशिकाओं की सह-संस्कृतियों में अत्यधिक प्रभावी दिखाई देता है। इसके अलावा, एक XP-Q3 aptamer-paclitaxel conjugate ने PD-L1 overexpressed TNBC कोशिकाओं [77] में प्रसार-विरोधी प्रभावकारिता दिखाई।

3.3। मैक्रोफेज

ट्यूमर से जुड़े मैक्रोफेज (टीएएम) कैंसर की एक विस्तृत श्रृंखला के टीएमई में सबसे प्रचुर मात्रा में प्रतिरक्षा कोशिकाओं में से हैं और एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को बढ़ावा देने या दबाने के लिए कार्य कर सकते हैं [86, 87]। वास्तव में, उनकी उच्च स्तर की प्लास्टिसिटी के कारण, वे विभिन्न सूक्ष्म पर्यावरणीय उत्तेजनाओं के जवाब में दो विविध फेनोटाइप्स में शिफ्ट हो जाते हैं: शास्त्रीय रूप से सक्रिय, प्रिनफ्लेमेटरी एम 1, और वैकल्पिक रूप से सक्रिय एंटी-इंफ्लेमेटरी एम 2, जो सेल सतह मार्करों के लिए एक अंतर अभिव्यक्ति प्रोफाइल प्रदर्शित करते हैं और विभिन्न साइटोकिन और केमोकाइन उत्पादन। एम 1 मैक्रोफेज आमतौर पर एंटीट्यूमर फ़ंक्शंस करता है, जबकि एम 2 मैक्रोफेज ट्यूमर की प्रगति को बढ़ावा देता है। TNBC सहित अधिकांश आक्रामक ट्यूमर में, TAMs एक M 2- जैसे फेनोटाइप से मिलते जुलते हैं, जो बड़े पैमाने पर पारंपरिक उपचारों और प्रतिरक्षा जांच चौकी अवरोधक उपचारों की विफलता के लिए जिम्मेदार हैं। इस कारण से, कई नवीन इम्यूनोथेरेप्यूटिक दृष्टिकोणों का लक्ष्य M2 मैक्रोफेज को लक्षित करना और उन्हें वांछित फेनोटाइप [88,89] में पुन: प्रोग्राम करना है।

मानव M2-जैसे मैक्रोफेज को लक्षित करने वाले aptamers का चयन करने के लिए, पहले सेल-SELEX दृष्टिकोण को कई दाताओं के मोनोसाइट्स से प्राप्त मानव मैक्रोफेज पर लागू किया गया था और M2-जैसे फेनोटाइप [90] के लिए ध्रुवीकृत किया गया था। हालांकि चयन से आने वाला सबसे अच्छा M2-लक्ष्यीकरण डीएनए aptamer अविभेदित M0-जैसे और मोनोसाइट्स से लक्ष्य कोशिकाओं में भेदभाव करने में सक्षम नहीं था और M1-की तरह कम सीमा तक सीमित था मैक्रोफेज, यह तेजी से CD14 प्लस मोनोसाइट्स में आंतरिक हो गया, इस प्रकार मोनोसाइट-लक्षित दवा वितरण अनुप्रयोगों के लिए क्षमता रखता है।

सॉलिड ट्यूमर इम्यूनोथेरेपी के लिए एप्टामर्स के एक और उल्लेखनीय अनुप्रयोग में कैंसर सेल-टारगेटिंग एप्टामर्स के साथ इंजीनियरिंग करके ट्यूमर कोशिकाओं के लिए एम1 मैक्रोफेज विशिष्टता को प्रबल करना शामिल है। चिमेरिक एंटीजन रिसेप्टर टी (सीएआर-टी) सेल इम्यूनोथेरेपी, जो सीएआर-टी कोशिकाओं के साथ रोगियों को संक्रमित करती है, ने कुछ ल्यूकेमिया और लिम्फोमा के उपचार में बहुत प्रभाव दिखाया है, लेकिन ट्यूमर को भेदने में कठिनाई के कारण ठोस ट्यूमर में केवल मामूली परिणाम मिलते हैं [91] . ट्यूमर के ऊतकों में प्रवेश करने के लिए मैक्रोफेज की आंतरिक क्षमता के कारण, कई दृष्टिकोणों को हाल ही में प्रस्तावित किया गया है कि आनुवंशिक रूप से उन्हें ट्यूमर कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए काइमेरिक सीएआर (सीएआर-एम) व्यक्त करने और एक लक्षित एंटीट्यूमर प्रतिक्रिया [92] शुरू करने के लिए। पारंपरिक सीएआर-एम थेरेपी से जुड़ी बड़ी कमियों को दूर करने के लिए, जैसे कि इंजीनियर प्रोटीन की कम प्रजनन क्षमता और सुरक्षा के मुद्दे, कियान एट अल। aptamers [93] के उपयोग के आधार पर एक नया सीएआर-एम दृष्टिकोण प्रस्तावित किया।

मरीन स्टेबल मैक्रोफेज सेल लाइन, RAW 264.7, को पहली बार एज़ाइड युक्त मेटाबॉलिक ग्लाइकोप्रोटीन लेबलिंग रिएजेंट और लिपोपॉलेसेकेराइड के साथ एम1 सेल की सतह पर एज़िडो शुगर उत्पन्न करने के लिए इनक्यूबेट किया गया था। फिर, M1 कोशिकाओं को AS1411 aptamer, जो कई कैंसर कोशिकाओं पर व्यक्त न्यूक्लियोलिन को बांधता है, और एक PD-L1 aptamer, एक साथ ट्यूमर लक्ष्यीकरण और प्रतिरक्षा जांच चौकी नाकाबंदी के लिए क्लिक रसायन प्रतिक्रिया द्वारा संयुग्मित किया गया था। महत्वपूर्ण रूप से, विवो में, 4T1 TNBC वाले चूहों की इमेजिंग और M1 कोशिकाओं के साथ अंतःशिरा इंजेक्शन, फ्लोरोसेंट aptamers के साथ क्रियाशील, ने असंशोधित M1 कोशिकाओं की तुलना में ट्यूमर में अधिक संचय दिखाया। इसके अलावा, जब एंटीट्यूमर गतिविधि के लिए परीक्षण किया गया, तो डुअल-एप्टैमर-इंजीनियर्ड M1 ने ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस के गठन में भारी कमी का कारण बना, जो कि ट्यूमर में टी सेल घुसपैठ में वृद्धि और टी सेल साइटोटोक्सिसिटी के साथ इम्यून टीएमई रीप्रोग्रामिंग के साथ था।

वैकल्पिक रूप से, चेन एट अल। मैक्रोफेज इंजीनियरिंग रणनीति [94] के रूप में प्रस्तावित पॉलीवलेंट गोलाकार aptamers (PSAs)। पीएसए थिओल-संशोधित AS1411 aptamer और एक डीएनए लिंकर दोनों के साथ सोने के नैनोकणों के कार्यात्मककरण के माध्यम से उत्पन्न हुए थे, जो एम 0 मैक्रोफेज पर उपरोक्त मेटाबोलिक के माध्यम से बनाए गए एज़ाइड टैग के साथ प्रतिक्रिया करने के लिए एक कार्यात्मक समूह को मुक्त चरम पर ले जाता है। लेबलिंग और बायोऑर्थोगोनल क्लिक प्रतिक्रियाएं (चित्र 6)। इंजीनियर गैर-ध्रुवीकृत मैक्रोफेज का M1 उपप्रकार में फेनोटाइपिक परिवर्तन इन विट्रो में एक्स-रे द्वारा सक्रिय किया गया था और 4T1 ट्यूमर ज़ेनोग्राफ़्ट वाले चूहों में पुष्टि की गई थी, जिससे प्रणालीगत विषाक्तता के संकेतों के बिना शक्तिशाली ट्यूमर-विशिष्ट हत्या हुई थी।

3.4। प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाएं

एनके कोशिकाएं जन्मजात आईएस से संबंधित साइटोटॉक्सिक लिम्फोसाइट्स हैं, जो भड़काऊ साइटोकिन्स और केमोकाइन का उत्पादन करने में सक्षम हैं। उन्हें "रक्षा की पहली पंक्ति" कहा जाता है, क्योंकि टी लिम्फोसाइटों से अलग, वे एंटीजन-विशिष्ट टी सेल रिसेप्टर्स को व्यक्त नहीं करते हैं, लेकिन पूर्व संवेदीकरण या क्लोनल विस्तार के बिना उत्परिवर्तित कोशिकाओं के खिलाफ कार्य करते हैं [95]। एनके सेल दत्तक इम्यूनोथेरेपी ठोस ट्यूमर के उपचार में प्रभावकारिता दिखाने में विफल रही, आंशिक रूप से इम्यूनोसप्रेसिव टीएमई और ट्यूमर के लिए एनके सेल विशिष्टता की कमी के कारण [96]।

इसलिए, एनके सेल एंटीकैंसर चिकित्सीय प्रभावकारिता में सुधार के दृष्टिकोणों के बीच, सीएआर की अभिव्यक्ति या ट्यूमर-लक्षित लिगेंड [97] के संयुग्मन के माध्यम से कैंसर विशिष्टता प्रदान करने पर एक बड़ा प्रयास केंद्रित है। ज़ू और उनके सहयोगियों ने एक एप्टैमर को जोड़कर सक्रिय कैंसर-लक्षित एजेंटों के रूप में एप्टैमर्स की खोज की, जो लिम्फोमा कोशिकाओं पर विशेष रूप से सीडी30 रिसेप्टर को एनके वाणिज्यिक सेल लाइन या तीन स्वस्थ दाताओं से प्राप्त एनके कोशिकाओं की सतह पर पहचानने में सक्षम है [98]। इस डीएनए-प्रकार aptamer को पहले उसी समूह द्वारा हाइब्रिड SELEX दृष्टिकोण के माध्यम से चुना गया था, जिसमें CD30 प्लस लिम्फोमा कोशिकाओं पर चयन के चरणों का पालन CD30 पुनः संयोजक प्रोटीन [99] पर चयन चरणों द्वारा किया गया था। एप्टैमर को एनके कोशिकाओं की झिल्ली में एंकरिंग के लिए लिपोफिलिक डबल सी18 हाइड्रोकार्बन श्रृंखलाओं के साथ 30 सिरों पर संशोधित किया गया था, जो विशेष रूप से लिम्फोमा कोशिकाओं को मारने के लिए निर्देशित होते हैं [98]। अभी हाल ही में, उन्हीं लेखकों ने TNBC कोशिकाओं पर NK कोशिकाओं की सतह पर अभिव्यक्त एक अज्ञात प्रोटीन को बाइंड करने में सक्षम डीएनए aptamer संलग्न करके TNBC में समान दृष्टिकोण लागू किया। एप्टैमर-इंजीनियर्ड एनके कोशिकाओं ने एमडीए-एमबी -231 कोशिकाओं से फेफड़े के मेटास्टेसिस को सामान्य ऊतकों [100] में साइड टॉक्सिसिटी के बिना चूहों में अंतःशिरा में इंजेक्ट किया।

ठोस ट्यूमर में एनके कोशिकाओं की ट्यूमर-विशिष्टता को और बढ़ाने के लिए, हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा कोशिकाओं और एप्टपीडी-एल1 एप्टामर [81] को लक्षित करने वाले एप्टैमर दोनों का उपयोग करके दोहरी एप्टैमर से लैस एनके कोशिकाओं को उत्पन्न किया गया था। परिणामी इंजीनियर एनके कोशिकाएं दत्तक रूप से स्थानांतरित चूहों में हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा के विकास को रोकने में केवल दो एप्टामर्स में से एक के साथ गैर-संयुग्मित या संयुग्मित कोशिकाओं की तुलना में अधिक प्रभावी थीं। एनके कोशिकाओं के साथ इम्यूनोथेरेपी की दक्षता की एक और सीमा ठोस ट्यूमर में उनकी अपर्याप्त घुसपैठ है। एक बार फिर, aptamers इस समस्या पर काबू पाने के लिए उत्कृष्ट उपकरण साबित हुए हैं। होक के समूह ने एक विशिष्ट एप्टैमर-आधारित संयुग्म उत्पन्न किया जो सी-मेट, एक रिसेप्टर जो कई ट्यूमर कोशिकाओं पर अत्यधिक अभिव्यक्त होता है, और एफसीजी रिसेप्टर III (सीडी16ए), एनके कोशिकाओं [101] पर व्यक्त प्रोटीन के लिए एक साथ बाध्यकारी होने में सक्षम है। संयुग्म दो अत्यधिक विशिष्ट सी-मेट और सीडी16ए डीएनए एप्टामर्स से बना है जो अलग-अलग लिंकर्स द्वारा जुड़े हुए थे, दो रिसेप्टर्स को एक साथ बांधने के लिए ∼65 Å-आदर्श दूरी को संरक्षित करते हैं। संयुग्म एनके कोशिकाओं को कैंसर कोशिकाओं में भर्ती करके एंटीबॉडी-निर्भर सेलुलर साइटोटोक्सिसिटी की कुशलता से नकल करने में सक्षम था। बाद में, उसी CD16 aptamer को PD-L1 डीएनए aptamer से जोड़ा गया ताकि PD-L1 प्लस ट्यूमर कोशिकाओं में NK कोशिकाओं को भर्ती करने और TILs को पुनः सक्रिय करके PD -1/PD-L1 प्रतिरक्षादमनकारी अक्ष को ख़राब करने में सक्षम निर्माण किया जा सके। ट्यूमर वाले चूहों में ट्यूमर कोशिकाओं के खिलाफ [82]। यह दृष्टिकोण विशेष रूप से पीडी-एल1 के उच्च स्तर वाले ठोस ट्यूमर जैसे टीएनबीसी के लिए संकेत दिया गया है।

4 निर्णय

हाल के अध्ययनों में यहां चर्चा की गई है कि कैंसर से लड़ने के लिए हमारे आईएस को बढ़ाने के लिए ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड एप्टामर्स की महान क्षमता स्पष्ट रूप से प्रदर्शित होती है। एप्टामर्स को mAbs की तरह ही एंटीकैंसर एजेंटों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन सस्ते होते हैं, अधिक तेजी से और अधिक प्रजनन क्षमता पर उत्पादित होते हैं, और एंटीबॉडी की तुलना में कम इम्युनोजेनिक होते हैं। हालाँकि, यह माना जाना चाहिए कि क्लिनिक में aptamers का आगमन अपेक्षा से धीमा साबित हो रहा है; वास्तव में, हालांकि पहले SELEX [25,26] को 30 से अधिक वर्ष बीत चुके हैं, केवल तीन aptamers वर्तमान में कैंसर उपचार [51] के नैदानिक ​​परीक्षणों में हैं।

यह मंदी ज्यादातर कुछ चुनौतियों के कारण होती है जो रोगियों में aptamers की प्रभावकारिता को सीमित करती हैं, जैसे कि उनकी अनिश्चित स्थिरता और आधा जीवन, विशेष रूप से जटिल और लगातार विकसित होने वाले माइक्रोएन्वायरमेंट में जो ट्यूमर को घेरता है। फिर भी, उपरोक्त सीमित मुद्दों को दूर करने के लिए पिछले कुछ वर्षों में विकसित की गई आश्चर्यजनक रणनीतियाँ और aptamer खोज में हाल की प्रगति और उन्हें किसी भी वांछित अनुप्रयोगों के अनुकूल बनाने के लिए संशोधनों से यह तर्क देना उचित है कि aptamers का अभ्यास उपयोग जल्द ही होगा TNBC जैसे कैंसर के लिए महसूस किया जा सकता है, जिसे तत्काल नए चिकित्सीय विकल्पों की आवश्यकता है।

लेखक योगदान:

संकल्पना, एलसी; लेखन - मूल मसौदा तैयार करना, एलसी; लेखन- एलए, विज्ञापन, आरएन, एमएफ, एससी और एलसी की समीक्षा और संपादन सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और उससे सहमत हैं।

अनुदान:

इस शोध को Fondazione AIRC per la Richerca sul Cancro, IG 23052 द्वारा वित्त पोषित किया गया था, LCLA को इटली के लिए AIRC फेलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था।

संस्थागत समीक्षा बोर्ड का वक्तव्य:

लागू नहीं।

डेटा उपलब्धता विवरण:

लागू नहीं।

स्वीकृतियां:

हम व्यावहारिक चर्चाओं के लिए ए कैलीएन्डो के आभारी हैं।

हितों का टकराव:

ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

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