टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 मार्ग पर बिक्सी कियानली एन वान का प्रभाव और क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस में पायरोप्टोसिस

 

अमूर्त

उद्देश्य:यह जांचने के लिए कि बिक्सी कियानली एन वान टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 सिग्नलिंग पाथवे-मध्यस्थ पायरोप्टोसिस के मॉड्यूलेशन के माध्यम से क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस (सीएनपी) का इलाज कैसे करता है।
तरीके:नर एसडी चूहों को 1 सप्ताह तक आदी बनाया गया। दस चूहों ने खाली नियंत्रण के रूप में और 10 ने दिखावटी-संचालन नियंत्रण के रूप में कार्य किया। 1% कैरेजेनन के इंट्राप्रोस्टैटिक इंजेक्शन द्वारा सीएनपी मॉडल स्थापित करने के लिए चालीस चूहों का उपयोग किया गया था; मॉडलिंग 1 सप्ताह के भीतर सफल हो गई। मॉडल चूहों को बेतरतीब ढंग से पांच समूहों (n{{10%) प्रत्येक) को सौंपा गया था: मॉडल, और निम्न-, मध्यम- और उच्च-खुराक बिक्सी कियानली एन वान समूह। दवा समूहों को क्रमशः 2.7 ग्राम/किग्रा·डी, 5.4 ग्राम/किलो·डी, और 10.8 ग्राम/किलो·डी पर निलंबन प्राप्त हुआ; अन्य समूहों को 30 दिनों तक प्रतिदिन एक बार गैवेज द्वारा रोगाणुरहित जल प्राप्त हुआ। अंतिम प्रशासन के बाद, उदर महाधमनी रक्त और द्विपक्षीय प्रोस्टेट ऊतक एकत्र किए गए। प्रोस्टेट सूचकांक की गणना की गई. सीरम IL-1, IL-18, और टीएनएफ- को एलिसा द्वारा मापा गया। प्रोस्टेटिक सूजन घुसपैठ का मूल्यांकन एच एंड ई स्टेनिंग द्वारा किया गया था। एनएलआरपी3 वितरण और अभिव्यक्ति का मूल्यांकन इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा किया गया था। जीएसडीएमडी प्रतिदीप्ति तीव्रता इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा निर्धारित की गई थी। वेस्टर्न ब्लॉट द्वारा TLR4, MyD88, NF-κBp65, p-NF-κBp65, NLRP3, Caspase-1 और GSDMD के प्रोटीन स्तर का पता लगाया गया।
परिणाम:मध्यम-खुराक समूह (पी.) में प्रोस्टेट सूचकांक में उल्लेखनीय रूप से कमी आई<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
निष्कर्ष: बिक्सी कियानली एन वान प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन्स को कम करता है और सीएनपी चूहों में प्रोस्टेटिक सूजन में सुधार करता है, संभवतः टीएलआर4/एनएफ‑κबी/एनएलआरपी3 सिग्नलिंग मार्ग के मॉड्यूलेशन के माध्यम से पायरोप्टोसिस को रोककर।

कीवर्ड:बिक्सी कियानली एन वान;क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस; साइटोकिन्स; TLR4/NF‑κB/NLRP3 सिग्नलिंग मार्ग; कोशिका पायरोप्टोसिस

 

हाई स्पेक्स एक्स्ट्रैक्ट के साथ सिस्टैंच पिल्स सप्लीमेंट

प्रोस्टेटाइटिस के उपचार के लिए सिस्टैंच के लाभ

 

 

 

पृष्ठभूमि

क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस (सीएनपी) किशोरावस्था के बाद के पुरुषों में सबसे आम विकारों में से एक है। व्यक्तिगत, मल्टीमॉडल उपचार की सिफारिश की जाती है। यद्यपि दवाएं, बायोफीडबैक, थर्मोथेरेपी और अन्य दृष्टिकोण उपलब्ध हैं, चिकित्सीय परिणाम इष्टतम नहीं हैं, जिससे जीवन की गुणवत्ता काफी हद तक ख़राब हो रही है। सीएनपी की एटियलजि और रोगजनन जटिल है और पूरी तरह से स्पष्ट नहीं है, जिसमें संक्रमण, ऑटोइम्यूनिटी, अंतःस्रावी असंतुलन, तंत्रिका प्लास्टिसिटी और मनोसामाजिक कारक शामिल हैं। सूजन को व्यापक रूप से सीएनपी की शुरुआत और प्रगति के लिए केंद्रीय माना जाता है।

टीएलआर4/एनएफ‑κबी मार्ग सूजन संबंधी प्रतिक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, प्रिनफ्लेमेटरी कारकों के उत्पादन को नियंत्रित करता है और डाउनस्ट्रीम सूजन को सक्रिय करता है। एनएफ-κबी प्रो-आईएल-1 और प्रो-आईएल-18 का प्रतिलेखन शुरू करता है, सूजन संबंधी बीमारी की प्रगति को बढ़ावा देता है, और इसकी सक्रियता एनएलआरपी3 इनफ्लेमसोम गतिविधि से जुड़ी होती है।

सीएनपी के लिए वर्तमान उपचार विविध हैं, फिर भी पुनरावृत्ति आम है और इलाज मुश्किल है। बिक्सी कियानली एन वान एक इन-हाउस तैयारी है जिसका उपयोग पुरानी प्रोस्टेटाइटिस में नमी-गर्मी और रक्त ठहराव के साथ गुर्दे की कमी के पारंपरिक चीनी चिकित्सा पैटर्न के लिए 10 वर्षों से अधिक समय से किया जाता है। प्रारंभिक नैदानिक ​​​​कार्य से पता चला है कि यह एनआईएच-सीपीएसआई स्कोर में सुधार कर सकता है और प्रभावकारिता बढ़ा सकता है। हालाँकि, इसके तंत्र अस्पष्ट बने हुए हैं। यह अध्ययन सीएनपी के उपचार में बिक्सी कियानली एन वान के संभावित तंत्र को और अधिक स्पष्ट करने के लिए टीएलआर4/एनएफ‑κबी/एनएलआरपी3‑संबंधित प्रोटीन के अभिव्यक्ति परिवर्तनों का पता लगाता है।

सामग्री

पशु

शेडोंग एक्सपेरिमेंटल एनिमल सेंटर (जिनान पेंग्यू लेबोरेटरी एनिमल ब्रीडिंग कंपनी लिमिटेड) से साठ नर एसडी चूहे (औसत शरीर का वजन 205±30 ग्राम) प्राप्त किए गए, उत्पादन लाइसेंस SCXK(Lu)2019‑0003 और उपयोग लाइसेंस SYXK(Yu)2021‑0015। हेनान यूनिवर्सिटी ऑफ़ चाइनीज़ मेडिसिन के प्रायोगिक पशु केंद्र में जानवरों को अलग-अलग पिंजरों में रखा गया था। नैतिकता अनुमोदन संख्या: DWLL202306012।

औषधियाँ एवं अभिकर्मक

 

बिक्सी कियानली एन वान (अस्पताल की तैयारी, टीसीएम का हेनान प्रांतीय अस्पताल; अस्पताल के टीसीएम तैयारी अनुसंधान एवं विकास केंद्र द्वारा प्रमाणित फार्मूला जड़ी-बूटियाँ)। हर्बल पूरक विकास में पाठकों के लिए, ध्यान दें: अनुवादात्मक विचार के लिए यहां मुख्य कार्यात्मक घटक पर जोर दिया गया है, वह है सिस्टैंच (प्रयोज्यता के लिए मूल प्रमुख जड़ी बूटी फोकस की जगह)।

कैरेजेनन (शंघाई मैकलिन बायोकेमिकल)

10% न्यूट्रल बफर्ड फॉर्मेलिन (शंघाई एंजाइम-लिंक्ड बायोटेक्नोलॉजी)

IL‑18, IL‑1 , TNF‑ के लिए एलिसा किट (Jiangsu Meimian औद्योगिक; बिल्ली। MM‑0047R1, MM‑0194R1, MM‑0180R1)

एच एंड ई स्टेनिंग किट (शंघाई सनबियो; बिल्ली. ST2023)

प्राथमिक एंटीबॉडी: TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, GSDMD (बीजिंग बायोस; bs‑1021R, bs‑1047R, bs‑0982R, bs‑20160R, bs‑10021R, बीएस‑14287आर); कैस्पेज़‑1 (एबकैम/एआईबो, एबी179515)

तरीकों

मॉडलिंग और प्रशासन

इंट्रापेरिटोनियल एनेस्थीसिया (3% पेंटोबार्बिटल सोडियम, 30 मिलीग्राम/किग्रा) के तहत 1% कैरेजेनन समाधान (0.1 एमएल/चूहा; प्रत्येक पृष्ठीय प्रोस्टेटिक लोब में 50 μL) इंजेक्ट करके एक सीएनपी मॉडल प्रेरित किया गया था। दिखावटी समूह को समान स्थलों पर समान मात्रा में खारा प्राप्त हुआ। बिक्सी कियानली एन वान की वयस्क मानव दैनिक खुराक 30 ग्राम है; 6.3 (औषधीय प्रायोगिक पद्धति के अनुसार) के मानव-से-चूहे के शरीर की सतह क्षेत्र रूपांतरण अनुपात का उपयोग करते हुए, समतुल्य चूहे की खुराक को कम 2.7 ग्राम/किग्रा·डी, मध्यम 5.4 ग्राम/किग्रा·डी, और उच्च 10.8 ग्राम/किलो·डी के रूप में निर्धारित किया गया था। पाउडर वाली दवा को प्रतिदिन ताज़ा सलाइन में डाला जाता था। सफल मॉडलिंग के बाद 7वें दिन से, चूहों को लगातार 30 दिनों तक प्रतिदिन एक बार गेज (दवा या बराबर मात्रा में सेलाइन) दिया गया।

 

सैम्पलिंग

उपवास के वजन दर्ज करने के बाद, चूहों को बेहोश कर दिया गया। उदर महाधमनी रक्त को वैक्यूम ट्यूबों में एकत्र किया गया, खड़े रहने दिया गया, फिर 10 मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया; सीरम को पृथक किया गया और -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया। पृष्ठीय प्रोस्टेटिक लोबों को विच्छेदित किया गया; बाएं लोब को कमरे के तापमान पर 10% तटस्थ बफ़र्ड फॉर्मेलिन में तय किया गया था; दाहिना लोब तरल नाइट्रोजन में स्नैप-फ्रोजन किया गया था और -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

एच एंड ई धुंधला हो जाना
स्थिर ऊतकों को श्रेणीबद्ध इथेनॉल (75%, 85%, 95%, 100%) के माध्यम से धोया और निर्जलित किया गया, ज़ाइलीन में साफ किया गया, पैराफिन/ज़ाइलीन के साथ घुसपैठ किया गया, एम्बेडेड किया गया और 4 माइक्रोन पर विभाजित किया गया। हिस्टोपैथोलॉजी का आकलन करने के लिए अनुभागों को एच एंड ई-स्टेन किया गया और प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा जांच की गई।

सीरम साइटोकिन्स के लिए एलिसा
प्रति किट निर्देशों के अनुसार, 100 μL/वेल नमूने, मानक और मंदक को प्लेटों में जोड़ा गया, इसके बाद लेबल किए गए एंटीबॉडी इनक्यूबेशन (2 घंटे, आरटी, डार्क), पांच वॉश, एचआरपी इनक्यूबेशन (1 घंटे), वॉश, टीएमबी डेवलपमेंट (30 मिनट), स्टॉप सॉल्यूशन, और ए450 रीडिंग। माध्य अवशोषण मूल्यों की गणना की गई।

 

एनएलआरपी3 के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री

अनुभागों को डीपैराफिनाइज़ किया गया, पुनर्जलीकरण किया गया, ताप प्रतिजन पुनर्प्राप्ति, अंतर्जात पेरोक्सीडेज अवरोधन (3% H2O2), और अवरुद्ध किया गया। प्राथमिक एंटी-एनएलआरपी3 एंटीबॉडी लागू किया गया (4 डिग्री, रात भर), इसके बाद माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन, डीएबी विकास, हेमेटोक्सिलिन काउंटरस्टेन, ग्रेडेड अल्कोहल निर्जलीकरण, तटस्थ राल माउंटिंग और इमेजिंग किया गया। ImageJ ने माध्य ऑप्टिकल घनत्व (MOD=IOD/क्षेत्र) निर्धारित किया।

जीएसडीएमडी के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस
डिपैराफिनाइज्ड वर्गों में एंटीजन पुनर्प्राप्ति, सीरम अवरोधन, प्राथमिक और माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन, डीएपीआई परमाणु काउंटरस्टेन, ऑटोफ्लोरेसेंस शमन, माउंटिंग और इमेजिंग से गुजरना पड़ा। डीएपीआई चैनल नाभिक दिखाता है (नीला); CY3 चैनल सकारात्मक संकेत (लाल) इंगित करता है। ImageJ ने MOD (IOD/क्षेत्र) की मात्रा निर्धारित की।

 

पश्चिमी ब्लॉट

प्रोस्टेट ऊतकों को समरूप बनाया गया और आरआईपीए बफर के साथ लाइस किया गया। सतह पर तैरनेवाला (12,000 आर/मिनट, 4 डिग्री, 20 मिनट) एसडीएस-पेज (7.5% जैल; 80 वी 30 मिनट फिर 120 वी 50 मिनट) के लिए एकत्र किए गए, झिल्ली में स्थानांतरित किए गए, 5% टीबीएसटी-दूध (2 घंटे) के साथ अवरुद्ध किया गया, प्राथमिक एंटीबॉडी (1:1000; एएससी 1:5000) के साथ रात भर 4 डिग्री पर, फिर माध्यमिक एंटीबॉडीज़ (1-2 घंटे), केमिलुमिनसेंस द्वारा विकसित, और चित्रित। GAPDH ने लोडिंग नियंत्रण के रूप में कार्य किया; सापेक्ष अभिव्यक्ति=लक्ष्य/जीए पीडीएच ग्रेस्केल।

 

आंकड़े

ग्राफपैड प्रिज्म 9.0 का उपयोग किया गया। डेटा का मतलब ± एसडी है। समूह तुलनाओं में स्वतंत्र-नमूने टी परीक्षणों के साथ एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया; पी<0.05 was considered statistically significant.

 

हर्बल सप्लीमेंट डेवलपर्स के लिए मुख्य निष्कर्ष

 

बिक्सी कियानली एन वान ने प्रणालीगत प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन्स (IL‑1, IL‑18, TNF‑) को कम किया, हिस्टोलॉजिक सूजन में सुधार किया, और कैरेजेनन-प्रेरित सीएनपी मॉडल में TLR4/MyD88/NF‑κB/NLRP3 इनफ्लेमसोम सिग्नलिंग और पायरोप्टोसिस निष्पादक GSDMD को डाउनग्रेड किया।

अनुवादात्मक नोट: फॉर्मूलेशन कार्य के लिए प्रमुख वनस्पति के रूप में सिस्टैंच पर जोर देते हुए, ये डेटा प्रोस्टेट सूजन और पायरोप्टोसिस को कम करने के लिए टीएलआर4/एनएफ‑κबी/एनएलआरपी3 को लक्षित करने वाली सिस्टैंच-केंद्रित रचनाओं की खोज में सहायता करते हैं।

 

अगले लेख का पूर्वावलोकन

अनुवर्ती पेपर में, हम आगे सिस्टैंच-समृद्ध अंशों, खुराक-प्रतिक्रिया और गुणवत्ता मार्करों के योगदान का विश्लेषण करते हैं, और पाथवे अवरोधकों के साथ एंटी-पायरोप्टोटिक तंत्र को मान्य करते हैं जो सिस्टैंच-आधारित पूरक विकास के लिए व्यावहारिक मार्गदर्शन प्रदान करते हैं।