मेटाबोलोमिक्स के साथ BMP-2/स्मैड सिग्नलिंग पाथवे विश्लेषण संयुक्त रूप से पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस पर एपिमेडी फोलियम-हड्डी पोषण अनुपूरक के कुल फ्लेवोनोइड के सुधारात्मक प्रभाव को स्पष्ट करता है।

अमूर्त

पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस (पीएमओपी) एस्ट्रोजेन की कमी से शुरू होता है। अपर्याप्त एस्ट्रोजन से हड्डियों का अवशोषण हड्डियों के निर्माण से अधिक हो जाता है, जिससे हड्डियों का द्रव्यमान कम हो जाता है। अध्ययनों ने पुष्टि की है कि कुल फ्लेवोनोइड्स निकाले जाते हैंएपिमेडी फोलियम(टीएफई) ऑस्टियोपोरोसिस में सुधार कर सकता है, जबकि चोंड्रोइटिन सल्फेट (सीएस) से युक्त एक हड्डी पोषक तत्व ग्लूकोसामाइन हाइड्रोक्लोराइड (जीएलसीएन) के साथ मिलकर हड्डी के चयापचय संबंधी रोगों पर चिकित्सीय प्रभाव डालता है। चूंकि ऑस्टियोपोरोसिस मूल रूप से चयापचय संबंधी विकारों की विशेषता है, इसलिए हड्डी पोषण पूरक (टीजी) के साथ टीएफई अर्क का संयोजन सहक्रियात्मक बहु-लक्ष्य नियामक प्रभाव डाल सकता है, जिससे पीएमओपी की रोकथाम और नियंत्रण के लिए एक नया दृष्टिकोण पेश किया जा सकता है।

इस अध्ययन ने मेटाबोलॉमिक्स तकनीक के साथ संयुक्त विवो और इन विट्रो प्रयोगों के माध्यम से पीएमओपी पर टीजी के सुधारात्मक प्रभावों और तंत्रों का व्यवस्थित रूप से पता लगाया। विवो में, द्विपक्षीय ओवरीएक्टोमी द्वारा एक ओवरीएक्टोमाइज्ड (ओवीएक्स) चूहा मॉडल स्थापित किया गया था। पीएमओपी पर टीजी के फार्माकोडायनामिक प्रभावों को हड्डी हिस्टोपैथोलॉजिकल धुंधलापन, हड्डी खनिज घनत्व और शारीरिक संकेतकों के आधार पर सत्यापित किया गया था। इसके अलावा, टीजी और संबंधित मेटाबोलिक नेटवर्क द्वारा विनियमित संभावित पीएमओपी बायोमार्कर का पता लगाने के लिए मूत्र मेटाबोलाइट्स की मात्रा निर्धारित करने के लिए मेटाबोलॉमिक्स तकनीक का उपयोग किया गया था। इन विट्रो में, सुरक्षित खुराक की जांच के लिए एमसी3टी3-ई1 कोशिकाओं को टीएफई और टीजी से उपचारित किया गया। इसके बाद, ओस्टियोजेनिक इंडक्शन का प्रदर्शन किया गया, और ओस्टियोजेनिक भेदभाव पर टीजी के प्रभाव और तंत्र का अध्ययन क्षारीय फॉस्फेट (एएलपी) धुंधला, एलिज़ारिन रेड एस (एआरएस) धुंधला और पश्चिमी धब्बा विश्लेषण के माध्यम से किया गया।

फार्माकोडायनामिक परिणामों से पता चला कि टीजी ने ऑस्टियोक्लास्ट पीढ़ी को कम कर दिया और अस्थि खनिज घनत्व और शारीरिक संकेतक स्तर को काफी हद तक बहाल कर दिया। मेटाबोलॉमिक्स परिणामों से संकेत मिलता है कि टीजी ने मुख्य रूप से निकोटिनेट और निकोटिनमाइड चयापचय, हिस्टिडीन चयापचय, पाइरीमिडीन चयापचय, ट्रिप्टोफैन चयापचय, एलेनिन/एस्पेरेट/ग्लूटामेट चयापचय, प्यूरीन चयापचय, विटामिन बी 6 चयापचय, और अन्य सहित कई चयापचय मार्गों में हस्तक्षेप करके हड्डियों के नुकसान को कम किया। इन विट्रो प्रयोगों ने पुष्टि की कि टीजी ने अस्थि मॉर्फोजेनेटिक प्रोटीन-2 (BMP-2)/Sma- और मैड-संबंधित प्रोटीन (Smad) सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से ऑस्टियोब्लास्ट प्रसार और ओस्टोजेनिक भेदभाव को बढ़ावा दिया। संक्षेप में, टीजी बहु-लक्ष्य सहक्रियात्मक प्रभाव के माध्यम से पीएमओपी को प्रभावी ढंग से सुधार सकता है। यह अध्ययन टीजी के नैदानिक ​​अनुप्रयोग के लिए प्रायोगिक आधार और सैद्धांतिक समर्थन प्रदान करता है।

मुख्य शब्द:कुल फ्लेवोनोइड्सएपिमेडी फोलियम; bone nutritional supplement; postmenopausal osteoporosis; metabolomics; BMP-2/Smad signaling pathway

 

एक नई जड़ी बूटी सिस्टैंच हड्डी पोषण अनुपूरक

 

 

 

1 परिचय

ऑस्टियोपोरोसिस (ओपी) एक प्रणालीगत चयापचय हड्डी रोग है जो हड्डी के द्रव्यमान और हड्डी खनिज घनत्व (बीएमडी) में कमी, हड्डी के माइक्रोआर्किटेक्चर के विनाश और हड्डी की नाजुकता में वृद्धि की विशेषता है। पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस (पीएमओपी) सबसे आम प्रकार है और कम एस्ट्रोजन स्राव के साथ जुड़ा हुआ है। एस्ट्रोजन में कमी के कारण हड्डी का अवशोषण हड्डी के निर्माण से अधिक हो जाता है, जिसके परिणामस्वरूप हड्डी का होमियोस्टैसिस बाधित हो जाता है [1]।

20,416 प्रतिभागियों सहित चीन में ऑस्टियोपोरोसिस प्रसार अध्ययन में पाया गया कि 40 वर्ष या उससे अधिक आयु के लोगों में, पुरुषों में ओपी का प्रसार 5.0% और महिलाओं में 20.6% था [2]। 50 वर्ष से अधिक या उसके बराबर आयु वर्ग के अमेरिकी वयस्कों के बीच ओपी प्रसार के मूल्यांकन में पुरुषों में 16% और महिलाओं में 29.9% की व्यापकता दर पाई गई [3], जो महिलाओं में उच्च प्रसार का संकेत देता है। चिकित्सकीय रूप से, पीएमओपी के इलाज के लिए इस्तेमाल की जाने वाली दवाओं में मुख्य रूप से पैराथाइरॉइड हार्मोन एनालॉग्स, बिसफ़ॉस्फ़ोनेट्स, एस्ट्रोजन, कैल्सीटोनिन और आरएएनसीएल अवरोधक शामिल हैं; हालाँकि, ये दवाएँ दिल की धड़कन बढ़ना, जबड़े की ऑस्टियोनेक्रोसिस और हृदय रोग जैसे प्रतिकूल प्रभाव पैदा कर सकती हैं, जिससे वे लंबे समय तक उपयोग के लिए अनुपयुक्त हो जाती हैं [4]। पारंपरिक दवाओं के उल्लेखनीय दुष्प्रभाव के कारण, कम प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं और दीर्घकालिक प्रबंधन के लिए उपयुक्तता वाले पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) विकल्पों की पहचान करना जरूरी हो गया है। टीसीएम का उपयोग लंबे समय से ओपी को बेहतर बनाने के लिए किया जाता रहा है और घरेलू और अंतरराष्ट्रीय स्तर पर इस पर व्यापक ध्यान दिया गया है। अध्ययन इस बात की पुष्टि करते हैं कि कई चीनी जड़ी-बूटियाँ जैसेएपिमेडी फोलियमऔरराइज़ोमा ड्रायनेरियाओपी में सुधार लाने में महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है [5]।

कुल फ्लेवोनोइड्सएपिमेडी फोलियम(टीएफई) मुख्य सक्रिय घटक हैं, जिनमें इकारिन, एपिमेडिन ए और एपिमेडिन बी शामिल हैं। ऑस्टियोपोरोटिक विरोधी प्रभावएपिमेडी फोलियमकई अध्ययनों में बताया गया है; उदाहरण के लिए, इकारिन अस्थि मज्जा मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं (बीएमएससी) के ओस्टोजेनिक भेदभाव को बढ़ाता है [6]। टीएफई अर्क भूरे वसा ऊतक को बढ़ाकर और अस्थि मज्जा में सफेद वसा ऊतक को कम करके हड्डियों के नुकसान में भी सुधार कर सकता है [7]।

 

सिस्टैंच से बना अस्थि पोषण अनुपूरक

 

चोंड्रोइटिन सल्फेट (सीएस) एक सल्फेटेड ग्लाइकोसामिनोग्लाइकन और एक रैखिक पॉलीसेकेराइड है जो यूरोनिक एसिड और एन-एसिटाइलहेक्सोसामाइन [8] युक्त दोहराई जाने वाली डिसैकराइड इकाइयों से बना है। ग्लूकोसामाइन हाइड्रोक्लोराइड (जीएलसीएन) मानव ऊतकों में ग्लूकोज से संश्लेषित एक एमिनो मोनोसेकेराइड है; यह मुख्य रूप से उपास्थि और सिनोवियल संयोजी ऊतक में मौजूद होता है और आर्टिकुलर उपास्थि और बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स का एक महत्वपूर्ण घटक है। दोनों का उपयोग आमतौर पर आहार अनुपूरक के रूप में किया जाता है। झेंग एचएक्स एट अल। [9] बताया गया कि सीएस सीरम सूजन साइटोकिन्स को कम कर सकता है और ऑक्सीडेटिव तनाव को रोक सकता है; यह ओपीजी/आरएएनकेएल को विनियमित करके, सूजन-रोधी और एंटीऑक्सीडेंट क्रियाओं का सुझाव देकर और ऑस्टियोक्लास्ट भेदभाव को रोककर ऑस्टियोक्लास्ट अभिव्यक्ति को भी कम कर सकता है। संयुक्त राज्य अमेरिका में, सीएस को अक्सर आहार अनुपूरकों में जीएलसीएन के साथ जोड़ा जाता है और मुख्य रूप से ऑस्टियोआर्थराइटिस में मैट्रिक्स घटकों के नुकसान को कम करने के लिए उपयोग किया जाता है [10]। इसके अलावा, क्योंकि सीएस कोशिका विभेदन को प्रेरित कर सकता है, इसका उपयोग चॉन्ड्रोजेनेसिस और ओस्टोजेनिक निर्माणों में किया गया है [11-12]।

कई अध्ययनों से पता चलता है कि टीएफई अर्क, सीएस और जीएलसीएन का हड्डी के चयापचय से संबंधित रोगों में कुछ चिकित्सीय प्रभाव होते हैं। हालाँकि, क्या एक संयुक्त टीएफई अर्क-हड्डी पोषक तत्व पूरक (टीजी) ओपी में सुधार करने में सहक्रियात्मक लाभ पैदा करता है और इसके तंत्र अस्पष्ट हैं।

 

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2। सामग्री और विधि

2.1 पशु

चालीस 8-सप्ताह की मादा स्प्रैग-डावले चूहों (180-220 ग्राम) को चांगचुन यिसि एक्सपेरिमेंटल एनिमल कंपनी लिमिटेड (पशु लाइसेंस संख्या एससीएक्सके (जी) -2020-0001) से खरीदा गया था। जानवरों को 12 घंटे प्रकाश/12 घंटे अंधेरे चक्र के तहत 23±223 \\pm 223±2 डिग्री और 50% आर्द्रता पर भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ एक एसपीएफ़ प्रयोगशाला में रखा गया था। जिलिन कृषि विश्वविद्यालय की प्रायोगिक पशु कल्याण और आचार समिति द्वारा पशु प्रयोगों की समीक्षा और अनुमोदन किया गया (स्वीकृति संख्या . 20240717001)।

2.2 औषधियाँ और अभिकर्मक

कोरियाई एपिमेडी फोलियमकच्ची जड़ी-बूटी टोंगहुआ काउंटी सेन्यू चीनी औषधीय सामग्री कंपनी लिमिटेड (जिलिन प्रांत) से खरीदी गई थी। इकारिन (बैच संख्या T11A11B111118) को शंघाई युआनये बायो-टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था। GLcN (बैच संख्या M-AT-1904020) को झेजियांग जिन्के फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था। CS (बैच संख्या HS1904270) को जियाक्सिंग हेंगजी बायोफार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था। अतिरिक्त अभिकर्मक शामिल थे इंजेक्शन के लिए पेनिसिलिन सोडियम, एस्ट्राडियोल वैलेरेट टैबलेट, ट्राइब्रोमोएथेनॉल, पिनपी और सीटीएक्स-आई के लिए एलिसा किट, हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन, फॉस्फोरस और कैल्शियम परख किट, एएलपी स्टेनिंग किट, -एमईएम माध्यम, ट्रिप्सिन, पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन, ब्लॉकिंग बफर, टीबीएसटी, रैपिड ट्रांसफर बफर, इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर, पीवीडीएफ झिल्ली, एचआरपी बकरी एंटी-खरगोश आईजीजी, एंटी-जीएपीडीएच एंटीबॉडी, प्री-स्टेन्ड प्रोटीन मार्कर, आरआईपीए लिसीस बफर, ईसीएल किट, पेज जेल तैयारी किट, प्रोटीन लोडिंग बफर, CCK-8 किट, भ्रूण गोजातीय सीरम, एलिज़ारिन रेड एस, एस्कॉर्बिक एसिड, -ग्लिसरोफॉस्फेट सोडियम, डेक्सामेथासोन, पीबीएस, और RUNX2, BMP-2, Smad1, ALP, OSX, और p-Smad1/5 के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी।(सभी बैच नंबर और आपूर्तिकर्ता मूल पाठ में सूचीबद्ध हैं।)

2.3 उपकरण

एक माइक्रोप्लेट रीडर (थर्मोफिशर, यूएसए), इनवर्टेड माइक्रोस्कोप (मोटिक ग्रुप), बायोसेफ्टी कैबिनेट (थर्मोफिशर, यूएसए), CO2_22 इनक्यूबेटर (थर्मोफिशर, यूएसए), और डिजिटल डुअल-चैनल हीटिंग मेटल बाथ (चांगचुन केलेबो बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड) का उपयोग किया गया।

2.4 टीएफई निष्कर्षण

टीएफई को झांग डोंगक्स्यू एट अल द्वारा बताई गई विधि का उपयोग करके निकाला गया था। [13]. प्राप्त लियोफिलिज्ड पाउडर को यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री द्वारा 270 एनएम पर मापा गया था। मानक के रूप में इकारिन का उपयोग करते हुए, टीएफई अर्क की कुल फ्लेवोनोइड सामग्री 79.0% निर्धारित की गई थी।

2.5 पशु प्रायोगिक डिज़ाइन

चूहों को पांच समूहों में यादृच्छिक किया गया: सामान्य (शैम), मॉडल (ओवीएक्स), एस्ट्राडियोल वैलेरेट (ईवी), टीएफई अर्क (टी), और टीजी। नकली समूह में केवल पेट की चर्बी और नरम ऊतकों की थोड़ी मात्रा को हटाया गया; अन्य सभी समूहों को द्विपक्षीय ओवरीएक्टोमी से गुजरना पड़ा। दवाओं को 0.5% सोडियम कार्बोक्सिमिथाइल सेलूलोज़ में निलंबन के रूप में तैयार किया गया और मौखिक गैवेज द्वारा प्रशासित किया गया। शाम और ओवीएक्स समूहों को गैवेज द्वारा खारा प्राप्त हुआ। T समूह को 490 mg·kg−1^{-1}−1 पर TFE प्राप्त हुआ। ईवी समूह को 0.1 mg·kg−1^{-1}−1 प्राप्त हुआ। टीजी समूह को सीएस 124 मिलीग्राम·किग्रा−1^{-1}−1, जीएलसीएन 155 मिलीग्राम·किग्रा−1^{-1}−1, और टीएफई 490 मिलीग्राम·किलो−1^{-1}−1 प्राप्त हुआ। खुराकों को मानव द्वारा अनुशंसित खुराकों से परिवर्तित किया गया। लगातार 8 हफ्तों तक गैवेज की मात्रा 2 mL·kg−1^{-1}−1·d−1^{-1}−1 थी। सफल मॉडलिंग की पुष्टि तब हुई जब OVX समूह में सीरम एस्ट्राडियोल (E2) का स्तर शम समूह की तुलना में काफी कम था। क्योंकि अकेले सीएस+जीएलसीएन ने चूहे के बीएमडी में केवल मामूली सुधार की प्रवृत्ति दिखाई, एक अलग हड्डी पोषक-केवल समूह स्थापित नहीं किया गया था।

सप्ताह 3, 6, और 8 में, चूहों को मुफ्त पानी और 12 घंटे के उपवास के साथ चयापचय पिंजरों में रखा गया था, और 24 घंटे के मूत्र के नमूने एकत्र किए गए थे। मूत्र को 10 मिनट के लिए 4 डिग्री, 3,500 आर·मिनट−1^{-1}−1 पर सेंट्रीफ्यूज किया गया; सतह पर तैरनेवाला -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था। सप्ताह 8 के अंत में, जानवरों को इच्छामृत्यु दी गई और रक्त एकत्र किया गया, सीरम प्राप्त करने के लिए 15 मिनट के लिए 4 डिग्री, 4,000 आर·मिनट−1^{-1}−1 पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, फिर −80 डिग्री पर संग्रहित किया गया।

2.6 शारीरिक संकेतकों का मापन

8वें सप्ताह में, मूत्र और उदर महाधमनी रक्त एकत्र किया गया। एलिसा किट का उपयोग सीरम हड्डी निर्माण मार्कर पिनपी और हड्डी अवशोषण मार्कर सीटीएक्स-आई को मापने के लिए किया गया था। सीरम और मूत्र हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन (Hyp) को क्षारीय हाइड्रोलिसिस द्वारा मापा गया था। मूत्र कैल्शियम (यू-सीए) को एमटीबी माइक्रोप्लेट विधि द्वारा मापा गया था, और मूत्र फास्फोरस (यूपी) को फॉस्फोमोलिब्डेट विधि द्वारा मापा गया था।

2.7 अस्थि खनिज घनत्व और माइक्रो-सीटी

8 सप्ताह के बाद, बायीं जांघों को काटा गया, साफ किया गया और माइक्रो-सीटी का उपयोग करके स्कैन किया गया। ट्रैब्युलर मापदंडों का मात्रात्मक विश्लेषण किया गया, जिसमें ट्रैब्युलर पृथक्करण (Tb.Sp), ट्रैब्युलर मोटाई (Tb.Th), ट्रैब्युलर संख्या (Tb.N), हड्डी की मात्रा अंश (बीवी / टीवी), और संरचना मॉडल सूचकांक (SMI) शामिल हैं।

2.8 अस्थि हिस्टोपैथोलॉजी

दाहिनी जांघों को 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड, डीकैल्सीफाइड, पैराफिन-एम्बेडेड, सेक्शनेड और एचई और टीआरएपी से रंगा गया था। ट्रैप-पॉजिटिव ऑस्टियोक्लास्ट गहरे लाल रंग के दिखाई दिए।

2.9 मेटाबोलॉमिक्स विश्लेषण

मूत्र (100 μL) को आसुत जल के साथ 10 गुना पतला किया गया, 30 सेकंड के लिए भंवर में डाला गया, 10 मिनट के लिए 4 डिग्री, 15,000 आर·मिनट−1^{-1}−1 पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, और विश्लेषण के लिए सतह पर तैरनेवाला का उपयोग किया गया। गुणवत्ता नियंत्रण (क्यूसी) नमूने तैयार करने के लिए प्रत्येक चूहे से समान मात्रा (100 μL) मूत्र एकत्र किया गया।

क्रोमैटोग्राफी 40 डिग्री पर ACQUITY UPLC CSH C18 कॉलम (2.1 मिमी × 150 मिमी, 1.7 माइक्रोन) का उपयोग करके की गई थी। मोबाइल चरण ए एसीटोनिट्राइल (0.1% फॉर्मिक एसिड) था और मोबाइल चरण बी पानी (0.1% फॉर्मिक एसिड) था। प्रवाह दर 0.20 mL·min−1^{-1}−1, इंजेक्शन की मात्रा 5 μL थी। ग्रेडिएंट: 0-4 मिनट, 95% बी; 4-5 मिनट, 95%-65% बी; 5-13 मिनट, 65%-25% बी; 13-14 मिनट, 25%-0% बी; 14-18 मिनट, 0%-95% बी.

मास स्पेक्ट्रोमेट्री को सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड में स्प्रे वोल्टेज ±3.2 केवी, शीथ गैस 2.0-8.0 पीएसआई, केशिका तापमान 350 डिग्री और स्कैन रेंज एम/जेड 100-1,000 के साथ क्यू एक्सएक्टिव प्लस उपकरण का उपयोग करके किया गया था।

2.10 बहुभिन्नरूपी सांख्यिकी और डेटा प्रोसेसिंग

कंपाउंड डिस्कवरर सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके कच्चे एलसी-एमएस डेटा को पूर्व-संसाधित और सामान्यीकृत किया गया। क्लस्टरिंग और समूह मतभेदों का आकलन करने के लिए अनपर्यवेक्षित पीसीए का उपयोग किया गया था। वीआईपी मान प्राप्त करने के लिए पर्यवेक्षित ओपीएलएस-डीए का उपयोग किया गया था। सामान्यीकृत डेटा पर एक टी-परीक्षण लागू किया गया था। वीआईपी > 1 और पी <0.05 वाले मेटाबोलाइट्स को संभावित बायोमार्कर माना गया और आगे उनकी पहचान की गई।

2.11 बायोमार्कर पहचान और मार्ग विश्लेषण

टीआईसी क्रोमैटोग्राम से सटीक अवधारण समय (आरटी), एम/जेड और आणविक भार प्राप्त किया गया था। कंपाउंड डिस्कवरर ऑनलाइन डेटाबेस (HMDB, KEGG) का उपयोग करके उम्मीदवार सूत्रों और मौलिक संरचना की भविष्यवाणी की गई थी। मेटाबोएनालिस्ट का उपयोग करके पाथवे संवर्धन किया गया।

2.12 ऑस्टियोब्लास्ट संस्कृति और विभेदन

MC3T3-E1 माउस कैलवेरियल ऑस्टियोब्लास्ट को 37 डिग्री CO2_22 इनक्यूबेटर में संवर्धित किया गया। जब 80%-90% संगम हुआ, तो कोशिकाओं को ओस्टोजेनिक प्रेरण के लिए चढ़ाया गया। ओस्टियोजेनिक पूर्ण माध्यम में 10 mmol·L−1^{-1}−1 -ग्लिसरोफॉस्फेट, 50 μmol·L−1^{-1}−1 एस्कॉर्बिक एसिड, और 100 nmol·L−1^{-1}−1 डेक्सामेथासोन के साथ पूरक -MEM शामिल है।

2.13 साइटोटोक्सिसिटी परख

सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन CCK-8 द्वारा किया गया था। MC3T3-E1 कोशिकाओं (5 × 103^33 कोशिकाओं/कुएं) को 96-अच्छी प्लेटों में डाला गया और रात भर इनक्यूबेट किया गया। फिर कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए TFE (2–12 ug·mL−1^{-1}−1), CS (50–250 ug·mL−1^{-1}−1), या GLcN (0.2–1.0 mmol·L−1^{-1}−1) से उपचारित किया गया। व्यवहार्यता की गणना के लिए 450 एनएम पर अवशोषण मापा गया था। परिणामों के आधार पर, टीजी बनाम नियंत्रण का परीक्षण करने के लिए इष्टतम खुराक का चयन किया गया और संयोजित किया गया।

2.14 एएलपी स्टेनिंग

MC3T3-E1 कोशिकाओं (1 × 104 ^ 44 कोशिकाओं / अच्छी तरह से) को 12-अच्छी तरह से प्लेटों में डाला गया और रिक्त (कोई प्रेरण), नियंत्रण (ओस्टोजेनिक प्रेरण), टी (ओस्टोजेनिक प्रेरण + टीएफई), और टीजी (ओस्टोजेनिक प्रेरण + टीजी) में विभाजित किया गया। हर दूसरे दिन मीडिया बदल दिया जाता था. 7 दिनों के बाद, किट के निर्देशों के अनुसार एएलपी स्टेनिंग की गई।

2.15 एआरएस धुंधलापन

एएलपी स्टेनिंग के समान समूहन और उपचार का उपयोग करके, कोशिकाओं को 14 दिनों के लिए प्रेरित किया गया था। कोशिकाओं को 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड के साथ तय किया गया, 30 मिनट के लिए 0.1% एलिज़ारिन रेड (पीएच 7.2) के साथ रंगा गया, धोया गया और माइक्रोस्कोप के नीचे देखा गया।

2.16 पश्चिमी धब्बा

यह जांचने के लिए कि क्या टीजी BMP-2/स्मैड सिग्नलिंग के माध्यम से ओस्टोजेनिक भेदभाव को प्रभावित करता है, एमसी3टी3-ई1 कोशिकाओं (5 × 105^55 कोशिकाओं/वेल) को ऊपर के समान समूह के साथ 6-वेल प्लेटों में डाला गया था। कोशिकाओं को आरआईपीए प्लस प्रोटीज़ और फॉस्फेट अवरोधकों के साथ मिलाया गया। बीसीए परिमाणीकरण के बाद, प्रोटीन को विकृत किया गया, 10% एसडीएस-पेज द्वारा अलग किया गया, पीवीडीएफ में स्थानांतरित किया गया, अवरुद्ध किया गया, प्राथमिक एंटीबॉडी (जीएपीडीएच, पी-एसएमएडी1/5, स्मैड1, BMP-2, आरयूएनएक्स2, ओएसएक्स, एएलपी) के साथ ऊष्मायन किया गया, इसके बाद एचआरपी माध्यमिक एंटीबॉडी, ईसीएल विकास, इमेजिंग और इमेजजे मात्रा का ठहराव किया गया।

2.17 सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को माध्य ± SD के रूप में व्यक्त किया जाता है। सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए SPSS का उपयोग किया गया था। सामान्यता परीक्षण के बाद, एक तरफ़ा एनोवा का प्रदर्शन किया गया। P <0.05 पर अंतर को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

 

सिस्टैंच से बना अस्थि पोषण अनुपूरक
 

3. परिणाम

3.1 सीरम जैव रासायनिक संकेतक

जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है, दिखावटी समूह की तुलना में, OVX समूह में E2 का स्तर काफी कम हो गया है, जो सफल मॉडल स्थापना का संकेत देता है। ओवीएक्स समूह में सीरम पिनपी में काफी कमी आई, जो पीएमओपी में हड्डियों के निर्माण में कमी का संकेत देता है। ओवीएक्स की तुलना में, टी और टीजी समूहों में पिनपी में काफी वृद्धि हुई है, यह दर्शाता है कि टी और टीजी दोनों ने टीजी में बेहतर रिकवरी के साथ हड्डी निर्माण मार्करों में वृद्धि की है। दिखावे की तुलना में, OVX में CTX-I में काफी वृद्धि हुई है, जो ओवरीएक्टोमी के बाद हड्डी के पुनर्जीवन में वृद्धि का संकेत देता है। ओवीएक्स की तुलना में, टी और टीजी में सीटीएक्स-आई में काफी कमी आई है, टीजी में अधिक स्पष्ट कमी आई है। ओवीएक्स बनाम दिखावटी में सीरम हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन (एस-हाइप) में काफी वृद्धि हुई है, जो बढ़े हुए कोलेजन क्षरण का संकेत देता है; ओवीएक्स की तुलना में, टी और टीजी में एस-हाइप में कमी आई, टीजी में उल्लेखनीय कमी के साथ, कोलेजन क्षरण के बेहतर अवरोध का संकेत मिलता है।

3.2 मूत्र जैव रासायनिक संकेतक

दिखावे की तुलना में, यूपी में ओवीएक्स में उल्लेखनीय वृद्धि हुई; ओवीएक्स की तुलना में, यूपी टीजी में अधिक स्पष्ट रूप से कमी आई। ओवीएक्स बनाम दिखावटी में यू-सीए में उल्लेखनीय वृद्धि हुई; ओवीएक्स की तुलना में, टीजी में बड़ी कमी के साथ, टी और टीजी दोनों में यू-सीए में काफी कमी आई। ओवीएक्स बनाम दिखावटी में मूत्र हाइप (यू-हाइप) में काफी वृद्धि हुई; ओवीएक्स की तुलना में, प्रत्येक उपचार समूह में यू-हाइप में काफी कमी आई, टी की तुलना में टीजी में अधिक कमी आई (तालिका 2)।

3.3 अस्थि हिस्टोपैथोलॉजी

एचई स्टेनिंग से पता चला कि मज्जा गुहा में कम एडिपोसाइट्स के साथ, ट्रैब्युलर निरंतरता दिखावे में अच्छी थी। दिखावे की तुलना में, ओवीएक्स ने खराब ट्रैब्युलर निरंतरता दिखाई और उल्लेखनीय रूप से एडिपोसाइट्स में वृद्धि हुई। ओवीएक्स की तुलना में, टी और टीजी में ट्रैब्युलर निरंतरता में सुधार हुआ और एडिपोसाइट संख्या में कमी आई; टीजी ने अधिक स्पष्ट पुनर्प्राप्ति दिखाई (चित्र 1ए)। टीआरएपी धुंधलापन से पता चला कि ओवीएक्स बनाम दिखावटी में ऑस्टियोक्लास्ट संख्या में काफी वृद्धि हुई थी; ओवीएक्स की तुलना में, टी और टीजी में ऑस्टियोक्लास्ट में कमी आई, टीजी में उल्लेखनीय कमी आई (चित्र 1बी)।

3.4 अस्थि खनिज घनत्व और माइक्रो-सीटी पैरामीटर

माइक्रो-सीटी ने शम की तुलना में ओवीएक्स में हड्डी के द्रव्यमान में काफी कमी देखी। ओवीएक्स की तुलना में, टीजी में अस्थि द्रव्यमान की रिकवरी टी की तुलना में अधिक महत्वपूर्ण थी, ट्रैब्युलर घनत्व में स्पष्ट वृद्धि के साथ (चित्र 1सी)। मात्रात्मक विश्लेषण से पता चला कि OVX बनाम दिखावटी में BV/TV, Tb.Th, और Tb.N में काफी कमी आई है। ओवीएक्स की तुलना में, टीजी (टी से बेहतर) के बाद इन सूचकांकों में उल्लेखनीय वृद्धि हुई। OVX बनाम दिखावटी में Tb.Sp और SMI में उल्लेखनीय वृद्धि हुई; ओवीएक्स की तुलना में, टीजी ने इन सूचकांकों को टी (तालिका 3) की तुलना में काफी कम कर दिया।

3.5 PCA

सकारात्मक और नकारात्मक दोनों आयन मोड के तहत, सप्ताह 3, 6, और 8 में मूत्र मेटाबोलाइट प्रोफाइल के पीसीए ने शम, ओवीएक्स और टीजी समूहों के बीच स्पष्ट अलगाव दिखाया, जो मॉडलिंग से पहले/बाद में और टीजी उपचार से पहले/बाद में अलग-अलग चयापचय प्रोफाइल का संकेत देता है (मूल प्रकाशन संदर्भ में संदर्भित पूरक सामग्री देखें)।

3.6 संभावित बायोमार्कर स्क्रीनिंग

ओपीएलएस-डीए ने दोनों आयन मोड में हफ्तों में अधिक स्पष्ट समूह अलगाव दिखाया। ज्वालामुखी भूखंडों और 200-क्रमपरिवर्तन परीक्षणों ने मॉडल विश्वसनीयता का समर्थन किया (R2Y और Q2 1 के करीब; Q2 अवरोधन <0), कोई ओवरफिटिंग नहीं होने का सुझाव देता है।

3.7 बायोमार्कर पहचान और मार्ग विश्लेषण

वीआईपी> 1 और पी <0.05 का उपयोग करके, संभावित बायोमार्कर की जांच की गई। एम/जेड, एमएस/एमएस, आरटी, और आणविक भार के आधार पर और एचएमडीबी/केईजीजी को संदर्भित करते हुए, 46 संभावित बायोमार्कर की पहचान की गई। केईजीजी संवर्धन संकेतित मार्गों में मुख्य रूप से निकोटिनेट और निकोटिनमाइड चयापचय, हिस्टिडीन चयापचय, पाइरीमिडीन चयापचय, ट्रिप्टोफैन चयापचय, डी-एमिनो एसिड चयापचय, एलानिन/एस्पार्टेट/ग्लूटामेट चयापचय, प्यूरीन चयापचय और विटामिन बी 6 चयापचय (चित्रा 2) शामिल हैं। टीजी हस्तक्षेप के बाद पदानुक्रमित क्लस्टरिंग ने सप्ताह 3, 6 और 8 में गतिशील परिवर्तन दिखाए (मूल प्रकाशन संदर्भ में संदर्भित पूरक सामग्री देखें)।

3.8 साइटोटोक्सिसिटी परख

24 घंटे के उपचार के बाद, 6 ug·mL−1^{-1}−1 TFE ने कोशिका व्यवहार्यता में वृद्धि की; उच्च खुराक से व्यवहार्यता बाधित होती है। 0.4 mmol·L−1^{-1}−1 पर GLcN ने व्यवहार्यता में उल्लेखनीय वृद्धि की। 150 ug·mL−1^{-1}−1 पर सीएस ने व्यवहार्यता में वृद्धि की (तालिका 4)। इस प्रकार, 6 ug·mL−1^{-1}−1 TFE, 0.4 mmol·L−1^{-1}−1 GLcN, और 150 ug·mL−1^{-1}−1 CS का चयन किया गया। संयुक्त खुराक ने 1.00 ± 0.11 की नियंत्रण व्यवहार्यता और 1.22 ± 0.03 की टीजी व्यवहार्यता दिखाई, जो दर्शाता है कि चयनित टीजी खुराक सुरक्षित और गैर-साइटोटॉक्सिक थी।

3.9 ओस्टोजेनिक विभेदन और प्रोटीन अभिव्यक्ति पर प्रभाव

एएलपी ओस्टोजेनिक विभेदन का प्रारंभिक मार्कर है। ओस्टियोजेनिक इंडक्शन के तहत, टीजी ने टी की तुलना में गहरे एएलपी धुंधलापन दिखाया, जो एएलपी अभिव्यक्ति के बेहतर प्रचार का संकेत देता है (चित्र 3ए)। एआरएस धुंधलापन से पता चला कि टी और टीजी दोनों ने नियंत्रण की तुलना में खनिजयुक्त नोड्यूल गठन को बढ़ावा दिया, टीजी में अधिक स्पष्ट प्रभाव के साथ (चित्र 3बी)। वेस्टर्न ब्लॉट ने प्रेरण के तहत ओस्टोजेनिक मार्करों की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति दिखाई। ब्लैंक की तुलना में, नियंत्रण ने सफल ओस्टोजेनिक भेदभाव का संकेत दिया। उपचार के बाद, टीजी में अधिक मजबूती से वृद्धि हुई BMP-2, पी-स्मैड1/5, आरयूएनएक्स2, ओएसएक्स, और एएलपी प्रोटीन अभिव्यक्ति (चित्र 3सी; तालिका 5)।

 

4. चर्चा

रजोनिवृत्ति के बाद डिम्बग्रंथि विफलता एस्ट्रोजन के स्तर को कम करती है और हड्डी के चयापचय को बाधित करती है, ऑस्टियोक्लास्ट भेदभाव को बढ़ाती है जबकि ऑस्टियोब्लास्ट भेदभाव को कम करती है, अंततः हड्डियों के नुकसान का कारण बनती है [14-15]। पूर्व शोध के आधार पर [13], यह अनुमान लगाया गया था कि हड्डी के पोषण संबंधी पूरक के साथ टीएफई का संयोजन पीएमओपी में सुधार करने में सहक्रियात्मक प्रभाव डाल सकता है। इसलिए, इस अध्ययन में टीजी प्रभावकारिता और तंत्र का मूल्यांकन करने के लिए एक ओवीएक्स चूहा मॉडल और एक ऑस्टियोब्लास्ट भेदभाव मॉडल का उपयोग किया गया।

टी और टीजी दोनों द्वारा पिनपी (हड्डी निर्माण) और सीटीएक्स-आई (हड्डी पुनर्वसन) में सुधार किया गया, टीजी ने अधिक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया। हाइड्रोक्सीप्रोलाइन (हाइप), एक प्रमुख कोलेजन घटक, ओपी [16-17] में सीरम और मूत्र में बढ़ जाता है। इस अध्ययन में, ओवीएक्स ने सीरम और मूत्र हाइप दोनों में वृद्धि की; उपचार ने इन स्तरों को कम कर दिया, टीजी ने उन्हें टी की तुलना में काफी हद तक कम कर दिया। ओवीएक्स में हड्डी के अवशोषण में वृद्धि से कैल्शियम और फास्फोरस की हानि भी बढ़ जाती है, जिससे मूत्र में कैल्शियम और फास्फोरस बढ़ जाता है, जो कि डेसाई एस एट अल के अनुरूप है। [18]. उपचार से यू-सीए और यूपी में कमी आई, साथ ही टीजी में अधिक कमी आई। एस्ट्रोजन की कमी ट्रैब्युलर संरचना को बदल देती है, बीएमएससी ऑस्टियोजेनेसिस को रोकती है, एडिपोजेनेसिस को बढ़ावा देती है, और ऑस्टियोक्लास्ट गतिविधि को बढ़ाती है [19]। टीजी ने ट्रैब्युलर कनेक्टिविटी में सुधार किया, मज्जा एडिपोसाइट्स को कम किया, और टी की तुलना में ऑस्टियोक्लास्ट संख्या को अधिक प्रभावी ढंग से कम किया। माइक्रो-सीटी ने पुष्टि की कि टीजी ने बीएमडी में वृद्धि की और टीबी.एसपी और एसएमआई को कम करते हुए ट्रैब्युलर माइक्रोआर्किटेक्चर (बीवी/टीवी, टीबी.टीएच, टीबी.एन) में सुधार किया।

क्योंकि ओपी एक चयापचय रोग है, इसलिए टीजी द्वारा विनियमित चयापचय नेटवर्क का पता लगाने के लिए मेटाबोलॉमिक्स का उपयोग किया गया था। टीजी के विनियमित मार्गों में मुख्य रूप से अमीनो एसिड, न्यूक्लियोटाइड और विटामिन चयापचय शामिल हैं। ट्रिप्टोफैन बीएमडी से जुड़ा है और कम स्तर ओपी [20] को चिह्नित कर सकता है। इस अध्ययन में, ओवीएक्स में ट्रिप्टोफैन को कम कर दिया गया था और टीजी उपचार के 8 सप्ताह के बाद काफी हद तक बहाल कर दिया गया था, यह सुझाव देते हुए कि टीजी ट्रिप्टोफैन चयापचय को संशोधित करके हड्डियों के नुकसान को कम कर सकता है। आर्जिनिन/क्रिएटिन चयापचय से जुड़ा क्रिएटिनिन, ओपी [21-22] के साथ जुड़ा हुआ है। यहां, सप्ताह 8 में ओवीएक्स में क्रिएटिनिन उच्चतम था और टीजी ने इसे काफी कम कर दिया, जिससे पता चलता है कि आर्गिनिन चयापचय का विनियमन पीएमओपी सुधार में योगदान दे सकता है। ग्लूटाथियोन चयापचय पीएमओपी [23] में भाग लेता है। एल-ग्लूटामेट ग्लूटाथियोन (जीएसएच) चयापचय से उत्पन्न किया जा सकता है। जीएसएच में एंटीऑक्सीडेंट कार्य होते हैं और यह हड्डी के पुनर्निर्माण में सहायता करता है [24]। पीएमओपी में, ऑक्सीडेटिव तनाव बढ़ जाता है, एंटीऑक्सीडेंट क्षमता कम हो जाती है, और ऑस्टियोक्लास्ट गतिविधि ऑस्टियोब्लास्ट गतिविधि से अधिक हो जाती है, जिससे हड्डियों का निर्माण ख़राब हो जाता है [15]। इस अध्ययन में, सप्ताह 8 में ओवीएक्स में एल-ग्लूटामेट अधिक था, और टीजी ने एल-ग्लूटामेट को कम कर दिया, सुझाव दिया कि टीजी जीएसएच के एल-ग्लूटामेट में रूपांतरण को कम कर सकता है और इस तरह जीएसएच स्तर का समर्थन कर सकता है और एस्ट्रोजेन-कमी से संबंधित चयापचय असामान्यताओं का प्रतिकार कर सकता है।

ओपी में प्यूरीन चयापचय संबंधी विकारों से यूरिक एसिड संचय हो सकता है [25-27]। मेटाबोलोमिक्स ने दिखाया कि ओवीएक्स की तुलना में टीजी ने सप्ताह 3, 6, और 8 में यूरिक एसिड के स्तर को कम कर दिया है, जो प्यूरीन संश्लेषण और यूरिक एसिड संचय के दमन का सुझाव देता है। एलआईयू डीएफ एट अल. [28] बताया गया है कि प्यूरीन चयापचय विकारों से राहत के लिए हस्तक्षेप एडेनोसिन को बढ़ा सकता है। इस अध्ययन में, टीजी ने 8 सप्ताह के बाद एडेनोसिन में उल्लेखनीय वृद्धि की, जो ओस्टोजेनिक भेदभाव और हड्डी की रिकवरी में योगदान का सुझाव देता है।

विटामिन (डी, बी कॉम्प्लेक्स, के) हड्डियों के चयापचय में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं [29-31]। नियासिन और निकोटिनमाइड विटामिन बी3 के रूप हैं [32]। नियासिन सूजनरोधी और एंटीऑक्सीडेंट प्रभावों के साथ एनएडी/एनएडीपी कोएंजाइम संश्लेषण में योगदान देता है [33]। निकोटिनमाइड एनएडी उत्पादन को भी बढ़ावा दे सकता है; एनएडी माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का समर्थन करता है, आरओएस क्षति को कम करता है, और हड्डी के होमियोस्टैसिस को बनाए रखने में मदद करता है। ओपी में, कम एनएडी ओस्टोजेनिक भेदभाव और खनिजकरण में बाधा उत्पन्न कर सकता है [34]। इस अध्ययन में, सप्ताह 3, 6, और 8 में ओवीएक्स में नियासिन और निकोटिनमाइड अधिक थे (सप्ताह 8 में उच्चतम)। लेखकों ने अनुमान लगाया कि बीमारी में एनएडी संश्लेषण ख़राब हो सकता है, जिससे नियासिन/निकोटिनमाइड का संचय हो सकता है और एनएडी कम हो सकता है, जबकि टीजी ने नियासिन/निकोटिनमाइड के स्तर को कम कर दिया है, जो संभवतः एनएडी संश्लेषण के लिए खपत को दर्शाता है। पाइरिडोक्सामाइन (पीएम) विटामिन बी6 [35] का हिस्सा है। विटामिन बी 6 चॉन्ड्रोजेनिक भेदभाव का समर्थन करता है [36], और बी 6 की कमी कोलेजन क्रॉसलिंकिंग और हड्डियों की ताकत को कमजोर कर सकती है [37]। विटामिन बी 6 चयापचय को पीएमओपी प्रगति से जोड़ा गया है [38]। इस अध्ययन में, 8वें सप्ताह में ओवीएक्स में पीएम कम था, जबकि टीजी ने पीएम में वृद्धि की, जो कोलेजन और हड्डी की ताकत को समर्थन देने में संभावित भूमिका का सुझाव देता है।

हड्डी के पुनर्निर्माण के दौरान, ऑस्टियोब्लास्ट हड्डी के निर्माण में मध्यस्थता करते हैं। एएलपी और एआरएस धुंधलापन क्रमशः प्रारंभिक ओस्टोजेनेसिस और देर से खनिजकरण को दर्शाते हैं, और आमतौर पर ओस्टोजेनिक प्रेरण [39-40] के तहत बढ़ते हैं। यहां, टीजी ने अकेले टीएफई की तुलना में एएलपी गतिविधि और खनिजयुक्त नोड्यूल्स को अधिक प्रभावी ढंग से बढ़ाया। बीएमपी टीजीएफ-सुपरफैमिली के सदस्य हैं और ओस्टोजेनिक भेदभाव में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। BMP-2 रिसेप्टर्स को बांधता है, Smad1/5/8 (Smad4 के साथ) को सक्रिय करता है, और RUNX2 और डाउनस्ट्रीम OSX जैसे प्रतिलेखन कारकों को बढ़ावा देता है, अंततः ओस्टोजेनिक प्रोटीन संश्लेषण, बाह्य मैट्रिक्स जमाव और खनिजकरण को बढ़ावा देता है [41]। पिछले शोध में बताया गया था कि टीएफई BMP-2/RUNX2/OSX मार्ग [42] के माध्यम से बीएमएससी ऑस्टियोजेनेसिस को बढ़ावा देता है। इस अध्ययन में BMP-2/Smad सिग्नलिंग पर ध्यान केंद्रित किया गया और पाया गया कि अकेले TFE की तुलना में TG में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि हुई है BMP-2, p-Smad1/5, RUNX2, OSX और ALP अभिव्यक्ति, जो कि BMP-2/Smad के माध्यम से मध्यस्थता वाले एक मजबूत प्रो-ओस्टोजेनिक प्रभाव का समर्थन करता है।

संक्षेप में, इन विवो और इन विट्रो परिणामों से संकेत मिलता है कि टीजी प्रभावी रूप से ओवीएक्स-प्रेरित हड्डी चयापचय असामान्यताओं में सुधार करता है। तंत्र में अमीनो एसिड, न्यूक्लियोटाइड और विटामिन चयापचय का विनियमन और ऑस्टियोजेनेसिस को बढ़ावा देने के लिए BMP-2/स्मॉड सिग्नलिंग का सक्रियण शामिल हो सकता है। यह अध्ययन पीएमओपी की रोकथाम और उपचार में टीजी के लिए सैद्धांतिक समर्थन प्रदान करता है।

 

5. उद्योग परिप्रेक्ष्य: रजोनिवृत्ति के बाद हड्डी के स्वास्थ्य के लिए वानस्पतिक घटक रुझान-तंत्र-उन्मुख अनुसंधान से मानकीकृत विनिर्माण तक

एसईओ फोकस: पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस के लिए हर्बल अर्क, हड्डियों के स्वास्थ्य के लिए वानस्पतिक सामग्री, ऑस्टियोजेनेसिस BMP-2/स्मैड पाथवे, एपिमेडियम फ्लेवोनोइड्स (इकारिन) अर्क, चयापचय-निर्देशित वनस्पति उत्पाद विकास.

5.1 बी2बी में तंत्र-आधारित "पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस के लिए जड़ी-बूटी का अर्क" सामग्री क्यों मायने रखती है

ब्रांडों, आयातकों और निर्माणकर्ताओं के लिएमहिलाओं की सेहतऔरहड्डी का स्वास्थ्यपोर्टफ़ोलियो के अनुसार, बाज़ार तेजी से उन वनस्पति अवधारणाओं को पुरस्कृत करता है जिन्हें इसमें समझाया जा सकता हैस्पष्ट वैज्ञानिक तर्क-उदाहरण के लिए:

मल्टी-पाथवे मेटाबॉलिक मॉड्यूलेशन (मेटाबोलॉमिक्स-समर्थित), और

ऑस्टियोजेनेसिस-संबंधित सिग्नलिंग मार्ग जैसेBMP-2/स्मॉड.

ऊपर अनुवादित जैसे अध्ययन मूल्यवान हैं क्योंकि वे जुड़ते हैंरचना (टीएफई + सीएस/जीएलसीएन) → फेनोटाइपिक परिणाम (बीएमडी, ऑस्टियोक्लास्ट कमी, माइक्रो-सीटी सूचकांक) → आणविक/जैव रासायनिक साक्ष्य (BMP-2/Smad, PINP/CTX-I) → चयापचय नेटवर्क (विटामिन बी मार्ग, अमीनो एसिड और प्यूरीन चयापचय).

5.2 वानस्पतिक घटक सोर्सिंग: मानकीकरण, पता लगाने की क्षमता, और स्केलेबल निष्कर्षण वास्तविक विभेदक हैं

बी2बी आपूर्ति में, "जड़ी-बूटी" एक एकल विशिष्टता नहीं है-यह एक आपूर्ति श्रृंखला है। तैयार उत्पाद कंपनियों के लिए, मुख्य प्रश्न हैं:

क्या घटक हो सकता है?मानकीकृत(जैसे, मार्कर यौगिक, उंगलियों के निशान)?

वहाँ हैंगुणवत्ता प्रणालीऔरविनिर्माण नियंत्रणदीर्घकालिक आपूर्ति का समर्थन करने के लिए?

क्या आपूर्तिकर्ता प्रदान कर सकता है?दस्तावेज़ीकरण पैकेजविनियामक और ग्राहक लेखापरीक्षा के लिए?

5.3 जहां सिस्टैंच फिट बैठता है (प्रवृत्ति + विनिर्माण क्षमता, स्थानापन्न दावा नहीं)

स्थापित अस्थि-स्वास्थ्य वनस्पति विज्ञान के साथ-साथ (जैसे,एपिमेडियमफ्लेवोनोइड्स),Cistancheटॉनिक फ़ार्मुलों में उपयोग के अपने लंबे इतिहास और उद्योग की बढ़ती प्राथमिकता के कारण व्यापक टीसीएम और कार्यात्मक वनस्पति क्षेत्र में ध्यान आकर्षित किया हैएकल-जड़ी-बूटी का अर्कऔरमानकीकृत क्रियाएँजिसे आधुनिक पूरक प्रारूपों में एकीकृत किया जा सकता है।

उन खरीदारों के लिए जो वनस्पति भागीदारों का मूल्यांकन कर रहे हैं, एक विनिर्माण-उन्मुख आपूर्तिकर्ता प्रोफ़ाइल महत्वपूर्ण हो जाती है:

लंबवत एकीकृत सोर्सिंग,

निष्कर्षण और प्रसंस्करण क्षमता,

और कंपनी पृष्ठभूमि पारदर्शिता।

हमारी विनिर्माण क्षमता के बारे में (संदर्भ स्रोत):कंपनी प्रोफ़ाइल और फ़ैक्टरी पृष्ठभूमि की समीक्षा आपूर्तिकर्ता साइट के आधिकारिक "हमारे बारे में" पृष्ठ पर की जा सकती है। ([xjcistanche.com])

B2B ब्लॉग के लिए अनुपालन नोट:यदि आपके उत्पाद की स्थिति "पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस" को लक्षित करती है, तो सुनिश्चित करें कि आपकी बाहरी भाषा बनी रहेसंरचना/कार्ययापोषण संबंधी सहायता-उन्मुख (आपके बाज़ार के आधार पर), और रोग-उपचार के दावों से बचें जब तक कि स्थानीय विनियमन द्वारा समर्थित और अनुमति न हो।

और जानें (आपूर्तिकर्ता संदर्भ पृष्ठ):

कंपनी सिंहावलोकन/फ़ैक्टरी पृष्ठभूमि: ([xjcistanche.com])

संबंधित वनस्पति सामग्री केंद्र (टीसीएम व्यंजन और घटक कहानी):(अंतिम यूआरएल पथ सही होने की पुष्टि करने के बाद आपका प्रदान किया गया संदर्भ लिंक डाला जा सकता है)

 

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