मानव गुर्दे में सीडी 8 और सीडी 4 टी सेल आबादी
Mar 25, 2022
सार:पृष्ठभूमि: सीमा स्थलों पर और आंतरिक अंगों में, ऊतक-निवासी मेमोरी टी कोशिकाएं (टीआरएम) वायरस, बैक्टीरिया, कवक और कैंसर जैसे रोगजनकों के खिलाफ प्रतिरक्षा बाधा में योगदान करती हैं। हालांकि, मानव गुर्दे में इन कोशिकाओं की उपस्थिति और कार्य के बारे में जानकारी बहुत कम है। इस अंग में टी सेल-मध्यस्थता प्रतिरक्षाविज्ञानी रक्षा को बेहतर ढंग से समझने के लिए, हमने स्वस्थ और एलोग्राफ़्ट में मौजूद सीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाओं के फेनोटाइपिक और कार्यात्मक पहलुओं को निर्धारित करने का लक्ष्य रखा है।गुर्दा ऊतक। तरीके: मल्टीचैनल फेलो साइटोमेट्री का उपयोग करते हुए, हमने स्वस्थ वृक्क ऊतक के नमूनों में टी कोशिकाओं के फेनोटाइप और कार्य का आकलन किया (n=5) औरगुर्दाएलोग्राफ़्ट ऊतक (एन=7) और इन पहलुओं की तुलना स्वस्थ नियंत्रण से परिधीय रक्त में टी कोशिकाओं से की (एन=13)। परिणाम:गुर्दाऊतक के नमूनों में पर्याप्त मात्रा में CD8 और CD4 T कोशिकाएँ थीं। परिसंचारी कोशिकाओं के विपरीत,गुर्दाT कोशिकाओं ने अक्सर CD69 और CD103 को व्यक्त किया और अधिक बार सक्रिय रूप से साइकिल चला रहे थे। इसके अलावा, लगभग सभीगुर्दाT कोशिकाओं ने CXCR3 व्यक्त किया, और अक्सर प्रचलन में T कोशिकाओं की तुलना में CXCR6 व्यक्त किया। उल्लेखनीय रूप से,गुर्दाटी कोशिकाओं ने परिसंचारी कोशिकाओं की तुलना में अधिक मात्रा में आईएफएन का उत्पादन किया और अक्सर पॉलीफंक्शनल थे। निष्कर्ष: टीआरएम के विशिष्ट लक्षणों वाली कार्यात्मक टी कोशिकाएं मानव में रहती हैंगुर्दाऊतक। ये कोशिकाएँ अधिक बार सक्रिय रूप से साइकिल चलाती हैं और अक्सर CXCR3 और CXCR6 व्यक्त करती हैं।
कीवर्ड:ऊतक-निवासी लिम्फोसाइट्स; टी-कोशिकाएं; सीडी8; सीडी4; सीडी69; सीडी103; गुर्दा; अलोग्राफ़्ट
किडनी/गुर्दे की बीमारी में सुधार करेगा सिस्टांचे
1 परिचयरेजिडेंट मेमोरी टी सेल्स (TRM) रोगजनकों के खिलाफ दीर्घकालिक स्थानीयकृत रक्षा प्रदान करने के लिए ऊतकों में बनी रहती हैं। टी कोशिकाओं के पुनरावर्तन के विपरीत, परिधीय रक्त में टीआरएम आबादी का पता नहीं लगाया जा सकता है, और उनके फेनोटाइप, कार्य और चयापचय के संबंध में टी सेल आबादी को पुन: प्रसारित करने से काफी भिन्न होता है। वास्तव में, यह इस तथ्य पर विचार करते हुए आश्चर्य की बात नहीं है कि विभिन्न अंग प्रणालियां, जैसे कि फेफड़े, विभिन्न रोगजनकों के उच्च भार के संपर्क में हैं, जो संचलन के मामले में है, जो आमतौर पर बाहरी दुनिया से अलग है [2]।TkM का ऊतक प्रतिधारण वर्षों तक बना रहता है और तंत्र द्वारा मध्यस्थता की जाती है जिसमें स्फिंगोसिन-1-फॉस्फेट रिसेप्टर1 (S1PR1)-स्फिंगोसिन 1-फॉस्फेट (SP1) अक्ष शामिल होता है। S1PR1 टी कोशिकाओं द्वारा व्यक्त एक रिसेप्टर है जो बायोएक्टिव सिग्नलिंग अणु SP1 के लिए बाध्य होने पर माध्यमिक लिम्फोइड अंगों से बाहर निकलने की मध्यस्थता करता है, जो टी सेल तस्करी का एक महत्वपूर्ण मध्यस्थ है। इस अक्ष को CD69 द्वारा बाधित किया जा सकता है, एक झिल्ली-बाध्य सी-टाइप लेक्टिन जो S1PR1 अभिव्यक्ति का विरोध करता है, इस प्रकार प्रतिधारण की मध्यस्थता करता है। इसके अलावा, चूहों में S1PR1 अभिव्यक्ति प्रतिलेखन कारक क्रुप्पेल-जैसे फैक्टर 2 (KLF2) से प्रेरित है, जिसे TRM में डाउनग्रेड किया गया पाया गया, जिससे लिम्फोसाइट इग्रेशन [3] भी बाधित हुआ। बदले में, KLF2 के डाउनरेगुलेशन को टी कोशिकाओं (होबिट) में ब्लिंप के प्रतिलेखन कारक होमोलोग द्वारा मध्यस्थता के रूप में दिखाया गया था, जो कि murine T कोशिकाओं [4] में TpM- विशिष्ट तरीके से व्यक्त किया गया है। इसके अलावा, कुछ टीआरएम सीडी 103 (इंटीग्रिन ई) भी व्यक्त करते हैं, जिससे टीआरएम को सीडी 69 और सीडी 103 अभिव्यक्ति का उपयोग करके पहचाना जा सकता है [1]।
जबकि विभिन्न मानव ऊतकों के लिए टीआरएम फेनोटाइप और कार्य पर ज्ञान बढ़ रहा है, इन पहलुओं के बारे में बहुत कम जानकारी हैगुर्दा. यहां, टी कोशिकाओं को रोगजनकों के एक अलग सेट से अवगत कराया जाता है जैसे कि निचले मूत्र पथ से आने वाले बैक्टीरिया और पॉलीओमावायरस बीके (बीकेपीवाईवी) जैसे रेनोट्रोपिक वायरस। दरअसल, हमने हाल ही में वर्णन किया है कि कैसे मानव गुर्दे में CD69 और/या CD103 को व्यक्त करने वाली T कोशिकाओं का एक उपसमुच्चय होता है, जिनमें CD8 T कोशिकाएं विशेष रूप से BKPyV प्रोटीन वायरियन प्रोटीन1 (VP1) और बड़े T एंटीजन (LTAG) प्रोटीन [5] को लक्षित करती हैं। हमने, और अन्य लोगों ने, म्यूकोसा से जुड़े अपरिवर्तनीय टी (एमएआईटी) कोशिकाओं को व्यक्त करते हुए सीडी69/सीडी103-की उपस्थिति का भी प्रदर्शन किया।गुर्दाऊतक [6,7]।
यह समझने के लिए कि किस प्रकार की टी कोशिकाएं इस अंग में स्थानीय प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का गठन करती हैं, हमने मल्टीचैनल फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग फेनोटाइप और कार्य की जांच के लिए किया।गुर्दाटीआरएम, दाता से अलगगुर्दागुर्दा प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं (आरटीआर) की सामग्री और स्वस्थ सेगुर्दारीनल क्लियर सेल कार्सिनोमा से सटे ऊतक, यह देखने के लिए कि ये आबादी प्रचलन में टी सेल आबादी की तुलना कैसे करती है।हमने पाया वो इंसानगुर्दाऊतक में पर्याप्त मात्रा में CD4 और CD8 T कोशिकाएँ होती हैं जो केवल CD69, CD69, और CD103, या इनमें से कोई भी मार्कर व्यक्त नहीं करती हैं। हमने पाया कि सीडी69-सीडी103- सेलगुर्दाऊतक संचलन में टी कोशिकाओं से काफी भिन्न होते हैं और एक टीआरएम आबादी का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं जिसमें विहित टीआरएम मार्करों की कमी होती है। इसके अलावा, हम दिखाते हैं कि किडनी टी कोशिकाएं अक्सर सक्रिय रूप से साइकिल चलाती हैं, जैसा कि रक्त की तुलना में Ki-67 की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति से पता चलता है। हमने यह भी पाया कि CD8 और CD4 T कोशिकाएँगुर्दाऊतक लगभग हमेशा CXCR3 व्यक्त करते हैं और अक्सर CXCR6 व्यक्त करते हैं। ये निष्कर्ष किडनी-निवासी मेमोरी टी सेल आबादी के आकर्षण और रखरखाव में इन केमोकाइन रिसेप्टर्स के लिए एक भूमिका निभाते हैं।
2। सामग्री और प्रणालियां
2.1. रोगी और नमूनेएम्स्टर्डम यूएमसी स्थान एएमसी के बायोबैंक रीनल डिजीज से नमूने प्राप्त किए गए थे। इस बायोबैंक में रोगी के नमूने, जैसे रक्त औरगुर्दाऊतक, स्वस्थ जीवन से एकत्र और संग्रहीत किए जाते हैंगुर्दाडोनर और आरटीआर जिनका किडनी ट्रांसप्लांट से पहले और बाद में पालन किया जाता है। यह अध्ययन हेलसिंकी और इस्तांबुल की घोषणाओं में उल्लिखित सिद्धांतों के अनुसार आयोजित किया गया था और सभी प्रतिभागियों ने बायोबैंक में नामांकन से पहले लिखित सूचित सहमति प्रदान की थी। इसके अतिरिक्त, ट्यूमर नेफरेक्टोमी (ट्यूमर से दूर गुर्दे के ऊतक) से गुजरने वाले रोगियों के अवशिष्ट ऊतक को पैथोलॉजी विभाग द्वारा दान कर दिया गया था और बायोबैंक में भी संग्रहीत किया गया था। फेडरेशन ऑफ डच मेडिकल साइंटिफिक सोसाइटीज की आचार संहिता (मानव ऊतक और चिकित्सा अनुसंधान: जिम्मेदार उपयोग के लिए आचार संहिता, 2011 www.federa.org) के अनुसार इन ऊतकों को गुमनाम रूप से संसाधित किया गया था।
2.2. परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल (PBMCs)रक्त के नमूने साइटोमेगालोवायरस (सीएमवी) -सेरोनगेटिव स्वस्थ नियंत्रण (जीवित) से प्राप्त किए गए थेगुर्दासर्जरी से पहले दाता, n= 13)। इस अध्ययन में भाग लेने वालों के लक्षण तालिका 1 में प्रदर्शित किए गए हैं। पीबीएमसी को सोडियम हेपरिन रक्त से मानक घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग किया गया था और बाद में विश्लेषण के दिन तक क्रायोप्रेसिव किया गया था।
2.3. गुर्दा ऊतकगुर्दे के स्वस्थ ऊतक के नमूने (n {0}}) गुर्दे से प्राप्त किए गए थे जिन्हें वृक्क कोशिका कार्सिनोमा (गुर्दे के विपरीत ध्रुव से दूर के गैर-ट्यूमर ऊतक) और प्रत्यारोपण गुर्दे के ऊतक (n {{1) के कारण शल्य चिकित्सा द्वारा हटा दिया गया था। }}) प्रत्यारोपण विफलता के बाद खोजे गए वृक्क अललोग्राफ़्ट से प्राप्त किया गया था। इन नमूनों को क्रमशः स्वस्थ और प्रतिरोपित गुर्दा के नमूने के रूप में संदर्भित किया जाता है। किडनी कॉर्टेक्स के स्लाइस को 1- मिमी क्यूब्स में McElwain ऊतक चॉपर (टेड पेला, रेडिंग, सीए, यूएसए) के साथ काट दिया गया था, 5 0 एमएल ट्यूबों में स्थानांतरित कर दिया गया था, और ठंडे पीबीएस से धोया गया था जब तक कि कोई रक्त नहीं था। स्पष्ट रूप से मौजूद था और सतह पर तैरनेवाला स्पष्ट था। पहले से गरम (37 डिग्री) पाचन माध्यम जोड़ा गया, 40 एमएल प्रति 10 ग्राम ऊतक (डीएनएएस टाइप IV (50 केयू/एमएल) (सिग्मा एल्ड्रिच, ज़्विइंड्रेक्ट, नीदरलैंड्स), कोलेजनेज़ टाइप IV (0.5 मिलीग्राम/एमएल) (वर्थिंगटन बायोकेमिकल, लेकवुड, एनजे, यूएसए), बीएसए (60 मिलीग्राम / एमएल) (सिग्मा एल्ड्रिच), 20 यूएल / एमएल भ्रूण बछड़ा सीरम (एफसीएस, वीडब्ल्यूआर इंटरनेशनल बीवी, एम्स्टर्डम, नीदरलैंड्स), टीआरआईएस (0.025 एम) (मर्क बीवी, एम्स्टर्डम, नीदरलैंड), पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (बायोक्रोम GMBH, बर्लिन, जर्मनी) HBSS (वेस्टबर्ग बीवी, ल्यूसडेन, नीदरलैंड) में), और 37 डिग्री पर 20 मिनट के लिए एक प्रकार के बरतन में इनक्यूबेट किया गया। वार्म सस्पेंशन को सी-ट्यूब (मिल्टेन्वी, बर्गिस्स ग्लैडबैक, जर्मनी) में स्थानांतरित कर दिया गया और जेंटलमैक्स (मिल्टनी) पर M_प्लीहा_04.01 कार्यक्रम के अधीन किया गया। पाचन माध्यम को ठंडे पीबीएस के साथ निष्क्रिय कर दिया गया था और परिणामस्वरूप सेल निलंबन एकल-कोशिका निलंबन प्राप्त करने के लिए एक सेल छलनी के माध्यम से पारित किया गया था, जो निर्माता के प्रोटोकॉल (लिम्फोप्रेप, एबॉट डायग्नोस्टिक्स टेक्नोलॉजीज एएस, ओस्लो, नॉर्वे) के अनुसार मानक घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन के अधीन था। ) पृथक मोनोन्यूक्लियर सेल (किडनी बहुराष्ट्रीय कंपनियां) थेआईएमडीएम में विश्लेषण के दिन तक क्रायोप्रिजर्व्ड 20 प्रतिशत एफसीएस, 000036 वी/वी प्रतिशत -मर्कैप्टोएथेनॉल, 5 प्रतिशत डीएमएसओ, पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक।
2.4. फ़्लो साइटॉमेट्रीLSRFortessa फ्लो साइटोमीटर (BD Biosciences) पर माप किए गए। प्रत्येक नमूने के लिए, 2 × 1 0 6 पीबीएमसी या 0.5 × 106 से 10 × 106 किडनी बहुराष्ट्रीय कंपनियों का विश्लेषण किया गया। प्रत्येक धुंधला प्रतिक्रिया की मात्रा कोशिकाओं की संख्या के सापेक्ष थी और एंटीबॉडी सांद्रता स्थिर रही। कोशिकाओं को सतह एंटीबॉडी (पूरक तालिका S1) के साथ अंधेरे में 4 डिग्री पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। फिक्स करने योग्य व्यवहार्यता डाई eFluor455UV (eBioscience Inc., थर्मो फिशर साइंटिफिक, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके मृत कोशिकाओं को बाहर रखा गया था। फॉक्सपी3/ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर स्टेनिंग सेट (eBioscience Inc.) का उपयोग करके कोशिकाओं के निर्धारण और पारगम्यीकरण के बाद इंट्रासेल्युलर लक्ष्य (पूरक तालिका S1) के साथ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी जोड़े गए थे। इम्यूनोलॉजिकल उद्देश्यों के लिए फ्लो साइटोमेट्री और सेल छँटाई के लिए प्रकाशित विधियों का पालन किया गया [8]। फेनोटाइपिक विश्लेषण के लिए उपयोग की जाने वाली गेटिंग रणनीति को पूरक चित्र S1 में पाया जा सकता है। हमने पहले दिखाया है कि विश्लेषण किए गए मार्करों में से कोई भी किडनी बहुराष्ट्रीय कंपनियों [7] को अलग करने के लिए उपयोग की जाने वाली पाचन विधि से प्रभावित नहीं था।
ऊतक नमूना सीमाओं के परिणामस्वरूप पर्दे के पैनल से नमूनों का बहिष्करण हुआ। स्वस्थ PBMCs, स्वस्थ किडनी बहुराष्ट्रीय कंपनियों और TX किडनी में प्रति नमूना विश्लेषण किए गए CD3 प्लस सेल काउंट को चित्र S3 में पाया जा सकता है। बहुराष्ट्रीय कंपनियों के नमूनों का विश्लेषण केवल तब किया गया जब उनमें लिम्फोसाइट के भीतर 50 प्रतिशत से अधिक जीवित कोशिकाएं थीं, जैसा कि व्यवहार्यता डीवी द्वारा मूल्यांकन किया गया था, और सीडी69/सीडी103 आधारित टी सेल-उपसमुच्चय को केवल तभी चित्रित किया गया था जब उनकी कुल सेल संख्या 50 से अधिक थी।
सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की खराबी में सुधार होगा
2.5. उत्तेजना परखPBMC और किडनी MNC को पहले वर्णित [7,9] के रूप में उत्तेजित किया गया था। पीबीएमसी और किडनी बहुराष्ट्रीय कंपनियों को डीएनए I (200 केयू / एमएल) की उपस्थिति में धोया गया, धोया गया, और अनुपचारित, गोल-नीचे, 96-वेल प्लेट्स (कॉर्निंग) में संस्कृति माध्यम (आरपीएमआई के साथ पूरक) में रात भर ठीक होने की अनुमति दी गई। 10 प्रतिशत एफसीएस और पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन) 20 × 106/एमएल （100 μL/well） की एकाग्रता पर।
अगली सुबह, कोशिकाओं को उत्तेजित करने के लिए फोर्बोल 12-मिरिस्टेट 13-एसीटेट (पीएमए, 10 एनजी/एमएल; सिग्मा एल्ड्रिच) और आयनोमाइसिन (1 ug/mL; सिग्मा एल्ड्रिच) मिलाया गया। अकेले माध्यम को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में जोड़ा गया था। सीडी28 (क्लोन 15ई8; 2 कुरूप/एमएल), सीडी29 (क्लोन टीएस 2/16; 1 कुरूप/एमएल), ब्रेफेल्डिन ए (10 कुरूप/एमएल, इंविट्रोजन), और गोल्गीस्टॉप ( बीडी बायोसाइंसेज) को 37 डिग्री पर 4 घंटे के लिए 200 यूएल की अंतिम मात्रा में और 5 प्रतिशत सीओ2 में।
इसके बाद, कोशिकाओं को सतह एंटीबॉडी (पूरक तालिका S2) के साथ 30 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। फिक्स करने योग्य व्यवहार्यता डाई eFluor780 (बायोसाइंस इंक, थर्मो फिशर साइंटिफिक, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके मृत कोशिकाओं को बाहर रखा गया था। इंट्रासेल्युलर धुंधला (टेबल एस 1) के लिए मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को साइटोफिक्स / साइटोपर्म रिएजेंट सेट (बीडी बायोसाइंसेस) का उपयोग करके कोशिकाओं के निर्धारण और पारगम्यीकरण के बाद जोड़ा गया था। कोशिकाओं को दो बार धोया गया और एक LSRFortessa प्रवाह साइटोमीटर पर विश्लेषण किया गया। कार्यात्मक विश्लेषण में प्रयुक्त गेटिंग रणनीति को पूरक चित्र S2 में पाया जा सकता है। प्रत्येक टी सेल उपसमुच्चय की बहुक्रियाशीलता का निर्धारण करने के लिए, प्रत्येक जनसंख्या के कार्यों की औसत संख्या की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई थी: ((1 साइटोकाइन का उत्पादन करने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत) * 1) प्लस ([2 साइटोकिन्स का उत्पादन करने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत] * 2) प्लस ([3साइटोकिन्स का उत्पादन करने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत] * 3) प्लस ([4 साइटोकिन्स का उत्पादन करने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत] * 4) प्लस ([सभी 5 साइटोकिन्स का उत्पादन करने वाली कोशिकाओं का प्रतिशत] * 5)) / 100।
2.6.डेटा विश्लेषण
फ्लोजो संस्करण 10 (फ्लोजो, एशलैंड, ओआर, यूएसए) का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया था। विंडोज के लिए ग्राफपैड प्रिज्म संस्करण 8.00 का उपयोग करके सभी ग्राफ और आंकड़े बनाए गए थे (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, ला जोला, सीए, यूएसए)। आंकड़ों के सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए भी इसी कार्यक्रम का उपयोग किया गया था। गैर-पैरामीट्रिक मान-व्हिटनी-यू परीक्षण का उपयोग अयुग्मित नमूनों के महत्व को निर्धारित करने के लिए किया गया था। युग्मित नमूनों की तुलना करने के लिए, विलकॉक्सन हस्ताक्षरित-रैंक परीक्षण का उपयोग किया गया था। पी मूल्यों<0.05 were="" considered="" statistically="">
3। परिणाम
3.1. स्वस्थ किडनी ऊतक में टी कोशिकाओं द्वारा सीडी8 और/या सीडी4 और टिश्यू रेजीडेंसी के मार्करों की विशिष्ट अभिव्यक्तिसबसे पहले, हमने CD4 और CD8 की अभिव्यक्ति की तुलना CD3-परिधीय रक्त में सकारात्मक T कोशिकाओं द्वारा स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में पाई गई कोशिकाओं से की। सीडी4-सीडी8 प्लस (सीडी8) टी कोशिकाओं को गुर्दे के ऊतकों में रक्त ((माध्य) 25 प्रतिशत बनाम 38 प्रतिशत) (चित्रा ला) की तुलना में काफी अधिक बार पता चला था। इसके विपरीत, सीडी 4 * सीडी {{9} }(सीडी4) टी कोशिकाओं को गुर्दे के ऊतकों की तुलना में रक्त में उच्च आवृत्तियों में पाया गया ((70 प्रतिशत बनाम 52 प्रतिशत) चित्रा ला)। कुल मिलाकर, CD4 T कोशिकाओं को CD8 T कोशिकाओं (चित्र 1b) की तुलना में स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में अधिक बार देखा गया।
इसके बाद, हमने ऊतक-निवास मार्करों, CD69 और CD1 03 की अभिव्यक्ति की जांच CD8 और CD में 4- परिभाषित T सेल उपसमुच्चय में की। जैसा कि अपेक्षित था, CD69 और CD1 0 3 वस्तुतः परिधीय रक्त में कोशिकाओं द्वारा व्यक्त नहीं किए गए थे (चित्र 1c)। स्वस्थ ऊतक में, CD69-CD103-, CD69 plus CD103-, CD69tCD103 plus, और CD69-CD103 प्लस फेनोटाइप को 46 प्रतिशत, 45 प्रतिशत द्वारा व्यक्त किया गया था। CD8T कोशिकाओं का 6.6 प्रतिशत, और 1.8 प्रतिशत, 61 प्रतिशत, 38 प्रतिशत, 0.44 प्रतिशत, और CD4T कोशिकाओं का 0.43 प्रतिशत, क्रमशः (चित्र lc)। अंत में, स्वस्थ मानव गुर्दे के ऊतकों में सीडी 8, लेकिन विशेष रूप से सीडी 4 टी कोशिकाओं को पर्याप्त संख्या में पाया गया। इसके अलावा, CD69 और CD103 की अभिव्यक्ति, ऊतक-निवास के मार्कर, मुख्य रूप से स्वस्थ ऊतक में पाए जाने वाले टी कोशिकाओं में पाए गए, न कि रक्त में।
3.2. स्वास्थ्य में/किडनी ऊतक द्वारा टी सेल द्वारा सामान्य सबसेट-डिनोमिनेटिंग मार्करों के विभिन्न अभिव्यक्ति पैटर्न
CD45RA, एक tyrosine phosphatase, CCR7, एक केमोकाइन रिसेप्टर, जिसे माध्यमिक लिम्फोइड अंगों के लिए T सेल तस्करी में मध्यस्थता करने के लिए जाना जाता है, और CD28 और CD27, दोनों कॉस्टिम्युलेटरी रिसेप्टर्स, T सेल सक्रियण में दृढ़ता से शामिल हैं, सभी मार्कर पारंपरिक रूप से कार्यात्मक T सेल सबसेट J1 की पहचान करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। {53}},1ली. हम जांच करना चाहते थे कि रक्त में इन उपसमुच्चय का वितरण गुर्दे के ऊतकों में वितरण से किस हद तक भिन्न है। जैसा कि अपेक्षित था, प्रचलन में पाए गए सबसे बड़े CD8 T सेल उपसमुच्चय (यानी, जो कुल जनसंख्या के 5 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर हैं) वे थे जिनके पास CD45RA प्लस CCR7 प्लस CD28 प्लस CD27 प्लस (बेवकूफ टी सेल या TN) थे। मंझला) 13 प्रतिशत), सीडी45आरए-सीसीआर7 प्लस सीडी28 प्लस सीडी27 प्लस (सेंट्रल-मेमोरी टीसेल्स या टीसीएम, 6 प्रतिशत), सीडी45आरए-सीसीआर7-सीडी28 प्लस सीडी27 प्लस (टीईवी1,30 प्रतिशत), CD45RA-CCR7-CD28 plus CD27-(Tau2,10 प्रतिशत ), CD45RA-CCR7-CD28-CD27*(TEy3,6 प्रतिशत) , CD45RA-CCR7-CD28-CD27-(TM4,6 प्रतिशत) और CD45RA प्लस CCR7-CD28-CD27-(TEMRA ,10 प्रतिशत) फेनोटाइप। स्वस्थ ऊतक में, लगभग कोई (0.6 प्रतिशत) सीडी 8 टी कोशिकाओं को टीएन फेनोटाइप के साथ नहीं पाया गया था और केवल कुछ (0.8 प्रतिशत) ने टैक्स फेनोटाइप प्रदर्शित किया था। इसके विपरीत, स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में पाए गए सीडी 8 टी कोशिकाओं में काफी टीईवी 1- (22 प्रतिशत), टीईएम 2- (12 प्रतिशत), टीपीएक्स 3- (18 प्रतिशत), टीईएक्स { {65}} (23 प्रतिशत), और टीईआरए (11 प्रतिशत) टी सेल आबादी (चित्रा एलडी और चित्रा एस4)। रक्त में सीडी4 टी कोशिकाओं को देखते समय, सबसे बड़ी आबादी वे थे जो एक Ty- (35 प्रतिशत), TcM- (25 प्रतिशत), TEMl- (16 प्रतिशत), TFM 2- (9 प्रतिशत), और अन्यथा निर्दिष्ट नहीं CD45RAtCCR7-CD28 प्लस CD27* फेनोटाइप (0.4 प्रतिशत) (चित्र 1d और चित्र S4) वाली आबादी। स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में, कुछ CD4 T कोशिकाओं ने TN- (3 प्रतिशत) या TcM व्यक्त किया। -(3 प्रतिशत) फेनोटाइप। इसके बजाय, स्वस्थ ऊतक (चित्रा एलडी और चित्रा एस 4) में एक टीईएम 1- (22 प्रतिशत), टीईएम 2- (40 प्रतिशत), या टीईएम 4 (14 प्रतिशत) फेनोटाइप के साथ पर्याप्त संख्या में कोशिकाओं का पता चला था। . अंत में, CD45RA/CCR7/CD28/CD27-परिभाषित CD8 और CD4 T सेल उपसमुच्चय का वितरण रक्त और स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों के बीच काफी भिन्न होता है।
3.3. स्वस्थ मानव गुर्दे के ऊतकों में सीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाएं अक्सर सक्रिय रूप से साइकिल चलाने वाली कोशिकाओं को शामिल करती हैंइसके बाद, हमने जांच की कि क्या रक्त और गुर्दे के ऊतकों में सीडी 8 और सीडी 4 टी सेल आबादी के बीच साइटोटोक्सिक इफ़ेक्टर-मेमोरी प्रोफाइल के विशिष्ट मार्करों की अभिव्यक्ति में अंतर है। सबसे पहले, हमने टी-बॉक्स ट्रांसक्रिप्शन कारकों टी-बेट और ईओमेसो-डर्मिन (ईओएमएस) की अभिव्यक्ति को देखा। ये ट्रांसक्रिप्शनल रेगुलेटर इंटरफेरॉन-वाई और ग्रैनजाइम बी जैसे अणुओं की अभिव्यक्ति को प्रेरित करने और माध्यमिक मेमोरी प्रतिक्रियाओं की पीढ़ी में तीव्र चरण प्रभावकारी कोशिकाओं को उत्पन्न करने में सीधे शामिल होते हैं। जैसा कि अपेक्षित था, परिसंचरण सीडी 8 कोशिकाओं (54 प्रतिशत) के बीच टी-शर्त की अभिव्यक्ति अक्सर होती थी, जबकि परिसंचरण सीडी 4 टी कोशिकाओं ने शायद ही कभी इस प्रतिलेखन कारक (13 प्रतिशत) को दबाया। दिलचस्प बात यह है कि सीडी4 टी कोशिकाओं के लिए, टी-शर्त की अभिव्यक्ति परिसंचरण (53 प्रतिशत बनाम 13 प्रतिशत) की तुलना में स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में पाई गई टी कोशिकाओं में काफी अधिक थी। कुछ अभिव्यक्ति को परिसंचारी सीडी8 टी कोशिकाओं (59 प्रतिशत) के बीच भी अक्सर पाया गया था, जबकि फिर से संचार सीडी 4 टी कोशिकाओं (15 प्रतिशत) के बीच दुर्लभ था। हालांकि, रक्त की तुलना में गुर्दे के ऊतकों (32 प्रतिशत) में सीडी 4 टी कोशिकाओं के बीच ईओएम अभिव्यक्ति अधिक बार होती थी (चित्र 2ए,बी)।
इसके बाद, हमने ग्रैनजाइम बी की अभिव्यक्ति की जांच की, एक सेरीन प्रोटीज जिसे साइटोटोक्सिक टी कोशिकाओं द्वारा साइटोप्लाज्म में इंजेक्शन के बाद एपोप्टोसिस की मध्यस्थता के लिए जाना जाता है। पिछली रिपोर्टों के अनुसार, सीडी 8 टी कोशिकाओं (28 प्रतिशत) को प्रसारित करने में पर्याप्त संख्या में टी-बेट और ग्रैनजाइम बी अभिव्यक्ति का पता चला था। हालांकि, सीडी 4 टी कोशिकाओं (1 प्रतिशत) को प्रसारित करने के बीच इसकी अभिव्यक्ति दुर्लभ थी, सीडी 8 टी कोशिकाओं के लिए, ग्रैनजाइम बी अभिव्यक्ति गुर्दे के ऊतकों और परिसंचारी आबादी (28 प्रतिशत ys.23 प्रतिशत) (चित्रा 2 सी) में समान थी। दिलचस्प बात यह है कि किडनी सीडी 4 टी कोशिकाओं में पाई गई उच्च टी-बेट और ईओएम अभिव्यक्ति आवृत्तियों इस डिब्बे में ग्रैनजाइम बी की उच्च अभिव्यक्ति आवृत्ति (5 प्रतिशत) के अनुरूप नहीं थीं। हमने तब KLRGl की अभिव्यक्ति को देखा, एक सहसंयोजक रिसेप्टर जिसे मुख्य रूप से साइटोटोक्सिक एक्यूट फेज़ इफ़ेक्टर सेल्स और इफ़ेक्टर-मेमोरी सेल्स द्वारा व्यक्त किया जाता है। KLRG1 को CD8 T सेल्स (54 प्रतिशत) को प्रसारित करके अक्सर व्यक्त किया गया था, लेकिन CD4 T सेल्स द्वारा नहीं ( 10 प्रतिशत )। CD8 या CD4 T कोशिकाओं के लिए KLRG1l अभिव्यक्ति में संरचनात्मक डिब्बों के बीच कोई अंतर नहीं पाया गया। अंत में, हमने Ki -67 की अभिव्यक्ति की जांच की, जो एक मार्कर है जो सक्रिय रूप से साइकिल चलाने वाली कोशिकाओं को दर्शाता है। पिछली टिप्पणियों के अनुरूप, सीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाओं को प्रसारित करने के बीच की -67 अभिव्यक्ति दुर्लभ थी (क्रमशः 1 प्रतिशत और 2 प्रतिशत)। दिलचस्प है, सीडी 8 टी कोशिकाओं के बीच, लेकिन विशेष रूप से सीडी 4 टी कोशिकाओं के बीच, की -67 अभिव्यक्ति गुर्दे के ऊतकों (क्रमशः 3 प्रतिशत और 11 प्रतिशत) में टी कोशिकाओं में काफी अधिक पाई गई थी (चित्र 2ई)। अंत में, सीडी 4 टी कोशिकाओं को स्वस्थ मानव गुर्दे के ऊतकों में पाया गया, लेकिन इस डिब्बे में सीडी 8 टी कोशिकाओं को नहीं, अधिक बार टी-बेट और होम्स व्यक्त किया गया। हालांकि, यह किडनी सीडी 4 टी कोशिकाओं द्वारा ग्रैनजाइम बी की अधिक लगातार अभिव्यक्ति में तब्दील नहीं हुआ। इसके अलावा, हालांकि साइक्लिंग कोशिकाओं की कुल संख्या कम थी, गुर्दे के ऊतकों में संचलन की तुलना में काफी अधिक सक्रिय रूप से सीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाओं को सक्रिय रूप से शामिल किया गया था।
3.4. स्वस्थ किडनी ऊतक में CD8 और CD4 T कोशिकाएँ लगभग सभी CXCR हैं3-स्थितिहमने तब अन्य मार्करों की अभिव्यक्ति में अंतर की तलाश की, जो कि तुरंत साइटोटोक्सिक मेमोरी एल्स की आबादी को प्रसारित करने में विशिष्ट नहीं है, जैसा कि पहले टी सेल आबादी को प्रसारित करने के लिए दिखाया गया था। हमने सबसे पहले IL-7R की अभिव्यक्ति को देखा, जो मुख्य रूप से प्रचलन में भोले और प्रारंभिक-विभेदित स्मृति कोशिकाओं पर व्यक्त की गई थी, जहां यह होमोस्टैटिक प्रसार [10,12,13] को बनाए रखने में शामिल है। परिधीय रक्त में, IL-7Ra को अक्सर CD8 T कोशिकाओं (84 प्रतिशत) और CD4 T कोशिकाओं (98 प्रतिशत) द्वारा व्यक्त किया जाता था। स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में सीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाओं ने इस मार्कर को टी कोशिकाओं (क्रमशः 71 प्रतिशत और 76 प्रतिशत) (चित्रा 2 एफ) को प्रसारित करने की तुलना में काफी कम बार व्यक्त किया।
इसके बाद, हमने कई अन्य केमोकाइन रिसेप्टर्स की अभिव्यक्ति की जांच की, दिलचस्प बात यह है कि, CXCR3, एक केमोकाइन रिसेप्टर है, जो कि सूजन वाले ऊतकों की तस्करी में शामिल है [14-17], गुर्दे के ऊतकों में बड़ी संख्या में CD8 और CD4 T कोशिकाओं द्वारा व्यक्त किया गया था (99) प्रतिशत और 91 प्रतिशत, क्रमशः), और टी कोशिकाओं (क्रमशः 58 प्रतिशत और 26 प्रतिशत) को परिचालित करके काफी कम बार (चित्र 2g)। अंत में, हमने CXCR6 की अभिव्यक्ति निर्धारित की, जिसे TRM आबादी [18-22] बनाने में फंसाया जाता है। जबकि CXCR6 को CD8 T कोशिकाओं (16 प्रतिशत) के परिसंचारी की केवल एक छोटी आबादी द्वारा व्यक्त किया गया था, और वस्तुतः CD4 T कोशिकाओं को प्रसारित करके नहीं। गुर्दे के ऊतकों में सीडी8 और सीडी4 कोशिकाओं का काफी बड़ा अनुपात इस अणु (क्रमशः 40 प्रतिशत और 40 प्रतिशत) को व्यक्त करता है (चित्र 2ह)। अंत में, मार्कर आमतौर पर परिसंचरण में एक तत्काल विभेदित स्थिति से जुड़े नहीं होते हैं, संभावित -7 रा, सीसीआर 7, सीडी 28, और सीडी 27, रक्त की तुलना में किडनी सीडी 8 और टी कोशिकाओं द्वारा काफी कम व्यक्त किए गए थे। इसके विपरीत, किडनी टी कोशिकाओं ने अधिक बार CXCR6 व्यक्त किया और लगभग हमेशा CXCR3 व्यक्त किया।
3.5.स्वस्थ किडनी और एलोग्राफ़्ट टी कोशिकाओं के बीच फेनोटाइप में अंतर न्यूनतम हैंइसके बाद, हम यह जांचना चाहते थे कि क्या ये निष्कर्ष विभिन्न नैदानिक संकेतों (टैब 1) के लिए प्राप्त किए गए प्रत्यारोपित किडनी एलोग्राफ़्ट से ऊतक में बने रहे।स्वस्थ और एलोग्राफ़्ट ऊतक में CD8 और CD4 T कोशिकाओं की संख्या के संबंध में, कोई अंतर नहीं देखा गया (चित्र 3a)। हालाँकि, हमने स्वस्थ ऊतक में अधिक सीडी 4 टी कोशिकाओं और कम सीडी 8 टी कोशिकाओं की ओर एक निरर्थक प्रवृत्ति देखी, जो कि एलोग्राफ़्ट ऊतक (चित्रा 3 बी) की तुलना में अधिक है। इसके अतिरिक्त, CD69/CD103अभिव्यक्ति और CD45RA/CCR7/CD28/CD27-परिभाषित उपसमुच्चय को देखते समय, CD69/CD103- या CD45RA/CCR7/CD28/CD27- के वितरण में कोई अंतर नहीं है। CD8/CD4 फेनोटाइप (चित्र 3d और चित्र S5) की परवाह किए बिना, परिभाषित उपसमुच्चय नोट किए गए थे। साइटोटोक्सिक परिसंचारी टी कोशिकाओं के लिए अधिक विशिष्ट मार्करों की अभिव्यक्ति आवृत्तियों की जांच करते समय, हमें स्वस्थ किडनी या एलोग्राफ़्ट टी कोशिकाओं (चित्रा 3 ए, जीएच) के बीच टी-बेट, केएलआरजी 1 या ग्रैनजाइम बी की अभिव्यक्ति में कोई अंतर नहीं मिला। हमने पाया कि स्वस्थ ऊतक टी कोशिकाओं (चित्रा 3 एफ) की तुलना में ईओएम अभिव्यक्ति को एलोग्राफ़्ट ऊतक सीडी 4 टी कोशिकाओं में कम बार देखा गया था। अन्य मार्करों की अभिव्यक्ति में कोई अंतर नहीं देखा गया। (चित्र 3-l और चित्र S5b-d)। अंत में, एलोग्राफ़्ट सीडी 4 टी कोशिकाओं के बीच ईओएम की कम अभिव्यक्ति आवृत्ति के अलावा, सेल आबादी अध्ययन आबादी के बीच भिन्न नहीं थी।
3.6. सीडी69-सीडी103-गुर्दे के ऊतकों में टी कोशिकाएं परिसंचारी कोशिकाओं से भिन्न होती हैंसीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाओं के समान फेनोटाइपिक मेकअप को स्वस्थ किडनी टिशू और किडनी एलोग्राफ़्ट टिशू में पाया गया, हमने सीडी 69 और सीडी 103 एक्सप्रेशन के अनुसार इन कोशिकाओं की विशेषताओं की जांच करने के लिए दोनों अध्ययन समूहों के डेटा को जमा किया। चूँकि CD69-CD103 प्लस सेल हमेशा बहुत कम आवृत्तियों में पाए गए थे(<50 events),="" we="" excluded="" these="" cells="" from="" further="" analyses.="">सबसे पहले, हमने CD69/CD10किडनी टी सेल आबादी में 3 सह-अभिव्यक्ति (चित्र 4 और चित्र S6) के अनुसार इन उपसमुच्चय में अंतर की जांच की। दिलचस्प बात यह है कि CD8 और CD4 T कोशिकाओं दोनों के लिए, CD45RA/CCR7/CD28/CD27-CD के बीच परिभाषित उपसमुच्चय69-CD103-,CD69 प्लस CD{ के वितरण में पर्याप्त अंतर नोट किया गया था। {14}}और CD69*CD103* उपसमुच्चय। CD8 T कोशिकाओं के लिए, CD69-CD103-कोशिकाओं में TeyRA कोशिकाओं (21 प्रतिशत) की एक बड़ी आबादी थी जो CD69 प्लस CD103- और CD69 प्लस CD103 सबसेट (5.8) के बीच बहुत छोटी थी। प्रतिशत और 2.2 प्रतिशत, क्रमशः)। इसके बजाय, इन बाद की आबादी में TEy3 (क्रमशः 13 प्रतिशत, 30 प्रतिशत, और 32 प्रतिशत) और TEy4 (8 प्रतिशत, 19 प्रतिशत, और 33 प्रतिशत, क्रमशः) उप-जनसंख्या बहुत बड़ी थी। CD4 T कोशिकाओं के लिए, CD69-CD103-, CD69*CD103-, और CD69 प्लस CD103* उपसमुच्चय (2.6 प्रतिशत,0 प्रतिशत और 1.7 प्रतिशत) के बीच कुछ TEyRA कोशिकाओं को देखा गया। क्रमश)। इसके बजाय, इन कोशिकाओं में TFw1 (क्रमशः 26 प्रतिशत .24 प्रतिशत, और 10 प्रतिशत, क्रमशः) और TEy2 ells (क्रमशः 30 प्रतिशत, 46 प्रतिशत और 27 प्रतिशत) की बड़ी उप-जनसंख्या थी। CD69 प्लस CD103-और विशेष रूप से CD69*CD103* कोशिकाओं के बीच, एक बहुत बड़ा TEM4 उप-जनसंख्या देखी गई (क्रमशः 6 प्रतिशत, 11 प्रतिशत और 34 प्रतिशत)।
इन अंतरों और पिछले अवलोकन को देखते हुए कि किडनी टी सेल आबादी में मुश्किल से टीएन और टीसीएम कोशिकाएं शामिल थीं, हमने गुर्दे के ऊतकों में पाए जाने वाले सीडी69-सीडी103-कोशिकाओं की जांच की ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि ये कोशिकाएं किस हद तक थीं न केवल गुर्दा परिसंचरण से गुजरने वाली कोशिकाओं को परिचालित करना। ऐसा करने के लिए, हमने इन कोशिकाओं की तुलना परिसंचारी कोशिकाओं से की। CD69-CD103~किडनी ऊतक में कोशिकाएँ संचलन में मौजूद कोशिकाओं से काफी भिन्न होती हैं: T-bet, Ki-67, और CXCR3 को किडनी T कोशिकाओं द्वारा अधिक बार व्यक्त किया गया था, CD8/CD4 फेनोटाइप (चित्र) की परवाह किए बिना 5ए-सी)। इसके विपरीत, IL-7R, CCR7, CD28, और CD27 सभी को CD69-CD103- किडनी T कोशिकाओं द्वारा काफी कम बार व्यक्त किया गया, CD8/CD4 फेनोटाइप (चित्र 5d-) की परवाह किए बिना। जी)। CD69-CD103-CD4 गुर्दे के ऊतकों में T कोशिकाओं ने KLRG1 को रक्त की तुलना में काफी अधिक बार व्यक्त किया और CD69-CD103-किडनी के ऊतकों में CD8 T कोशिकाओं ने Eomes की तुलना में काफी अधिक बार व्यक्त किया। रक्त में।
इसके बाद, हम यह देखना चाहते थे कि CD69 और CD103 सह-अभिव्यक्ति कार्यात्मक क्षमता के मार्करों को कैसे प्रभावित करते हैं। सबसे पहले, हमने साइटोटोक्सिक क्षमता से जुड़े मार्करों को देखा। हालांकि अलग-अलग उप-जनसंख्या के बीच अंतर नोट किया गया था, सीडी 69 या सीडी103 को सह-संपीड़ित (चित्रा 6ए,बी) में सीडी8 टी कोशिकाओं में टी-बेट और ईओएम के लिए कोई परिणामी पैटर्न नहीं देखा गया था। इसके विपरीत, सीडी4 टी कोशिकाओं में ये प्रतिलेखन कारक दोनों एक साथ बढ़े हैं। CD69 और CD103 सह-अभिव्यक्ति (चित्र 6a,b)। KLRG1 को देखते समय, हमने देखा कि CD8 T कोशिकाओं के लिए, KLRG1 अभिव्यक्ति CD69 / CD103 सह-अभिव्यक्ति के साथ घट गई। सीडी 4 टी कोशिकाओं के लिए एक समान प्रवृत्ति देखी गई। हालाँकि, यहाँ केवल CD69-CD103-कोशिकाओं ने KLRG1 को CD69 प्लस CD103- और CD69 प्लस CD103* कोशिकाओं (चित्र 6c) की तुलना में अधिक आवृत्ति पर व्यक्त किया। ऊतक-निवास के मार्करों के साथ ग्रैनजाइम बी की अभिव्यक्ति आवृत्तियों में भी गिरावट आई है, इसकी अभिव्यक्ति आवृत्ति सीडी 6 9 प्लस सीडी 103 * कोशिकाओं के बीच सबसे कम है, सीडी 8 और सीडी 4 टी कोशिकाओं (चित्रा 6 डी) दोनों के भीतर। Ki -67 की अभिव्यक्ति, जो रक्त में T कोशिकाओं की तुलना में किडनी T कोशिकाओं में अधिक थी, CD69 या CD103 सह-अभिव्यक्ति (चित्र 6e) के अनुसार भिन्न नहीं थी।
हमने तब CD69 / CD103 सह-अभिव्यक्ति के अनुसार सामान्य रूप से एक नॉनसाइटोटॉक्सिक मेमोरी प्रोफाइल से जुड़े मार्करों की जांच की। IL-7Ra, CCR7, और CD28 की अभिव्यक्ति CD69-CD103- आबादी के भीतर उच्चतम थी, जिसमें CD69/CD103 के सह-अभिव्यक्ति के साथ-साथ अभिव्यक्ति को परिभाषित करने की प्रवृत्ति थी (चित्र 6f-h ) फिर हमने CXCR3 और CXCR6 के व्यंजक को देखा। दोनों केमोकाइन रिसेप्टर्स को अक्सर CD69t CD103t कोशिकाओं द्वारा व्यक्त किया गया था, CD8 / CD4 फेनोटाइप की परवाह किए बिना, और CD69 / CD103 के सह-अभिव्यक्ति के साथ एक ऊपर की ओर रुझान दिखाया। केवल CXCR6 के लिए, यह प्रवृत्ति सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण थी, जिसने CD8 और CD4 टेल्स (चित्र 6j, k) दोनों को प्रभावित किया। अंत में, गुर्दे के ऊतकों में सीडी 69- सीडी 103- कोशिकाएं परिसंचरण में कोशिकाओं से काफी भिन्न होती हैं और सीडी 69 या सीडी103 अभिव्यक्ति द्वारा चिह्नित नहीं होने वाली एक और टीबीवी आबादी की चिंता कर सकती हैं। CD69 और CD103 सह-अभिव्यक्ति के संदर्भ में CD8/CD4 फेनोटाइप की परवाह किए बिना लगातार भिन्न होने वाला एकमात्र मार्कर CXCR6 था।
3.7. गुर्दे के ऊतकों में टी कोशिकाएं रक्त में टी कोशिकाओं की तुलना में अधिक बार इंटरफेरॉन का उत्पादन करती हैंअंत में, हमने सीडी 8/सीडी द्वारा साइटोकिन उत्पादन क्षमता की जांच की 4- गुर्दे के ऊतकों में टी सेल आबादी को परिभाषित किया। सबसे पहले, हमने इंटरफेरॉन-वाई (आईएफएनवाई), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर (टीएनएफ), इंटरल्यूकिन -2 (आईएल -2), ग्रैनुलोसाइट-मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (जीएम-सीएसएफ) के उत्पादन की तुलना की, और IL-17 उत्तेजित CD8/CD4- द्वारा रक्त में पाए जाने वाले स्वस्थ गुर्दा ऊतक (चित्र 7a-e) के लिए परिभाषित टी सेल आबादी। दिलचस्प बात यह है कि केवल IFNy को स्वस्थ किडनी ऊतक में T कोशिकाओं के अधिक अनुपात द्वारा लगातार व्यक्त किया गया था, जब रक्त में T कोशिकाओं की तुलना में, CD8 / CD4 फेनोटाइप (चित्र 7a) की परवाह किए बिना। व्यक्तिगत उपसमुच्चय स्तर पर अंतर भी देखा गया। विशेष रूप से, TNF और GM-CSF गुर्दे के ऊतकों में CD4 T कोशिकाओं द्वारा अधिक बार उत्पादित किए गए थे (चित्र 7b.c)। पॉलीफंक्शनलिटी (यानी, एक साथ उत्पादित साइटोकिन्स की संख्या) के संबंध में, गुर्दे के ऊतकों में सीडी 4 टी कोशिकाएं रक्त में सीडी 4 कोशिकाओं (चित्रा 7 एफ) की तुलना में अधिक पॉलीफंक्शनल पाई गईं।
इसके बाद, हमने स्वस्थ और एलोग्राफ़्ट ऊतक से उत्तेजित टी कोशिकाओं के बीच साइटोकिन उत्पादन क्षमता में अंतर देखा। व्यक्तिगत साइटोकिन्स के उत्पादन में कोई अंतर नहीं है, या स्वस्थ या एलोग्राफ़्ट किडनी ऊतक (चित्रा S7) से टी कोशिकाओं के बीच एक साथ उत्पादित साइटोकिन्स की संख्या में कोई अंतर नहीं पाया गया। चूँकि CD69 को T कोशिकाओं की उत्तेजना पर व्यक्त किया जाता है, हमने केवल CD103-नकारात्मक और CD103-को व्यक्त करने वाले CD4 और CD8 T कोशिकाओं (चित्र 7g-) के बीच अंतर का अध्ययन किया। सीडी 4 और सीडी 8 टी कोशिकाओं की तुलना सीडी 103 को गुर्दे के ऊतकों में सीडी 103 को व्यक्त नहीं करने वाली कोशिकाओं के साथ करते समय, हमने देखा कि सीडी 8 और सीडी 4 सीडी 103 कोशिकाओं ने सीडी 103- कोशिकाओं (चित्रा 7 जी) की तुलना में अधिक आईएफएनवाई व्यक्त की। इसके अतिरिक्त, हालांकि IL-1ZA- उत्पादक कोशिकाएं CD103 प्लस CD8 और CD4 T कोशिकाओं में गुर्दे के ऊतकों में कम थीं, वे लगातार इस जनसंख्या में CD103- जनसंख्या की तुलना में अधिक बार पाई गईं। अंत में, गुर्दे के ऊतकों में अधिक टी 'कोशिकाओं ने सीडी 8/सीडी 4 फेनोटाइप की परवाह किए बिना, टी कोशिकाओं को प्रसारित करने की तुलना में आईएफएनवाई का उत्पादन किया। दरअसल, IFNy-उत्पादक कोशिकाओं का उच्चतम प्रतिशत CD4 और CD8 किडनी-व्युत्पन्न टी-कोशिकाओं को व्यक्त करने वाली सीडी 103- के बीच पाया गया। इसके अलावा, गुर्दे के एलोग्राफ़्ट में टी कोशिकाएं इन मापदंडों के संबंध में स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों से भिन्न नहीं थीं।
4। चर्चा
वर्तमान अध्ययन में हमने मानव गुर्दे में सीडी 8 और सीडी 4 की अभिव्यक्ति और ऊतक-निवास, सीडी 6 9 और सीडी 103 के मार्करों के अनुसार टी सेल सबसेट की विविधता को संबोधित किया और इनकी तुलना रक्त से की। CD8 और CD4 T कोशिकाओं की पर्याप्त संख्या वास्तव में गुर्दे के ऊतकों में पाई गई थी। इसके अलावा, गुर्दे में इन टी कोशिकाओं में काफी संख्या में CD69*CD103-कोशिकाएं होती हैं। CD69 प्लस CD103 प्लस कोशिकाओं का भी पता लगाया गया था, लेकिन मुख्य रूप से CD8 T कोशिकाओं के बीच और CD4 T कोशिकाओं के बीच वस्तुतः कोई नहीं थे। एक समान खोज संबंधित फेफड़े टीआरएम पहले [23]। जैसा कि अपेक्षित था, ऐसे CD69 और CD 103- व्यक्त करने वाली आबादी इसके बजाय प्रचलन से अनुपस्थित थे। गुर्दे में टी कोशिकाओं की रक्त के साथ तुलना करते समय एक महत्वपूर्ण अंतर, पारंपरिक सीडी45आरए/सीसीआर7/सीडी28/सीडी27-परिभाषित उपसमुच्चय के एक अलग वितरण से संबंधित है। दिलचस्प बात यह है कि CD28 की अभिव्यक्ति अधिक बार तब व्यक्त नहीं की गई थी जब T कोशिकाएँ CD69 को अकेले या CD103 के संयोजन में सह-संपीड़ित कर रही थीं। सैद्धांतिक रूप से, यह इन आबादी को CD80 और CD86 द्वारा लागत-उत्तेजक संकेतों के प्रति कम संवेदनशील बनाता है। अन्य अंतरों का संबंध CXCR3, CXCR6, और Ki-67 की उच्च अभिव्यक्ति आवृत्ति से है। इसके अतिरिक्त, किडनी टी कोशिकाओं में अक्सर IFNy-उत्पादक कोशिकाएं होती हैं और अक्सर बहुक्रियाशील होती हैं। दरअसल, गुर्दे के भीतर, CD103 प्लस Tpys में उनके CD103-नकारात्मक समकक्षों की तुलना में अधिक IFN-उत्पादक कोशिकाएं होती हैं। इसके अलावा, CD103T कोशिकाओं ने अधिक बार IL-17 का उत्पादन किया, हालांकि यह एक मामूली जनसंख्या से संबंधित था।
सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे के संक्रमण में सुधार होगा
CD8 और CD4 किडनी T कोशिकाओं द्वारा CXCR3 की अधिक लगातार अभिव्यक्ति के संबंध में, CXCR3 / CXCL10 अक्ष को पहले त्वचा, यकृत और लिम्फोइड ऊतक [24-28] में TpM आबादी को आकार देने में शामिल दिखाया गया था। इसके अतिरिक्त, यह सामान्य अर्थों में तनावग्रस्त उपकला और सूजन की तस्करी में शामिल है [14-17]। स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों में इन टी कोशिकाओं के बीच CXCR3 की उच्च आवृत्तियों को देखते हुए, CXCR3 गुर्दे के ऊतकों में भी TRM होमियोस्टेसिस में फंसा हुआ प्रतीत होता है और ऐसा करने के लिए जरूरी नहीं कि सूजन या खतरे के संकेत शामिल हों। CXCR6 के संबंध में, CXCR6 / CXCL16 अक्ष वास्तव में पहले से ही फेफड़े, त्वचा, यकृत और मस्तिष्क जैसे विभिन्न डिब्बों में Tpst की तस्करी के लिए आवश्यक दिखाया गया है, और TRM को मार्गदर्शन और बनाए रखने के लिए आवश्यक एक सार्वभौमिक तंत्र से संबंधित हो सकता है। ऊतकों में, मानव गुर्दे के ऊतकों में टीआरएम से संबंधित [18-22]।
फ़ार्बर और सहकर्मियों ने बड़े पैमाने पर विशेषता दी है और सीडी 8 और सीडी 4 टीआरएम आबादी की तुलना अंग दाताओं से प्राप्त विभिन्न मानव ऊतक प्रकारों में की है। उन्होंने बताया कि कैसे फेफड़े, प्लीहा, छोटी आंतों और विभिन्न माध्यमिक लिम्फोइड ऊतकों में टीआरएम आबादी प्रतिलेख के संबंध में भिन्न होती है, लेकिन वर्तमान अध्ययन [29-31 में जांच की गई साइटोकिन्स सहित विभिन्न प्रोटीनों की अभिव्यक्ति के लिए भी। हालांकि, इन जांचों में मानव गुर्दे में टीआरएम आबादी और इस पर डेटा शामिल नहीं था
विषय दुर्लभ है। हमने पहले दिखाया था कि सीडी 8 टी कोशिकाएं पॉलीओमावायरस बीके वीपी 1 और एलटीएजी प्रोटीन को लक्षित करती हैं, जो एक वायरस से व्युत्पन्न होती हैं, जिसमें गुर्दे की उपकला कोशिकाओं के लिए एक मजबूत ट्रॉपिज्म होता है, जो कि एलोग्राफ़्ट किडनी में पता लगाने योग्य होते हैं। इन वायरस-विशिष्ट टी कोशिकाओं ने समान रोगियों के संचलन में पाए जाने वाले अपने समकक्षों की तुलना में अधिक संख्या में CD69 और CD103 व्यक्त किए। इसके अलावा, इन टी कोशिकाओं ने आम तौर पर एक सीडी45आरए-सीडी27-ग्रैनजाइम बी-नकारात्मक फेनोटाइप [5] व्यक्त किया। बाद में, अन्य लोगों ने ट्रांसप्लांट नेफरेक्टोमी से प्राप्त मानव गुर्दे के ऊतकों में टीआरएम आबादी पर भी रिपोर्ट की है। इस प्रकाशन में, लेखक रिपोर्ट करते हैं कि इन ऊतकों में टी कोशिकाएं मुख्य रूप से सीडी 8 टी सेल [321. हमने इसके बजाय पाया कि सीडी 4 टी कोशिकाओं में वास्तव में सबसे बड़ा टी सेल सबसेट शामिल था। हालाँकि, हमने यह भी पाया कि स्वस्थ गुर्दे के ऊतकों की तुलना में संतुलन, हालांकि महत्वपूर्ण रूप से नहीं, एलोग्राफ़्ट ऊतक में सीडी 8 टी कोशिकाओं की अधिक संख्या की ओर स्थानांतरित हो गया। इस प्रकार, इस विसंगति को एक अलग अध्ययन समूह द्वारा समझाया जा सकता है, और यह हो सकता है कि स्वास्थ्य में, प्रतिरक्षाविज्ञानी रक्षा बाह्य कोशिकीय खतरों पर अधिक केंद्रित है, जैसे बैक्टीरिया, बनाम अधिक इंट्रासेल्युलर खतरों, जैसे कि प्रतिरक्षाविज्ञानी मेजबानों में वायरस और कैंसर। हमें स्वस्थ किडनी और एलोग्राफ़्ट टी कोशिकाओं के बीच अध्ययन किए गए मार्करों में अन्य अंतर नहीं मिले। हालांकि, आगे के शोध, ट्रांसक्रिप्टोम पर व्यापक दृष्टिकोण के साथ तकनीकों का उपयोग करते हुए, जैसे आरएनए अनुक्रमण, या प्रोटिओम, जैसे मास स्पेक्ट्रोमेट्री, को यह स्थापित करने के लिए नियोजित किया जाना चाहिए कि क्या यह वास्तव में मामला है।
इसके अलावा, डी लेउर एट अल। वर्णन करें कि गुर्दे में टीआरएम ने अक्सर ग्रैनजाइम बी को कैसे व्यक्त किया, जबकि हमने स्वस्थ और एलोग्राफ़्ट किडनी ऊतक [32] दोनों में केवल कम मात्रा में ग्रैनजाइम बी का पता लगाया। हालांकि, हमने गुर्दे के ऊतकों में पर्याप्त टी-शर्त और ईओम्स-व्यक्त करने वाली टी कोशिकाओं का पता लगाया है, जो टी सेल आबादी को परिचालित करने में, वास्तव में ग्रैनजाइम बी [10] की उच्च अभिव्यक्ति के साथ जुड़ा हुआ है। जबकि उत्तरार्द्ध आश्चर्यजनक नहीं हो सकता है, इस तथ्य को देखते हुए कि ग्रैनजाइम बी अभिव्यक्ति भी सीधे टी-शर्त [33,34] से प्रेरित है, यह संबंध वर्तमान अध्ययन में किडनी टी कोशिकाओं के बीच स्पष्ट नहीं था। जैसा कि हमने और अन्य लोगों ने दिखाया है कि मानव फेफड़े-, मस्तिष्क- और त्वचा-व्युत्पन्न टीआरएम [25,26,3536], साथ ही गुर्दे से व्युत्पन्न ऊतक-निवासी MAIT lls 6,7】 उनके ग्रैनजाइम बी में कम हैं सामग्री, जबकि अक्सर पर्याप्त मात्रा में टी-बेट और ईओएम व्यक्त करते हैं, यह (मानव) टीकेएम का एक सामान्य लक्षण हो सकता है। इसके अलावा, फेफड़े में टीआरएम ग्रैनजाइम बी अभिव्यक्ति को उत्तेजना [35 एल] पर तेजी से अपग्रेड किया गया था, यह सुझाव देते हुए कि यह अन्य टीईएम में भी हो सकता है। यहां, लेखकों ने परिकल्पना की कि इस तरह की 'छिपी हुई साइटोटोक्सिसिटी, साइटोटोक्सिक टी कोशिकाओं द्वारा ऊतकों की संरचनात्मक अखंडता को नुकसान से बचाने का काम करती है।
निष्कर्ष में, हम दिखाते हैं कि गुर्दे के ऊतकों में टी क्लस पर्याप्त संख्या में मौजूद होते हैं और इसमें आबादी शामिल होती है जो अक्सर सीडी 69 प्लस और सीडी103 प्लस को व्यक्त करते हैं, अणु जिसके द्वारा टी कोशिकाएं ऊतकों का पालन करती हैं और बनी रहती हैं। फिर भी, गुर्दे के ऊतकों में सीडी 69- सीडी 103- टी कोशिकाएं परिसंचारी टी कोशिकाओं से अलग प्रतीत होती हैं और एक अन्य विशिष्ट टीआईएम आबादी की चिंता कर सकती हैं, संभवतः अन्य तंत्रों द्वारा गुर्दे में बनी रहती हैं जिनका अनावरण किया जाना है। एक अन्य विकल्प यह हो सकता है कि ये सीडी 69- सीडी 103- टी कोशिकाएं एक ऐसी आबादी की चिंता करती हैं जो हाल ही में प्रचलन से बाहर हो गई है, और हाय ने किडनी माइक्रोएन्वायरमेंट के साथ बातचीत के कारण केवल क्षणिक रूप से नए फेनोटाइपिक लक्षण हासिल किए हैं। इन संभावनाओं को स्पष्ट करने के लिए इस आबादी में आगे की जांच की आवश्यकता है। आगे। CD8 और CD4 किडनी T कोशिकाएँ अक्सर सक्रिय रूप से साइकिल चलाती थीं और अधिक बार CXCR6 व्यक्त की जाती थीं। इसके अतिरिक्त, CD8 और CD4 आबादी ने CXCR3 की एक विशेष रूप से उच्च अभिव्यक्ति को विस्थापित कर दिया, इन केमोकाइन रिसेप्टर्स को दृढ़ता से निहित किया, साथ ही साथ TRM प्रोद्भवन और मानव गुर्दे में दृढ़ता में CXCR6। इसलिए, मानव गुर्दे में टीपीवी आबादी की हमारी छवि को बढ़ाने के लिए और जांच की आवश्यकता है। फिर भी, यहां प्रस्तुत निष्कर्ष गुर्दे के ऊतकों में टी सेल आबादी के अधिक विस्तृत लक्षण वर्णन और स्वास्थ्य और बीमारी में उनकी भूमिका की दिशा में एक ठोस पहला कदम है।