नेटवर्क फार्माकोलॉजी और प्रायोगिक सत्यापन से एनएएफएलडी के उपचार में सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की यंत्रवत भूमिका का पता चलता है TNF/PI3K/एक्ट पाथवे के माध्यम से

3. परिणाम

3.1 नेटवर्क फार्माकोलॉजी

3.1.1 सक्रिय यौगिक और संभावित लक्ष्य

प्रोजेक्ट टीम के पूर्व शोध और डेटाबेस और साहित्य से मिली जानकारी के आधार पर, औषधीय गतिविधि वाले दस प्रतिनिधि यौगिकों का चयन किया गया था [10-11]:वर्बास्कोसाइड, आइसोवरबास्कोसाइड, इचिनाकोसाइड, 2′-एसिटाइल-वर्बास्कोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, सिस्टानोसाइड बी, सैलिड्रोसाइड, आइसोक्रेनाटोसाइड II, सिस्टैंच ग्लाइकोसाइड ए, और सिस्टांच ग्लाइकोसाइड एफ.

रक्त लिपिड उपचार के लिए उच्च सामग्री वर्बास्कोसाइड (एक्टोसाइड) सिस्टैंच अर्क

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का उपयोग करते हुएस्विस लक्ष्य भविष्यवाणी, 44 लक्ष्य प्राप्त किये गये;नेटइन्फरशीर्ष 20 लक्ष्यों की भविष्यवाणी की, जिससे 45 लक्ष्य प्राप्त हुए;सुपरप्रीड118 लक्ष्य प्राप्त हुए। डुप्लिकेट को मर्ज करने और हटाने के बाद,195 अद्वितीय लक्ष्यकी पहचान की गई.

सेGSE89632डेटासेट, जिसमें 39 एनएएफएलडी नमूने और 24 सामान्य नमूने शामिल थे,589 विभेदित रूप से व्यक्त जीनस्क्रीनिंग की गई. से डेटा का संयोजनजीनकार्डऔरDisGeNET, 2,315 एनएएफएलडी-संबंधित रोग जीनडिडुप्लीकेशन के बाद प्राप्त किए गए (आंकड़े 1ए-1बी)। यौगिक-संबंधी लक्ष्यों को रोग लक्ष्यों के साथ प्रतिच्छेद करके,77 अतिव्यापी लक्ष्यएनएएफएलडी (चित्रा 1सी) के खिलाफ सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के संभावित चिकित्सीय लक्ष्य के रूप में पहचान की गई थी।

इन लक्ष्यों को आयात किया गया थाडोरी database with an interaction threshold >0.400. पृथक नोड्स हटा दिए गए, और नेटवर्क की कल्पना की गईसाइटोस्केप, जिसके परिणामस्वरूप ए75 नोड्स और 408 किनारों वाला पीपीआई नेटवर्क(चित्र 1डी)। साइटोस्केप में "विश्लेषण नेटवर्क" फ़ंक्शन का उपयोग करते हुए, डिग्री मान के आधार पर शीर्ष 10 लक्ष्यों को मुख्य लक्ष्य के रूप में पहचाना गया:टीएनएफ, एनएफकेबी1, टीएलआर4, एचएसपी90एए1, ईएसआर1, एचआईएफ1ए, स्टेट1, एपीपी, पीआरकेएसीए, एसएमएडी3.

3.1.2 जीओ, केईजीजी, और डीओ संवर्धन विश्लेषण

जीओ संवर्धन विश्लेषण से 93 शब्दों का पता चलाआणविक कार्य (एमएफ), 38 के लिएसेलुलर घटक (सीसी), और 989 के लिएजैविक प्रक्रिया (बीपी). प्रत्येक श्रेणी में शीर्ष 10 प्रविष्टियों की कल्पना की गई (चित्र 2)। परिणामों से संकेत मिलता है कि सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स संबंधित मार्गों के माध्यम से एनएएफएलडी विरोधी प्रभाव डाल सकते हैंसूजन, साइटोकिन्स, चयापचय, और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया.

डीओ संवर्धन की पहचान की गई833 रोगलक्ष्यों के साथ संबद्ध, शीर्ष 25 की कल्पना (चित्र 4) सहितचयापचय, प्रतिरक्षा, हृदय संबंधी, मोटापे से संबंधित और यकृत रोग, सभी एनएएफएलडी से निकटता से संबंधित हैं।

3.1.3 "यौगिक-लक्ष्य-मार्ग" नेटवर्क

KEGG संवर्धन परिणामों के आधार पर, a"यौगिक-लक्ष्य-मार्ग" नेटवर्कका उपयोग करके निर्माण किया गया थासाइटोस्केप 3.9.1. हरा वर्ग सक्रिय यौगिकों का प्रतिनिधित्व करता है, नीला वृत्त लक्ष्य का प्रतिनिधित्व करता है, और नारंगी वी-आकार के नोड्स पथ का प्रतिनिधित्व करते हैं (चित्र 5)। इससे पता चलता है कि सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स एनएएफएलडी विरोधी प्रभाव डालते हैंअनेक यौगिक, लक्ष्य और रास्ते, साथइचिनाकोसाइड और वर्बास्कोसाइडके 2020 संस्करण में सबसे प्रचुर और सूचीबद्ध मार्कर यौगिक हैचीनी फार्माकोपिया.

3.1.4 आणविक डॉकिंग

पीपीआई नेटवर्क में शीर्ष पांच मुख्य लक्ष्य (टीएनएफ, एनएफकेबी1, टीएलआर4, एचएसपी90एए1, ईएसआर1) को सक्रिय यौगिकों के साथ जोड़ा गया था, और उनकी न्यूनतम बाध्यकारी ऊर्जा की गणना की गई थी (चित्र 6)। सभी डॉकिंग स्कोर इससे कम थे-6 किलो कैलोरी/मोल, जो मजबूत बंधनकारी समानताओं का संकेत देता है।टीएनएफ ने सबसे मजबूत आत्मीयता प्रदर्शित की. कुछ डॉकिंग परिणामों का उपयोग करके कल्पना की गई थीपायमोल(चित्र 7)।

3.2 सेल प्रयोग

3.2.1 हेपजी2 कोशिकाओं में लिपिड संचय पर एफएफए का प्रभाव

जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 8, एफएफए सांद्रता को 0.5 से 2 एमएमओएल/एल तक बढ़ाने से लाल लिपिड बूंदों में वृद्धि हुई, जो बड़ी लिपिड बूंदों में विलीन हो गई, जो सफल लिपिड लोडिंग का संकेत देती है।

3.2.2 सेल व्यवहार्यता पर एफएफए और सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स का प्रभाव

जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 9ए, एफएफए सांद्रता1 mmol/L और नीचेसेल व्यवहार्यता पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा (पी > 0.05); इस प्रकार,1 एमएमओएल/एलमॉडलिंग के लिए चुना गया था. जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 9बी, सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स तक200 μg/एमएलव्यवहार्यता पर महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा (पी > 0.05), लेकिन400 μg/एमएलमहत्वपूर्ण रूप से बाधित व्यवहार्यता (पी <0.01)। इसलिए,25, 50, और 100 μg/एमएलउपचार के लिए निम्न, मध्यम और उच्च खुराक के रूप में चुना गया।

3.2.3 लिपिड संचय पर प्रभाव

जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 10, मॉडल समूह ने नियंत्रण समूह (पी <0.01) की तुलना में महत्वपूर्ण लाल लिपिड बूंद संचय प्रदर्शित किया, जो सफल मॉडलिंग की पुष्टि करता है। के साथ उपचार50 और 100 μg/mLसिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स ने लिपिड बूंदों के गठन को काफी कम कर दिया (पी <0.01)। मेंचित्र 11, मॉडल समूह (पी <0.01) में टीजी और टीसी का स्तर ऊंचा था, जबकि सभी उपचार समूहों ने मॉडल समूह (पी <0.01) की तुलना में काफी कम स्तर दिखाया।

3.2.4 माइटोकॉन्ड्रियल क्षति पर प्रभाव

JC-1 डाई स्वस्थ माइटोकॉन्ड्रिया में जमा हो जाती है और लाल प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करती है; क्षतिग्रस्त माइटोकॉन्ड्रिया में, यह मोनोमेरिक रूप में रहता है और हरे रंग की प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 12नियंत्रण समूह में लाल प्रतिदीप्ति का प्रभुत्व था, जबकि मॉडल समूह में हरी प्रतिदीप्ति प्रमुख थी। उपचार समूहों ने हरी प्रतिदीप्ति में कमी और लाल प्रतिदीप्ति में वृद्धि देखी, जो बेहतर माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का संकेत देता है।

3.2.5 इंट्रासेल्युलर आरओएस स्तरों पर प्रभाव

जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 13, मॉडल समूह ने उल्लेखनीय रूप से बढ़ी हुई प्रतिदीप्ति तीव्रता (पी <0.01) प्रदर्शित की, जो ऊंचे आरओएस को दर्शाता है। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के साथ उपचार से सभी सांद्रता (पी <0.01) पर आरओएस स्तर काफी कम हो गया।

3.2.6 एपोप्टोसिस पर प्रभाव

होइचस्ट 33342 नाभिक को दाग देता है, जिसमें एपोप्टोटिक नाभिक चमकीला नीला, संघनित या खंडित आकारिकी दिखाता है। में जैसा दिखाचित्र 14नियंत्रण समूह में न्यूनतम उज्ज्वल प्रतिदीप्ति थी, जबकि मॉडल समूह में प्रचुर मात्रा में चमकीले नीले एपोप्टोटिक नाभिक दिखाई दिए। उपचार समूहों ने कम प्रतिदीप्ति तीव्रता प्रदर्शित की, जो एपोप्टोसिस में कमी का संकेत देती है।

3.2.7 TNF/PI3K/एक्ट सिग्नलिंग पाथवे और बैक्स एक्सप्रेशन पर प्रभाव

जैसा कि दिखाया गया हैचित्र 15नियंत्रण समूह की तुलना में, मॉडल समूह ने काफी उन्नत अभिव्यक्ति दिखाईTNF-α, PI3K p85, Akt, और Baxप्रोटीन (पी <0.05, पी <0.01)। उपचार पर:

सभी सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड समूहों में कमी देखी गईTNF-αअभिव्यक्ति (पी <0.01),

50 माइक्रोग्राम/एमएलसमूह कम दिखाया गयाPI3K p85अभिव्यक्ति (पी <0.01),

100 माइक्रोग्राम/एमएलसमूह कम दिखाया गयाएक्ट और बैक्सअभिव्यक्ति (पी <0.05)।

4. चर्चा

एनएएफएलडी एक जटिल यकृत रोग है जो चयापचय संबंधी विकारों से जुड़ा हैलिपिड चयापचय असंतुलन, इंसुलिन प्रतिरोध, और ऑक्सीडेटिव तनाव[12]. हाल के वर्षों में,पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम)एनएएफएलडी के इलाज में महत्वपूर्ण वादा दिखाया है।

आधुनिक शोध से यह पता चला हैसिस्टैंच से फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइडयकृत में लिपिड और ग्लूकोज चयापचय को नियंत्रित कर सकता है और ऑक्सीडेटिव तनाव, सूजन और फाइब्रोसिस को रोक सकता है [13-15]। लीवर उपयोग करता हैβ-ऑक्सीकरणफैटी एसिड को चयापचय करने के लिए औरCYP7A1लिपिड होमियोस्टैसिस के लिए कोलेस्ट्रॉल को पित्त एसिड में परिवर्तित करना [16-18]। उच्च वसा वाले वातावरण में, चयापचय असंतुलन से लिपिड संचय और एनएएफएलडी होता है [19]।

इस अध्ययन से इसकी पुष्टि हुईएफएफए-प्रेरित हेपजी2 कोशिकाएंलिपिड बूंदों में वृद्धि और टीसी और टीजी स्तर में वृद्धि देखी गई। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के साथ उपचार से लिपिड ड्रॉपलेट गठन और टीसी/टीजी स्तर में काफी कमी आई, जिससे हेपेटिक स्टीटोसिस में सुधार हुआ।

माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन से β-ऑक्सीकरण कम हो जाता है, अत्यधिक आरओएस उत्पादन और लिपिड पेरोक्सीडेशन होता है [20]। आरओएस माइटोकॉन्ड्रिया को और अधिक नुकसान पहुंचाता है, जिससे स्टीटोसिस बिगड़ जाता है [21]। हमारे परिणाम बताते हैं कि सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्सआरओएस कम करें, सुधारमाइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता, और कम करेंऑक्सीडेटिव तनाव, जिससे वसा संचय कम हो जाता है।

नेटवर्क फार्माकोलॉजी ने संकेत दिया कि एनएएफएलडी विरोधी प्रभावों में कई शामिल हैंचयापचय और एपोप्टोसिस-संबंधित मार्ग. आणविक डॉकिंग ने विशेष रूप से सक्रिय यौगिकों और लक्ष्यों के बीच मजबूत बंधन समानताएं दिखाईंटीएनएफ, इसकी केंद्रीय भूमिका का सुझाव देते हुए।

टीएनएफ मार्गसेल सिग्नलिंग में महत्वपूर्ण है। TNF-α से बंधता हैटीएनएफआर1, मृत्यु रिसेप्टर मार्गों को सक्रिय करना और एपोप्टोसिस को प्रेरित करना [22]। यह भी सक्रिय करता हैPI3K/एक्ट मार्गपैराक्राइन सिग्नलिंग के माध्यम से [23-24]। असामान्य PI3K/Akt सिग्नलिंग NAFLD में लिपिड संचय, सूजन और फाइब्रोसिस से जुड़ा हुआ है [25]। हमारा डेटा बताता है कि सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्सएपोप्टोसिस को रोकेंऔर की अभिव्यक्ति को कम करेंTNF-α, PI3K, Akt, औरबक्स, नेटवर्क भविष्यवाणियों के अनुरूप, के महत्व की पुष्टि करता हैTNF/PI3K/एक्ट पाथवे.

निष्कर्ष

सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स एनएएफएलडी को नियंत्रित करते हैंअनेक प्रक्रियाएँ और रास्ते, शामिल:

लिपिड संचय को कम करना,

ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकना,

माइटोकॉन्ड्रियल क्षति को कम करना,

एपोप्टोसिस को दबाना।

ये प्रभाव निकटता से जुड़े हो सकते हैंTNF/PI3K/एक्ट सिग्नलिंग पाथवे. यह अध्ययन न केवल एनएएफएलडी उपचार में सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के अनुप्रयोग के लिए वैज्ञानिक समर्थन प्रदान करता है, बल्कि नई चिकित्सीय दवाओं के विकास और नैदानिक ​​​​अनुसंधान के लिए एक संदर्भ भी प्रदान करता है।