सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड्स प्रोस्टेट कैंसर कोशिका प्रसार को रोकते हैं और आरओएस जेनरेशन और एंटीऑक्सीडेंट जीन दमन के माध्यम से एपोप्टोसिस को प्रेरित करते हैं।

 

अमूर्त:
उद्देश्य:के प्रभावों और अंतर्निहित तंत्रों की जांच करनासिस्टैंच पॉलीसेकेराइडके प्रसार और एपोप्टोसिस परप्रोस्टेट कैंसर कोशिकाएं.

तरीके:
मानव प्रोस्टेट कैंसर DU145 कोशिकाओं का इलाज निम्न, मध्यम और उच्च सांद्रता के साथ किया गयासिस्टैंच पॉलीसेकेराइड(क्रमशः 20, 40, और 80 मिलीग्राम/एमएल)। कोशिका प्रसार का मूल्यांकन का उपयोग करके किया गया थाएमटीटी परख, और एपोप्टोसिस का मूल्यांकन किया गया थाप्रवाह साइटोमेट्री. intracellularप्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस)स्तर को फ्लो साइटोमेट्री के माध्यम से मापा गया, जबकिग्लूटाथियोन (जीएसएच)का उपयोग करके स्तर निर्धारित किये गयेएलिसा. एमआरएनए और प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तरग्लूटामेट-सिस्टीन लिगेज उत्प्रेरक सबयूनिट (जीसीएलसी), ग्लूटामेट-सिस्टीन लिगेज संशोधक सबयूनिट (जीसीएलएम), औरथिओरेडॉक्सिन रिडक्टेस 1 (TXNRD1)द्वारा विश्लेषण किया गयाआरटी-पीसीआरऔरपश्चिमी ब्लॉट, क्रमश।

परिणाम:
की अर्ध-अधिकतम निरोधात्मक सांद्रता (IC₅₀)।सिस्टैंच पॉलीसेकेराइडDU145 कोशिकाओं पर 40.35 मिलीग्राम/एमएल था, इस प्रकार 40 मिलीग्राम/एमएल को बाद के प्रयोगों के लिए मध्यम खुराक के रूप में चुना गया था। निम्न, मध्यम और उच्च खुराक को क्रमशः IC₅₀ के 50%, 100% और 200% के रूप में परिभाषित किया गया था।

सभी उपचार समूहों ने नियंत्रण समूह की तुलना में एपोप्टोसिस दर में उल्लेखनीय वृद्धि प्रदर्शित की।उच्च खुराक वाला सिस्टैंच समूहकोशिका प्रसार में सबसे बड़ा अवरोध और उच्चतम एपोप्टोसिस दर प्रदर्शित हुई, इसके बाद मध्यम और निम्न खुराक वाले समूह रहे (P<0.01). आरओएस का स्तर काफी बढ़ गया था, और जीएसएच का स्तर सभी में काफी कम हो गया थासिस्टैंच-उपचारित समूहबनाम नियंत्रण. गौरतलब है किउच्च खुराक समूहमध्यम और निम्न-खुराक वाले समूहों की तुलना में स्पष्ट रूप से उच्च आरओएस और निम्न जीएसएच स्तर था (P<0.05); मध्यम खुराक वाले समूह ने कम खुराक वाले समूह की तुलना में समान अंतर दिखाया (P<0.05).

अभिव्यक्ति का स्तरजी.सी.एल.सी, जीसीएलएम, औरTXNRD1(एमआरएनए और प्रोटीन दोनों) को नियंत्रण की तुलना में सभी सिस्टैंच-उपचारित समूहों में काफी कम विनियमित किया गया था (P<0.05).उच्च खुराक समूहइन एंटीऑक्सीडेंट से संबंधित जीन और प्रोटीन का सबसे महत्वपूर्ण दमन दिखाया गया, इसके बाद मध्यम और कम खुराक वाले समूह (P<0.05).

 

निष्कर्ष:
सिस्टैंच पॉलीसेकेराइडएंटीऑक्सीडेंट कारकों की अभिव्यक्ति को रोकता हैजी.सी.एल.सी, जीसीएलएम, औरTXNRD1, जिससे कमी आती हैजीएसएच संश्लेषण, को बढ़ावाआरओएस संचय, और अंततः प्रेरकप्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं में एपोप्टोसिस. ये निष्कर्ष यही सुझाव देते हैंCistancheके रूप में कार्य कर सकता हैप्राकृतिक चिकित्सीय एजेंटप्रोस्टेट कैंसर के लिए के माध्यम सेऑक्सीडेटिव तनाव-मध्यस्थ तंत्र.

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पृष्ठभूमि और तरीके

प्रोस्टेट कैंसरलगभग हिसाब हैसभी पुरुष दुर्दमताओं का 7.1%, 60 वर्ष की आयु के बाद इसकी चरम घटना होती है। जैसे-जैसे चीन की आबादी बढ़ती जा रही है, इस बीमारी की घटना और बढ़ने की उम्मीद है [1]। अध्ययनों से पता चलता है कि वृद्ध पुरुषों में प्रोस्टेट कैंसर का उच्च प्रसार संबंधित हो सकता हैप्रोस्टेट में अपक्षयी परिवर्तन, आनुवंशिक प्रवृत्ति, आहार विहार, औरजीवनशैली कारक [2].

शल्य चिकित्सा उच्छेदनप्रोस्टेट कैंसर के उपचार में यह मुख्य आधार बना हुआ है, जिसका लक्ष्य अधिकांश ट्यूमर द्रव्यमान को हटाना है। हालाँकि, यह महत्वपूर्ण जटिलताओं से जुड़ा है, जैसे किमूत्रीय अन्सयम, यौन रोग, और सबसे गंभीर रूप से,ट्यूमर की पुनरावृत्ति और मेटास्टेसिस, जो खराब पूर्वानुमान के प्रमुख कारण हैं [3]।

हाल के वर्षों में,पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम)कैंसर चिकित्सा में अपनी भूमिका के लिए इसने ध्यान आकर्षित किया है। टीसीएम मदद कर सकता हैरोग प्रतिरोधक क्षमता बढ़ाएं, कीमोथेरेपी/रेडियोथेरेपी के दुष्प्रभावों का प्रतिकार करें, औरविषहरण बढ़ाएँ. कुछ औषधीय जड़ी-बूटियाँ भी प्रदर्शित होती हैंप्रत्यक्ष एंटीट्यूमर गुण, जिसमें ट्यूमर के विकास को रोकना और शामिल हैकैंसर कोशिकाओं में एपोप्टोसिस का प्रेरण [4].

इनमे से,सिस्टैंच (सिस्टैंच डेजर्टिकोला)एक पारंपरिक टॉनिक जड़ी बूटी है जो इसके लिए जानी जाती हैइम्यूनोमॉड्यूलेटरी, एंटीऑक्सीडेंट, औरट्यूमररोधी प्रभाव. इसके प्रमुख बायोएक्टिव घटक हैंपॉलिसैक्राइडऔरफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स. यह अध्ययन इसके प्रभावों और अंतर्निहित तंत्र की जांच करता हैसिस्टैंच पॉलीसेकेराइडपरप्रोस्टेट कैंसर DU145 कोशिकाओं का प्रसार और एपोप्टोसिस.

 

1. सामग्री और विधियाँ

1.1 प्रमुख सामग्री और अभिकर्मक

DU145 मानव प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाएंटोंगपाई बायोटेक (शंघाई, चीन) से प्राप्त किए गए थे।

सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड(बैच संख्या: 0287181) वेइकेकी बायो कंपनी लिमिटेड (सिचुआन, चीन) से खरीदे गए थे।

भ्रूण गोजातीय सीरम, पेनिसिलिन/स्ट्रेप्टोमाइसिन, औरडीएमईएमज़ेटा लाइफ (यूएसए) द्वारा प्रदान किए गए थे।

एमटीटी परख, एनेक्सिन वी/पीआई एपोप्टोसिस किट, आरआईपीए लाइसिस बफर, बीसीए प्रोटीन परिमाणीकरण किटएलाबसाइंस (शंघाई, चीन) से प्राप्त किए गए थे।

प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) का पता लगाने वाली किटऔरजीएसएच एलिसा किटबायोलैब (शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे।

ट्राइज़ोल अभिकर्मक, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट, औरपीसीआर किटन्यूरोसिम (हांग्जो, चीन) से प्राप्त किए गए थे।

के विरुद्ध एंटीबॉडीजी.सी.एल.सी, जीसीएलएम, TXNRD1, -एक्टिन, और संबंधित द्वितीयक एंटीबॉडी UnivBio (शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे।

1.2 कोशिका संस्कृति और प्रसार परख

DU145 कोशिकाओं को संवर्धित किया गयाDMEM को 10% FBS और 1% पेनिसिलिन/स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक किया गयाCO₂ इनक्यूबेटर में। के लिएएमटीटी परख, लॉगरिदमिक-चरण DU145 कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में डाला गया और इलाज किया गयासिस्टैंच पॉलीसेकेराइड समाधानकी सांद्रता पर10, 20, 40, और 80 मिलीग्राम/एमएल. नियंत्रण समूह को केवल DMEM माध्यम प्राप्त हुआ।

24 घंटे के उपचार के बाद,5 मिलीग्राम/एमएल एमटीटी का 20 μLप्रत्येक कुएं में डाला गया और 4 घंटे तक ऊष्मायन किया गया। सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था, औरडीएमएसओ का 150 μLसंकलित था। 10 मिनट तक हिलाने के बाद, अवशोषण को मापा गया490 nmमाइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करना।आईसी₅₀गणना की गई, और20, 40, और 80 मिलीग्राम/एमएलके रूप में चुना गयानिम्न, मध्यम और उच्च खुराकआगामी प्रयोगों के लिए.कोशिका प्रसार निषेध दरइस प्रकार गणना की गई:
अवरोध दर (%)=(OD_control - OD_treated) / OD_control × 100

1.3 एपोप्टोसिस परख

लॉग-चरण DU145 कोशिकाओं का विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गयासिस्टैंच पॉलीसेकेराइडसमूहों के अनुसार. निर्धारण और धुंधलापन के बाद,एनेक्सिन वी-एफआईटीसीऔरअनुकरणीयएपोप्टोटिक कोशिकाओं को लेबल करने के लिए उपयोग किया गया था।फ्लो साइटोमेट्रीप्रतिदीप्ति संकेतों का पता लगाने के लिए प्रदर्शन किया गया था, और एपोप्टोटिक कोशिकाओं का प्रतिशत दर्ज किया गया था।

 

1.4 इंट्रासेल्युलर आरओएस और जीएसएच स्तरों का पता लगाना

आरओएस स्तर का उपयोग करके मापा गया थाआरओएस प्रतिदीप्ति जांचऔर प्रवाह साइटोमेट्री। जीएसएच स्तर का उपयोग करके मात्रा निर्धारित की गईएलिसा. जीएसएच मानकों की ज्ञात सांद्रता का उपयोग करके एक मानक वक्र तैयार किया गया था, और नमूनों में जीएसएच सांद्रता की गणना करने के लिए अवशोषण को मापा गया था।

 

जीसीएलसी, जीसीएलएम, टीएक्सएनआरडी1 की एमआरएनए अभिव्यक्ति के लिए 1.5 आरटी-पीसीआर

का उपयोग करके कुल आरएनए निकाला गयाट्राइज़ोल, और सीडीएनए को संश्लेषित किया गया था। विशिष्ट प्राइमरों का उपयोग करके पीसीआर का प्रदर्शन किया गया:

जी.सी.एल.सी:

आगे: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'

रिवर्स: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'

जीसीएलएम:

आगे: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'

रिवर्स: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'

TXNRD1:

आगे: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'

रिवर्स: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'

-एक्टिन (आंतरिक नियंत्रण):

आगे: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'

रिवर्स: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'

प्रवर्धन की स्थिति: 60 सेकंड के लिए 95 डिग्री, उसके बाद 30 सेकंड के लिए 95 डिग्री के 30 चक्र, 30 सेकंड के लिए 60 डिग्री, और 60 सेकंड के लिए 72 डिग्री। पीसीआर उत्पादों का विश्लेषण किया गयाजेल वैद्युतकणसंचलन, और सापेक्ष जीन अभिव्यक्ति को सामान्यीकृत किया गया-एक्टिन.

 

1.6 प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए वेस्टर्न ब्लॉटिंग

का उपयोग करके कुल प्रोटीन निकाला गयाआरआईपीए बफर, और प्रोटीन सांद्रता द्वारा निर्धारित किया गया थाबीसीए परख. द्वारा प्रोटीन अलग किये गयेएसडीएस-पृष्ठ, इसे हस्तांतरित किया गयापीवीडीएफ झिल्ली, अवरुद्ध किया गया, और प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ रात भर 4 डिग्री पर ऊष्मायन किया गयाजी.सी.एल.सी, जीसीएलएम, TXNRD1, और-एक्टिन. के साथ ऊष्मायन के बादएचआरपी-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी, बैंड का उपयोग करके कल्पना की गई थीchemiluminescenceऔर द्वारा परिमाणित किया गयाइमेजजे सॉफ्टवेयर.

 

1.7 सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी डेटा का उपयोग करके विश्लेषण किया गयाएसपीएसएस 25.0. एक तरफ़ा एनोवा औरएलएसडी-टी परीक्षणसांख्यिकीय महत्व निर्धारित करने के लिए उपयोग किया गया था।