सिस्टैंच ट्यूबुलोसा (गुआनहुआ रौकॉन्ग्रॉन्ग) और इसके प्रसंस्कृत उत्पादों के रासायनिक घटकों और सामग्री पर तुलनात्मक अध्ययन

अमूर्त

उद्देश्य:प्रसंस्कृत उत्पादों की रासायनिक घटक सामग्री में भिन्नता (परिवर्तन के पैटर्न) की जांच करनासिस्टैंच ट्यूबुलोसा(गुआनहुआ रौकॉन्ग्रॉन्ग)।
तरीके:पांच प्रकार के काढ़े के टुकड़ों का चयन किया गया, जिनमें कच्चे स्लाइस, वाइन-स्टीम्ड स्लाइस, स्टीम्ड स्लाइस, स्टिर-प्रोसेस्ड विद ब्लैक-बीन्स स्लाइस और ब्लैक-बीन-जूस-प्रोसेस्ड स्लाइस शामिल हैं। कच्चे उत्पाद और प्रसंस्कृत उत्पादों के बीच अंतर घटकों की जांच और पुष्टि करने के लिए एक एचपीएलसी फिंगरप्रिंट विधि स्थापित की गई और समानता मूल्यांकन, क्लस्टर विश्लेषण (सीए), और प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) के साथ जोड़ा गया। कच्चे और संसाधित नमूनों के बीच कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स, पॉलीसेकेराइड्स, कुल फ्लेवोनोइड्स और चार फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की सामग्री में अंतर को निर्धारित करने और तुलना करने के लिए केमोमेट्रिक तरीकों और एचपीएलसी को नियोजित किया गया था।
परिणाम:एचपीएलसी उंगलियों के निशानसिस्टैंच ट्यूबुलोसा and its processed products were established. With Mark peak matching, 9 common peaks were assigned for raw slices, whereas 11 common peaks were assigned for the other four processed products. Peaks No. 2 and No. 7 were differential chromatographic peaks. By comparison with reference standards, four chromatographic peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Fingerprints of the processed products showed similar profiles with the same number of common peaks; similarity values were all >0.9. संदर्भ शिखर के रूप में इचिनाकोसाइड का उपयोग करते हुए, विभिन्न प्रसंस्कृत उत्पादों के बीच सामान्य शिखर के सापेक्ष अवधारण समय का आरएसडी 0.11% से 0.82% तक था, जबकि सापेक्ष शिखर क्षेत्रों का आरएसडी 15.46% से 76.07% तक था। जब अंतर-वर्ग दूरी 10 पर सेट की गई, तो सीए ने कच्चे स्लाइस और प्रसंस्कृत उत्पादों को तीन श्रेणियों में वर्गीकृत किया। पीसीए ने कच्चे और संसाधित नमूनों के बीच संरचनात्मक अंतर का संकेत दिया: 11 शिखर चर को तीन प्रमुख घटकों में घटा दिया गया; विभिन्न प्रमुख घटक विभिन्न क्रोमैटोग्राफ़िक शिखरों के साथ सहसंबद्ध होते हैं। घटक मैट्रिक्स और रैखिक भार के आधार पर, व्यापक स्कोर से पता चला कि ब्लैक-बीन-जूस-संसाधित स्लाइस और पीले-वाइन-स्टीम्ड और पानी-स्टीम्ड स्लाइस उच्च स्थान पर हैं। कच्चे और प्रसंस्कृत नमूनों में सामग्री इस प्रकार थी: कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड 3.80%-7.07%, कुल पॉलीसेकेराइड 5.85%-6.70%, कुल फ्लेवोनोइड 14.16%-24.26%; इचिनाकोसाइड 4.11%-5.99%, एक्टियोसाइड 0.67%-1.34%, सिस्टानोसाइड ए 0.06%-0.36%, और आइसोएक्टियोसाइड 0.25%-1.66%। प्रसंस्कृत उत्पादों के बीच काफी अंतर मौजूद था।
निष्कर्ष:स्थापित एचपीएलसी फ़िंगरप्रिंट विधि में मजबूत विशिष्टता है, जो कच्चे स्लाइस को प्रसंस्कृत उत्पादों से प्रभावी ढंग से अलग करती हैसिस्टैंच ट्यूबुलोसा, और कच्ची दवा और प्रसंस्कृत उत्पादों में इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए और आइसोएक्टियोसाइड के गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण के लिए उपयुक्त है। विभिन्न नमूनों के बीच तुलनात्मक प्रोफाइलिंग और सामग्री परिवर्तन पहचान और गुणवत्ता नियंत्रण के लिए वैज्ञानिक आधार प्रदान कर सकते हैंसिस्टैंच ट्यूबुलोसाऔर इसके विभिन्न प्रसंस्कृत उत्पाद।

कीवर्ड: सिस्टैंच ट्यूबुलोसा; प्रसंस्करण; रासायनिक घटक; फिंगरप्रिंट; उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी)

 

1 परिचय

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा(शेंक) वाइट (गुआनहुआ रौकॉन्ग्रॉन्ग) ओरोबैंचेसी में एक बारहमासी जड़ी बूटी है और पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना के फार्माकोपिया में सिस्टैंच हर्बा का आधिकारिक तौर पर सूचीबद्ध स्रोत है (इसके बाद इसे "चीनी फार्माकोपिया" के रूप में जाना जाता है)। औषधीय भाग पपड़ीदार पत्तियों वाला सूखा मांसल तना है। यह प्रकृति में गर्म है, स्वाद में मीठा और नमकीन है, और किडनी और बड़ी आंत के मेरिडियन में प्रवेश करता है, किडनी यांग को टोन करने, सार और रक्त को लाभ पहुंचाने और कब्ज से राहत देने के लिए आंतों को नम करने का कार्य करता है [1]। आधुनिक औषधीय अध्ययनों ने कई गतिविधियों की पुष्टि की है, जैसे कि एंटी-एजिंग, प्रतिरक्षा वृद्धि, किडनी-टोनिफाइंग और कामोत्तेजक प्रभाव, रेचक प्रभाव और एंटीहाइपरटेंसिव गतिविधि।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसायह फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स, इरिडोइड्स और उनके ग्लाइकोसाइड्स, लिग्नांस, ऑलिगोसेकेराइड एस्टर, पॉलीओल्स, पॉलीसेकेराइड्स, फ्लेवोनोइड्स और अन्य घटकों से समृद्ध है [2]। इनमें से, फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड प्रमुख सक्रिय घटक और सबसे प्रचुर यौगिक हैं; वे फार्माकोपिया में सामग्री निर्धारण के लिए मार्कर घटक भी हैं, और एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव, चयापचय संवर्धन, सीखने और स्मृति में सुधार, और यौन कार्य में वृद्धि जैसी विविध जैव सक्रियता प्रदर्शित करते हैं [3]।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसालवणीय-क्षारीय भूमि और गोबी रेगिस्तानी क्षेत्रों को तरजीह देता है, जड़ों पर परजीवीकरण करता हैझाऊएसपीपी, और मुख्य रूप से चीन के भीतरी मंगोलिया, झिंजियांग और गांसु में वितरित किया जाता है [4]। जंगली और खेती वाले भू-प्रामाणिक क्षेत्रों में झिंजियांग के हॉटन प्रीफेक्चर में मिनफेंग काउंटी, युटियन, पिशान और मोयू शामिल हैं। इसका प्रसंस्करण मुख्य रूप से कटे हुए काढ़े के टुकड़ों, कच्ची हर्बल सामग्री, अर्क, स्वास्थ्य उत्पादों और कार्यात्मक खाद्य पदार्थों में विकसित किया जाता है; इनमें से, व्यावसायिक काढ़े के टुकड़े मुख्यधारा में बने हुए हैं। हालाँकि, बाज़ार में, विभिन्न प्रसंस्कृत उत्पाद-जैसे कच्चे स्लाइस, वाइन-प्रसंस्कृत स्लाइस, उच्च तापमान एंजाइम-निष्क्रिय स्लाइस, और पानी-उबले हुए स्लाइस-अक्सर मिश्रित होते हैं और अंतर करना मुश्किल होता है।

सिस्टैंच हर्बा का प्रसंस्करण समय के साथ प्राचीन अभिलेखों से विकसित हुआ हैताइपिंग शेनघुई फेंग, झेंगलेई बेनकाओ, औरपूजी फेंग[5-7] (उदाहरण के लिए, वाइन से धोना, वाइन के साथ भूनना, वाइन के साथ भाप में पकाना/बेक करना, वाइन के साथ भिगोना/सूखा पकाना, पानी में उबालना, ट्रिपल स्टीमिंग और बटर स्टिर-फ्राइंग) से लेकर वाइन मैक्रेशन (स्टीमिंग), सिंगल स्टीमिंग, "फोर-स्टीमिंग और फोर-सनिंग", और ब्लैक-बीन प्रोसेसिंग जैसे आधुनिक तरीकों तक [8]। विभिन्न प्रसंस्करण विधियाँ सक्रिय घटकों की सामग्री, सुरक्षा और जैविक गतिविधि को प्रभावित कर सकती हैं। कै होंग एट अल. [9] पाया गया कि 6 मिनट के लिए 70 डिग्री गर्म पानी के साथ ताजी सामग्री के एंजाइम को निष्क्रिय करने के परिणामस्वरूप इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड की मात्रा सीधे धूप में सुखाने की तुलना में क्रमशः 7.3 गुना और 6.5 गुना हो गई। टाई ज़ियाओयान और अन्य। [10] बताया गया है कि स्टीमिंग प्रसंस्करण से ताजी सामग्री की तुलना में काढ़े के टुकड़ों की गुणवत्ता में उल्लेखनीय सुधार हुआ है। चेन वेइजुन एट अल। [11] देखा गया कि ताज़ा उत्पादों की तुलना में वाइन, नमक और भाप-प्रसंस्करण के बाद बीटाइन की मात्रा कम हो गई। झांग चाओ एट अल. [12] दिखाया गया है कि वाइन-स्टीमिंग के दौरान, लंबे समय तक स्टीमिंग समय के साथ, इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए और 2′-एसिटाइलेक्टियोसाइड धीरे-धीरे कम हो गए, जबकि आइसोएक्टियोसाइड में काफी वृद्धि हुई।

चीनी फार्माकोपिया का वर्तमान 2025 संस्करण केवल कच्चे स्लाइस और वाइन-स्टीम्ड स्लाइस में इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड के लिए सीमाएं निर्धारित करता है, लेकिन अन्य संसाधित उत्पादों के लिए मार्कर घटकों को निर्दिष्ट नहीं करता है, और प्रभावी सामग्री नियंत्रण विधियों का अभाव है। इसलिए, विशिष्ट घटकों का विश्लेषण और तुलना करना और संरचनागत परिवर्तनों के पैटर्न की खोज करना कच्चे और प्रसंस्कृत उत्पादों की गुणात्मक पहचान और मात्रात्मक नियंत्रण के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है।

पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) फ़िंगरप्रिंटिंग रासायनिक घटकों का समग्र प्रतिनिधित्व है। अखंडता, विशिष्टता और समृद्ध जानकारी के फायदे के साथ, इसका व्यापक रूप से क्रूड दवाओं और तैयारियों के गुणवत्ता नियंत्रण मूल्यांकन, अंतरराष्ट्रीय मानकों के साथ संरेखण, प्रामाणिकता की पहचान, विनिर्माण प्रक्रिया की निगरानी और फार्माकोडायनामिक पदार्थों पर अनुसंधान में उपयोग किया जाता है [13]। एचपीएलसी फ़िंगरप्रिंटिंग के आधार पर, इस अध्ययन ने इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए और आइसोएक्टियोसाइड को गुणवत्ता मार्कर के रूप में चुना, और विभिन्न प्रसंस्कृत उत्पादों के बीच रासायनिक घटकों और सामग्री परिवर्तन पैटर्न की तुलना करने के लिए सामग्री निर्धारण के साथ समानता विश्लेषण, सीए और पीसीए को नियोजित किया, जो पहचान और गुणवत्ता नियंत्रण के लिए वैज्ञानिक आधार प्रदान करता है।

 

2 उपकरण और सामग्री

2.1 उपकरण

U3000 HPLC सिस्टम (थर्मो फिशर); UPL-111-20आर अल्ट्राप्योर जल प्रणाली (सिचुआन यूपु); एबी 265-एस इलेक्ट्रॉनिक बैलेंस (मेट्लर टोलेडो); KQ-5200DA अल्ट्रासोनिक एक्सट्रैक्टर/क्लीनर (कुशान अल्ट्रासोनिक); GZX-9240MBE इलेक्ट्रिक सुखाने ओवन (शंघाई बॉक्सुन); UV-2600 यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमदज़ु, चीन)।

2.2 औषधियाँ और अभिकर्मक

ताजासिस्टैंच ट्यूबुलोसा(बैच नंबर . 20241008) की आपूर्ति झिंजियांग कांग्रोंगटांग बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा की गई थी और शोधकर्ता वांग गुओपिंग (झिंजियांग उइगुर स्वायत्त क्षेत्र मटेरिया मेडिका संस्थान) द्वारा मांसल तने के रूप में प्रमाणित किया गया था।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा(शेंक) वाइट (ओरोबैंचेसी)।

संदर्भ पदार्थ: डी-ग्लूकोज निर्जल (बैच संख्या . 361810, 100.00%, शेन्ज़ेन जिंहुई बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड); इचिनाकोसाइड (बैच नं.. 111670-201907), रुटिन (बैच नं.. 100080-202012), एक्टियोसाइड (बैच नं.. 11530-202315), सिस्टानोसाइड ए (बैच नं.. 313512), और आइसोएक्टियोसाइड (बैच नं.. 313413), एचपीएलसी परख शुद्धता के साथ 91.8%, 92.2%, 97.6%, 98.06%, और 98.09% से अधिक या उसके बराबर, क्रमशः, राष्ट्रीय खाद्य एवं औषधि नियंत्रण संस्थान (चीन) से।(नोट: दिए गए पाठ में एक शुद्धता रेखा काट दी गई है; उपरोक्त पठनीय भाग का अनुसरण करता है।)

पीले चावल की वाइन (अर्ध-शुष्क प्रकार, अल्कोहल 16%; झेजियांग ग्युएलॉन्गशान शाओक्सिंग वाइन कंपनी लिमिटेड); मेथनॉल और एसीटोनिट्राइल (एचपीएलसी ग्रेड, फिशर साइंटिफिक, यूएसए)। अन्य अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।

3 विधियाँ और परिणाम

3.1 कच्चे स्लाइस और प्रसंस्कृत उत्पाद तैयार करनासिस्टैंच ट्यूबुलोसा

कच्चे स्लाइस और प्रसंस्कृत उत्पादों को तैयार करने के लिए निम्नलिखित विधियों का उपयोग किया गया, प्रत्येक 6 बैचों में।

कच्चे टुकड़े:ताजाCistanche3 मिमी स्लाइस में काटा गया और 60 डिग्री पर सुखाया गया।

भाप देने की विधि:साहित्य [14] के अनुसार, 20 ग्राम साफ स्लाइस को एक सीलबंद कंटेनर में 6 एमएल आसुत जल के साथ मिलाया गया, 4 घंटे के लिए गीला किया गया [12], 12 घंटे के लिए पानी पर भाप में पकाया गया, ठंडा किया गया और 60 डिग्री पर सुखाया गया।

वाइन-प्रसंस्करण विधि:वाइन-स्टूइंग या वाइन-स्टीमिंग विधि (सामान्य नियम 0213, चीनी फार्माकोपिया) के अनुसार तैयार किया गया।

काली फलियों के साथ हिला-प्रसंस्करण:के अनुसार तैयार किया गया हैचीनी मटेरिया मेडिका(झोंगहुआ बेनकाओ) सिस्टैंच हर्बा के तहत; प्रति 10 किग्रा में 1 किग्रा काली फलियाँ डाली गईंCistancheसामग्री।

ब्लैक-बीन-जूस प्रसंस्करण:स्लाइस को काली फलियों के रस के साथ मिलाया गया और फिर उपरोक्त स्टीमिंग विधि द्वारा संसाधित किया गया; ब्लैक बीन की खुराक उपरोक्त के समान ही थी।

3.2 निरीक्षण मदों का निर्धारण

नमी का निर्धारण ओवन-सुखाने से किया गया (सामान्य नियम 0832, चीनी फार्माकोपिया); सामान्य नियम 2302 द्वारा कुल राख; सामान्य नियम 2201 के तहत कोल्ड मैक्रेशन विधि द्वारा अल्कोहल-घुलनशील अर्क। परिणाम तालिका 1 में दिखाए गए हैं।

 

3.3 एचपीएलसी फ़िंगरप्रिंट का तुलनात्मक विश्लेषणसिस्टैंच ट्यूबुलोसाऔर इसके प्रसंस्कृत उत्पाद

3.3.1 क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ

वाटर्स एक्सटेर्रा आरपी18 कॉलम (250 मिमी × 4.6 मिमी, 5 µm)। मोबाइल चरण: एसीटोनिट्राइल (ए)-0.1% फॉर्मिक एसिड (बी) ग्रेडिएंट एल्युशन के साथ: 0-12 मिनट, 14% ए → 17% ए; 12-30 मिनट, 17% ए → 19% ए; 30-35 मिनट, 19% ए → 14% ए; 35-50 मिनट, 14% ए. प्रवाह दर: 1.0 एमएल·मिनट⁻¹। कॉलम तापमान: 30 डिग्री. डिटेक्शन तरंग दैर्ध्य: 330 एनएम। इंजेक्शन की मात्रा: 10 µL.

3.3.2 समाधान तैयार करना

संदर्भ समाधान:क्रमशः 1.1301, 0.2294, 0.2255, और 0.2109 mg·mL⁻¹ के समाधान प्राप्त करने के लिए इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, और आइसोएक्टियोसाइड संदर्भ पदार्थों को सटीक रूप से तौला गया और 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 50% मेथनॉल में भंग कर दिया गया; अंतिम समाधान प्राप्त करने के लिए फ़िल्टर किया गया।

नमूना समाधान:कच्चे और प्रसंस्कृत नमूनों के 80-मेष पाउडर के 0.5 ग्राम को सटीक रूप से तौला गया, 25 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 50% मेथनॉल के साथ निकाला गया, 40 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिकेटेड (200 डब्ल्यू, 40 किलोहर्ट्ज़), ठंडा, मिश्रित, खड़े रहने की अनुमति दी गई और 0.22 माइक्रोन झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया; निस्पंदन का प्रयोग किया गया।

3.3.3 विधि सत्यापन (फ़िंगरप्रिंट)

3.3.3.1 परिशुद्धता

एक ही नमूना समाधान लगातार छह बार इंजेक्ट किया गया था। संदर्भ शिखर के रूप में इचिनाकोसाइड का उपयोग करते हुए, सामान्य शिखर के सापेक्ष अवधारण समय का आरएसडी था<0.48% and the RSD of relative peak areas was <2.86%, indicating good instrumental precision.

3.3.3.2 पुनरावर्तनीयता

एक ही बैच (कच्चा टुकड़ा S1) से छह समानांतर नमूना समाधान तैयार किए गए थे। संदर्भ शिखर के रूप में इचिनाकोसाइड का उपयोग करते हुए, सापेक्ष अवधारण समय का आरएसडी था<0.07% and the RSD of relative peak areas was <2.77%, indicating good method repeatability.

3.3.3.3 स्थिरता

उसी नमूना समाधान का विश्लेषण 0, 3, 6, 9, 12 और 24 घंटे पर किया गया। संदर्भ शिखर के रूप में इचिनाकोसाइड का उपयोग करते हुए, सापेक्ष अवधारण समय का आरएसडी था<0.11% and the RSD of relative peak areas was <2.33%, indicating stability within 24 h.

3.3.4 फ़िंगरप्रिंट की स्थापना

के तीस बैचसिस्टैंच ट्यूबुलोसाऔर प्रसंस्कृत उत्पादों का विश्लेषण किया गया। "पारंपरिक चीनी चिकित्सा के क्रोमैटोग्राफिक फ़िंगरप्रिंट के लिए समानता मूल्यांकन प्रणाली" (2012 संस्करण) का उपयोग किया गया था। कच्चे स्लाइस S1 और पीले-वाइन-स्टीम्ड स्लाइस J1 को संदर्भ फ़िंगरप्रिंट के रूप में उपयोग किया गया था; उंगलियों के निशान उत्पन्न करने के लिए मल्टीपॉइंट सुधार और मार्क पीक मिलान के लिए माध्य विधि और 0.1 मिनट की समय विंडो चौड़ाई लागू की गई थी (आंकड़े 1-2), और मिश्रित संदर्भ मानकों के साथ ओवरलेड क्रोमैटोग्राम प्राप्त किए गए थे (चित्र 3)।

परिणामों से पता चला कि चार प्रसंस्कृत उत्पादों में कच्चे स्लाइस के समान फिंगरप्रिंट प्रोफाइल थे। कच्चे स्लाइस में 9 सामान्य चोटियाँ थीं, जबकि वाइन-स्टीम्ड, स्टीम्ड, स्टिर-प्रोसेस्ड-विद-ब्लैक-बीन्स, और ब्लैक-बीन-जूस-प्रोसेस्ड स्लाइस में 11 सामान्य चोटियाँ थीं। दोनों द्वारा नौ समान चोटियाँ साझा की गईं। चोटियाँ नं. चार संसाधित उत्पादों के बीच फ़िंगरप्रिंट प्रोफ़ाइल समान थीं, और उनके बीच स्पष्ट रूप से अंतर प्रतिबिंबित नहीं हुआ।

3.3.5 समानता विश्लेषण

Using J1 as the reference fingerprint, similarity analysis was performed for different processed products (Table 2). Similarities were all >0.9, विभिन्न प्रसंस्कृत उत्पादों के बीच समान फिंगरप्रिंट विशेषताओं को दर्शाता है।

3.3.6 सामान्य चोटियों की पहचान

मिश्रित संदर्भ मानकों और कच्चे-स्लाइस क्रोमैटोग्राम के साथ अवधारण समय की तुलना करके, चार क्रोमैटोग्राफिक चोटियों की पहचान की गई: पीक 4, इचिनाकोसाइड; पीक 9, सिस्टानोसाइड ए; पीक 10, एक्टियोसाइड; पीक 11, आइसोएक्टियोसाइड (चित्र 2)। संदर्भ शिखर के रूप में पीक 4 (इचिनाकोसाइड) के साथ, चार प्रसंस्कृत उत्पादों के विभिन्न बैचों के बीच सामान्य शिखर के सापेक्ष अवधारण समय के आरएसडी मूल्य 0.11% से 0.82% तक थे, और सापेक्ष शिखर क्षेत्रों के आरएसडी मूल्य 15.46% से 76.07% तक थे।

3.3.7 क्लस्टर विश्लेषण

एसपीएसएस 27.0 का उपयोग कच्चे स्लाइस और प्रसंस्कृत उत्पादों के क्लस्टर विश्लेषण के लिए किया गया था। अंतर-समूह लिंकेज लागू किया गया और वर्गाकार यूक्लिडियन दूरी का उपयोग किया गया (चित्र 4)। जब अंतर-कक्षा दूरी थी<5, water-steamed slices and wine-steamed slices clustered together. When the inter-class distance was 10, raw slices and the four processed products were classified into three categories: raw materials (S1–S6) as one category; black-bean-juice-processed slices (H1–H6) as one category; and wine-steamed slices (J1–J6) together with water-steamed slices (Q1–Q6) and stir-processed-with-black-beans slices (C1–C6) as one category. When the inter-class distance was between 15 and 25, black-bean-juice-processed slices formed a separate cluster from the other samples.

3.3.8 प्रमुख घटक विश्लेषण

चरम क्षेत्रों के मानकीकरण के बाद, एसपीएसएस 27.0 का उपयोग करके पीसीए का प्रदर्शन किया गया। KMO मान 0.679 था और बार्टलेट का परीक्षण महत्व था<0.001, indicating suitability for PCA. With eigenvalues >1, तीन प्रमुख घटक eigenvalues ​​​​6.815, 1.987, और 1.105 के साथ निकाले गए थे। विचरण योगदान दरें क्रमशः 61.954%, 18.063%, और 10.047% थीं, संचयी विचरण योगदान दर 90.064% (तालिका 3) के साथ। यह इंगित करता है कि पहला प्रमुख घटक व्यापक स्कोर के लिए सबसे महत्वपूर्ण संकेतक है।

घटक मैट्रिक्स ने दिखाया कि पहले प्रमुख घटक में, पीक 2-9 और पीक 11 के लिए पीक क्षेत्र चर के पूर्ण गुणांक अपेक्षाकृत बड़े थे, जो एफ1 पर मजबूत प्रभाव का सुझाव देते हैं। दूसरा प्रमुख घटक पीक 1 और 10 की जानकारी से संबंधित है, और तीसरा प्रमुख घटक पीक 1 के साथ सहसंबद्ध है। घटक मैट्रिक्स तालिका 4 में दिखाया गया है; स्क्री प्लॉट और लोडिंग प्लॉट को चित्र 5 और 6 में दिखाया गया है। तीन प्रमुख घटकों के स्कोर और उनके विचरण योगदान दर को रैखिक भार के लिए वजन के रूप में उपयोग करते हुए, व्यापक स्कोर की गणना की गई (तालिका 5), यह दर्शाता है कि ब्लैक-बीन-जूस-प्रसंस्कृत स्लाइस, पानी-स्टीम्ड स्लाइस और वाइन-स्टीम्ड स्लाइस उच्च स्थान पर हैं।

 

3.4 एचपीएलसी में एकाधिक घटकों का निर्धारणसिस्टैंच ट्यूबुलोसाऔर इसके प्रसंस्कृत उत्पाद

3.4.1 क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ और विशिष्टता

क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ वही थीं जो फ़िंगरप्रिंटिंग के लिए उपयोग की जाती थीं। नमूना समाधान, संदर्भ समाधान, और नकारात्मक रिक्त समाधान (पीले चावल की शराब, शुद्ध पानी, काले सेम का रस) प्रत्येक को इंजेक्ट किया गया (10 μL)। अवधारण समय की तुलना की गई. नकारात्मक रिक्त समाधानों में इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, एक्टियोसाइड और आइसोएक्टियोसाइड के साथ कोई हस्तक्षेप नहीं दिखाया गया।[स्रोत में पाठ गायब है]

3.4.2 रैखिकता

1.1301, 0.2294, 0.2255, और 0.2109 mg·mL⁻¹ की सांद्रता पर इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए और आइसोएक्टियोसाइड के संदर्भ समाधानों को 1, 2, 4, 8, 10, और 16 µL पर सटीक रूप से पिपेट किया गया और इंजेक्ट किया गया। रैखिक प्रतिगमन चरम क्षेत्र XXX बनाम इंजेक्शन एकाग्रता YYY (mg·mL⁻¹) के साथ किया गया था। रैखिक समीकरण और रेंज तालिका 6 में दिखाए गए हैं।

3.4.3 परिशुद्धता

एक ही नमूना समाधान लगातार छह बार इंजेक्ट किया गया था। चार विश्लेषणों (इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, एक्टियोसाइड, आइसोएक्टियोसाइड) के लिए सामग्री के आरएसडी मूल्य क्रमशः 0.23%, 2.71%, 0.53% और 2.08% थे (तालिका 7), सभी<3%, indicating good instrumental precision.

3.4.4 पुनरावर्तनीयता

एक ही बैच (कच्चा टुकड़ा S1) से छह समानांतर नमूना समाधान तैयार किए गए थे। चार विश्लेषणों के लिए सामग्री का आरएसडी मान क्रमशः 0.22%, 2.46%, 0.50% और 2.46% था (तालिका 7), सभी<3%, indicating good repeatability.

3.4.5 स्थिरता (इंट्रा-डे)

उसी नमूना समाधान का विश्लेषण 0, 3, 6, 9, 12 और 24 घंटे पर किया गया। चार विश्लेषणों के लिए सामग्री का आरएसडी मान क्रमशः 0.80%, 1.62%, 1.72% और 1.49% था (तालिका 7), सभी<2.0%, indicating stability within 24 h.

3.4.6 स्थिरता (अंतर-दिन)

एक ही नमूना समाधान का लगातार पांच दिनों तक विश्लेषण किया गया। पांच दिनों में चार विश्लेषणों के लिए सामग्री का आरएसडी मान क्रमशः 2.80%, 2.53%, 3.53% और 2.88% था (तालिका 7), जो पांच दिनों के भीतर स्थिरता का संकेत देता है।

3.4.7 पुनर्प्राप्ति

की उचित मात्रासिस्टैंच ट्यूबुलोसानमूने का वजन किया गया, और इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए और आइसोएक्टियोसाइड के संदर्भ मानकों को 1:1 के अनुपात में बढ़ाया गया। छह समानांतर नमूना समाधान तैयार किए गए और उनका विश्लेषण किया गया (10 μL इंजेक्शन)। औसत पुनर्प्राप्ति 99.29%, 98.75%, 99.45%, और 96.13% (n{{9%)) थी, जिसमें आरएसडी मान क्रमशः 2.51%, 0.38%, 1.71% और 0.49% थे।

3.4.8 निर्धारण परिणाम

प्रत्येक नमूने के लिए, 0.5 ग्राम पाउडर का सटीक वजन किया गया; चार घटकों की प्रतिशत सामग्री निर्धारित करने और गणना करने के लिए 10 μL इंजेक्ट किया गया था। परिणाम चित्र 7-10 में दिखाए गए हैं।

 

3.5 कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड, कुल पॉलीसेकेराइड और कुल फ्लेवोनोइड का निर्धारण

3.5.1 कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड का निर्धारण

3.5.1.1 संदर्भ समाधान तैयार करना

0.32 mg·mL⁻¹ की सांद्रता वाला घोल प्राप्त करने के लिए इचिनाकोसाइड संदर्भ पदार्थ की उचित मात्रा को सटीक रूप से तौला गया और 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में मेथनॉल में घोल दिया गया। साहित्य के अनुसार [15], 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, और 1.2 एमएल संदर्भ समाधान को पिपेट किया गया, मेथनॉल के साथ 10 एमएल तक पतला किया गया, और अवशोषण (ए) 333 एनएम पर मापा गया। फिट किया गया मानक वक्र समीकरण Y =24.7596

3.5.1.2 नमूना समाधान तैयार करना

100 मिलीग्राम नमूना पाउडर (100-मेश छलनी के माध्यम से पारित) को सटीक रूप से तौला गया, 30 मिनट (200 डब्ल्यू, 40 किलोहर्ट्ज) के लिए मेथनॉल के साथ अल्ट्रासोनिक रूप से निकाला गया, 10 एमएल तक पतला किया गया, और 0.22 माइक्रोन झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया। फिर 0.2 एमएल निस्पंद को मेथनॉल के साथ 10 एमएल तक पतला किया गया और विश्लेषण के लिए मिलाया गया।

3.5.1.3 निर्धारण

प्रत्येक नमूने के लिए, नमूना समाधान तैयार करने के लिए 100 मिलीग्राम पाउडर का उपयोग किया गया था। अवशोषण 333 एनएम पर मापा गया था और कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की प्रतिशत सामग्री की गणना की गई थी (तालिका 9)।

समीकरण (1):
सामग्री (%) =C×V×Dm×100%= \\dfrac{C \\times V \\times D}
जहां सीसीसी नमूना समाधान में विश्लेषक की एकाग्रता है, वीवीवी कमजोर पड़ने की मात्रा है, डीडीडी कमजोर पड़ने वाला कारक है, और एमएमएम नमूना द्रव्यमान (मिलीग्राम) है।

3.5.2 कुल पॉलीसेकेराइड का निर्धारण

3.5.2.1 संदर्भ समाधान तैयार करना

डी-ग्लूकोज निर्जल संदर्भ पदार्थ की उचित मात्रा को सटीक रूप से तौला गया, शुद्ध पानी में घोला गया और 0.190 mg·mL⁻¹ का घोल प्राप्त करने के लिए 10 एमएल तक पतला किया गया। मिश्रण और निस्पंदन (0.22 µm) के बाद, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, और 1.0 एमएल को पिपेट किया गया। रंग विकास एंथ्रोन-सल्फ्यूरिक एसिड विधि [16] द्वारा किया गया था। अवशोषण 625 एनएम मापा गया। फिट किया गया मानक वक्र समीकरण Y=35.1316

3.5.2.2 नमूना समाधान तैयार करना

40 मिलीग्राम नमूना पाउडर को सटीक रूप से तौला गया, 30 मिनट (200 डब्ल्यू, 40 किलोहर्ट्ज) के लिए शुद्ध पानी में अल्ट्रासोनिक रूप से घोला गया, 10 एमएल तक पतला किया गया और 0.22 माइक्रोन झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया।

3.5.2.3 निर्धारण

प्रत्येक नमूने के लिए, नमूना समाधान तैयार करने के लिए 40 मिलीग्राम का उपयोग किया गया था। फिर 0.1 एमएल निस्पंद को पाइप से डाला गया और 2.00 एमएल तक शुद्ध पानी के साथ पूरक किया गया। एंथ्रोन-सल्फ्यूरिक एसिड विधि द्वारा रंग विकास के बाद, अवशोषण को मापा गया और कुल पॉलीसेकेराइड की प्रतिशत सामग्री की गणना की गई (तालिका 8)।

3.5.3 कुल फ्लेवोनोइड्स का निर्धारण

3.5.3.1 संदर्भ समाधान तैयार करना

रुटिन संदर्भ पदार्थ की उचित मात्रा को सटीक रूप से तौला गया, 70% इथेनॉल में घोला गया, और 25 एमएल तक पतला किया गया; 0.22 µm झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया। फिर 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 और 4.0 एमएल को पिपेट किया गया। रंग विकास सोडियम नाइट्राइट-एल्यूमीनियम नाइट्रेट-सोडियम हाइड्रॉक्साइड विधि [17] का उपयोग करके किया गया था। अवशोषण 510 एनएम पर मापा गया था। फिट किया गया मानक वक्र समीकरण Y =11.5699

3.5.3.2 नमूना समाधान तैयार करना

50 मिलीग्राम पाउडर को सटीक रूप से तौला गया, अल्ट्रासोनिक रूप से 30 मिनट (200 डब्ल्यू, 40 किलोहर्ट्ज़) के लिए 70% इथेनॉल में घोला गया, 10 एमएल तक पतला किया गया, और 0.22 µm झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया।

3.5.3.3 निर्धारण

प्रत्येक नमूने के लिए, नमूना समाधान तैयार करने के लिए 50 मिलीग्राम का उपयोग किया गया था। फिर 0.5 एमएल निस्पंद को 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित किया गया और उपरोक्त क्रम में रंग अभिकर्मकों को जोड़ा गया। शुद्ध पानी को रिक्त स्थान के रूप में परोसा जाता है। अवशोषण को मापा गया और कुल फ्लेवोनोइड की प्रतिशत सामग्री की गणना की गई (तालिका 8)।

 

4 चर्चा

इस अध्ययन में, एचपीएलसी उंगलियों के निशानसिस्टैंच ट्यूबुलोसा and its various processed products were established. Peak matching across different batches confirmed 9 common peaks in raw slices and 11 common peaks in processed products. By comparison with reference standards, four common peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Similarity analysis showed that similarity values among four processed products were all >0.9, और समग्र फिंगरप्रिंट प्रोफाइल समान थे, जो दर्शाता है कि उनके घटक प्रकार समान थे। हालाँकि, सापेक्ष चरम क्षेत्रों के आरएसडी में बड़े अंतर घटक सामग्री में उल्लेखनीय अंतर का सुझाव देते हैं।

कच्चे स्लाइस की तुलना में, चार प्रसंस्कृत उत्पादों ने दो अतिरिक्त चोटियों (चोटियों 2 और 7) का प्रदर्शन किया, जो दर्शाता है कि वाइन-स्टीमिंग, वॉटर-स्टीमिंग, या ब्लैक-बीन प्रसंस्करण के बाद रासायनिक घटक बदल गए। माना जाता है कि इन नव निर्मित चोटियों का निर्माण प्रसंस्करण के दौरान हुआ है; उनके घटक लक्षण वर्णन को बाद के अध्ययनों में संबोधित किया जाएगा।

सीए के नतीजों से पता चला कि इंटर क्लास में दूरी कब थी<5, wine-steamed and water-steamed slices clustered together, suggesting similar chemical composition and content. At an inter-class distance of 10, raw slices could be separated from black-bean-juice-processed slices, stir-processed-with-black-beans slices, and wine/water-steamed slices. At inter-class distances of 15–25, differences between black-bean-juice-processed slices and other samples became more prominent. PCA results indicated that three principal components had substantial influence on comprehensive evaluation.

विभिन्न प्रसंस्करण विधियों ने विभिन्न घटकों के स्तर को सीधे प्रभावित किया। केमोमेट्रिक निर्धारण के आधार पर, कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स को इस प्रकार क्रमबद्ध किया गया है: ब्लैक-बीन-जूस-संसाधित > कच्चे स्लाइस > पानी-उबले हुए > वाइन-स्टीम्ड > ब्लैक-बीन के साथ हलचल-संसाधित। कुल पॉलीसेकेराइड को इस प्रकार क्रमबद्ध किया गया है: पानी-उबला हुआ > वाइन-उबला हुआ > हलचल-संसाधित-साथ-काली फलियाँ > काली-बीन-रस-संसाधित > कच्चे स्लाइस। कुल फ्लेवोनोइड्स को इस प्रकार क्रमबद्ध किया गया है: ब्लैक-बीन-जूस-प्रोसेस्ड > पानी-स्टीम्ड > स्टिर-प्रोसेस्ड-विथ-ब्लैक-बीन्स > वाइन-स्टीम्ड > कच्चे स्लाइस। कच्चे स्लाइस की तुलना में, ब्लैक-बीन-जूस प्रसंस्करण ने कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड में वृद्धि की, जबकि अन्य प्रसंस्करण विधियों ने इसे कम कर दिया; सभी चार प्रसंस्करण विधियों ने कुल पॉलीसेकेराइड और कुल फ्लेवोनोइड में उल्लेखनीय वृद्धि की। दो ब्लैक-बीन विधियों के बीच, ब्लैक-बीन-जूस प्रसंस्करण से सांख्यिकीय अंतर के साथ, ब्लैक-बीन के साथ हलचल-प्रसंस्करण की तुलना में कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड और कुल फ्लेवोनोइड में बड़ी वृद्धि हुई।

 

तालिका 8. कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड, कुल पॉलीसेकेराइड और कुल फ्लेवोनोइड के निर्धारण परिणामसिस्टैंच ट्यूबुलोसाऔर इसके प्रसंस्कृत उत्पाद

प्रसंस्कृत उत्पाद (काढ़े के टुकड़े)	कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (%)	कुल पॉलीसेकेराइड (%)	कुल फ्लेवोनोइड्स (%)
कच्चे टुकड़े	6.81 ± 0.06	5.85 ± 0.10	14.16 ± 0.24
वाइन-उबले हुए टुकड़े	5.10 ± 0.05***	6.61 ± 0.05***	20.84 ± 0.33***
पानी से उबले हुए टुकड़े	5.23 ± 0.05***	6.70 ± 0.15***	21.59 ± 0.37***
काली फलियों के स्लाइस के साथ हिलाकर संसाधित किया गया	3.80 ± 0.02***	6.56 ± 0.09***	21.02 ± 0.35***
ब्लैक-बीन-जूस-संसाधित स्लाइस	7.07 ± 0.09****	6.09 ± 0.03****	24.26 ± 0.18****

टिप्पणियाँ: कच्चे स्लाइस की तुलना में: *पी <0.05, **पी <0.01, ***पी <0.001; हलचल-संसाधित-साथ-काली फलियों के स्लाइस की तुलना में: *पी <0.05, **पी <0.01, ***पी <0.001।

इचिनाकोसाइड, एक्टियोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, और आइसोएक्टियोसाइड प्रमुख फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड हैं जो किडनी-टोनिफाइंग और सार-लाभकारी प्रभावों में योगदान करते हैं।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा. इन चार घटकों की एचपीएलसी तुलना से पता चला कि सामान्य चोटियों के बीच शिखर-क्षेत्र अंतर विभिन्न प्रसंस्कृत उत्पादों को अलग करने के आधार के रूप में काम कर सकता है। कच्चे स्लाइस की तुलना में, प्रसंस्कृत उत्पादों में इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड ए और आइसोएक्टियोसाइड अलग-अलग डिग्री तक बढ़ गए हैं, ब्लैक-बीन-जूस उत्पादों में अधिक स्पष्ट वृद्धि हुई है। तीन प्रसंस्कृत उत्पादों में एक्टियोसाइड कम हो गया लेकिन ब्लैक-बीन्स के साथ हलचल-संसाधित उत्पादों में वृद्धि हुई। यह एक्टियोसाइड की अंतर्निहित स्थिरता से संबंधित हो सकता है: कैफॉयल अंश के साथ एक फेनिलएथेनॉइड डाइग्लाइकोसाइड के रूप में, यह कैफिक एसिड उत्पन्न करने के लिए हीटिंग तापमान, समय और पीएच में परिवर्तन के तहत एस्टर बंधन दरार से गुजर सकता है, और आंशिक रूप से आइसोएक्टोसाइड में आइसोमेराइज हो सकता है। चार प्रसंस्कृत उत्पादों में एक्टियोसाइड में देखी गई कमी और आइसोएक्टियोसाइड में वृद्धि उच्च तापमान वाली स्टीमिंग से जुड़ी हो सकती है, जो रहमानिया रेडिक्स प्रसंस्करण के लिए रिपोर्ट किए गए पैटर्न के अनुरूप है [18]।

इस अध्ययन में वाइन/पानी की भाप लेने और ब्लैक-बीन प्रसंस्करण के बाद इचिनाकोसाइड में वृद्धि हुई, जो झांग चाओ एट अल के विपरीत है। [12]. ब्लैक बीन्स और ब्लैक-बीन-जूस प्रसंस्करण के साथ हलचल-प्रसंस्करण की तुलना करने पर, बाद वाले ने इचिनाकोसाइड और सिस्टानोसाइड ए की काफी उच्च सामग्री और एक्टियोसाइड से आइसोएक्टियोसाइड में अधिक स्पष्ट रूपांतरण प्रवृत्ति दिखाई। कुल मिलाकर, यह अध्ययन विभिन्न प्रसंस्करण विधियों के बाद संरचनागत और सामग्री परिवर्तनों को प्रकट करता है और एक्टियोसाइड और आइसोएक्टोसाइड के बीच परिवर्तन की पुष्टि करता है। एचपीएलसी फ़िंगरप्रिंट कच्चे स्लाइस और प्रसंस्कृत उत्पादों की पहचान करने के लिए एक वैज्ञानिक विधि प्रदान करता है, और गुणवत्ता-नियंत्रण मानकों की स्थापना और गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक संदर्भ प्रदान करता है।

 

एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो

ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

लेखक का योगदान

एक्सयू ज़ियाओकिन: परियोजना समर्थन, अध्ययन डिजाइन, प्रयोगात्मक निर्धारण, और पांडुलिपि लेखन;
किंग डेगांग: औषधीय सामग्रियों का समग्र समन्वय और संग्रह;
झांग जुआन और झाओ पेंगान: घटक निर्धारण और डेटा विश्लेषण;
वांग गुओपिंग: औषधीय सामग्रियों का प्रमाणीकरण।

 

सिस्टैंच नमूना फैक्टरी:

https://www.xjcistanche.com/about-us

 

 

संदर्भ

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