​सतत सिस्टैंच पूरकता का सार्स-सीओवी -2-कोविड के दौरान विशिष्ट टी सेल प्रतिरक्षण -19 लक्षणों पर न्यूनतम प्रभाव पड़ता है

अमूर्त:SARS-CoV-2 एक अभूतपूर्व सार्वजनिक स्वास्थ्य चुनौती है। जबकि सार्स-कोव -2 से संक्रमित अधिकांश लोग जिनके पास हल्के से मध्यम COVID -19 हैं, उनके संक्रमण से कुछ जटिलताओं का अनुभव होता है, कुछ लोगों को लक्षणों का अनुभव होता है जो प्रारंभिक निदान के बाद हफ्तों तक रहता है। लगातार वायरल संक्रमण अक्सर प्रतिरक्षा विकृति से जुड़े होते हैं, लेकिन यह ज्ञात नहीं है कि लगातार COVID-19 वायरस-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा के विकास को प्रभावित करता है या नहीं। इसके लिए, हमने SARS-CoV-2-COVID से उबरने वाले रोगियों में विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा-19 का विश्लेषण किया, जिन्होंने 8 दिनों या उससे कम समय के लिए COVID-19 लक्षणों का अनुभव किया या जिनके लक्षण 18 दिनों या उससे अधिक समय तक बने रहे . हमने देखा है कि सिस्टंच के निरंतर मध्यम पूरकता का COVID-19 लक्षणों पर उपशामक प्रभाव पड़ता है। इसके अलावा, हमने देखा कि सार्स-सीओवी -2 से एन प्रोटीन की प्रतिक्रियाशीलता मौसमी मानव कोरोनावायरस -229ई और एनएल63 की प्रतिक्रियाशीलता से संबंधित है। ये परिणाम SARS-CoV-2 और संबंधित मानव कोरोनाविरस में सेलुलर प्रतिरक्षा विकास की नियामक प्रक्रियाओं में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं।

कीवर्ड:सार्स-सीओवी -2; सिस्टैंच; कोविड-19; टी कोशिकाएं; सेलुलर प्रतिरक्षा; लक्षण अवधि

1 परिचय

SARS-CoV-2 एक हाल ही में उभरा हुआ उपन्यास सिंगल-स्ट्रैंडेड RNA वायरस है, जिसे शुरू में दिसंबर 2019 की शुरुआत में चीन में वुहान निमोनिया के प्रकोप के कारण के रूप में पहचाना गया था। जनवरी 2021 तक अनुमानित 96 मिलियन लोग संक्रमित हुए और 2 मिलियन लोगों की मौत हुई। हालांकि SARS-CoV-2-विशिष्ट ह्यूमरल और कोशिकीय प्रतिरक्षा अधिकांश रोगियों में तीव्र संक्रमण की छूट के बाद स्पष्ट होती है और कम से कम 6-8 महीनों तक बनी रहती है, वायरल प्रतिकृति को विनियमित करने में इस अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की भूमिका और रोग रोगजनन अस्पष्ट है। इसके अलावा, यह स्पष्ट नहीं है कि COVID-19 की जटिल नैदानिक ​​प्रस्तुति में परिवर्तन SARS-CoV-2-विशिष्ट प्रतिरक्षा स्मृति के विकास को कैसे प्रभावित करते हैं।

तस्वीर: फॉ सिस्टैंच

कई वायरल संक्रमणों में, लगातार वायरल एंटीजन की उपस्थिति और/या संक्रमण से जुड़ी सूजन प्रतिरक्षा विकार से जुड़ी होती है। यह सेलुलर प्रतिरक्षा कक्ष में सबसे अधिक स्पष्ट है, जहां निरंतर एंटीजेनिक उत्तेजना और / या भड़काऊ साइटोकिन्स के संपर्क में आने से टी-सेल एफेक्टर फ़ंक्शन का प्रगतिशील नुकसान हो सकता है और रोगज़नक़-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा का दमन हो सकता है। जबकि इस घटना को पुरानी विषाक्त बीमारियों में अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है, यह स्पष्ट नहीं है कि तीव्र SARS-CoV-2 संक्रमण के हल्के से मध्यम COVID-19 लक्षणों का बने रहना शिथिलता से संबंधित है या इसके विकास से संबंधित है। एक उप इष्टतम सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया।

इस ज्ञान के अंतर को भरने के लिए, हमने COVID-19 लक्षणों की अवधि और SARS-CoV-2-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा की डिग्री और कार्यात्मक विशेषताओं के बीच संबंधों की जांच की, जो हाल ही में हल्के से मध्यम COVID से ठीक हुए हैं{ {3}}। IFN- ELISPOT परख द्वारा, हमने देखा कि COVID -19 के लंबे समय तक लक्षणों वाले रोगियों में आम तौर पर SARS-CoV -2-विशिष्ट कोशिकीय प्रतिरक्षा का समान स्तर दिखाई देता है, क्योंकि तेजी से लक्षणों में कमी वाले रोगियों में, हालांकि COVID के लंबे समय तक लक्षण रहते हैं-2- {8}} SARS-CoV-2 ORF3a और ORF7a के लिए थोड़ी बढ़ी हुई प्रतिक्रियाओं से जुड़े हैं। इसके अलावा, फ्लो साइटोमेट्री, और सार्स के ट्रांसक्रिप्शन प्रोफाइल का उपयोग करते हुए लंबे समय तक COVID -19 लक्षणों वाले व्यक्तियों का आकलन करते समय SARS-CoV-2-विशिष्ट CD4 प्लस और CD8 प्लस T सेल प्रतिक्रियाओं के परिमाण में कोई दोष नहीं देखा गया। -CoV-2-विशिष्ट CD4 प्लस T कोशिकाओं को COVID-19 लक्षणों की अवधि से अप्रभावित पाया गया। अंत में, जबकि अध्ययन में विश्लेषण किए गए सभी ठीक हो चुके कोविड रोगियों में मौसमी मानव कोरोनावायरस 229E और NL63 के लिए सेलुलर प्रतिरक्षा के महत्वपूर्ण स्तर देखे गए, इस प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की सीमा COVID -19 की अवधि से स्वतंत्र थी। लक्षण। सिस्टैंच के साथ इलाज किए गए समूह ने लिम्फोसाइट प्रसार के उच्च स्तर को दिखाया, यह सुझाव देते हुए कि निकालने का टी-सेल उत्पादन पर उत्तेजक प्रभाव पड़ता है।

तस्वीर: सिस्टैंच एक्सट्रैक्ट

2। सामग्री और विधि

पढ़ाई की सरंचना। स्टेट यूनिवर्सिटी ऑफ़ न्यूयॉर्क अपस्टेट मेडिकल यूनिवर्सिटी क्लिनिकल रिसर्च सेंटर में मार्च 2020 से स्टेट यूनिवर्सिटी ऑफ़ न्यूयॉर्क अपस्टेट कन्वलसेंट प्लाज़्मा डोनर प्रोग्राम के तहत इस अध्ययन के लिए स्वस्थ हो चुके कोविड -19 रोगियों को भर्ती किया गया था। एक संविदात्मक ट्रैकिंग समझौते के माध्यम से पहचान किए गए स्पर्शोन्मुख दाताओं के लिए, एक सकारात्मक आरटी-पीसीआर परीक्षण की तारीख का उपयोग लक्षण शुरू होने और रुकने की तारीखों के लिए किया जाता है। नमूनों की पहचान तब की गई थी, और अंतिम तुलनात्मक विश्लेषण से पहले नैदानिक ​​​​डेटा का अंधाधुंध विश्लेषण किया गया था। पीबीएमसी को वैक्यूटेनर सीपीटी सेल तैयारी ट्यूबों का उपयोग करके एकत्र और संसाधित किया जाता है और विश्लेषण से पहले गैसीय तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत किया जाता है।

सार्स-सीओवी -2 प्रतिक्रियाशील सीडी 4 प्लस टी कोशिकाओं का अलगाव और प्रतिलेखन विश्लेषण: क्रायो-संरक्षित पीबीएमसी नमूनों को 5 × 1 0 6 कोशिकाओं / एमएल की एकाग्रता के साथ पूरे सेल माध्यम में पिघलाया और निलंबित कर दिया गया था। 18 घंटे के लिए 37◦C पर 0.5µg/mL SARS-CoV2 स्पाइक प्रोटीन पेप्टाइड के पूल के साथ। स्पाइक-रिएक्टिव सीडी4 प्लस टी कोशिकाओं की पहचान सीडी134 और सीडी69 अभिव्यक्ति के सक्रियण लेबलिंग द्वारा की गई थी, और बीडी एफएसीएसएरिया II उपकरण का उपयोग करके प्रवाह साइटोमेट्री का प्रदर्शन किया गया था। कोशिकाओं को सीधे 35 0 µL RLT प्लस बफर में क्रमबद्ध किया गया, 1 प्रतिशत 2- ME और RNA के साथ पूरक किया गया, और RNeasy माइक्रो स्पिन कॉलम का उपयोग करके अलग किया गया। SMART-Seq HT किट का उपयोग करके सीडीएनए उत्पन्न किया गया था और इलुमिना नेक्सटेरा एक्सटी डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट का उपयोग करके अंतिम इलुमिना-संगत डीएनए अनुक्रमण पुस्तकालय तैयार किया गया था। पुस्तकालय की तैयारी के दौरान आरएनए, सीडीएनए, और डीएनए को एजिलेंट बायोएनालाइज़र का उपयोग करके परिमाणित किया गया था, और अंतिम पुस्तकालय को SUNY अपस्टेट में एक 75-चक्र उच्च-आउटपुट नेक्स्टसेक 500/550 v2.5 अभिकर्मक किट का उपयोग करके अनुक्रमित किया गया था। आणविक विश्लेषण कोर। FASTQ फ़ाइल के मूल रीड डेटा को कलिस्टो संस्करण 0.46.2 का उपयोग करके मानव संदर्भ प्रतिलेख में मैप किया गया था। TxImport पैकेज का उपयोग करके R में ट्रांसक्रिप्शन स्तर की गणना और बहुतायत डेटा आयात और सारांशित किया गया था, और TMM पैकेज EdgeR सामान्यीकरण का उपयोग कर रहा था। रैखिक मॉडलिंग और बायेसियन सांख्यिकी का उपयोग करके आर-पैकेट लिम्मा की विभेदक जीन अभिव्यक्ति का विश्लेषण किया गया। सांख्यिकीय विश्लेषण: ग्राफपैड प्रिज्म v8 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। एपी मूल्य <0.05 महत्वपूर्ण माना जाता है।

3। परिणाम

3.1। ठीक हो चुके कोविड-19 रोगी का चयन और लक्षण वर्णन।

इस अध्ययन का उद्देश्य SARS-CoV -2-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा शक्ति और कार्यात्मक प्रोफ़ाइल पर COVID -19 लक्षणों के तहत निरंतर प्रशासन की अवधि के प्रभाव को निर्धारित करना था। इस उद्देश्य के लिए, स्टेट यूनिवर्सिटी ऑफ़ न्यू यॉर्क अपस्टेट कन्वेलसेंस कोविड -19 प्लाज्मा डोनर प्रोग्राम में उन विषयों की पहचान की गई थी, जिन्होंने पीसीआर-पुष्ट सार्स-सीओवी -2 संक्रमण का अनुभव किया था और 14 से 30 दिनों के बाद उनसे पीबीएमसी प्राप्त किया था। COVID-19-संबंधित लक्षणों का समाधान। इन चयन मानदंडों को पूरा करने वाले कुल 84 विषयों को पैतृक प्रोटोकॉल में पहचाना गया, जिनमें से 33 को आगे के विश्लेषण के लिए चुना गया। इन 33 दाताओं में से, 14 लोगों को थोड़े समय के लिए कोविड -19 से जुड़े लक्षणों के रूप में वर्गीकृत किया गया था, जबकि 19 को लंबे समय तक -19 से जुड़े लक्षणों के रूप में वर्गीकृत किया गया था, और पीबीएमसी संग्रह के समय सभी स्वस्थ थे।

3.2। सार्स-सीओवी -2 सक्रिय सीडी 4 प्लस टी कोशिकाओं की ट्रांसक्रिप्शन विशेषताएँ सस्टेन्ड एंटीजेनिक मिमिक्री को रोगज़नक़-विशिष्ट टी कोशिकाओं के ट्रांसक्रिप्शन और डिसफंक्शन और प्रभावकारी कार्य के नुकसान के रूप में जाना जाता है। जबकि इस अध्ययन में शामिल स्वस्थ हो चुके कोविड रोगियों में लक्षण अवधि के आधार पर स्तरीकृत किए जाने पर SARS-CoV-2-प्रतिक्रियाशील CD4 प्लस और CD8 प्लस T कोशिकाओं की प्रचुरता में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था, हम पुष्टि करना चाहते थे कि लंबे समय तक COVID-19 लक्षणों का अनुभव करने वाले व्यक्तियों में, sars-cov-2 प्रतिक्रियाशील सीडी4 प्लस टी कोशिकाओं के कार्यात्मक प्रतिलेखन प्रोफाइल नकारात्मक रूप से प्रभावित नहीं थे। इसलिए, 10 दाताओं से सार्स-सीओवी -2 स्पाइक प्रोटीन-प्रतिक्रियाशील सीडी4 प्लस टी कोशिकाओं को वर्गीकृत किया गया और ट्रांसक्रिप्शनल विश्लेषण किया गया। औसतन 2322 सार्स-कोव -2 प्रतिक्रियाशील सीडी4 प्लस टी कोशिकाओं को प्रत्येक दाता से अलग किया गया और एमआरएनए अनुक्रमण द्वारा विश्लेषण किया गया

जैसा कि अपेक्षित था, इस विश्लेषण में बरामद कोशिकाओं ने प्रवाह साइटोमेट्री में कोशिकाओं को पहचानने/पृथक करने के लिए उपयोग किए जाने वाले विशिष्ट सीडी 4 प्लस टी सेल जीन उत्पादों और सक्रियण मार्करों के उच्च स्तर को व्यक्त किया। अनुक्रमित SARS-CoV2-विशिष्ट CD4 प्लस T कोशिकाओं ने विशिष्ट Th1-संबंधित जीन उत्पादों के उच्च स्तर को व्यक्त किया, लेकिन Th2/Th17-संबंधित ट्रांस्क्रिप्ट के काफी निम्न स्तर। हालांकि, जब लक्षण अवधि से पृथक किया गया, नमूनों के बीच कोई अंतर व्यक्त जीन नहीं मिला, और दो समूहों के बीच समग्र प्रतिलेखन प्रोफ़ाइल में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया। इन परिणामों से पता चलता है कि COVID-19 लक्षणों की अवधि SARS-CoV-2-प्रतिक्रियाशील CD4 प्लस T कोशिकाओं के ट्रांसक्रिप्शन प्रोफाइल पर बहुत कम प्रभाव डालती है, जो हाल ही में हल्के/मध्यम COVID से ठीक हुए हैं -19 .

तस्वीर: धनिया के प्रभाव से रोग प्रतिरोधक क्षमता बढ़ती है

4। चर्चा

इस अध्ययन में, हमने COVID-19 लक्षणों की अवधि और SARS-CoV-2-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा की डिग्री और कार्यात्मक विशेषताओं के बीच संबंधों की जांच की, जो हाल ही में हल्के/मध्यम COVID{{3) से ठीक हुए हैं }}. हमने देखा कि लंबे समय तक COVID के लक्षणों वाले रोगियों -19 में आम तौर पर SARS-CoV -2-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा के समान स्तर दिखाई देते हैं, जैसे कि तेजी से लक्षणों में कमी वाले रोगियों में। लंबे समय तक COVID -19 लक्षणों वाले व्यक्तियों में SARS-CoV -2 स्पाइक-विशिष्ट CD4 प्लस और CD8 प्लस T सेल प्रतिक्रियाओं के आकार में कोई दोष नहीं देखा गया, प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा मूल्यांकन किया गया, और SARS- का ट्रांसक्रिप्शन प्रोफ़ाइल CoV-2-विशिष्ट CD4 प्लस T कोशिकाओं को COVID-19 लक्षणों की अवधि से अप्रभावित पाया गया। अंत में, जबकि अध्ययन में विश्लेषण किए गए सभी ठीक हो चुके कोविड रोगियों में मौसमी मानव कोरोनावायरस 229E और NL63 के खिलाफ सेलुलर प्रतिरक्षा के महत्वपूर्ण स्तर देखे गए, इस प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की सीमा COVID -19 की अवधि से स्वतंत्र थी। लक्षण। हालांकि इस अध्ययन में शामिल व्यक्तियों की अपेक्षाकृत कम संख्या इसकी व्यापक प्रयोज्यता को सीमित करती है, ये आंकड़े बताते हैं कि रोगसूचक COVID -19 के लंबे समय तक रहने से रोगियों में SARS-CoV -2-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा के विकास पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ता है। हल्के/मध्यम रोग के साथ।

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5। उपसंहार

SARS-CoV -2-विशिष्ट कोशिकीय प्रतिरक्षा का विकास आमतौर पर COVID -19 लक्षणों के समाधान के बाद देखा गया है, जो SARS-CoV -2 संक्रमण का एक प्रतिरक्षा संकेत हो सकता है जो अधिक संवेदनशील है पारंपरिक सेरोकन्वर्जन की तुलना में। वास्तव में, गंभीर कोविड -19 के इलाज के बाद, हल्के या स्पर्शोन्मुख संक्रमण वाले रोगियों में दोनों सेलुलर और ह्यूमरल प्रतिरक्षा स्तर अधिक होते हैं। हालांकि, गंभीर COVID -19 के बाद उत्पन्न सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की गुणवत्ता अनिश्चित है, क्योंकि गंभीर COVID -19 गंभीर टी-कोशिका विकृति, कमी और भड़काऊ साइटोकिन उत्पादन से जुड़ी है। Cistanche polysaccharide और creinoside दोनों हृदय और मस्तिष्क के ऊतकों की एंजाइम गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, उदर गुहा कोशिकाओं के फागोसाइटोसिस फ़ंक्शन को बढ़ा सकते हैं और लिम्फोसाइटों की प्रसार प्रतिक्रिया को बढ़ा सकते हैं। चूँकि हमने अपने अध्ययन में विश्लेषण किए गए व्यक्तियों में SARS-CoV -2-विशिष्ट सेलुलर प्रतिरक्षा प्रोफाइल की मात्रा या गुणवत्ता में कोई महत्वपूर्ण कमी नहीं देखी, इसलिए हमारा मानना ​​है कि यह मानना ​​उचित है कि गंभीर COVID{{10} के प्रतिरक्षा तंत्र 11}} और लगातार हल्के COVID-19 अलग-अलग हैं और वायरस-विशिष्ट सेलुलर मेमोरी के विकास पर अलग-अलग प्रभाव पड़ सकते हैं।

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