एचपीएलसी द्वारा सिस्टैंच हर्बा के जल अर्क में इचिनाकोसाइड का निर्धारण

अमूर्त:

उद्देश्य के लिए एक एचपीएलसी विधि स्थापित की गई थीइचिनाकोसाइड का निर्धारणमेंसिस्टैंच का जल अर्कहर्बा.

इचिनाकोसाइड के तरीके एचपीएलसी द्वारा निर्धारित किए गए थे। पृथक्करण इनर्टसिल ओडीएस-एसपी सी18 कॉलम पर एसीटोनिट्राइल (ए) और 0.4% फॉस्फोरिक एसिड समाधान (बी) से युक्त एक मोबाइल चरण के साथ ग्रेडिएंट रेफरेंस द्वारा किया गया था। डिटेक्शन वेवलेंथ 333 एनएम पर सेट किया गया था, और कॉलम तापमान 3 0 डिग्री था। प्रवाह दर 1.0 एमएल·मिनट-1 थी और इंजेक्शन की मात्रा 10 μL थी। परिणाम 44 की सांद्रता सीमा के भीतर इचिनाकोसाइड का रैखिक संबंध। रिकवरी 94.59%-105.31% (आरएसडी= 2.93%,एन=9) थी। सिस्टैंच हर्बा के जल अर्क में इचिनाकोसाइड की सामग्री 15.527,7.347,12.267 मिलीग्राम·जी-1 थी। निष्कर्ष अच्छी पुनरावृत्ति के साथ स्थापित एचपीएलसी विधि सटीक, सरल और व्यवहार्य है। यह सिस्टैंच हर्बा के जल अर्क में इचिनाकोसाइड के निर्धारण के लिए उपयुक्त है।

कीवर्ड:एचपीएलसी;सिस्टैंच हर्बा का जल अर्क; इचिनाकोसाइड; सामग्री का निर्धारण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला एक टॉनिक पारंपरिक चीनी दवा है जिसका उपयोग आमतौर पर नैदानिक ​​​​अभ्यास में किया जाता है और इसे "डेजर्ट जिनसेंग" के रूप में जाना जाता है [1]। चीनी फार्माकोपिया के 2015 संस्करण में दर्ज सिस्टैंच डेजर्टिकोला, सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा या सिस्टैंच ट्यूबुलोसा (शेंक) वाइट की पपड़ीदार पत्तियों वाला सूखा मांसल तना है। यह गर्म, मीठा और नमकीन होता है, और गुर्दे और बड़ी आंत के मेरिडियन में लौट आता है। इसमें किडनी यांग को पोषण देने, सार और रक्त को फिर से भरने और आंतों और रेचक को मॉइस्चराइज करने का प्रभाव होता है [2]। "शेन नोंग की मटेरिया मेडिका," का कहना है कि यह "मध्यम को टोन कर सकता है, पांच आंतरिक अंगों को पोषण दे सकता है, यिन को मजबूत कर सकता है और सार को पोषण दे सकता है"। सिस्टैंच डेजर्टिकोला में मुख्य रूप से फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स, इरिडोइड्स और उनके ग्लाइकोसाइड्स, लिग्नान्स और उनके ग्लाइकोसाइड्स, पॉलीसेकेराइड्स, एस्टर यौगिक और एल्कलॉइड्स होते हैं [3]। फेनिलथेनॉल ग्लाइकोसाइड्स सिस्टैंच डेजर्टिकोला के मुख्य सक्रिय तत्व हैं। उनमें से, इचिनाकोसाइड और वर्बास्कोसाइड को चीनी फार्माकोपिया में सिस्टैंच डेजर्टिकोला में सूचीबद्ध किया गया है।

पहचान और सामग्री निर्धारण के लिए सांकेतिक घटक। औषधीय अध्ययन [4] से पता चलता है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला में विभिन्न औषधीय प्रभाव होते हैं जैसे रेचक, यकृत सुरक्षा, एंटी-ऑस्टियोपोरोसिस, एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-एजिंग और एंटी-थकान। सिस्टैंच डेजर्टिकोला जलीय अर्क चूहे के ऑस्टियोब्लास्ट में हड्डी मॉर्फोजेनेटिक प्रोटीन 2 जीन, ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों के सीरम में टार्ट्रेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट, ऑस्टियोकैल्सिन और अस्थि मज्जा में Smad1, Mad5 जीन, परिवर्तनकारी विकास कारक- आदि की अभिव्यक्ति को बढ़ावा दे सकता है। , में ऑस्टियोपोरोसिस-रोधी प्रभाव होता है [5-6]।

इचिनेशिया ऑस्टियोब्लास्ट के प्रसार को बढ़ावा दे सकता है और इन विट्रो में संवर्धित अस्थि मज्जा मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं को ऑस्टियोब्लास्ट [7-9] में विभेदित कर सकता है। हाल के वर्षों में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला इथेनॉल अर्क और इसकी यौगिक तैयारियों में इचिनाकोसाइड और वर्बास्कोसाइड की सामग्री निर्धारण पर कई शोध रिपोर्टें आई हैं [10-12], लेकिन सिस्टैंच डेजर्टिकोला में सूचकांक घटकों की सामग्री निर्धारण पर कुछ रिपोर्टें हैं जलीय अर्क. इस अध्ययन में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला के जलीय अर्क में इचिनेसाइड की सामग्री निर्धारित करने के लिए उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) का उपयोग किया गया था।

1 सामग्री

1.1 उपकरण

एलसी{{0}एटी उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी, एसपीडी{{2}एक डिटेक्टर, एसआईएल{{3}एक ऑटोसैंपलर, सीटीओ-10एएसवीपी कॉलम ओवन, एलसी समाधान तरल क्रोमैटोग्राफी वर्कस्टेशन, शिमदज़ु कॉर्पोरेशन ऑफ जापान; MES125P-OCE-DU इलेक्ट्रॉनिक विश्लेषणात्मक संतुलन, सार्टोरियस कंपनी, जर्मनी; एसएचजेड-डी (Ⅲ) परिसंचारी जल बहुउद्देश्यीय वैक्यूम पंप, हेनान युहुआ इंस्ट्रूमेंट कंपनी लिमिटेड; RC2B SO25 रोटरी इवेपोरेटर कूलिंग सर्कुलेशन सिस्टम, RV 10 D S96 रोटरी इवेपोरेटर, IKA कंपनी, जर्मनी; डीके-एस26

विद्युत स्थिर तापमान जल स्नान, शंघाई जिंगहोंग प्रायोगिक उपकरण कं, लिमिटेड; यूपीआर श्रृंखला अल्ट्राप्योर वॉटर मशीन, सिचुआन यूपू अल्ट्राप्योर टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड।

1.2 औषधीय सामग्री और अभिकर्मक

सिस्टैंच डेजर्टिकोला औषधीय सामग्री गुआंगज़ौ लिंगन पारंपरिक चीनी चिकित्सा टुकड़े कंपनी लिमिटेड, बैच संख्या: 1801001, 1806001, 181001 से खरीदी गई थी। चीनी चिकित्सा के गुआंगज़ौ विश्वविद्यालय के तीसरे संबद्ध अस्पताल में मुख्य पारंपरिक चीनी फार्मासिस्ट तू जिंगमिंग ने इसकी पहचान की। सिस्टैंच डेजर्टिकोला YCMa की पपड़ीदार पत्तियों वाले सूखे मांसल तने के रूप में। नमूना चीनी चिकित्सा के गुआंगज़ौ विश्वविद्यालय के तीसरे संबद्ध अस्पताल के औषधि परीक्षण कक्ष में संग्रहीत है; इचिनेशिया ग्लाइकोसाइड संदर्भ पदार्थ, सामग्री 89.7%, चीन खाद्य एवं औषधि नियंत्रण संस्थान, बैच संख्या: 111670-

201706; एसीटोनिट्राइल क्रोमैटोग्राफिक रूप से शुद्ध है (मर्क, जर्मनी); मेथनॉल और फॉस्फोरिक एसिड विश्लेषणात्मक रूप से शुद्ध हैं (तियानजिन फुयू फाइन केमिकल कंपनी लिमिटेड); जल अतिशुद्ध जल है.

2 विधियाँ और परिणाम

2.1 सिस्टैंच डेजर्टिकोला का जल अर्क तैयार करना

सिस्टैंच डेजर्टिकोला औषधीय सामग्री का मोटा पाउडर लें, आसुत जल की 1/2 गुना मात्रा डालें, दो बार निष्कर्षण के लिए गर्म करें और भाटा दें, हर बार 1 घंटे के लिए, फ़िल्टर करें, निस्पंद को मिलाएं, और निस्पंद को एक रोटरी बाष्पीकरणकर्ता के साथ केंद्रित करें कच्ची दवा की मात्रा 0.100 ग्रामएमएल-1 तक रखें, और बाद में उपयोग के लिए इसे 4 डिग्री पर संग्रहित करें।

2.2 क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ और सिस्टम उपयुक्तता

क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम: इनर्टसिल ओडीएस एसपी सी18 कॉलम (15{7}} मिमी × 4.6 मिमी, 5 माइक्रोन); मोबाइल चरण: एसीटोनिट्राइल (ए) -0 .4% फॉस्फोरिक एसिड समाधान (बी), ग्रेडिएंट रेफरेंस: 0 ~ 5 मिनट, 17%

ए; 5 ~ 25 मिनट, 20% ए; 25 ~ 30 मिनट, 17% ए; पता लगाने की तरंग दैर्ध्य: 333 एनएम; स्तंभ तापमान: 30 डिग्री; प्रवाह दर: 1.0 एमएल·मिनट-1;

इंजेक्शन की मात्रा: 10 μL. इन क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियों के तहत, इचिनाकोसाइड और आसन्न घटक चोटियों के बीच अलगाव 1.5 से अधिक है, और इचिनाकोसाइड चोटी के आधार पर सैद्धांतिक प्लेटों की संख्या 4, 000 से कम नहीं होनी चाहिए। क्रोमैटोग्राम चित्र 1 में दिखाया गया है।

2.3 समाधान की तैयारी

2.3.1 संदर्भ पदार्थ समाधान उचित मात्रा में इचिनेकोसाइड संदर्भ पदार्थ को तौलें, इसे सटीक रूप से तौलें, इसे 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें, इसे घोलने के लिए मेथनॉल मिलाएं, और एक संदर्भ पदार्थ समाधान तैयार करें जिसमें 898.794 ग्राम इचिनेकोसाइड प्रति मिलीलीटर, 4 डिग्री हो। बाद में उपयोग के लिए सहेजें.

2.3.2 परीक्षण समाधान

सिस्टैंच डेजर्टिकोला जलीय अर्क के 2. 0 एमएल को सटीक रूप से मापें, पानी के स्नान में सूखने के लिए वाष्पित करें, घुलने के लिए मेथनॉल जोड़ें, 1 {{3%) वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में मात्रा में पतला करें, अच्छी तरह से हिलाएं, और फ़िल्टर करें प्राप्त करने के लिए 0.22 μm माइक्रोपोरस झिल्ली।

2.4 रैखिक संबंध की जांच

सटीक रूप से मापें {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 आइटम 2.3.1 के तहत संदर्भ समाधान का एमएल, इसे 5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें, मात्रा बनाने के लिए मेथनॉल जोड़ें, और 44 की ग्रेडिएंट एकाग्रता प्राप्त करने के लिए अच्छी तरह से हिलाएं। }, 89.879 4. 179। 2.2 के तहत क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियों के अनुसार मापें, और चरम क्षेत्र रिकॉर्ड करें। संदर्भ पदार्थ के द्रव्यमान सांद्रण को एब्सिस्सा (X, ug·mL-1) और शिखर क्षेत्र को कोटि (Y) के रूप में लेकर रैखिक प्रतिगमन करें, और प्रतिगमन समीकरण प्राप्त होता है: Y=13 185 .0X-32 273.0, आर=0.999 8. नतीजे बताते हैं कि इचिनेशिया का 44.939 7 ~ 539.276 4 यूजी·एमएल-1 की सांद्रता सीमा के भीतर एक अच्छा रैखिक संबंध है।

2.5 परिशुद्धता परीक्षण

539.276 4 यूजी ·एमएल- 1 संदर्भ समाधान लें, 2.2 के तहत क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों के अनुसार लगातार 6 बार इंजेक्ट करें और मापें, और चरम क्षेत्र को रिकॉर्ड करें। परिणामों से पता चला कि इचिनाकोसाइड शिखर क्षेत्र का आरएसडी 1.81% था, जो अच्छे उपकरण परिशुद्धता को दर्शाता है।

2.6 स्थिरता परीक्षण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला जलीय अर्क के 2. 0 एमएल को सटीक रूप से मापें, पानी के स्नान में सूखने के लिए वाष्पित करें, घुलने के लिए मेथनॉल मिलाएं, 1 0 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में पतला करें, अच्छी तरह से हिलाएं, {{ के साथ फ़िल्टर करें 7}}.22 माइक्रोन माइक्रोपोरस झिल्ली, आइटम 2.2 के तहत क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों का पालन करें, और क्रमशः 0 और 2 पर रखें। , 4, 8, 12, 24 घंटे इंजेक्शन माप, चरम क्षेत्र रिकॉर्ड करें। परिणामों से पता चला कि इचिनाकोसाइड पीक क्षेत्र का आरएसडी 1.16% था, जो दर्शाता है कि परीक्षण समाधान में 24 घंटों के भीतर अच्छी स्थिरता थी।

2.7 पुनरावर्तनीयता परीक्षण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला जल अर्क के 2. 0 एमएल को सटीक रूप से मापें और 2.3.2 के तहत विधि के अनुसार समानांतर में 6 परीक्षण समाधान तैयार करें। 2.2 के तहत क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों के अनुसार माप के लिए नमूने इंजेक्ट करें और शिखर क्षेत्र रिकॉर्ड करें। परिणामों से पता चला कि आर.एस.डीइचिनाकोसाइडद्रव्यमान सांद्रता 1.28% थी, जो विधि की अच्छी पुनरावृत्ति का संकेत देती है।

2.8 नमूना पुनर्प्राप्ति परीक्षण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला जल अर्क के 1.0 एमएल के 9 भागों को सटीक रूप से मापें, 0.8, 1.0, और 1.2 एमएल संदर्भ समाधान (1.552 मिलीग्राम·एमएल{{11) जोड़ें }}) क्रमशः, पानी के स्नान में सूखने तक वाष्पित करें, घुलने के लिए मेथनॉल डालें, और 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में समायोजित करें; उच्च, मध्यम और निम्न सांद्रता परीक्षण समाधान तैयार करने के लिए अच्छी तरह से हिलाएं और 0.22 μm माइक्रोपोरस झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें। प्रत्येक सांद्रण की समानांतर रूप से 3 प्रतियां तैयार करें। 2.2 के अंतर्गत क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियों के अनुसार मापें। शिखर क्षेत्र को रिकॉर्ड करें और नमूना पुनर्प्राप्ति की गणना करें। दर। परिणाम को तालिका एक में दिखाया गया है।

2.9 नमूना सामग्री का निर्धारण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला जलीय अर्क के 2.{2}} एमएल के 3 भागों को सटीक रूप से मापें, पानी के स्नान में सूखने तक वाष्पित करें, घुलने के लिए मेथनॉल मिलाएं, 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में पतला करें, अच्छी तरह से हिलाएं, फ़िल्टर करें एक 0.22 μm माइक्रोपोरस झिल्ली, और 2.2 के तहत क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियों के अनुसार मापें। शिखर क्षेत्र को रिकॉर्ड करें और इचिनेसीसाइड सामग्री की गणना करें। परिणामों को तालिका दो में दर्शाया गया है।

तालिका 1 इचिनाकोसाइड के पुनर्प्राप्ति परीक्षणों के परिणाम

तालिका 2 सिस्टैंच हर्बा के जल अर्क में इचिनाकोसाइड की सामग्री निर्धारण के परिणाम