सिस्टैंच हर्बा से कच्चे उत्पादों और वाइन भाप-प्रसंस्कृत उत्पादों की संरचना और औषधीय प्रभावकारिता में अंतर

अमूर्त:

उद्देश्यप्रसंस्करण से पहले और बाद में रौकॉन्ग्रॉन्ग (सिस्टैन्चेस हर्बा) की रासायनिक संरचना और औषधीय प्रभावकारिता में परिवर्तन की तुलना करना, ताकि वाइन के साथ स्टू करने के सिद्धांत को स्पष्ट किया जा सके।

वाइन के साथ स्टू करने से पहले और बाद में घटकों में असमानता का पता लगाने के लिए बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण के साथ संयुक्त, सिस्टैंच हर्बा के मिश्रण से पहले और बाद में रासायनिक संरचना प्रकारों की पहचान करने के लिए एलसी-एमएस विधियों को लागू किया गया था। प्रभावकारिता अंतर हाइड्रोजनीकृत कॉर्टिसोन किडनी यांग की कमी के चूहे मॉडल द्वारा सिद्ध किया गया था।

परिणामकुल 45 रासायनिक घटकों की पहचान की गईसिस्टैंच हर्बा नमूने; यौगिकों ने बीच अंतर में योगदान दियासिस्टैंच हर्बा और वाइन-स्टूड सिस्टैंच हर्बाहैंइचिनाकोसाइड, वर्बास्कोसाइड, आइसोएक्टियोसाइड और ट्यूबलोसाइड बी; सिस्टैंच हर्बा से कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अर्क वाइन-स्टूड सिस्टैंच हर्बा की तुलना में किडनी यांग की कमी वाले चूहे के मॉडल के सुधार पर बेहतर प्रभाव डालता है। निष्कर्ष वाइन के साथ उबालने के बाद सिस्टैंच की संरचना बदल गई है, और किडनी यांग की कमी पर प्रभाव बढ़ गया है। सिस्टैंच हर्बाटो वाइन-स्ट्यूड सिस्टैंच हर्बा से परिवर्तन की सामग्री सक्रिय तत्व हो सकती है जो किडनी को मजबूत करती है और यांग का समर्थन करती है।

मुख्य शब्द: सिस्टैंच हर्बा; वाइन-स्ट्यूड सिस्टैंच हर्बा;किडनी यांग की कमी;इचिनाकोसाइड;verbascoside; आइसोएक्टियोसाइड;ट्यूबुलोसाइड बी

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इसे "जिनसेंग" के रूप में जाना जाता है और मुख्य रूप से इनर मंगोलिया, निंगक्सिया (अज़ुकी), गांसु (चांगमा), झिंजियांग और अन्य क्षेत्रों में वितरित किया जाता है [1]। सिस्टैंच प्रकृति में गर्म, स्वाद में मीठा और नमकीन होता है, और गुर्दे और बड़ी आंत के मेरिडियन में प्रवेश करता है। इसमें लीवर और किडनी को पोषण देने, सार और रक्त को लाभ पहुंचाने और आंतों को नम करने और कब्ज से राहत देने का प्रभाव होता है। इसका उपयोग किडनी यांग की कमी, नपुंसकता और बांझपन, कमर और घुटनों के दर्द, मांसपेशियों और हड्डियों की कमजोरी, शुष्क आंतों और कब्ज के लिए किया जा सकता है [2]। आधुनिक शोध से पता चलता है कि सिस्टैंच की स्केल पत्तियों वाले मांसल तनों में मुख्य रूप से विभिन्न प्रकार के रासायनिक घटक होते हैं जैसे कि फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड्स, साइक्लोपेंटेन ईथर टेरपेन्स और उनके ग्लाइकोसाइड्स, लिग्नान, शर्करा, आदि। [3], और कई औषधीय प्रभाव होते हैं जैसे किबुढ़ापा विरोधी,एंटीऑक्सिडेंट,विरोधी पागलपन,थकान रोधी, और आंतों को नम करता है और कब्ज से राहत देता है [4]।

वाइन के साथ उबालने के बाद, सिस्टैंच का किडनी-टोनिफाइंग और यांग-बढ़ाने वाला प्रभाव बढ़ जाता है। प्रसंस्करण सिद्धांत को स्पष्ट रूप से समझाया नहीं गया है। फैन यानान एट अल। [5-7] प्रसंस्करण से पहले और बाद में चूहे के शौच, प्रतिरक्षा कार्य, एंटरिक न्यूरोट्रांसमीटर और संबंधित जीन अभिव्यक्तियों पर सिस्टैंच के प्रभावों का अध्ययन किया गया। दा एट अल. इसके प्रसंस्करण सिद्धांत को समझाने के लिए प्रसंस्करण से पहले और बाद में फेनिलथेनॉल ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का उपयोग किया गया; झांग चाओ एट अल. [8] प्रसंस्करण सिद्धांत को समझाने के लिए प्रसंस्करण से पहले और बाद में फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड की सामग्री में परिवर्तन का उपयोग किया गया; झांग शुयुन एट अल। [9] सिस्टैंच पर प्रसंस्करण के प्रभाव को समझाने के लिए प्रसंस्करण से पहले और बाद में बीटाइन की सामग्री में परिवर्तन का उपयोग किया गया। सिस्टैंच के प्रसंस्करण पर मौजूदा साहित्य मुख्य रूप से औषध विज्ञान पर केंद्रित है, और घटकों पर अनुसंधान भी विशिष्ट घटकों की सामग्री में परिवर्तन पर केंद्रित है, जिसमें घटक अंतरों के व्यवस्थित अध्ययन का अभाव है। इस प्रयोग में सिस्टैंच में रासायनिक घटकों की पहचान करने, कच्चे सिस्टैंच और वाइन-स्टूड उत्पादों के बीच अंतर मार्करों को खोजने और की प्रभावकारिता में अंतर का अध्ययन करने के लिए बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण के साथ तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस) तकनीक का उपयोग किया गया। हाइड्रोकार्टिसोन से प्रेरित किडनी यांग की कमी के एक चूहे के मॉडल के माध्यम से कच्चे सिस्टैंच और वाइन-स्टूड उत्पाद, ताकि सामग्री के आधार को समझाया जा सकेकिडनी को टोन करने और यांग को बढ़ावा देने में सिस्टैंचऔर वाइन-स्ट्यूड सिस्टैंच का प्रसंस्करण सिद्धांत।

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1 सामग्री

1.1 उपकरण

अल्टीमेट 3000 यूपीएलसी-एलटीक्यू ऑर्बिट्रैप एक्सएल इलेक्ट्रोस्टैटिक फील्ड टेंडेम आयन ट्रैप हाई-रिज़ॉल्यूशन मास स्पेक्ट्रोमीटर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, यूएसए), थेरियो एक्सकैलिबर वर्कस्टेशन; BT125D 1/100000 इलेक्ट्रॉनिक बैलेंस (सार्टोरियस इंस्ट्रूमेंट सिस्टम, जर्मनी); KQ500DE सीएनसी अल्ट्रासोनिक क्लीनर (कुंशान अल्ट्रासोनिक इंस्ट्रूमेंट कं, लिमिटेड); XHF-D हाई-स्पीड डिस्पेंसर (गुआंगज़ौ हू रुइमिंग इंस्ट्रूमेंट कं, लिमिटेड); मल्टीस्कैन एफसी माइक्रोप्लेट रीडर (थर्मो साइंटिफिक); एचसी-3518 हाई-स्पीड सेंट्रीफ्यूज (अनहुई झोंगके झोंगजिया साइंटिफिक इंस्ट्रूमेंट कंपनी लिमिटेड); BW-YLS-1B बहुकार्यात्मक चूहा स्वैच्छिक गतिविधि रिकॉर्डर (शंघाई रुआनलोंग टेक्नोलॉजी डेवलपमेंट कंपनी लिमिटेड)।

1.2 औषधियाँ

मास स्पेक्ट्रोमेट्री ग्रेड मेथनॉल (फिशर); मास स्पेक्ट्रोमेट्री ग्रेड फॉर्मिक एसिड (द्रव्यमान अंश 99%, सिग्मा एल्ड्रिच); पानी (वाटसन आसुत जल); जिंकुई शेन्की पिल्स (बीजिंग टोंगरेंटांग टेक्नोलॉजी डेवलपमेंट कंपनी लिमिटेड फार्मास्युटिकल फैक्ट्री, बैच नंबर 1701653); हाइड्रोकार्टिसोन सक्सिनेट सोडियम नमक (टियांजिन बायोकेमिकल फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड, बैच नंबर 011705067); सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज़ (एसओडी) किट (बैच संख्या 20170115) और मैलोनडायलडिहाइड (एमडीए) किट (बैच संख्या 20170117) नानजिंग जियानचेंग बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे; टेस्टोस्टेरोन (टी) और एस्ट्राडियोल (ई2) क़िंगदाओ केचुआंग गुणवत्ता निरीक्षण केंद्र में निर्धारित किए गए थे, और क्रिएटिनिन (सीआरईए) और रक्त यूरिया नाइट्रोजन (बीयूएन) इनर मंगोलिया मेडिकल यूनिवर्सिटी के विश्लेषण और परीक्षण केंद्र में निर्धारित किए गए थे।

1.3 पशु

100 नर एसडी चूहे, जिनका वजन 180-200 ग्राम था, बीजिंग के हैडियन जिले में जिंगलोंग प्रायोगिक पशु फार्म से खरीदे गए थे, लाइसेंस संख्या: एससीएक्सके (बीजिंग) 2016-0003। इस पशु प्रयोग को बीजिंग यूनिवर्सिटी ऑफ़ चाइनीज़ मेडिसिन की एथिक्स कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया है, एथिक्स संख्या: BUCM-4-2022091301-3095।

1.4 नमूने

सिस्टैंच डेजर्टिकोला के छह बैचों को स्कूल ऑफ चाइनीज मेडिसिन, बीजिंग यूनिवर्सिटी ऑफ चाइनीज मेडिसिन के प्रोफेसर ली जियानगरी द्वारा प्रामाणिक के रूप में पहचाना गया था, और ओरोबैंचेसी परिवार के एक पौधे, सिस्टैन्चे डेजर्टिकोला वाईसी मा की स्केल पत्तियों के साथ सूखे मांसल तनों से प्राप्त किए गए थे। नमूनों की विस्तृत जानकारी तालिका 1 में दिखाई गई है।

तालिका 1 सिस्टैंच हर्बा नमूनों की सूचना शीट

2 विधियाँ

2.1 नमूना तैयार करना

2.1.1 कच्चे उत्पादों की तैयारी साफ सिस्टैंच डेजर्टिकोला लें, इसे नरम करें, मोटे टुकड़ों में काटें और सुखा लें।

2.1.2 वाइन-स्टूड उत्पादों की तैयारी

100 ग्राम सिस्टैंच डेजर्टिकोला स्लाइस लें, 30 एमएल चावल वाइन डालें, अच्छी तरह मिलाएं, और वाइन को अवशोषित होने तक पकाएं। इसे 12 घंटे तक पानी में उबालें, बाहर निकालें और थोड़ा ठंडा होने दें और सुखा लें। कच्चे सिस्टैंच डेजर्टिकोला और वाइन-स्टूड सिस्टैंच डेजर्टिकोला नमूनों के लिए चित्र 1 देखें।

2.2 वाइन में स्टू करने से पहले और बाद में सिस्टैंच डेजर्टिकोला के घटकों के अंतर पर अध्ययन

2.2.1 घोल तैयार करना

लगभग 2 ग्राम सूखा नमूना पाउडर (एक जाली वाली छलनी से गुजारा हुआ) लें, सही ढंग से तौलें, 50 एमएल भूरे रंग के वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें, 25 एमएल 50% मेथनॉल मिलाएं जलीय घोल, कसकर सील करें, द्रव्यमान का वजन करें, 30 मिनट के लिए भिगोएँ, 40 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक उपचार करें (शक्ति 250 डब्ल्यू, आवृत्ति 35 किलोहर्ट्ज़), ठंडा करें, फिर से वजन करें, खोए हुए द्रव्यमान की भरपाई के लिए 50% मेथनॉल जलीय घोल जोड़ें, हिलाएं ठीक है, खड़े रहने दें, सतह पर तैरनेवाला को 0.22 μm माइक्रोपोरस फ़िल्टर झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें, और समाधान प्राप्त करने के लिए फ़िल्टर को भूरे रंग के तरल चरण की बोतल में रखें।

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2.2.2 क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ

वाटर्स एक्विटी UPLCTM BEH C18 क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम (100 मिमी×2.1 मिमी, 1.7 माइक्रोन), कॉलम तापमान 35 डिग्री; नमूना कक्ष का तापमान 10 डिग्री, नमूना इंजेक्शन की मात्रा 3 μL, मेथनॉल (ए)-0.1% फार्मिक एसिड जलीय घोल (बी) मोबाइल चरण के रूप में, ग्रेडिएंट एल्यूशन: 0-4 मिनट, 10%{ {13}}% मेथनॉल; 4-18 मिनट, 26%-40% मेथनॉल; 18-24 मिनट, 40%-100% मेथनॉल; 24-28 मिनट, 100% मेथनॉल। वॉल्यूम प्रवाह दर 0.3 एमएल/मिनट थी, और डिटेक्शन वेवलेंथ 330 एनएम थी।

2.2.3 मास स्पेक्ट्रोमेट्री स्थितियाँ

इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण स्रोत (ईएसआई) का उपयोग किया गया था, नकारात्मक आयन मोड स्कैनिंग, केशिका तापमान 350 डिग्री था, शीथ गैस वॉल्यूम प्रवाह दर 30 एआरबी थी, सहायक गैस वॉल्यूम प्रवाह दर 10 एआरबी थी, स्प्रे वोल्टेज 3 था

KV, केशिका वोल्टेज -35 V था, ट्यूब लेंस वोल्टेज -110 V था, स्कैनिंग रेंज m/z 100-1 000 थी, डेटा संग्रह प्रणाली Xcalibur 2.1 थी।

2.2.4 प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए)

सटीक द्रव्यमान-प्रतिधारण समय डेटा जोड़े के द्वि-आयामी मैट्रिक्स प्राप्त करने के बाद, उपकरण पैनल सभी स्वचालित रूप से आयातित सटीक अवधारण समय जानकारी प्रदर्शित करेगा, और विस्तारित सांख्यिकी मॉड्यूल की पीसीए विधि का उपयोग विश्लेषण के लिए किया जाएगा।

2.2.5 ऑर्थोगोनल आंशिक न्यूनतम वर्ग विभेदक विश्लेषण (ओपीएलएस-डीए) एलसीएमएस द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री की उच्च संवेदनशीलता के साथ तरल क्रोमैटोग्राफी के उच्च पृथक्करण को जोड़ता है। एकत्रित डेटा काफी बड़ा है, और डेटा को संसाधित करने के लिए बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण की आवश्यकता होती है। ओपीएलएस-डीए डेटा को दो समूहों में विभाजित करता है और बड़ी संख्या में ऑर्थोगोनलाइज्ड स्पेक्ट्रा प्राप्त करने के लिए एक पर्यवेक्षित सांख्यिकीय मॉडल का उपयोग करता है, जो नमूनों के दो समूहों के बीच अंतर को स्पष्ट रूप से दिखाता है। अतिरिक्त आकृति एस-प्लॉट प्रारूप में, प्रत्येक बिंदु एक सटीक द्रव्यमान प्रतिधारण समय डेटा जोड़ी का प्रतिनिधित्व करता है, एक्स-अक्ष चर का प्रतिनिधित्व करता है, डेटा बिंदु शून्य बिंदु से जितना दूर होगा, नमूना अंतर में बिंदु का योगदान उतना अधिक होगा ; Y-अक्ष एक ही नमूना समूह में नमूनों के बीच सहसंबंध का प्रतिनिधित्व करता है, सटीक द्रव्यमान और अवधारण समय डेटा जोड़ी शून्य बिंदु से जितनी दूर होगी, सहसंबंध उतना ही मजबूत होगा। इसलिए, एस-आकार के वक्र के दोनों सिरों पर द्रव्यमान सटीक अवधारण समय डेटा जोड़े प्रत्येक नमूना समूह से सबसे विश्वसनीय विशेषता आयनों का प्रतिनिधित्व करते हैं।

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2.2.6 मास स्पेक्ट्रोमेट्री संरचना विश्लेषण

विशिष्ट आयनों को प्राप्त करने के बाद, सटीक सापेक्ष आणविक द्रव्यमान की गणना करके और विभेदक घटकों की पहचान करने के लिए मौजूदा डेटाबेस और प्रासंगिक साहित्य को मिलाकर तत्व संरचना और यौगिक मिलान किया गया।

2.3 वाइन के साथ स्टू करने से पहले और बाद में प्रभावकारिता में अंतर पर अध्ययन करें

2.3.1 सिस्टैंच डेजर्टिकोला अर्क की तैयारी

सिस्टैंच डेजर्टिकोला (बैच संख्या 160901) और संबंधित वाइन-स्ट्यूड सिस्टैन्च डेजर्टिकोला पाउडर को "2.2.1" के तहत शर्तों के अनुसार निकाला गया, अल्ट्रासोनिक उपचार के बाद फ़िल्टर किया गया, दो बार दोहराया गया, छानना संयुक्त किया गया, वैक्यूम आसवन द्वारा केंद्रित किया गया, और फ्रीज- सूख गया.

2.3.2 पशु प्रयोग समूहन और औषधि प्रशासन

चित्र 1 सिस्टैंच हर्बा ए और वाइन-स्टूड सिस्टैंच हर्बा बी

(1) समूहीकरण: चूहों को पानी और आहार तक मुफ्त पहुंच दी गई। अनुकूली भोजन के 1 सप्ताह के बाद, उन्हें यादृच्छिक रूप से 5 समूहों (तालिका 2) में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में 10 चूहे थे, अर्थात् सामान्य समूह, मॉडल समूह, कच्चा सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह (पीआर), वाइन-स्टूड सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह (पीडब्ल्यू)। , और सकारात्मक नियंत्रण जिंकुई शेन्की पिल समूह (जेके)। (2) मॉडलिंग: सामान्य समूह को छोड़कर, अन्य चार समूहों को लगातार 14 दिनों तक 20 मिलीग्राम/किलोग्राम की खुराक के साथ हाइड्रोकार्टिसोन सोडियम सक्सिनेट इंजेक्शन दिया गया। सामान्य समूह को सामान्य सेलाइन की समान खुराक का इंजेक्शन लगाया गया। यह निर्धारित करने के लिए प्रत्येक समूह में चूहों की सामान्य स्थिति देखी गई कि क्या उनमें ठंड से डर, गर्मी के लिए प्राथमिकता, ठंडे अंग, साफ और लंबा मूत्र, मुड़ी हुई और धनुषाकार पीठ, सुस्त और गंदे बाल और मानसिक अवसाद जैसे लक्षण दिखाई दिए। साथ ही, प्रत्येक समूह में चूहों के शरीर का वजन, सहज गतिविधियों की संख्या, भोजन का सेवन, पानी का सेवन, मूत्र उत्पादन और अन्य संकेतकों को मापा गया।

(3) प्रशासन: चूहों की खुराक की गणना जिंकुई शेंकी पिल्स और सिस्टैंच डेजर्टिकोला की नैदानिक ​​खुराक के आधार पर की गई थी। कच्ची दवा की मात्रा के संदर्भ में प्रत्येक सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह की खुराक 1.80 ग्राम/किग्रा थी। विशिष्ट खुराक तालिका 2 में दिखाई गई है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला और जिंकुई शेंकी पिल्स के प्रत्येक अर्क को विआयनीकृत पानी के साथ एक निश्चित सांद्रता के घोल में तैयार किया गया था। घोल को लगातार 30 दिनों तक 10 एमएल/किग्रा की इंट्रागैस्ट्रिक मात्रा के साथ हर दिन इंट्रागैस्ट्रिक रूप से प्रशासित किया गया था। सामान्य समूह और मॉडल समूह को हर दिन समान मात्रा में विआयनीकृत पानी के साथ इंट्रागैस्ट्रिक रूप से प्रशासित किया गया था। शरीर का वजन साप्ताहिक रूप से मापा जाता था, और चूहों के शरीर के वजन के अनुसार इंट्रागैस्ट्रिकली मात्रा को समायोजित किया जाता था। प्रशासन के बाद, चूहों को 12 घंटे तक उपवास रखा गया। पेंटोबार्बिटल एनेस्थीसिया के बाद, सीरम इंडेक्स का पता लगाने के लिए पेट की महाधमनी से रक्त एकत्र किया गया था। प्रासंगिक सूचकांक का पता लगाने के लिए गुर्दे, अंडकोष, एपिडीडिमिस, वीर्य पुटिका और प्रोस्टेट को हटा दिया गया था।