इचिनाकोसाइड मधुमेह जिगर की चोट में सुधार करता है

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लुओ यांग, जियांग झांग, मिन लियाओ, यारोंग हाओ *

सार

लक्ष्य:इचिनाकोसाइड (ईसीएच) सिस्टैंच डेजर्टिकोला पौधे के तने से निकाला गया एक प्राकृतिक यौगिक है, जिसमें एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-इंफ्लेमेटरी, न्यूरोप्रोटेक्टिव, एंटी-ट्यूमर, हेपेटोप्रोटेक्टिव और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गुणों सहित महत्वपूर्ण जैविक गुण हैं। इस अध्ययन में, हमने डीबी / डीबी चूहों में मधुमेह के जिगर की चोट पर ईसीएच के सुरक्षात्मक प्रभावों और तंत्र का पता लगाने का लक्ष्य रखा है।

मुख्य तरीके:कुल मिलाकर, 6-सप्ताह पुराने DB/DB चूहों (n=20) को बेतरतीब ढंग से 2 समूहों में आवंटित किया गया था: मधुमेह मॉडल समूह (DB/DB समूह, सामान्य खारा का इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन, n=10 ) और ईसीएच-उपचारित समूह (डीबी/डीबी प्लस ईसीएच समूह, एन=10)। इसके अतिरिक्त, सामान्य नियंत्रण समूह में 6-सप्ताह पुराने डीबी/एम चूहों (डीबी/एम समूह, सामान्य खारा इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन, एन=10) शामिल थे। ECH को दिन में एक बार 10 सप्ताह के लिए प्रशासित किया गया था। वजन और उपवास रक्त शर्करा (एफबीजी) को हर दो सप्ताह में मापा जाता था। एचई धुंधला और तेल ओ धुंधला का उपयोग क्रमशः यकृत ऊतक रोग परिवर्तन और लिपिड संचय का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। एएमपीके / एसआईआरटी 1 सिग्नलिंग अक्ष के घटकों की अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला, पश्चिमी धब्बा और आरटी-पीसीआर विश्लेषण का उपयोग किया गया था।

मुख्य निष्कर्ष:परिणामों से पता चला कि 1 0 सप्ताह के लिए इचिनाकोसाइड का प्रशासन डीबी/डीबी चूहों (पी <0.01) में="" जिगर="" की="" चोट="" और="" इंसुलिन="" प्रतिरोध="" में="" काफी="" सुधार="" कर="" सकता="" है।="" इसके="" अलावा,="" इचिनाकोसाइड="" उपचार="" ने="" रक्त="" लिपिड="" और="" रक्त="" ग्लूकोज="" (पी=""><0.01) को="" कम="" करने="" में="" मदद="" की।="" इसके="" अलावा,="" ech="" सक्रिय="" ampk/sirt1="" सिग्नलिंग,="" अपग्रेडेड="" पेरोक्सिसोम="" प्रोलिफ़रेटर-सक्रिय="" रिसेप्टर="" गामा="" को-एक्टीवेटर="" 1="" अल्फा="" (pgc="" -1),="" प्रोलिफ़रेटर-एक्टिवेटेड="" रिसेप्टर-="" (ppar),="" कार्निटाइन="" पामिटॉयलट्रांसफेरेज़="" -1a="" (cpt1a)="" डीबी/डीबी="" चूहों="" में="" (पी=""><>

महत्व:ECH के प्रभाव को लीवर AMPK/SIRT1 मार्ग की सक्रियता और इसके बहाव के कारकों द्वारा वसा, इंसुलिन प्रतिरोध और डिस्लिपिडेमिया में सुधार करने के लिए प्राप्त किया जा सकता है।

सिस्टैंच रेडिटबेहतर बनाता हैवसा, इंसुलिन प्रतिरोध और डिस्लिपिडेमिया।

1 परिचय

टाइप 2 डायबिटीज मेलिटस (T2DM) एक पुरानी चयापचय बीमारी है और मानव शारीरिक और मानसिक स्वास्थ्य के लिए एक गंभीर खतरा है। यह लीवर की चोट सहित कई अंगों को नुकसान पहुंचा सकता है। गैर-मादक वसायुक्त यकृत रोग (NAFLD) जिगर की सबसे आम चोट है [1,2]। हेपेटोसाइट्स में लिपिड का अत्यधिक संचय चयापचय प्रक्रिया को बाधित करता है और सूजन, यकृत फाइब्रोसिस और यहां तक ​​कि यकृत कैंसर का कारण बनता है [3,4]। रोग रोगजनन अस्पष्ट रहता है। यद्यपि T2DM वाले रोगियों में नैदानिक ​​रूप से महत्वपूर्ण जिगर की जटिलताओं का एक उच्च प्रसार है, उन्हें अक्सर उपचार सेटिंग में अनदेखा कर दिया जाता है। मधुमेह के इलाज के लिए वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले एजेंटों में मेटफोर्मिन, सल्फोनीलुरेस, थियाज़ोलिडाइनेडियोन (TZDs), और डाइपेप्टिडाइल पेप्टिडेज़ -4 (DPP-4) अवरोधक शामिल हैं। हालांकि, इनमें से अधिकांश एजेंट यकृत की शिथिलता का कारण बनते हैं और यकृत की कमी वाले रोगियों में अनुशंसित नहीं होते हैं, जिसका अर्थ है कि चिकित्सीय दक्षता और कम प्रतिकूल घटना प्रोफ़ाइल वाले एजेंटों की जांच करने की आवश्यकता है। अध्ययनों ने सिस्टैंच डेजर्टिकोला [5] के मुख्य घटक इचिनाकोसाइड (ईसीएच) के एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटी-ट्यूमर, हेपेटोप्रोटेक्टिव और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गुणों का प्रदर्शन किया है। इसके अलावा, एएमपी-सक्रिय प्रोटीन किनेज (एएमपीके) मार्ग को यकृत में लिपिड विनियमन से जुड़े मुख्य सेलुलर ऊर्जा चयापचय स्विच और एनएएफएलडी के लिए एक चिकित्सीय लक्ष्य के रूप में मान्यता दी गई है। AMPK सेल्युलर NAD प्लस स्तरों को बढ़ाकर स्तनधारी साइलेंसिंग नियामक प्रोटीन -1 (SIRT1) गतिविधि को बढ़ाता है, जिसके परिणामस्वरूप डाउनस्ट्रीम SIRT1 लक्ष्यों की गतिविधि का विचलन और मॉड्यूलेशन होता है जिसमें पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़रेटर-सक्रिय रिसेप्टर-कोएक्टीवेटर 1 (PGC{) शामिल होता है। {20}} ) [6]। मादक वसायुक्त यकृत रोग (AFLD) और NAFLD दोनों में कई सकारात्मक कार्यों के कारण, SIRT1 का SIRT परिवार के बीच व्यापक रूप से अध्ययन किया गया है। प्रोटीन लिपिड और ग्लूकोज चयापचय का एक प्रमुख नियामक है और यकृत और अन्य ऊतकों की इंसुलिन संवेदनशीलता में सुधार कर सकता है और हेपेटिक स्टेटोसिस को कम कर सकता है [7]। PPAR- PPARs से संबंधित है, परमाणु हार्मोन रिसेप्टर्स का एक उपपरिवार, PPAR- CPT1A के माध्यम से मध्यस्थता, माइटोकॉन्ड्रियल और पेरोक्सीडेज फैटी एसिड बीटा-ऑक्सीकरण के माध्यम से लिपिड चयापचय में सुधार करता है। डीबी / डीबी चूहे सहज मोटे टाइप 2 डायबिटिक चूहे हैं। जैसे-जैसे ये चूहे बड़े होते जाते हैं, मधुमेह की स्थिति जैसे बुलिमिया, मोटापा, स्पष्ट हाइपरग्लाइसेमिया, हाइपरलिपिडिमिया और इंसुलिन प्रतिरोध [8] की क्रमिक अभिव्यक्ति हो सकती है। रोगजनन T2DM वाले रोगियों में देखे गए समान है। इस अध्ययन ने एएमपीके / एसआईआरटी1 मार्ग और इसके डाउनस्ट्रीम प्रभावकों को सक्रिय करने के माध्यम से टी 2 डीएम-प्रेरित जिगर की चोट और इस प्रभाव की मध्यस्थता पर ईसीएच के चिकित्सीय प्रभाव की परिकल्पना की। DB/DB चूहों को T2DM लीवर इंजरी मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया था, और ECH को इंट्रागैस्ट्रिक रूप से प्रशासित किया गया था।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. प्रायोगिक जानवर

टाइप 2 डायबिटिक डीबी / डीबी चूहों के लीवर को सहज T2DM लीवर की चोट के लिए मॉडल माना जाता था, db / m चूहों को नियंत्रण समूह के रूप में इस्तेमाल किया जाता था, और डायबिटिक db / db चूहों को मॉडल समूह और ECH उपचारित समूह (पुरुष) के रूप में इस्तेमाल किया जाता था। , 6 सप्ताह पुराना, एसपीएफ़ ग्रेड) प्रत्येक समूह में 10 चूहों के साथ। सभी चूहों को नानजिंग विश्वविद्यालय (नानजिंग इंस्टीट्यूट ऑफ बायोमेडिसिन, चीन; पशु उत्पादन प्रमाणपत्र संख्या: SCKK (Su) 2015–0001) से खरीदा गया था। जानवरों (n=5 प्रति पिंजरे) को तापमान (22 C ± 2 C), सापेक्ष आर्द्रता (60 प्रतिशत) की मानक स्थितियों के तहत वुहान विश्वविद्यालय (SPF) के रेनमिन अस्पताल के केंद्रीय प्रयोगशाला पशु कक्ष में रखा गया था। , और प्रकाश/अंधेरा (12 घंटे/12 घंटे) चक्र, 10 सप्ताह की प्रयोगात्मक अवधि के दौरान पीने के पानी और फ़ीड के लिए एड लिबिटम पहुंच के साथ। प्रयोग वुहान विश्वविद्यालय के रेनमिन अस्पताल द्वारा अनुशंसित प्रायोगिक पशु नैतिकता दिशानिर्देशों के अनुसार किए गए थे।

2.2. मुख्य उपकरण और अभिकर्मक

वनटच अल्ट्रा ब्लड ग्लूकोज मीटर और ब्लड ग्लूकोज टेस्ट स्ट्रिप्स (लाइफस्कैन इंक, जॉनसन एंड जॉनसन); खरगोश मानव-विरोधी मोनोक्लोनल एंटीबॉडी SIRT-1 (#9475; संयुक्त राज्य अमेरिका की CST कंपनी); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934), और GAPDH (Ab37168; सभी Abcam कंपनी से); सीपीटी1ए (15184-1-एपी; वुहान सेनिंग बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड); बीसीए प्रोटीन एकाग्रता का पता लगाने किट (बायंटियन बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड); एसडीएस-पेज जेल तैयारी किट (गूगल बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड); और आरटी-पीसीआर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट (तकरा, जापान) का प्रयोग प्रयोगों के लिए किया गया था।

2.3. पशु समूहन और प्रशासन

प्रयोग शुरू करने से पहले, {0}}सप्ताह के चूहों को 1 सप्ताह के लिए अलग रखा गया था और 1 सप्ताह के लिए अनुकूल रूप से खिलाया गया था। डीबी / डीबी चूहों को बेतरतीब ढंग से क्रमांकित किया गया और या तो डायबिटिक मॉडल समूह (डीबी / डीबी समूह, एन=10) या इचिनाकोसाइड-उपचारित समूह (डीबी / डीबी प्लस ईसीएच समूह, एन =10) को आवंटित किया गया। 10 डीबी/एम चूहों को सामान्य नियंत्रण समूह (डीबी/एम समूह, एन=10) ​​को आवंटित किया गया था। 8 सप्ताह की आयु में, सामान्य नियंत्रण और मधुमेह मॉडल समूह के चूहों को इंट्रागैस्ट्रिक रूप से सामान्य खारा (0.05 एमएल / 10 ग्राम) प्रशासित किया गया था, और ईसीएच-उपचारित समूह चूहों को इंट्रागैस्ट्रिक रूप से 300 मिलीग्राम / किग्रा / डी ईसीएच प्रशासित किया गया था। इस अवधि के दौरान, चूहों को 10 सप्ताह के लिए भोजन और पानी के लिए एड लिबिटम एक्सेस की अनुमति दी गई थी।

2.4. सामान्य स्थिति और उपवास रक्त शर्करा

प्रयोग के दौरान स्वास्थ्य की स्थिति, भोजन और पीने के पानी का सेवन और कोट की चमक देखी गई। प्रयोग के पहले सप्ताह से, चूहों के शरीर के वजन को हर 2 सप्ताह में मापा जाता था। उपवास रक्त ग्लूकोज के परीक्षण के लिए रक्त के नमूने पूंछ की नस से प्राप्त किए गए थे। 10-सप्ताह के ईसीएच उपचार के बाद, मौखिक ग्लूकोज टॉलरेंस टेस्ट (ओजीटीटी) किया गया। रात भर के उपवास के बाद, चूहों को ग्लूकोज (2 ग्राम / किग्रा शरीर का वजन) दिया गया, और रक्त शर्करा की सांद्रता का आकलन (0 मिनट) और 15, 3 0, 60, और 120 मिनट से पहले किया गया। ग्लूकोज का प्रशासन। वक्र के नीचे का क्षेत्र (एयूसी) ग्राफपैड प्रिज्म 7.0 का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।

2.5. नमूना संग्रह

10 सप्ताह के हस्तक्षेप के बाद, भोजन लेकिन पानी नहीं 12 घंटे के लिए रोक दिया गया था, जानवरों को रेट्रो-ऑर्बिटल प्लेक्सस से रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए संवेदनाहारी किया गया था। एकत्रित रक्त से सीरम को जल्दी से अलग किया गया और जैव रासायनिक सूचकांक निर्धारित करने के लिए −80 C पर संग्रहीत किया गया। रक्त के नमूने प्राप्त करने के बाद, चूहों को मार दिया गया और सामान्य खारा के साथ सुगंधित किया गया। जिगर को विच्छेदित और तौला गया। लिवर इंडेक्स (LI) की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई: LI=[यकृत का वजन (g)/शरीर का वजन (g)] × 100 प्रतिशत। ताजा यकृत ऊतक का हिस्सा रोग विश्लेषण के लिए रखा गया था, और शेष यकृत ऊतक को 1 घंटे के लिए तरल नाइट्रोजन में रखा गया था और फिर अनुवर्ती प्रोटीन का पता लगाने और मात्रात्मक वास्तविक समय पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन के लिए −80 C पर संग्रहीत किया गया था। पीसीआर)।

सिस्टैंच अनुभवनिचोड़

2.6. जिगर की हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा

ताजा यकृत ऊतक जल्दी से अलग हो गया था, और 24 घंटे के लिए 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में एक खंड तय किया गया था, इसके बाद पैराफिन में निर्जलीकरण और एम्बेडिंग किया गया था। वर्गों को ज़ाइलीन के साथ डीवैक्स किया गया और पानी में ढाल वाले इथेनॉल के माध्यम से पुनर्जलीकरण किया गया। नाभिक और साइटोप्लाज्म को हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एचई) के साथ दाग दिया गया था और निर्जलीकरण के बाद तटस्थ गोंद के साथ सील कर दिया गया था। तेल रेड-ओ धुंधला के लिए ऊतक का एक अन्य भाग इष्टतम काटने तापमान यौगिक (ओटीसी) एम्बेडेड स्लाइस का उपयोग करता है।

2.7. सीरम और यकृत ऊतक के जैव रासायनिक सूचकांक का पता लगाना

सीरम के नमूने स्वचालित जैव रासायनिक विश्लेषण के लिए वुहान विश्वविद्यालय के रेनमिन अस्पताल के प्रयोगशाला विभाग में भेजे गए थे। रक्त लिपिड इंडेक्स में ट्राइग्लिसराइड (टीजी), कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी), उच्च घनत्व वाले लिपोप्रोटीन कोलेस्ट्रॉल (एचडीएल-सी), कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन कोलेस्ट्रॉल (एलडीएल-सी) शामिल थे। लिवर फंक्शन इंडेक्स में ग्लूटामिक पाइरुविक ट्रांसएमिनेस (एएलटी) और ग्लूटामिक ऑक्सालोएसेटिक ट्रांसएमिनेस (एएसटी) शामिल थे। उपवास इंसुलिन का स्तर (FINS) एलिसा किट (मीमियन बायोलॉजिकल इंक। चीन) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। मानक नमूने की एकाग्रता और ऑप्टिकल घनत्व (OD) के आधार पर एक मानक वक्र का निर्माण किया गया था; नमूना एकाग्रता तब मानक वक्र से गणना की गई थी। अंत में, इंसुलिन संवेदनशीलता सूचकांक (ISI) और इंसुलिन प्रतिरोध सूचकांक (HOMA-IR) की गणना निम्नानुसार की गई: ISI=1/(FPG × FINS); होमा-आईआर=एफपीजी × फिन्स/22.5।

2.8. एएमपीके, पी-एएमपीके, एसआईआरटी -1, पीजीसी -1, पीपीएआर-, और सीपीटी1ए लीवर टिश्यू में एक्सप्रेशन पश्चिमी धब्बा का उपयोग करके पाए गए।

जमे हुए जिगर के ऊतकों को वर्गों में काटा गया था। कुल प्रोटीन निष्कर्षण के लिए, 1 एमएल RIPA lysate को 50 ग्राम खंड में जोड़ा गया और 13, 000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूजेशन में जमा किया गया, इसके बाद सतह पर तैरनेवाला का संग्रह किया गया। प्रोटीन सांद्रता BCA प्रोटीन सांद्रता निर्धारण किट का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। प्रत्येक समूह से लगभग 40 कुरूप प्रोटीन का नमूना लिया गया और पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड (PVDF) झिल्ली में स्थानांतरित किया गया। झिल्ली को 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर संकेतित माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ लेबल किया गया और विकसित किया गया। प्रत्येक प्रोटीन बैंड के ग्रे मूल्यों का विश्लेषण किया गया था, और GAPDH का उपयोग अर्ध-मात्रात्मक विश्लेषण के लिए आंतरिक संदर्भ के रूप में किया गया था।

2.9. इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला द्वारा जिगर के ऊतकों में p-AMPK और SIRT1 अभिव्यक्तियों का पता लगाया गया था

जिगर के ऊतकों को 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया था, पैराफिन में एम्बेडेड किया गया था, और फिर 10- माइक्रोन मोटी लीवर स्लाइस में विभाजित किया गया था। 30 मिनट के लिए 3 प्रतिशत बीएसए जोड़ें । 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ इनक्यूबेट स्लाइड। माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ उद्देश्य ऊतक को कवर करें, अंधेरे स्थिति में 50 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं । फिर 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर DAPI समाधान के साथ इनक्यूबेट, अंधेरी जगह में रखा। 5 मिनट के लिए इनक्यूबेट करने के लिए सहज प्रतिदीप्ति शमन अभिकर्मक जोड़ें। माइक्रोस्कोपी का पता लगाना और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा चित्र एकत्र करना।

2.10. SIRT-1, PGC-1, PPAR-, और CPT1A mRNA अभिव्यक्ति लीवर के ऊतकों में RT-PCR द्वारा पता लगाया गया था

प्रत्येक समूह से लगभग 100 मिलीग्राम यकृत ऊतक −80 C पर संग्रहीत किया गया था। Trizol किट का उपयोग करके कुल RNA निकाला गया; आरएनए गुणवत्ता निर्धारित करने के लिए पराबैंगनी (यूवी) अवशोषण विधि का उपयोग किया गया था, और इस आरएनए को फिर सीडीएनए में उलट दिया गया था। SYBR ग्रीन qPCR बायो-रेड CFX96 टच रियल-टाइम पीसीआर डिटेक्शन सिस्टम (बायो-रेड लेबोरेटरीज, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) पर चलाया गया था। SIRT-1, PGC-1, PPAR- और CPT1A के प्राइमर सीक्वेंस को प्राइमर प्रीमियर5.0 सॉफ्टवेयर द्वारा डिजाइन किया गया था और हाउसकीपर जीन GAPDH के साथ वुहान सेविले बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा संश्लेषित किया गया था। आंतरिक संदर्भ के रूप में। प्रवर्धन की स्थिति इस प्रकार थी: 95 C पर पूर्व विकृतीकरण, 95 C पर विकृतीकरण, और 60 C (30 s) पर annealing, कुल 40 चक्रों के साथ। प्रतिक्रिया के अंत में, पीसीआर प्रवर्धन की विशिष्टता विघटन वक्र विश्लेषण द्वारा निर्धारित की गई थी, सीटी मान पढ़ा गया था, और लक्ष्य जीन एमआरएनए की सापेक्ष अभिव्यक्ति की गणना 2-ΔΔCt विधि द्वारा की गई थी। प्राइमर अनुक्रम तालिका 1 में दिखाए गए हैं।

2.11. सांख्यिकीय पद्धतियां

SPSS22.0 सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का उपयोग डेटा प्रोसेसिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए और ग्राफपैड प्रिज्म7.0 ड्राइंग के लिए किया गया था। सामान्य रूप से वितरित डेटा को माध्य ± मानक विचलन (विचरण x ± s) के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। समूहों के बीच जोड़ीवार तुलना विचरण के एकल-कारक विश्लेषण द्वारा की गई थी। समूहों के बीच अंतर के महत्व की पहचान या तो कम से कम महत्वपूर्ण अंतर (एलएसडी) टेस्ट (विचरणों की समरूपता) या कई तुलनाओं के लिए डननेट के टी-टेस्ट (गैर-समरूप) के साथ की गई थी। यदि डेटा सामान्य वितरण के अनुरूप नहीं था, तो माध्यिका और चतुर्थक अंतर, साथ ही गैर-पैरामीट्रिक परीक्षण (क्रुस्कल-वालिस परीक्षण) का उपयोग किया गया था। एपी मूल्य<0.05 was="" considered="" statistically="">

पुरुष लाभके लियेगुर्दा

3। परिणाम

3.1. ईसीएच सामान्य स्वास्थ्य स्थिति और डीबी/डीबी चूहों के एलआई में सुधार करता है

पूरे प्रयोग के दौरान, db/m समूह के चूहे स्वस्थ और सक्रिय थे और कोट की चमक प्रदर्शित करते थे। डीबी / डीबी समूह के चूहों ने अत्यधिक पानी और भोजन का सेवन, मोटापा, सुस्ती और झुकना, और खुरदरे, काले बालों का प्रदर्शन किया। डीबी / डीबी समूह चूहों की तुलना में, डीबी / डीबी प्लस ईसीएच समूह के चूहों ने सभी अध्ययनों में बेहतर स्थिति का प्रदर्शन किया। इसके अलावा, उनके शरीर का वजन और यकृत सूचकांक मधुमेह मॉडल समूह के चूहों (पी <0.05) (तालिका="" 2)="" की="" तुलना="" में="" कम="">

तालिका 1 आरटी प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर प्राइमर।

तालिका 2 प्रत्येक समूह के चूहों में शरीर का वजन, जिगर का गीला वजन और यकृत सूचकांक।

3.2. ईसीएच उपवास रक्त ग्लूकोज और इंसुलिन प्रतिरोध को कम करता है और डीबी/डीबी चूहों में ग्लूकोज सहिष्णुता और इंसुलिन संवेदनशीलता को बढ़ाता है

जैसे-जैसे प्रयोग आगे बढ़ा, db/m समूह की तुलना में, db/db समूह में उपवास रक्त शर्करा में उल्लेखनीय वृद्धि हुई (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">

3.3. ईसीएच यकृत संरचनात्मक विकार में सुधार करता है और डीबी/डीबी चूहों में लिपिड संचय जैसे रोग संबंधी परिवर्तनों को कम करता है

एचई धुंधला ने खुलासा किया कि डीबी / एम समूह में हेपेटोसाइट्स का आकार और आकारिकी सामान्य थी, और यकृत लोब्यूल और साइनसॉइड की संरचनाएं स्पष्ट थीं। डीबी / डीबी समूह में व्यापक हेपेटोसाइट अध: पतन, हेपेटोसाइट मात्रा में वृद्धि, परमाणु आकार में भिन्नता, फोकल सेल नेक्रोसिस और पोर्टल क्षेत्र में भड़काऊ सेल घुसपैठ थी। डीबी / डीबी प्लस ईसीएच समूह में, लिपिड बूंदों और भड़काऊ कोशिकाओं में काफी कमी आई थी, नेक्रोटिक सेल की चोट को कम किया गया था (छवि 2 ए)। तेल लाल ओ धुंधला यकृत ऊतक के सूक्ष्म विश्लेषण से डीबी/एम समूह में कोशिकाओं की एक साफ व्यवस्था का पता चला, जिसमें कोई लिपिड बूंदों या रोग संबंधी परिवर्तन नहीं थे। डीबी/डीबी समूह में, कोशिकाओं में एक अव्यवस्थित व्यवस्था थी, और कोशिका द्रव्य में बड़ी संख्या में विभिन्न आकार के वसा कण मौजूद थे। डीबी/डीबी समूह की तुलना में, डीबी/डीबी प्लस ईसीएच समूह में लिपिड बूंदों की संख्या काफी कम थी, जो लीवर पर ईसीएच के संभावित सुरक्षात्मक प्रभाव का सुझाव देती है (चित्र 2बी, सी)।

अंजीर। 1. ईसीएच ने ग्लूकोज सहिष्णुता में सुधार किया और डीबी / डीबी चूहों के इंसुलिन प्रतिरोध को कम किया।

3.4. ईसीएच डीबी/डीबी चूहों में लिपिड चयापचय और यकृत समारोह में सुधार करता है

डीबी/एम समूह की तुलना में, टीसी, टीजी, और एलडीएल के रक्त लिपिड स्तर में काफी वृद्धि हुई थी, और डीबी/डीबी समूह (पी <{{0}}) में="" एचडीएल="" में="" काफी="" कमी="" आई="" थी।{{4}="" }1).="" हालांकि,="" टीसी,="" टीजी,="" और="" एलडीएल="" के="" स्तर="" में="" कमी="" आई="" थी,="" और="" डीबी/डीबी="" प्लस="" ईसीएच="" समूह="" में="" एचडीएल="" स्तर="" को="" डीबी/डीबी="" समूह="" (पी=""><0.05, पी="" की="" तुलना="" में="" बढ़ाया="" गया="" था।="">< 0.01)="" (चित्र="" 3ए)।="" डीबी/एम="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" डीबी/डीबी="" समूह="" (पी=""><0.05, पी=""><0.01) में="" एएलटी="" और="" एएसटी="" स्तरों="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="" थी।="" एएसटी="" और="" एएलटी="" स्तर="" डीबी/डीबी="" प्लस="" ईसीएच="" समूह="" में="" डीबी/डीबी="" समूह="" (पी=""><0.05, पी=""><0.01) (छवि="" 3="" बी,="" सी)="" की="" तुलना="" में="" काफी="" कम="">

अंजीर। 2. ECH ने NAFLD के साथ चूहों में यकृत ऊतक संरचनात्मक विकार और लिपिड संचय को क्षीण किया।

3.5. विभिन्न समूहों चूहों में AMPK / SIRT1 मार्ग के सक्रियण पर ECH का प्रभाव

पश्चिमी धब्बा परिणामों के अनुसार, db/m समूह की तुलना में, p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR-, और CPT1A लीवर ऊतक में प्रोटीन का स्तर db/db समूह में काफी कम था ( पी < 0.01)।="" हालांकि,="" डीबी/डीबी="" प्लस="" ईसीएच="" समूह="" में="" प्रोटीन="" का="" स्तर="" डीबी/डीबी="" समूह="" (पी=""><0.01) (छवि="" 4ए,="" बी)="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" था।="" इसके="" अलावा,="" इम्यूनोफ्लोरेसेंस="" धुंधला="" ने="" दिखाया="" कि="" पी-एएमपीके="" और="" एसआईआरटी="" 1="" की="" अभिव्यक्ति="" स्पष्ट="" रूप="" से="" डीबी="" डीबी="" समूह="" (छवि="" 4="" सी)="" की="" तुलना="" में="" ईसीएच-उपचारित="" चूहों="" के="" यकृत="" ऊतक="" में="" पाई="" गई="">

3.6. विभिन्न समूहों के चूहों के जिगर में SIRT1 मार्ग mRNA की अभिव्यक्ति पर इचिनाकोसाइड का प्रभाव

RT-PCR परिणामों के अनुसार, SIRT1, PGC-1, PPAR- और CPT1A का स्तर db/m समूह की तुलना में db/db समूह में काफी कम हो गया। हालांकि, डीबी/डीबी समूह (चित्र 5) की तुलना में डीबी/डीबी प्लस ईसीएच समूह में इन स्तरों में काफी वृद्धि हुई है।

अंजीर। 3. प्रत्येक समूह के चूहों में सीरम से संबंधित सूचकांक।

4। चर्चा

मधुमेह दुनिया में एक प्रमुख चिकित्सा चिंता है, और 2035 तक मधुमेह से पीड़ित लोगों की संख्या बढ़कर लगभग 592 मिलियन होने की उम्मीद है [9]। मधुमेह की व्यापकता दर, मुख्य रूप से चीन में T2DM, उल्लेखनीय रूप से बढ़ती प्रवृत्ति [10,11] को दर्शाती है। T2DM और जिगर की बीमारी के बीच एक जटिल संबंध है, और NAFLD, जो जिगर में अत्यधिक वसा जमाव की विशेषता है, T2DM के कारण होने वाली सबसे आम जिगर की चोट है और दुनिया में सबसे लगातार पुरानी जिगर की बीमारी है [12,13]। नैदानिक ​​आनुवंशिक परीक्षण अनुसंधान से पता चलता है कि T2DM से जुड़ा जीन बढ़े हुए BMI, हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिया और कम HDL-C से जुड़ा है, जो NAFLD [14] का एक उच्च जोखिम प्रदान करता है। NAFLD इंसुलिन प्रतिरोध और डिस्लिपिडेमिया से निकटता से संबंधित है और इस प्रकार T2DM और / या मोटापे के रोगियों में अत्यधिक प्रचलित है। हालांकि कई चयापचय कारक NAFLD विकास से संबंधित प्रतीत होते हैं, इसका रोगजनन काफी हद तक अस्पष्ट और जटिल है [15]। सिस्टैंच डेजर्टिकोला एक बारहमासी परजीवी पौधा है जो सैंडफिक्सिंग पौधों की जड़ों पर उगता है। चाइनीज फार्माकोपिया के अनुसार, किडनी की बीमारी और बांझपन [16,17] के इलाज के लिए सिस्टैंच डेजर्टिकोला का उपयोग पारंपरिक दवा के रूप में किया जाता है। हाल के वर्षों में, अध्ययनों ने पुष्टि की है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला मधुमेह चूहों में उपवास और प्रसवोत्तर रक्त शर्करा के स्तर में वृद्धि को रोक सकता है, इंसुलिन प्रतिरोध और डिस्लिपिडेमिया में सुधार कर सकता है, और वजन घटाने में सहायता कर सकता है [18]। Cistanche डेजर्टिकोला के मुख्य घटक के रूप में, ECH से DM से जुड़े जिगर की चोट को बेहतर बनाने में और योगदान देने की उम्मीद है। हमारे प्रायोगिक परिणामों से पता चला है कि मोटापा और मधुमेह चूहों में जिगर की चोट का कारण बन सकता है, जो सीरम एएलटी और एएसटी स्तरों में उल्लेखनीय वृद्धि और विशिष्ट हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों की विशेषता है। ईसीएच ने एलआई और रक्त ग्लूकोज को काफी कम कर दिया, टीसी, टीजी, और एलडीएल के स्तर में कमी आई, एचडीएल स्तर में वृद्धि हुई और इंसुलिन संवेदनशीलता में सुधार हुआ। हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा ने ईसीएच-उपचारित चूहों में हेपेटोसाइट स्टीटोसिस अध: पतन और भड़काऊ सेल घुसपैठ को कम किया, यह पुष्टि करते हुए कि एजेंट मोटे, मधुमेह चूहों में जिगर की चोट में सुधार कर सकता है।

AMPK एक अत्यधिक संरक्षित प्रोटीन काइनेज है जो जीवों में व्यापक रूप से वितरित किया जाता है और इसे ऊर्जा चयापचय रिसेप्टर कहा जाता है। यह ऑक्सीडेटिव तनाव, सूजन, प्रसार और एपोप्टोसिस [19] को कम करने में एक भूमिका निभाता है। अप्रत्यक्ष सक्रियकर्ताओं द्वारा एंजाइम की सक्रियता मधुमेह, मोटापा, कैंसर और अन्य संबंधित चयापचय संबंधी विकारों के इलाज के लिए वैज्ञानिक ध्यान आकर्षित करती है [20,21]। यह कई तरीकों से लिपिड चयापचय को नियंत्रित कर सकता है, जैसे फैटी एसिड और ट्राइग्लिसराइड संश्लेषण को रोकना, कोलेस्ट्रॉल संश्लेषण को रोकना, और फैटी एसिड ऑक्सीकरण और अपघटन को बढ़ावा देना [22]। जिगर में, AMPK फास्फारिलीकरण द्वारा लिपिड चयापचय को नियंत्रित करता है।

जब इंट्रासेल्युलर एएमपी-टू-एटीपी अनुपात बढ़ता है, एएमपीके सक्रिय होता है, पी-एएमपीके / एएमपीके को बढ़ाता है और सेलुलर एनएडी प्लस स्तरों [23,24] को बढ़ाकर एसआईआरटी 1 अभिव्यक्ति का अपग्रेडेशन करता है। SIRT1, एक NAD पर निर्भर डीएसेटाइलेज़, को हाल ही में NAFLD पैथोफिज़ियोलॉजी [25] से संबंधित दिखाया गया है। एंजाइम विभिन्न सेलुलर शारीरिक प्रक्रियाओं में शामिल है, जैसे कि लिपिड और ग्लूकोज होमियोस्टेसिस और इंसुलिन संवेदनशीलता, और चयापचय का एक प्रमुख नियामक है [26]। मोटे रोगियों, विशेष रूप से इंसुलिन प्रतिरोध, मधुमेह और NAFLD वाले लोगों में SIRT1 [27,28] का स्तर कम होता है। मूल्य एट अल। ने हेपेटिक स्टीटोसिस की रोकथाम में SIRT1 की भूमिका की जांच की और पाया कि NAFLD [29] के रोगियों में SIRT1 की अभिव्यक्ति कम हो गई है। अन्य अध्ययनों से पता चला है कि SIRT1 का हेपेटोसाइट-विशिष्ट नॉकआउट फैटी एसिड ऑक्सीकरण को कम कर सकता है और यकृत में स्टीटोसिस और सूजन को प्रेरित कर सकता है, जबकि SIRT1 की अधिकता पीजीसी -1 मार्ग [30] के माध्यम से लिपिड चयापचय में सुधार कर सकती है। SIRT1 PGC-1 की गतिविधि को नियंत्रित करता है, और ये दोनों सेलुलर ऊर्जा होमोस्टैसिस को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण हैं। इसलिए, SIRT1 और डाउनस्ट्रीम कारक PGC-1 जिगर की चोट का मुख्य लक्ष्य हो सकते हैं। पीजीसी कोएक्टीवेटर एक प्रोटीन है जो ट्रांसक्रिप्शनल गतिविधि को बढ़ाने के लिए ट्रांसक्रिप्शन कारकों या परमाणु रिसेप्टर्स को बांध सकता है [31]। अधिकांश प्रतिलेखन कारकों को संयोजकों की आवश्यकता होती है, विशेष रूप से पीपीएआर-, मुख्य रूप से यकृत, मायोकार्डियम और कंकाल की मांसपेशी जैसे ऑक्सीकृत ऊतकों में। यह जीन प्रतिलेखन को सक्रिय कर सकता है जो फैटी एसिड परिवहन और ऑक्सीकरण, कीटोन उत्पादन और ग्लूकोनोजेनेसिस को बढ़ावा देता है [32,33]। CPT1A फैटी एसिड ऑक्सीकरण में एक प्रमुख दर-सीमित एंजाइम है। इसकी अभिव्यक्ति जटिल ट्रांसक्रिप्शनल तंत्र द्वारा नियंत्रित होती है, जिसमें SIRT1, PGC-1 और PPAR [34] सहित कई ट्रांसक्रिप्शन कारक और संयोजक शामिल होते हैं। इस अध्ययन में, हमने पाया कि डीबी/डीबी समूह में रक्त शर्करा की उच्च सांद्रता के तहत, एएमपीके/एसआईआरटी1 सिग्नलिंग पाथवे अभिव्यक्ति के डाउनस्ट्रीम कारकों के डाउनरेगुलेशन के साथ हेपेटोसाइट्स में लिपिड संचय में वृद्धि हुई है; ईसीएच-उपचार समूह में, पी एएमपीके/एएमपीके, एसआईआरटी1 और पीजीसी-1 भावों में काफी वृद्धि हुई थी, और डाउनस्ट्रीम कारकों पीपीएआर और सीपीटी1ए की अभिव्यक्तियों में काफी वृद्धि हुई थी, जो दर्शाता है कि एएमपीके/एसआईआरटी1 सिग्नल अक्ष और इसके डाउनस्ट्रीम कारक मधुमेह के जिगर की चोट (चित्र 6) के उपचार में लाभकारी भूमिका निभाते हैं। हालाँकि, यहाँ उपलब्ध कराए गए डेटा इन-विवो प्रयोगों पर आधारित थे; इस प्रकार, AMPK/SIRT1 सिग्नलिंग मार्ग और प्रभावकारक प्रोटीन पर ECH के प्रभाव की पुष्टि करने के लिए अतिरिक्त इन-विट्रो अध्ययन की आवश्यकता है।

कुल मिलाकर, ईसीएच एएमपीके/एसआईआरटी1 और इसके डाउनस्ट्रीम कारकों की अभिव्यक्ति को विनियमित करके रक्त शर्करा और लिपिड चयापचय को नियंत्रित कर सकता है, इस प्रकार मधुमेह के जिगर की चोट में सुधार होता है।

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