इचिनाकोसाइड आरओएस उत्पादन को कम करके पीसी12 कोशिकाओं में 6-हाइड्रॉक्सीडोपामाइन-प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं से बचाता है

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यू-हुआ वांग, 1,2 झाओ-होंग ज़ुआन, 3 शुओ तियान, 1 और गुआन-हुआ डु1,2

पार्किंसंस रोग (पीडी) एक न्यूरोडीजेनेरेटिव विकार है, जो कि मूल निग्रा में डोपामिनर्जिक (डीए) न्यूरॉन्स के प्रगतिशील नुकसान की विशेषता है। पीडी में कोशिका क्षति के तंत्र में माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन और भड़काऊ प्रतिक्रियाएं शामिल हैं। 6-हाइड्रॉक्सीडोपामाइन (6-OHDA), एक डोपामिन एनालॉग, विशेष रूप से डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स को नुकसान पहुंचाता है।इचिनाकोसाइड(ईसीएच) एक फेनिलएथेनॉयड ग्लाइकोसाइड है जो के तनों से पृथक होता हैसिस्टांचे साल्सा, पिछले अध्ययनों में विभिन्न प्रकार के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव दिखा रहा है। वर्तमान अध्ययन पीसी12 कोशिकाओं में 6-OHDA- प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी और संभावित तंत्र के खिलाफ इसके प्रभाव की जांच करने के लिए था। परिणामों से पता चला कि 6-OHDA ने सेल व्यवहार्यता को कम कर दिया, ऑक्सीकरण-कमी गतिविधि को कम कर दिया, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता में कमी आई, और अनुपचारित PC12 कोशिकाओं की तुलना में माइटोकॉन्ड्रिया-मध्यस्थता एपोप्टोसिस को प्रेरित किया। हालांकि,इचिनाकोसाइडउपचार ने 6-OHDA द्वारा प्रेरित इन परिवर्तनों को महत्वपूर्ण रूप से क्षीण कर दिया। इसके साथ ही,इचिनाकोसाइड6-OHDA द्वारा प्रेरित भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को भी काफी कम कर सकता है। आगे के शोध से पता चला है किइचिनाकोसाइडPC12 कोशिकाओं में 6-OHDA- प्रेरित ROS उत्पादन को कम कर सकता है। ये परिणाम बताते हैं कि का अंतर्निहित तंत्रइचिनाकोसाइड6-ओएचडीए-प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी के खिलाफ आरओएस उत्पादन को कम करके माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को कम करने में शामिल हो सकता है।

1 परिचय

पार्किंसंस रोग (पीडी)यह एक न्यूरोडीजेनेरेटिव विकार है, जो कि सोरिया नाइग्रा पार्स कॉम्पेक्टा में डोपामाइन न्यूरॉन्स के धीरे-धीरे प्रगतिशील अध: पतन की विशेषता है। यद्यपि पीडी के न्यूरोपैथोलॉजिकल हॉलमार्क अच्छी तरह से वर्णित हैं, फिर भी एटियलजि अपरिभाषित है। विशेष रूप से, कई टिप्पणियों से पता चलता है कि माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन पीडी के रोगजनन और डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के अध: पतन में शामिल है [2, 3]। माइटोकॉन्ड्रिया में कई रेडॉक्स एंजाइम होते हैं और ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण की स्वाभाविक रूप से होने वाली अक्षमता प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) उत्पन्न करती है [4]। हाल ही में, मानव और पशु अध्ययनों से बढ़ते सबूतों ने सुझाव दिया है कि पीडी [5] में न्यूरोनल हानि के लिए न्यूरोइन्फ्लेमेशन भी एक महत्वपूर्ण योगदानकर्ता है।

6-हाइड्रॉक्सीडोपामाइन (6-OHDA) इंट्रास्ट्राइटल कृंतक मॉडल और कुछ कोशिकाओं [6–11] में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के लिए विशिष्ट है। PC12 सेल PD अनुसंधान के लिए एक लोकप्रिय सेल मॉडल बन गया है क्योंकि इस सेल लाइन में DAergic न्यूरॉन्स की कई विशेषताएं हैं। इसका उपयोग पीडी के अध्ययन के लिए और सुरक्षात्मक और चिकित्सीय एजेंटों के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए इन विट्रो मॉडल के रूप में किया गया है। इचिनाकोसाइड (चित्र 1) एक फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड है जिसे तनों से पृथक और शुद्ध किया जाता हैसिस्टांचे साल्सा[12], एक परजीवी पौधा जो उत्तर पश्चिमी चीन का मूल निवासी है, जिसका उपयोग 6-OHDA- प्रेरित डैमेजइनपीसी12सेल्स के खिलाफ इचिनाकोसाइड के अंतर्निहित तंत्र के रूप में किया जाता है।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. सामग्री। इचिनाकोसाइड को नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर फूड एंड ड्रग कंट्रोल (बीजिंग, चीन) से प्राप्त किया गया था। RPMI-1640 और भ्रूण गोजातीय सीरम गिब्को . से प्राप्त किए गए थे

(ग्रैंड आइलैंड, एनवाई, यूएसए)। 6-OHDA, MTT, 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate, propidium iodide (PI), और resazurin को सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, MO, USA) से खरीदा गया था। एटीपी बायोलुमिनसेंट परख किट क्रोमेगा (मैडिसन, यूएसए) से प्राप्त की गई थी। 5,5,6,6 -टेट्राक्लोरो-1,1,3,3 -tet-raethyl benzimidazolyl carbocyanine आयोडाइड (JC-1) परख किट बायोटाइम इंस्टीट्यूट ऑफ बायोटेक्नोलॉजी से प्राप्त की गई थी। (हैमेन, जिआंगसु, चीन)। साइटोक्रोम सी एलिसा किट और फ्लोरोजेनिक सब्सट्रेट एसी-डीवीडी-एएमसी इनविट्रोजन (कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। IL-1 और IL-6 एलिसा किट Boster Bio-इंजीनियर लिमिटेड कंपनी (वुहान, चीन) से प्राप्त की गई थी। स्पेक्ट्रामैक्स एम 5 माइक्रोप्लेट रीडर आणविक उपकरण कंपनी (सनीवेल, सीए, यूएसए) से खरीदा गया था।

2.2. सेल संस्कृति और उपचार। PC12 कोशिकाओं को RPMI -1640 में 1 0 प्रतिशत हॉर्स सीरम और 5 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ विकसित किया गया था। 5 प्रतिशत CO2 [19] युक्त आर्द्र वातावरण में 37∘C पर स्थितियां बनाए रखी गई थीं। कोशिकाओं को 2 × 105 कोशिकाओं/एमएल के घनत्व पर 96-अच्छी तरह से प्लेटों में चढ़ाया गया था। 80 प्रतिशत संगम के बाद, कोशिकाओं को 1 घंटे के लिए सीरम-मुक्त RPMI -1640 माध्यम में इचिनाकोसाइड की विभिन्न सांद्रता के साथ पुन: स्थापित किया गया था। फिर, 6-OHDA को 100 M की अंतिम सांद्रता पर कुओं में जोड़ा गया और दूसरे के लिए ऊष्मायन किया गया। उपचार के बाद, एक माइक्रोस्कोप के तहत रूपात्मक परिवर्तन देखे गए। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन MTT परख [19] द्वारा किया गया था। संक्षेप में, उपचार के बाद, 0.5 मिलीग्राम / एमएल की अंतिम एकाग्रता में एमटीटी को प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया और 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया।

2.3. रूपात्मक परिवर्तन और PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता परख। उपचार के बाद, एक माइक्रोस्कोप के तहत रूपात्मक परिवर्तन देखे गए। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन MTT परख [19] द्वारा किया गया था। संक्षेप में, उपचार के बाद, एमटीटी को 0.5 मिलीग्राम/एमएल की अंतिम सांद्रता में प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया और 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। फिर, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था और एक माइक्रोएटर प्लेट शेकर पर 15 मिनट के लिए सरगर्मी के साथ 100 एल डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड में फॉर्मेज़न उत्पाद को भंग कर दिया गया था और स्पेक्ट्रोमैक्स एम 5 माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके 570 एनएम पर अवशोषण पढ़ा गया था। साक्ष्य-आधारित पूरक और वैकल्पिक चिकित्सा

2.4. इंट्रासेल्युलर एटीपी स्तर परख। सेलुलर एटीपी स्तर को निर्माता के निर्देशों के अनुसार एटीपी बायोलुमिनसेंट परख किट से मापा गया था। 100 एल लूसिफ़ेरिन और लूसिफ़ेरेज़ [20] को जोड़ने के बाद ल्यूमिनेसेंस मोड में एक माइक्रोप्लेट रीडर पर ल्यूमिनेसेंस की निगरानी की गई थी।

2.5. Resazurin द्वारा माइटोकॉन्ड्रिया ऑक्सीकरण-कमी गतिविधि का मापन। उपचार के बाद, 5 एम की अंतिम सांद्रता पर रेज़ज़ुरिन को कुओं में जोड़ा गया था और 530 एनएम के उत्तेजना और 590 एनएम [21] के उत्सर्जन पर प्रतिदीप्ति तीव्रता की जांच की गई थी।

2.6. जेसी द्वारा माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का मापन-1। निर्माता के निर्देशों के अनुसार जेसी -1 परख किट का उपयोग करके माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता को मापा गया। उपचार के बाद, संस्कृति माध्यम को हटा दिया गया और अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए जेसी -1 समाधान के साथ लोड किया गया। लाल/हरे अनुपात की प्रतिदीप्ति तीव्रता 490 एनएम की उत्तेजना और 530 एनएम (हरा फ्लोरोसेंट मोनोमर्स) और 590 एनएम (लाल फ्लोरोसेंट समुच्चय) के उत्सर्जन पर निर्धारित की गई थी, [22]।

2.7. साइटोक्रोम सी रिलीज की मात्रा का ठहराव। साइटोसोलिक साइटोक्रोम सी स्तरों को निर्माता के निर्देशों [23] के अनुसार एलिसा किट का उपयोग करके मापा गया था। संक्षेप में, उपचार के बाद, कोशिकाओं को 15 मिनट के लिए 1000 ग्राम पर lysed और centrifugated किया गया था, और फिर सतह पर तैरनेवाला एक साइटोप्लाज्मिक अंश के रूप में एकत्र किया गया था और साइटोक्रोम सी रिलीज माप के लिए उपयोग किया गया था।

2.8. कस्पासे का निर्धारण-3 गतिविधि। कस्पासे -3 गतिविधि संशोधन के साथ संदर्भों के अनुसार की गई थी [24]। संक्षेप में, उपचार के बाद, लसीका बफर को प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया और उसके बाद 10 मिनट के लिए 12 000 g पर सेंट्रीफ्यूजेशन किया गया। कैस्पासे -3 गतिविधि का परीक्षण फ्लोरोजेनिक सब्सट्रेट एसी-डीवीडी-एएमसी के प्रोटीयोलाइटिक क्लेवाज को 380 एनएम की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य और 460 एनएम के उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य के साथ मापने के परिणामस्वरूप सतह पर तैरनेवाला में किया गया था।

2.9. PC12 कोशिकाओं में फ्लो साइटोमेट्री परख। उपचार के बाद, कोशिकाओं को ट्रिप्सिनाइज़ किया गया, दो बार पीबीएस से धोया गया, 5 मिनट के लिए 1000 आर / मिनट पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, और फिर 4∘C पर रातोंरात 70 प्रतिशत इथेनॉल के साथ तय किया गया। कोशिकाओं को पीबीएस के साथ दो बार अपकेंद्रित किया गया और धोया गया, पीबीएस (50 ग्राम / एमएल आरएनएसेए युक्त) में फिर से जोड़ा गया, अंधेरे में कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए 10 एम की अंतिम एकाग्रता में पीआई के साथ सना हुआ, और 488 पर एक प्रवाह साइटोमीटर में पढ़ा गया। एनएम उत्तेजना [10]।

2.10. एलिसा परख द्वारा आईएल-1 और आईएल-6 स्तर का मापन। सुसंस्कृत PC12 कोशिकाओं के माध्यम को उपचार के बाद एकत्र किया गया था, और IL -1 और IL -6 सांद्रता को निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एलिसा किट द्वारा मापा गया था।

2.11. इंट्रासेल्युलर प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति स्तर का निर्धारण। 6-OHDA के साथ ऊष्मायन के बाद, कोशिकाओं को अंधेरे में 37∘C पर 30 मिनट के लिए 10M H2DCFH-DA के साथ लोड किया गया था। DCF की प्रतिदीप्ति तीव्रता को एक उत्तेजना पर मापा गया

साक्ष्य-आधारित पूरक और वैकल्पिक चिकित्सा तरंग दैर्ध्य 495 एनएम और उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 530 एनएम एक माइक्रोप्लेट रीडर पर [25]।

2.12. सांख्यिकीय विश्लेषण। सभी डेटा को माध्य ± SD के रूप में व्यक्त किया जाता है। परिणामों का सांख्यिकीय विश्लेषण विचरण (ANOVA) के एकतरफा विश्लेषण द्वारा किया गया, इसके बाद -परीक्षण किया गया। सांख्यिकीय महत्व <0.05 पर="" स्वीकार="" किया="" गया="">

3। परिणाम

3.1. 6-OHDA द्वारा क्षतिग्रस्त PC12 कोशिकाओं में इचिनाकोसाइडन मॉर्फोलॉजी और सेल व्यवहार्यता का प्रभाव। जैसा कि चित्र 2(A) में दिखाया गया है, PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में 0 की सांद्रता में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था।

24 घंटे जैसा कि चित्र 2 (बी) में दिखाया गया है, अकेले 6- ओएचडीए के साथ उपचार के 24 घंटे के भीतर, पीसी12 कोशिकाओं के बहुमत में झिल्ली का फूलना और कोशिका संकोचन जैसे रूपात्मक परिवर्तन हुए थे। इचिनाकोसाइड के साथ सह उपचार ने कोशिकाओं को 6-OHDA क्षति से बचाया। MTT परख ने दिखाया कि अकेले 6-OHDA के साथ PC12 कोशिकाओं के उपचार से 24 घंटे के भीतर कोशिका के अस्तित्व में लगभग 25 प्रतिशत की कमी आई, जबकि {{10}}.1 M, 1 M, और 10 एम इचिनाकोसाइड ने 6-ओएचडीए-मध्यस्थता साइटोटोक्सिसिटी (सभी <0.01, चित्रा="" 2(सी))="" की="" कमी="">

3.2. PC12 कोशिकाओं में 6-OHDA द्वारा प्रेरित माइटोकॉन्ड्रिया रोग पर इचिनाकोसाइड का प्रभाव। 1 0 0M 6-OHDA के साथ 24 घंटे के ऊष्मायन के बाद सेलुलर एटीपी स्तर में काफी कमी आई थी, जबकि इचिनाकोसाइड के 1 मांड 10 एम के साथ सहसंयोजन कम हो गया 6- ओएचडीए-मध्यस्थता एटीपी पीसी 12 कोशिकाओं में एनाबॉलिक परिवर्तन को कम करता है। . परिणामों से पता चला कि इचिनाकोसाइड के 1 मांड 10 एम के साथ सह-उपचार 6-OHDA (दोनों <0.05 और="" चित्रा="" 3="" (बी))="" से="" प्रेरित="" माइटोकॉन्ड्रिया="" ऑक्सीकरण-कमी="" गतिविधि="" हानि="" को="" काफी="" हद="" तक="" कम="" कर="" सकता="">

जैसा कि चित्र 3(सी) में दिखाया गया है, 24 घंटे के लिए ओएचडीए के 1 0 0 एम 6- के साथ उपचार के परिणामस्वरूप अनुपचारित समूह की तुलना में माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता में उल्लेखनीय कमी आई (<{ {11}}.01)।="" हालांकि,="" 6-ohda="" द्वारा="" प्रेरित="" माइटोकॉन्ड्रियल="" झिल्ली="" क्षमता="" की="" कमी="" को="" 0.1="" एम,="" 1="" एम,="" और="" 10="" एम="" इचिनाकोसाइड="" (सभी=""><0.01) के="" साथ="" सह-उपचार="" द्वारा="" काफी="" हद="" तक="" देखा="" गया="">

3.3. 6-OHDA न्यूरोटॉक्सिसिटी के खिलाफ PC12 कोशिकाओं में इचिनाकोसाइड का एंटी-माइटोकॉन्ड्रिया-मध्यस्थता एपोप्टोसिस। परिणामों से पता चला कि 6-OHDA जोखिम के परिणामस्वरूप अनुपचारित समूह (<0.{{10}}}) की="" तुलना="" में="" साइटोसोलिक="" साइटोक्रोम="" c="" में="" 167="" प्रतिशत="" की="" वृद्धि="" हुई।="" 0.1="" एम,="" 1="" एम,="" और="" 10एम="" की="" खुराक="" पर="" इचिनाकोसाइड,="" साइटोक्रोम="" सी="" रिलीज="" को="" 6-ओएचडीए=""><0.05,><0.01, और=""><0.01, सम्मान="" .;="" चित्रा="" 4="">

कैस्पासे {0}} गतिविधि में लगभग 3.3- की वृद्धि हुई थी, 6-OHDA जोखिम (<0.01 के="" बाद="" अनुपचारित="" समूह="" की="" तुलना="" में।="" )="" इसके="" विपरीत,="" इचिनाकोसाइड="" के="" 1="" एम="" और="" 1="" 0="" एम="" के="" साथ="" सह-उपचार="" ने="" क्रमशः="" 6-="" ओएचडीए-उपचारित="" कोशिकाओं="" की="" तुलना="" में="" कस्पासे="" -3="" गतिविधि="" में="" उल्लेखनीय="" कमी="" दिखाई="" (दोनों=""><0.05 और="" चित्रा="" 4(="" बी))="" पीआई="" झिल्ली="" पारगम्यता="" है="" और="" आमतौर="" पर="" व्यवहार्य="" कोशिकाओं="" से="" बाहर="" रखा="" जाता="" है।="" तो="" यह="" आमतौर="" पर="" आबादी="" में="" मृत="" कोशिकाओं="" की="" पहचान="" के="" लिए="" प्रयोग="" किया="" जाता="" है।="" परिणामों="" से="" पता="" चला="" कि="" 100="" एम="" 6-="" ओएचडीए="" के="" साथ="" 24="" एच="" ऊष्मायन="" के="" बाद="" एपोप्टोसिस="" दर="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="" थी,="" जबकि="" 1="" और="" 10="" एम="" इचिनाकोसाइड="" के="" साथ="" सह-उपचार="" में="" काफी="" कमी="" आई="" 6-="" ओएचडीए-प्रेरित="" एपोप्टोसिस=""><0.05,><0.01, सम्मान।,="" चित्र="" 4="">

3.4. 6-OHDA द्वारा प्रेरित PC12 कोशिकाओं में इचिनाकोसाइड का विरोधी भड़काऊ प्रभाव। परिणामों से पता चला कि 6-OHDA ने अनुपचारित समूह (<0.05; चित्र="" 4(a))="" के="" साथ="" तुलना="" में="" स्तर="" -1="" स्तर="" को="" प्रभावित="" किया।="" हालांकि,="" इचिनाकोसाइड="" का="" 10="" एम="" 6-="" ओएचडीए=""><0.05; चित्रा="" 5="" (ए))="" से="" प्रेरित="" आईएल="" -1="" रिलीज="" को="" काफी="" कम="" कर="" सकता="">

अनुपचारित समूह (<0.01) की="" तुलना="" में="" il{{0}}="" का="" स्तर="" भी="" काफी="" बढ़="" गया="" था।="" हालांकि,="" इचिनाकोसाइड="" के="" 0.1,="" 1,="" और="" 10="" एम="" के="" साथ="" सह-उपचार="" ने="" 6-="" ओएचडीए-उपचारित="" कोशिकाओं="" (दोनों=""><0.05 और="" चित्रा="" 5="" (बी))="" की="" तुलना="" में="" आईएल="" -6="" रिलीज="" को="" काफी="" कम="" कर="">

3.5. PC12 कोशिकाओं में 6-OHDA द्वारा प्रेरित ROS उत्पादन पर ECH का प्रभाव। 6-OHDA से उपचारित कोशिकाओं ने अनुपचारित कोशिकाओं (<0.01) की="" तुलना="" में="" इंट्रासेल्युलर="" ros="" की="" उल्लेखनीय="" वृद्धि="" (लगभग="" 1.{6}}गुना)="" दिखाई।="" इस="" वृद्धि="" को="" 0.1,="" 1,="" और="" 10="" एम="" इचिनाकोसाइड=""><0.05,><0.01, और=""><0.01, सम्मान;="" चित्रा="" 6)="" के="" साथ="" संयोग="" से="" काफी="" हद="" तक="" देखा="" गया="" था।="">

4। चर्चा

इचिनाकोसाइड एक प्रसिद्ध पारंपरिक रिपोर्ट किए गए इचिनाकोसाइड से निकाले गए फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के प्रमुख घटकों में से एक है, जिसमें न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग [18] में एपोप्टोटिक और न्यूरोप्रोटेक्टिव गुण होते हैं। विवो अध्ययन में बताया गया है कि इचिनाकोसाइड का एमपीटीपी-प्रेरित डोपामिनर्जिक न्यूरोनल क्षति के माउस मॉडल में न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव और व्यवहार में सुधार था, जबकि आगे की जांच से पता चला कि इचिनाकोसाइड ने कस्पासे के डाउनरेगुलेशन को प्रेरित किया -3 और कास्पेज़ -8 एमपीपी प्लस में सक्रियण अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स [16] के प्रेरित एपोप्टोसिस। विवो अध्ययन में एक अन्य ने 6-OHDA [17] द्वारा घायल स्ट्राइटल डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स पर इचिनाकोसाइड के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभावों की सूचना दी। हालांकि, इन क्रियाओं के अंतर्गत आने वाले सेलुलर और आणविक तंत्र पूरी तरह से समझ में नहीं आते हैं, खासकर माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और सूजन प्रतिक्रियाओं पर उनके प्रभाव के लिए। इसलिए हमारे वर्तमान अध्ययन ने पीडी के खिलाफ इसके तंत्र को स्पष्ट करने के लिए माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और सूजन प्रतिक्रियाओं पर इचिनाकोसाइड के प्रभावों की जांच की। परिणामों ने सबसे पहले दिखाया कि इचिनाकोसाइड ने माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और सूजन-रोधी सुरक्षा के माध्यम से PC12 कोशिकाओं में 6-OHDA- प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी को काफी कम कर दिया।

माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन लंबे समय से पार्किंसंस रोग और इसके प्रायोगिक मॉडल [26] में निग्रोस्ट्रिएटल डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की मृत्यु में फंसा हुआ है। माइटोकॉन्ड्रिया न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों [27] में श्वसन श्रृंखला के इलेक्ट्रॉन वाहक के माध्यम से प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के उत्पादन में गहराई से शामिल हैं। जैविक प्रणालियों में सामान्य चयापचय के दौरान आरओएस की एक विस्तृत विविधता का उत्पादन होता है, लेकिन उनका संचय से परे होता है

आवश्यक मात्रा संभावित रूप से लिपिड, प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को नुकसान पहुंचा सकती है।

6-OHDA, एक कैटेकोलामाइन एनालॉग, पर्याप्त नाइग्रा न्यूरॉन्स के विशिष्ट अध: पतन का कारण बनता है। 6-OHDA द्वारा प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी, आंशिक रूप से, ROS [28-32] के उत्पादन के कारण है।

ओएचडीए एटीपी उत्पादन में कमी, आरओएस चयापचय में गड़बड़ी, और एपोप्टोसिस [10, 33, 34] को शामिल करने सहित माइटोकॉन्ड्रिया फ़ंक्शन को प्रभावित करके न्यूरोनल मौत की ओर जाता है। वर्तमान अध्ययन में, हमारे परिणामों ने यह भी प्रदर्शित किया कि 6-OHDA ने माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव-कमी समारोह को नुकसान पहुंचाया, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता में कमी, माइटोकॉन्ड्रिया-मध्यस्थता एपोप्टोसिस को प्रेरित किया, और PC12 कोशिकाओं में ROS उत्पादन में वृद्धि की।

रेसज़ुरिन एक फ्लोरोसेंट संकेतक है जो केवल आणविक ऑक्सीजन और साइटोक्रोम ऑक्सीडेज की अंतिम कमी के बीच मध्यवर्ती है। इसलिए, रेसज़ुरिन की ऑक्सीडेटिव-कमी क्षमता श्वसन श्रृंखला को पूर्ण होने के लिए कार्य करने की अनुमति देती है, जो माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अधिक सटीक और संवेदनशील संकेत प्रदान करेगी। जेसी -1 एक झिल्ली संभावित-संवेदनशील जांच है जो आंतरिक माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली को स्थानीयकृत करती है जहां यह माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता के आधार पर या तो मोनोमर (हरा) या समुच्चय (लाल) बनाती है। इस प्रकार, रेसज़ुरिन और जेसी -1 माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन [35] की जांच के लिए मूल्यवान विश्लेषणात्मक उपकरण हैं। वर्तमान अध्ययन से संकेत मिलता है कि माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव-कमी गतिविधि में कमी आती है और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता 6-OHDA- प्रेरित डोपामिनर्जिक न्यूरोटॉक्सिसिटी में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकती है। हमारे परिणाम ने माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव-कमी गतिविधि और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता को भी दिखाया। ये परिणाम प्रदान करते हैं कि माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन में सुधार प्रगतिशील डोपामिनर्जिक न्यूरोडीजेनेरेशन को धीमा करने का एक बेहतर तरीका हो सकता है जो आमतौर पर पीडी से जुड़ा होता है।

यह आम तौर पर स्वीकार किया जाता है कि 6- ओएचडीए द्वारा प्रेरित सेल एपोप्टोसिस की मध्यस्थता माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन द्वारा की जाती है, जो साइटोक्रोम सी रिलीज और कैस्पेज़ -3 सक्रियण [36] द्वारा विशेषता है। एक एपोप्टोटिक उत्तेजना माइटोकॉन्ड्रिया से साइटोक्रोम सी की रिहाई को साइटोसोल में ट्रिगर करती है जहां यह कैस्पेज़ -3 और अन्य डाउनस्ट्रीम कैसपेज़ को सक्रिय करती है। वर्तमान अध्ययन में, परिणामों से पता चला है कि PC12 कोशिकाएं 100 M 6-OHDA वर्धित साइटोक्रोम C रिलीज़ के संपर्क में हैं और caspase निर्भरता से साइटोक्रोम C रिलीज़ और caspase - 3 सक्रियणों को रोकता है। इन परिणामों से पता चलता है कि इचिनाकोसाइड माइटोकॉन्ड्रिया-मध्यस्थता एपोप्टोसिस को रोक सकता है, साइटोक्रोम सी रिलीज को माइटोकॉन्ड्रिया से साइटोसोल और कैस्पेज़ -3 सक्रियण को कम करके।

सूजन पार्किंसोनियन दिमाग की एक न्यूरोपैथोलॉजिकल विशेषता है और रोग के प्रायोगिक मॉडल में भी है। सूजन को कम करने और इस भड़काऊ कारकों के उत्पादन को रोकने के लिए चिकित्सीय रणनीतियाँ पार्किंसंस रोग और संबंधित स्थितियों के उपचार के लिए एक आशाजनक न्यूरोप्रोटेक्टिव रणनीति हो सकती हैं [37]। मस्तिष्कमेरु द्रव में भी कई अध्ययन किए गए और पार्किंसोनियन रोगियों में पोस्टमॉर्टम विश्लेषण के दौरान साइटोकिन्स के बढ़े हुए स्तर का पता चला, जैसे कि इंटरल्यूकिन-1 (IL-1) और इंटरल्यूकिन-6 (IL{{4} }), एप्रोइन्फ्लेमेटरी रिस्पॉन्स[38, 39] की सक्रियता का सुझाव देते हैं। वर्तमान अध्ययन में, परिणामों से पता चला है कि PC12 कोशिकाओं में 100 Mof 6-OHDA प्रेरित IL-1 और IL-6 रिलीज होता है। हालांकि, इचिनाकोसाइड के साथ उपचार खुराक-निर्भरता से आईएल -1 और आईएल -6 6- ओएचडीए द्वारा प्रेरित रिलीज को रोक सकता है। परिणाम बताते हैं कि भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को कम करना भी 6-OHDA- प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी के खिलाफ इचिनाकोसाइड के तंत्र में शामिल है।

निष्कर्ष में, इस शोध के परिणामों से पता चला कि इचिनाकोसाइड PC12 कोशिकाओं में 6-OHDA- प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी को अवरुद्ध करने में सक्षम था, और तंत्र ROS उत्पादन को कम करके माइटोकॉन्ड्रियल सुरक्षा और सूजन-रोधी से संबंधित हो सकता है। इस कार्य द्वारा प्रदान की गई जानकारी एंटी-पीडी के लिए इचिनाकोसाइड के तंत्र को स्पष्ट करने के लिए उपयोगी होगी। यह निष्कर्ष निकाला गया है कि पीडी की रोकथाम और उपचार के लिए इचिनाकोसाइड एक आशाजनक चिकित्सीय विकल्प हो सकता है।

रुचियों का भेद

लेखकों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है

स्वीकृतियाँ

इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81473383) और राष्ट्रीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी प्रमुख परियोजना (2012जेडएक्स09103101-078; 2013जेडएक्स09103-001-008; और 2013जेडएक्स09102106) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।