इचिनाकोसाइड मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट देता है और हृदय समारोह में सुधार करता है

संपर्क करना:joanna.jia@wecistanche.com/ व्हाट्सएप: 008618081934791

यजुआन Ni1|जी डेंग1|ज़िन लियू1|किंग ली1|जुआनली झांग1|होंगयुआन बाई1|जिंगवेन झांग2

सार

मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग एचएफ का एक महत्वपूर्ण रोग संबंधी आधार है, माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी, फाइब्रोसिस और एपोप्टोसिस का प्रमोटर है। ईसीएच एक पारंपरिक चीनी दवा सिस्टांच हर्बा का प्रमुख सक्रिय घटक है, बहुत सारे अध्ययनों से संकेत मिलता है कि इसमें तंत्रिका कोशिकाओं और ट्यूमर में एक मजबूत एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है, यह माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है, माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन की रक्षा करता है, लेकिन विशिष्ट तंत्र स्पष्ट नहीं है। SIRT1/FOXO3a/MnSOD एक महत्वपूर्ण एंटीऑक्सीडेंट अक्ष है, अध्ययन में पाया गया है कि ECH सहसंयोजक रूप से SIRT1 को एक लिगैंड के रूप में बांधता है और मस्तिष्क कोशिकाओं में SIRT1 की अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है। हम अनुमान लगाते हैं कि ECH मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट सकता है और SIRT1 / FOXO3a / MnSOD सिग्नलिंग अक्ष को विनियमित करके और कार्डियोमायोसाइट्स में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर HF के हृदय कार्य में सुधार कर सकता है। यहां, हम सबसे पहले एसी -16 कोशिकाओं के साथ आईएसओ द्वारा ऑक्सीडेटिव तनाव के एक सेलुलर मॉडल को प्रेरित करते हैं और ईसीएच के साथ पूर्व-उपचार, माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस का स्तर, एमटीडीएनए ऑक्सीडेटिव चोट, एमएमपी, कार्बोनिलेटेड प्रोटीन, लिपिड पेरोक्सीडेशन, इंट्रासेल्युलर आरओएस, और एपोप्टोसिस का पता लगाया जाता है, माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव और इन विट्रो में कार्य में ईसीएच के प्रभाव की पुष्टि करें। फिर, हम आईएसओ द्वारा प्रेरित एक एचएफ चूहा मॉडल स्थापित करते हैं और ईसीएच के साथ पूर्व-उपचार करते हैं। हृदय क्रिया के सूचकांक, मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग, माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव और कार्य, SIRT1 / FOXO3a / MnSOD सिग्नलिंग अक्ष की अभिव्यक्ति को मापा जाता है, डेटा इंगित करता है कि ECH हृदय कार्य में सुधार करता है, मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी को रोकता है, फाइब्रोसिस और एपोप्टोसिस SIRT1 / FOXO3a / की अभिव्यक्ति को बढ़ाता है। MnSOD सिग्नलिंग अक्ष, माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव क्षति को कम करता है, माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन की सुरक्षा करता है। हम यह निष्कर्ष निकालते हैं कि ECH मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट देता है और SIRT1 / FOXO3a / MnSOD अक्ष को विनियमित करके और HF चूहों में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर कार्डियक फ़ंक्शन में सुधार करता है।

कीवर्ड सेचिनकोसाइड, दिल की विफलता, माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव, मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग

ताजा जड़ी बूटियोंप्रतिमाइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव

1|परिचय

दिल की विफलता (एचएफ) उच्च प्रसार और खराब पूर्वानुमान के साथ अधिकांश कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों का अंतिम परिणाम है, और बढ़ती उम्र की आबादी की बढ़ती प्रवृत्ति के साथ, पुरानी दिल की विफलता (सीएचएफ) के कारण अस्पताल में भर्ती और मृत्यु दर पूरी दुनिया में तेजी से बढ़ी है।1 पिछले 20 वर्षों के दौरान, एचएफ के लिए दवा उपचार ने काफी प्रगति की है, लेकिन प्रभाव बहुत सीमित है, इसलिए नई दवाओं की तत्काल आवश्यकता है। मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग एचएफ का एक महत्वपूर्ण रोग संबंधी आधार है और इसकी विशेषता मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी, एपोप्टोसिस, इंटरस्टीशियल फाइब्रोसिस है, मायोकार्डियल कोशिकाएं अव्यवस्थित हैं, और इजेक्शन अंश (एलवीईएफ) में कमी, बाएं वेंट्रिकुलर एंड-डायस्टोलिक और सिस्टोलिक आयामों में वृद्धि होती है। (LVIDd और LVIDs), और लेफ्ट वेंट्रिकुलर फ्रैक्शनल शॉर्टनिंग (LVFS) की कमी। 2 लेकिन अंतर्निहित तंत्र अभी भी पूरी तरह से समझ में नहीं आया था। हाल के वर्षों में, कई अध्ययनों ने पुष्टि की है कि ऑक्सीडेटिव तनाव मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग का एक महत्वपूर्ण प्रमोटर है।3-7

ऑक्सीडेटिव तनाव एक ऐसी स्थिति है जिसमें प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) या मुक्त कण अत्यधिक उत्पन्न होते हैं और सेल घटकों के ऑक्सीडेटिव क्षति का कारण बनते हैं, यह बदले में, सेल की शिथिलता का कारण बनता है। 8 माइटोकॉन्ड्रिया इंट्रासेल्युलर आरओएस का मुख्य स्रोत है, जिसके परिणामस्वरूप श्वसन इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला से रिसाव, और माइटोकॉन्ड्रिया आरओएस प्रभावों के लिए सबसे संवेदनशील स्थिति है। एचएफ में अध्ययन ने श्वसन श्रृंखला के जटिल I से बढ़ी हुई आरओएस पीढ़ी की पहचान की। 8 बढ़े हुए आरओएस उत्पादन में सबसे पहले माइटोकॉन्ड्रियल घटकों पर हमला होता है और इसके परिणामस्वरूप अतिरिक्त ऑक्सीडेटिव तनाव होता है। , प्रोटीन के कार्बोनिलेशन, लिपिड पेरोक्सीडेशन, और डीएनए क्षति, 10 और माइटोकॉन्ड्रिया की शिथिलता के रूप में प्रकट होता है, जिसके परिणामस्वरूप आरओएस का अत्यधिक गठन होता है, 8 एक दुष्चक्र बनाता है। निरंतर ऑक्सीडेटिव तनाव का प्रदर्शन मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी और मायोकार्डियल फाइब्रोसिस का कारण बन सकता है, 11-13 और माइटोकॉन्ड्रिया-आश्रित एपोप्टोसिस के सक्रियण के माध्यम से माइटोकॉन्ड्रिया-निर्भर एपोप्टोसिस के कारण माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली प्रोटीन के कार्बोनिलेशन और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता के नुकसान के कारण मायोकार्डियल कोशिकाओं के एपोप्टोसिस का कारण बन सकता है। 14 तो , यह माना जाता है कि माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव का निषेध मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग और यहां तक ​​कि एचएफ को रोकने के लिए एक नई रणनीति हो सकती है।15-17

इचिनाकोसाइड (ईसीएच), एक प्राकृतिक फेनिलएथेनॉयड ग्लाइकोसाइड, सिस्टेनचेस हर्बा का प्रमुख सक्रिय घटक है, जो पारंपरिक चीनी दवा है। हाल के वर्षों में, तंत्रिका तंत्र और ट्यूमर में ईसीएच का बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है, और इसमें विभिन्न प्रकार के औषधीय प्रभाव होने की सूचना मिली है, जैसे कि एंटीऑक्सिडेंट, विरोधी भड़काऊ, एंटी-एपोप्टोसिस और एंटी-ट्यूमर गुण। तंत्रिका कोशिकाओं, ईसीएच काफी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को बढ़ाता है, आरओएस उत्पादन को कम करता है, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता (एमएमपी) में सुधार करता है, और सेल व्यवहार्यता बढ़ाता है, 20 माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन पर सुरक्षात्मक प्रभाव प्रदर्शित करता है और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है, यह ऑक्सीडेटिव चोट से बचाता है और स्मृति में सुधार करता है, अंततः रोकता है neurodegeneration.21,22 ECH भी SOD की गतिविधि को बढ़ाता है और मस्तिष्क के ऊतकों और रेटिना के ऊतकों में एक सुरक्षात्मक भूमिका निभाता है, 19,23 लेकिन इसके एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव के लिए विशिष्ट तंत्र स्पष्ट नहीं है।

SIRT1 ऑक्सीडेटिव तनाव से निकटता से संबंधित है, और SIRT1 / FOXO3a / MnSOD सिग्नलिंग अक्ष सबसे महत्वपूर्ण एंटीऑक्सिडेंट अक्ष है और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव के दमन के लिए जिम्मेदार है, MnSOD माइटोकॉन्ड्रिया में व्यापक रूप से वितरित करता है और मुख्य रूप से माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस के समाशोधन के लिए जिम्मेदार है, इस प्रकार ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकना, यौगिक जो इस एंटीऑक्सिडेंट अक्ष को सक्रिय करते हैं, ऑक्सीडेटिव तनाव को रोक सकते हैं। 24,25 हाल के अध्ययनों से पता चला है कि ईसीएच पी-एकेटी, एमटीओआर / एसटीएटी 3, टीजीएफ-बीटा 1 / स्मैड जैसे कई सिग्नलिंग मार्गों को विनियमित करके अपने औषधीय प्रभाव डालता है। , और SIRT1 सिग्नलिंग मार्ग। 26-29 एक नए अध्ययन में पाया गया है कि ECH सहसंयोजक रूप से SIRT1 को एक लिगैंड के रूप में बांधता है और मस्तिष्क कोशिकाओं में SIRT1 की अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है। 26 यह सुझाव देता है कि ECH कार्डियोमायोसाइट्स में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोक सकता है और मायोकार्डियल को उलट सकता है। रीमॉडलिंग हालांकि, ईसीएच के प्रभावों पर शोध ने तंत्रिका तंत्र या ट्यूमर पर ध्यान केंद्रित किया है, कार्डियोमायोसाइट्स और मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव पर ईसीएच के प्रभाव और तंत्र अज्ञात रहते हैं। यहां, हम सबसे पहले आईएसओ द्वारा ऑक्सीडेटिव तनाव के एक सेलुलर मॉडल को प्रेरित करते हैं और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव और इन विट्रो में कार्य पर ईसीएच के प्रभाव की पुष्टि करते हैं। फिर, हम आईएसओ द्वारा प्रेरित एक एचएफ चूहा मॉडल स्थापित करते हैं और प्रदर्शित करते हैं कि ईसीएच मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट देता है और एसआईआरटी 1 / फॉक्सो 3 ए / एमएनएसओडी सिग्नलिंग अक्ष को विनियमित करके और एचएफ चूहों में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर कार्डियक फ़ंक्शन में सुधार करता है। परिणामों का उद्देश्य दिल की विफलता को रोकने के लिए नई दवाओं के विकास के लिए प्रायोगिक साक्ष्य प्रदान करना है।

2|सामग्री और तरीके

2.1|सेल संस्कृति और उपचार

AC16 सेल बेना कल्चर कलेक्शन से खरीदे जाते हैं। कोशिकाओं को उच्च ग्लूकोज डल्बेको के संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम; हाइक्लोन, जीई हेल्थकेयर, यूएसए) में रखा जाता है, जिसमें 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (10 प्रतिशत एफबीएस; गिब्को) टी -75 फ्लास्क (कॉर्निंग ग्लासवर्क्स, कॉर्निंग, एनवाई, यूएसए)। 5 प्रतिशत CO2 युक्त आर्द्र वातावरण में स्थितियां 37 डिग्री पर बनी रहती हैं। एक बार जब कोशिकाएं 70 प्रतिशत -80 प्रतिशत संगम तक पहुंच जाती हैं, तो आईएसओ (सिग्मा, यूएसए) समूह कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 10uM आईएसओ (सिग्मा, यूएसए) वाले माध्यम से इनक्यूबेट किया जाता है, ECH समूह कोशिकाओं को 50uM ECH (MCE) के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। , यूएसए) 30 मिनट पूर्व आईएसओ एक्सपोजर के लिए। नियंत्रण कोशिकाओं (Ctrl) का इलाज कुछ भी नहीं किया जाता है।

बिक्री के लिए सिस्टैंचनिचोड़

2.2|ल्यूमिनॉल केमिलुमिनेसेंस का उपयोग करके माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस स्तर का पता लगाना

माइटोकॉन्ड्रिया को निर्माता के निर्देशों के अनुसार माइटोकॉन्ड्रिया आइसोलेशन किट (सिग्मा, यूएसए) का उपयोग करके एसी -16 कोशिकाओं से पृथक और शुद्ध किया जाता है। प्रोटीन सांद्रता बीसीए प्रोटीन परख किट (बायोटेक) द्वारा निर्धारित की जाती है। माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस स्तर का पता एलिसा किट का उपयोग करके ल्यूमिनल (3-एमिनोफथेलिक हाइड्राज़ाइड 5-एमिनो-2,3-डायहाइड्रो-1,4-फ़थलज़ीनेडियोन) द्वारा लगाया जाता है। (GERMED SCIENTIFIC INC, USA), यह ROS के साथ प्रतिक्रिया करता है और फोटॉनों के उत्सर्जन का कारण बनता है, जो कि एक बैंड स्पेक्ट्रम है जिसका शिखर लगभग 460nm है, और सापेक्ष प्रकाश इकाई (RLU) को केमिलुमिनेसिसेंस मापक यंत्र द्वारा पता लगाया जाता है और RLU/ug में परिवर्तित किया जाता है। माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन।

2.3|8-OHdG का उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए के ऑक्सीडेटिव क्षति का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है

माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए ऑक्सीडेटिव क्षति का मूल्यांकन 8-हाइड्रॉक्सी-2-डीऑक्सीगुआनोसिन (8-OHG) की सामग्री का पता लगाकर किया जाता है। कोशिकाओं में शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया को ऊपर (सिग्मा) के रूप में माइटोकॉन्ड्रिया आइसोलेशन किट का उपयोग करके अलग किया जाता है। प्रोटीन सांद्रता बीसीए प्रोटीन परख किट (बायोटेक) द्वारा निर्धारित की जाती है। फिर, निर्माता के निर्देशों के अनुसार एलिसा किट (GERMED SCIENTIFIC INC, USA) का उपयोग करके 8-OHdG के स्तर को निर्धारित करने के लिए उन्हें अलग कर दिया जाता है। रंग परिवर्तन का अवशोषण एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर में 450 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर मापा जाता है। नमूनों में 8-OHdG की सांद्रता तब नमूनों के OD की मानक वक्र से तुलना करके और ng/ml में परिवर्तित करके निर्धारित की जाती है।

2.4|जेसी द्वारा एमएमपी का मापन-1

माइटोकॉन्ड्रिया पृथक और एसी से शुद्ध होते हैं -16 और प्रोटीन सांद्रता ऊपर बताए अनुसार निर्धारित की जाती है। फिर माइटोकॉन्ड्रिया को 1mg/ml सांद्रता पर फिर से निलंबित कर दिया जाता है, MMP को निर्माता के निर्देशों के अनुसार JC-1 परख किट का उपयोग करके मापा जाता है। प्रतिदीप्ति तीव्रता को उत्तेजना तरंग दैर्ध्य पर मापा जाता है: 490nm, भट्ठा 5nm, उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य: 590 एनएम, एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर उपकरण के साथ 5nm भट्ठा, 30 परिणाम FLU / ugP के रूप में दर्शाए जाते हैं।

2.5|एसी में प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा एपोप्टोटिक कोशिकाओं का पता लगाना-16 कोशिकाएं

फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग सेलुलर एपोप्टोसिस का आकलन करने के लिए किया जाता है। आपूर्तिकर्ता के निर्देशों के अनुसार एपोप्टोटिक और नेक्रोटिक कोशिकाओं का पता लगाने के लिए एनेक्सिन वी-एफआईटीसी/पीआई एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट (सीडब्ल्यूबीआईओ, चीन) का उपयोग किया जाता है। अर्ली-स्टेज एपोप्टोसिस, लेट-स्टेज एपोप्टोसिस या नेक्रोसिस, सेल्युलर मलबे और व्यवहार्य कोशिकाओं की पहचान एनेक्सिन वी (प्लस) / पीआई (-), एनेक्सिन वी (प्लस) / पीआई (प्लस), एनेक्सिन वी (-) / पीआई के रूप में की जाती है। (प्लस) और एनेक्सिन वी (-)/पीआई (-), क्रमशः। एक प्रवाह साइटोमीटर (BD FACSVerse™ Flow Cytometer, BD Biosciences, San Jose, CA, USA) का उपयोग करके प्रतिदीप्ति तीव्रता का विश्लेषण किया जाता है। प्रत्येक प्रयोग 3 बार दोहराया जाता है।

2.6|प्रवाह साइटोमीटर द्वारा इंट्रासेल्युलर आरओएस का आकलन किया गया

उपचार के बाद, कोशिकाओं को ट्रिप्सिनाइज़ किया जाता है, दो बार पीबीएस से धोया जाता है। कोशिकाओं को तब पीबीएस में पुन: निलंबित किया जाता है, 1 माइक्रोन की अंतिम एकाग्रता पर डीसीएफएच-डीए (बायोटाइम, चीन) के साथ दाग दिया जाता है और सीओ 2 के साथ एक इनक्यूबेटर में 37 डिग्री पर 1 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है, और फिर 488 एनएम उत्तेजना पर प्रवाह साइटोमीटर में परीक्षण किया जाता है। . प्रतिदीप्ति तीव्रता इंट्रासेल्युलर आरओएस के स्तर का प्रतिनिधित्व करती है।

2.7|AC-16 कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में कार्बोनिल प्रोटीन सामग्री का परीक्षण करें

उपचार के बाद, शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया को अलग किया जाता है और बर्फ पर सोनिकेट किया जाता है और माइटोकॉन्ड्रियल न्यूक्लिक एसिड को अवक्षेपित करने के लिए 1 प्रतिशत स्ट्रेप्टोमाइसिन सल्फेट के साथ इलाज किया जाता है, प्रोटीन एकाग्रता निर्धारित की जाती है। कार्बोनिल प्रोटीन सामग्री का परीक्षण एलिसा किट (GERMED SCIENTIFIC INC, USA) का उपयोग करके किया जाता है, जो कि कार्बोनिल समूह के डाइनाइट्रोफेनिलहाइड्राजाइन (DNPH) के व्युत्पन्नीकरण पर आधारित होता है, किट के निर्देशों के अनुसार, OD को एक माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा मापा जाता है और nmol/ में परिवर्तित किया जाता है। मानक वक्र की तुलना में मिलीग्राम प्रोटीन।

2.8|एसी -16 कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में लिपिड पेरोक्सीडेशन स्तर का निर्धारण

उपचार के बाद, कोशिकाओं को एकत्र किया जाता है और लाइस किया जाता है, माइटोकॉन्ड्रिया को अलग किया जाता है और शुद्ध किया जाता है, और अल्ट्रासाउंड द्वारा क्रैक किया जाता है, प्रोटीन एकाग्रता बीसीए प्रोटीन परख किट (बायोटेक) द्वारा निर्धारित किया जाता है, लिपिड पेरोक्सीडेशन टीबीएआरएस परख के माध्यम से malondialdehyde (एमडीए) के स्तर से निर्धारित होता है। , एक किट (नान जिंग जियान चेंग, चीन) और एमडीए स्तर का उपयोग करके निर्माता के प्रोटोकॉल के बाद मापा जाता है। एक माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा 586 एनएम पर OD का पता लगाया जाता है और मानक वक्र की तुलना में μmol/g प्रोटीन में परिवर्तित किया जाता है।

2.9|पशु और उपचार

शीआन जिओ टोंग यूनिवर्सिटी लेबोरेटोरियल एनिमल सेंटर (शानक्सी, चीन) से 120-140g वजन वाले युवा नर स्प्राग-डावले चूहों को प्राप्त किया जाता है। यह जांच द गाइड फॉर द केयर एंड यूज ऑफ लेबोरेटरी एनिमल्स के अनुरूप है, जिसे यूएस नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (एनआईएच प्रकाशन संख्या 85-23, 1996 में संशोधित) द्वारा प्रकाशित किया गया था, और प्रायोगिक प्रोटोकॉल को स्थानीय अधिकारियों द्वारा अनुमोदित किया गया था ( शी 'एक जिओ टोंग विश्वविद्यालय के चिकित्सा विभाग की बायोमेडिकल एथिक्स कमेटी)। एचएफ का चूहा मॉडल हमारे द्वारा पहले वर्णित के रूप में स्थापित किया गया है। 31 संक्षेप में, आइसोप्रोटेरेनॉल (1 0 मिलीग्राम / किग्रा) को 2 सप्ताह के लिए इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा प्रतिदिन एक बार प्रशासित किया जाता है (एचएफ समूह के रूप में परिभाषित), ईसीएच को 20 के साथ प्रशासित किया जाता है। आईएसओ का इलाज करने से पहले 30 मिनट पर इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा प्रतिदिन एक बार यूजी / जी (ईसीएच समूह के रूप में परिभाषित), और प्रशासन 2 सप्ताह तक रहता है। नियंत्रण जानवरों को 0.9 प्रतिशत NaCl (Ctrl समूह के रूप में परिभाषित) के साथ प्रशासित किया जाता है। इकोकार्डियोग्राफी माप हृदय समारोह का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है।

2.10|इकोकार्डियोग्राफिक माप

जानवरों को 300 मिलीग्राम/किलोग्राम क्लोरल हाइड्रेट के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया जाता है। 7.5 मेगाहर्ट्ज (एचपी, यूएसए) के अल्ट्रासाउंड ट्रांसड्यूसर के साथ सोनोस -2500 अल्ट्रासाउंड सिस्टम का उपयोग इकोकार्डियोग्राफिक परीक्षा करने के लिए किया जाता है। लेफ्ट वेंट्रिकुलर इजेक्शन फ्रैक्शन (LVEF), लेफ्ट वेंट्रिकुलर फ्रैक्शनल शॉर्टनिंग (LVFS), लेफ्ट वेंट्रिकुलर एंड-डायस्टोलिक डाइमेंशन (LVIDd), लेफ्ट वेंट्रिकुलर एंड-सिस्टोलिक डाइमेंशन (LVIDs), हार्ट रेट (HR), डायस्टोल में इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टल थिकनेस (IVSTd) ), डायस्टोल (एलवीपीडब्ल्यूटीडी) में बाएं वेंट्रिकुलर पश्च दीवार की मोटाई को हमारे द्वारा पहले वर्णित के रूप में मापा जाता है। 32

फिगर 1 50μmol ECH, 10μmol/L ISO से प्रेरित एसी-16 कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को प्रभावी ढंग से रोकता है और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन की रक्षा करता है और एपोप्टोसिस को कम करता है।

2.11|दिल के वजन से शरीर के वजन का अनुपात (HW/BW) मापा जाता है

एनेस्थेटिज़ेशन से पहले चूहे का वजन किया जाता है, ताजा दिल को अलग किया जाता है और रक्त को 0.1mol/L पीबीएस, कटे हुए जहाजों और अन्य अनावश्यक ऊतकों से धोया जाता है और हृदय का वजन किया जाता है, तो HW/BW(mg/100g) है गणना की।

2.12|ऊतकीय धुंधलापन

चूहों के दिल विच्छेदित होते हैं और 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय होते हैं, पैराफिन में एम्बेडेड होते हैं, और 5 माइक्रोन-मोटी स्लाइस में विभाजित होते हैं। हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन (एचई) धुंधला का उपयोग रोग संबंधी परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है और मेसन के ट्राइक्रोम का उपयोग चूहों के मायोकार्डियम ऊतक के कोलेजन फाइबर का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है। कार्डियक कोलेजन वॉल्यूम अंश (सीवीएफ) और कार्डियोमायोसाइट्स क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र को इमेज-प्रो प्लस 6.0 (मीडिया साइबरनेटिक्स, बेथेस्डा, एमडी, यूएसए) से मापा जाता है।

2.13|ट्यूनेल धुंधला हो जाना

बाएं वेंट्रिकल से मायोकार्डियल ऊतक एकत्र किया जाता है और ट्यूनल परख को हमारे द्वारा पहले वर्णित के रूप में किया जाता है।

2.14|इलेक्ट्रान सम्प्रेषित दूरदर्शी

ताजा हृदय ऊतक को 2.5 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड में 4 डिग्री पर तय किया जाता है, फिर ऊतक को 1 मिमी3 मात्रा में काटा जाता है और 2 घंटे के लिए 4 डिग्री पर 2.5 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड में फिर से तय किया जाता है, फिर 0 से धोया जाता है। 1mol/L पीबीएस, फिक्स्ड 1 प्रतिशत ऑस्मिक एसिड में, एसीटोन के साथ निर्जलित, एपॉक्सी राल के साथ एम्बेडेड, अल्ट्राथिन स्लाइस जो लगभग 8 0 0nm पतले होते हैं, यूरेनिल एसीटेट और लेड साइट्रेट से सना हुआ होता है, और फिर एक ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (H{) के तहत देखा जाता है। {13}}, हिताची लिमिटेड, जापान)। माइटोकॉन्ड्रियल आकारिकी में ईसीएच के सुरक्षात्मक प्रभाव की मात्रा निर्धारित करने के लिए, माध्य माइटोकॉन्ड्रियल परिधि, माध्य माइटोकॉन्ड्रियल क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र, अध: पतन का प्रतिशत, और माइटोकॉन्ड्रिया में टीकाकरण का प्रतिशत इमेज-प्रो प्लस 6.0 (मीडिया साइबरनेटिक्स, यूएसए) के साथ सांख्यिकीय रूप से विश्लेषण किया जाता है।

2.15|मात्रात्मक पीसीआर

टोटल आरएनए को ट्राईजोल रिएजेंट (इनविट्रोजन, कार्ल्सबैड, यूएसए) के साथ बाएं वेंट्रिकुलर ऊतक से तैयार किया जाता है। सीडीएनए को ट्यूरेस्क्रिप्ट 1 स्ट्रैंड सीडीएनए सिंथेसिस किट (तकरा, जापान) का उपयोग करके संश्लेषित किया गया है। वास्तविक समय पीसीआर के लिए उपयोग किए गए कोलेजन के विशिष्ट प्राइमर अनुक्रम इस प्रकार हैं: आगे: 5′-GTCGTATCCAGTGCGTGTC-3′, रिवर्स: 5′-GTGGAGTCGGCAATTGCA-3′। GAPDH फॉरवर्ड 5'-GGC AAG GTC ATC CCA GAG CT-3', रिवर्स 5'-CGC CTG CTT CAC CAC CTT CT-3'। रीयल-टाइम क्वांटिटेटिव PCR (qPCR) SYBRPremix Ex के साथ किया जाता है। टाक (परफेक्ट रियल टाइम) (तकरा, जापान)। mRNA के सापेक्ष स्तर की गणना 2-ΔΔCT विधि के अनुसार GAPDH को सामान्य करके की जाती है।

2.16|SIRT1, FOXO3a, MnSOD प्रोटीन अभिव्यक्ति का पश्चिमी धब्बा विश्लेषण

प्रोटीज इनहिबिटर कॉकटेल (सिग्मा-एल्ड्रिच) के साथ ठंडे RIPA बफर (BioRad, USA) का उपयोग करके बाएं वेंट्रिकुलर ऊतक का कुल प्रोटीन बर्फ पर निकाला जाता है। एकाग्रता बीसीए विधि द्वारा निर्धारित की जाती है। पश्चिमी धब्बा की प्रक्रियाओं को पहले वर्णित किया गया है। 33 संक्षेप में, प्रोटीन के नमूने को 15 प्रतिशत सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जैल पर विभाजित किया जाता है, जिसे पीवीडीएफ झिल्ली (बायोरैड, यूएसए) में स्थानांतरित किया जाता है, 5 प्रतिशत स्किम दूध द्वारा अवरुद्ध किया जाता है, और माउस से एमवाईएच एंटीबॉडी के साथ इनक्यूबेट किया जाता है। (पतला 1:200, सांता क्रूज़, यूएसए)। फिर, एक हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित बकरी माउस एंटीबॉडी (पतला 1:2, 000, सांता क्रूज़, यूएसए) के साथ ऊष्मायन किया गया। प्रोटीन के सापेक्ष स्तर की गणना -एक्टिन के माध्य किरण मान को सामान्य करके की जाती है। प्रोटीन बैंड का पता एक रसायनयुक्त प्रणाली (केमीडॉक एक्सआरएस, बायोरेड) द्वारा लगाया जाता है।

2.17|चूहे के मायोकार्डियम में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव का मापन

चूहे के मायोकार्डियम के शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया को निर्माता के निर्देशों के अनुसार माइटोकॉन्ड्रिया आइसोलेशन किट (सिग्मा, यूएसए) का उपयोग करके अलग किया जाता है, माइटोकॉन्ड्रिया में माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस, एमएमपी, एमटीडीएनए की ऑक्सीडेटिव क्षति, कार्बोनिलेटेड प्रोटीन सामग्री और माइटोकॉन्ड्रिया में लिपिड पेरोक्सीडेशन स्तर सभी का पता उसी तरीके से लगाया जाता है। ऊपर वर्णित सेल प्रयोग। ध्यान दें, मायोकार्डियल ऊतक में आरओएस का पता डीसीएफएच-डीए फ्लोरोसेंट जांच से लगाया जाता है, एंजाइम-लेबलिंग मापने वाले उपकरण के साथ प्रतिदीप्ति तीव्रता का पता लगाया जाता है, परिणाम आरएलयू / यूजी माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन के रूप में दर्शाए जाते हैं।

2.18|सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी डेटा को ± SEM के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। एकतरफा एनोवा का उपयोग कई समूहों के बीच अंतर की तुलना करने के लिए किया जाता है, इसके बाद महत्व के लिए तुकी पोस्ट हॉक टेस्ट किया जाता है। सभी आँकड़े SPSS15.0 सॉफ़्टवेयर (SPSS Inc, IL, USA) का उपयोग करके निर्धारित किए जाते हैं। P <.05 का="" एक="" प्रायिकता="" मान="" महत्वपूर्ण="" माना="" जाता="">

3|परिणाम

3.1|50 माइक्रोन ईसीएच एसी -16 कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव क्षति और एपोप्टोसिस को प्रभावी ढंग से रोकता है

अनुपचारित कोशिकाओं को एक Ctrl समूह के रूप में सेट किया जाता है। सबसे पहले, जैसा कि चित्र 1ए दिखाता है, ईसीएच आईएसओ द्वारा प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस को रोकता है। आईएसओ उपचारित कोशिकाएं Ctrl की तुलना में माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस में उल्लेखनीय वृद्धि दिखाती हैं और यह वृद्धि 50 μM ECH के साथ पूर्व-उपचार द्वारा महत्वपूर्ण रूप से देखी जाती है। दूसरे, ईसीएच आईएसओ द्वारा प्रेरित एमटीडीएनए के ऑक्सीडेटिव क्षति को रोक सकता है। 8-ओएचडीजी को ऑक्सीडेटिव तनाव से उत्पन्न होने वाले सबसे प्रचुर डीएनए घावों में से एक माना जाता है और यह ऑक्सीडेटिव डीएनए क्षति और मरम्मत का बायोमार्कर है। जैसा कि चित्र 1बी दिखाता है, एसी -16 कोशिकाओं से शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया में 8-OHdG की सामग्री का पता चला है, परिणाम बताते हैं कि आईएसओ उपचारित कोशिकाओं से माइटोकॉन्ड्रिया में 8-OHdG का स्तर नाटकीय रूप से बढ़ गया है, लेकिन परिवर्तन 50 μM ECH द्वारा उलट दिया गया था। तीसरा, ईसीएच एमएमपी की सुरक्षा के लिए प्रभावी है, जो आईएसओ से प्रभावित है। Ctrl कोशिकाओं की तुलना में ISO से उपचारित कोशिकाओं में प्रतिदीप्ति तीव्रता काफी कम हो जाती है, जबकि 50 μM ECH के साथ पूर्व-उपचार उल्लेखनीय रूप से MMP की कमी को दर्शाता है, जैसा कि चित्र 1C से पता चलता है। चौथा, ईसीएच एसी -16 कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन के ऑक्सीडेटिव क्षति से बचाता है। जैसा कि चित्र 1डी दिखाता है, आईएसओ उपचार कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में कार्बोनिल प्रोटीन सामग्री काफी बढ़ जाती है और ईसीएच प्रभाव को कम कर देता है। पांचवां, ईसीएच आईएसओ द्वारा प्रेरित एसी -16 कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल लिपिड पेरोक्सीडेशन को भी रोकता है। जैसा कि चित्र 1ई दिखाता है, आईएसओ कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में लिपिड पेरोक्साइड का स्तर स्पष्ट रूप से Ctrl कोशिकाओं की तुलना में अधिक है, जबकि यह वृद्धि 50μM ECH पूर्व-उपचार से काफी कम हो जाती है। अंततः, ईसीएच इंट्रासेल्युलर आरओएस के संचय को रोकता है। जैसा कि चित्र 1F दिखाता है, ISO कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर ROS का स्तर स्पष्ट रूप से बढ़ जाता है और ECH पूर्व-उपचारित कोशिकाओं में प्रमुख रूप से कम हो जाता है। चित्र 1G दिखाता है कि Ctrl कोशिकाओं की तुलना में AC -16 कोशिकाओं की एपोप्टोसिस दर 10μM ISO के साथ 24 घंटे ऊष्मायन के बाद काफी बढ़ जाती है, जबकि 50 μM ECH के साथ पूर्व-उपचार कोशिकाएं आईएसओ-प्रेरित एपोप्टोसिस को काफी कम कर देती हैं।

चित्र 2 आईएसओ द्वारा प्रेरित एचएफ चूहों की कार्डियक हाइपरट्रॉफी से राहत मिली है और ईसीएच उपचार से हृदय की कार्यक्षमता में काफी सुधार हुआ है।

3.2|ईसीएच मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट देता है और आईएसओ-प्रेरित एचएफ चूहों के कार्डियक फ़ंक्शन में सुधार करता है

जैसा कि चित्र 2कमें दिखाया गया है, एचएफ चूहों में दिल स्पष्ट अतिवृद्धि हैं और ईसीएच के साथ उपचार द्वारा उलट दिए जाते हैं। जैसा कि आंकड़े 2बी-डी और एल दिखाते हैं, ईसीएच एचडब्ल्यू/बीडब्ल्यू को कम करता है। इकोकार्डियोग्राफी के परिणाम बताते हैं कि एचएफ समूह में एलवीईएफ और एलवीएफएस काफी कम हो गए हैं, एलवीआईडीडी, एलवीआईडी, और आईवीएसटीडी एचएफ समूह में काफी बढ़ गए हैं। हालाँकि, ECH LVIDd, LVIDs, IVSTd को काफी कम कर देता है और LVEF और LVFS में सुधार करता है, तीन समूहों के बीच HR में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं है, LVPWTd को HF में बढ़ाया जाता है, लेकिन ECH और Ctrl के बीच या ECH और HF के बीच कोई अंतर नहीं होता है। चित्रा 2ई-के दिखाता है। एचई धुंधला के परिणाम इंगित करते हैं कि मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी, व्यवस्थित विकार या अध: पतन नेक्रोसिस, भड़काऊ सेल घुसपैठ और एचएफ चूहों में अंतरालीय हाइपरमिया और एडिमा, और ईसीएच इन नुकसानों को काफी कम करता है, मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी और व्यवस्थित विकार से राहत मिलती है, अध: पतन परिगलन और भड़काऊ घुसपैठ कम हो जाती है, जैसा कि चित्र 3ए में दिखाया गया है। कार्डियोमायोसाइट के क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र को मापा जाता है, यह आईएसओ के बाद काफी बढ़ जाता है और ईसीएच उपचारित समूह में कम हो जाता है, जैसा कि चित्र 3ई से पता चलता है। मैसन स्टेनिंग द्वारा कोलेजन जमाव के आकलन से पता चलता है कि एचएफ चूहों में बाएं वेंट्रिकुलर कोलेजन सामग्री स्पष्ट रूप से बढ़ जाती है और जाहिर तौर पर ईसीएच के साथ उपचार के बाद कम हो जाती है, जो स्पष्ट रूप से सीवीएफ कम हो जाती है। रीयल-टाइम पीसीआर विश्लेषण से पता चलता है कि प्रोकोलेजन प्रकार टेप आईएसओ चूहों में ऊपर-विनियमित होते हैं और ईसीएच चूहों में डाउन-विनियमित होते हैं, ये परिणाम एक दूसरे के अनुरूप होते हैं, जैसा कि आंकड़े 3 बी और एफजी दिखाते हैं, डेटा इंगित करता है कि ईसीएच प्रभावी रूप से कोलेजन बयान को कम करता है . कार्डियोमायोसाइट्स में ट्यूनल-पॉजिटिव कोशिकाओं की संख्या में Ctrl की तुलना में एचएफ चूहों में काफी वृद्धि हुई है, ईसीएच स्पष्ट रूप से मायोकार्डियल सेल एपोप्टोसिस को कम करता है, और चित्रा 3सी-डी संबंधित निम्न और उच्च शक्ति क्षेत्रों में ट्यूनेल-पॉजिटिव कोशिकाओं की प्रतिनिधि छवि दिखाता है, और चित्रा 3H मायोकार्डियल कोशिकाओं की एपोप्टोसिस दर को दर्शाता है। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि ईसीएच प्रभावी रूप से मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी, मायोकार्डियल इंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस और एपोप्टोसिस को उलट देता है, और आईएसओ द्वारा प्रेरित एचएफ चूहों में हृदय समारोह में सुधार करता है।

चित्र 3 हिस्टोलॉजिकल धुंधलापन के परिणाम प्रदर्शित करते हैं कि ईसीएच आईएसओ द्वारा प्रेरित एचएफ चूहों के बाएं वेंट्रिकुलर रीमॉडेलिंग को उलट देता है।

3.3|ईसीएच एचएफ चूहों में मायोकार्डियल अल्ट्रास्ट्रक्चर की रक्षा करता है

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ परिणाम दिखाते हैं कि मायोकार्डियल अल्ट्रास्ट्रक्चर को नुकसान ईसीएच द्वारा देखा जा सकता है, जैसा कि चित्र 4ए-बी से पता चलता है। मायोफिब्रिल्स ऊर्ध्वाधर व्यवस्था हैं, सरकोमेरे संरचना स्पष्ट है, मायोफिलामेंट्स बड़े करीने से व्यवस्थित हैं, और जेड लाइन स्पष्ट है। माइटोकॉन्ड्रिया बड़े करीने से व्यवस्थित होते हैं और Ctrl चूहों में संरचना स्पष्ट होती है। हालांकि, मायोफिब्रिल्स अव्यवस्थित, टूटा हुआ और भंग हो जाता है, सरकोमेरे संरचना अस्पष्ट होती है, जेड लाइन की अनुपस्थिति, मायोकार्डियल संकुचन क्षेत्र दिखाई देता है, माइटोकॉन्ड्रिया की संख्या और मात्रा बढ़ जाती है, माइटोकॉन्ड्रिया विभिन्न आकार और आकार होते हैं, विकार में व्यवस्थित होते हैं, संरचना अस्पष्ट है, सूजन और क्राइस्टा विखंडन, पतन या क्लंपिंग और एचएफ चूहों में रिक्तिका में भंग हो गया है। ईसीएच स्पष्ट रूप से इन परिवर्तनों को दर्शाता है, हृदय की मांसपेशी फाइबर के बहुमत बड़े करीने से व्यवस्थित होते हैं और मायोकार्डियल फिलामेंट्स स्पष्ट होते हैं, जेड लाइन अस्तित्व में है, हालांकि फिलामेंट्स का कुछ विघटन स्पष्ट है, सरकोमेरे संरचना स्पष्ट है, माइटोकॉन्ड्रियल का घनत्व कम हो गया है, आकार और आकार कम हो जाते हैं, अधिक साफ-सुथरे ढंग से व्यवस्थित होते हैं, माइटोकॉन्ड्रिया सूजन और क्राइस्टा विखंडन, पतन या क्लंपिंग, और एचएफ की तुलना में ईसीएच द्वारा टीकाकरण स्पष्ट रूप से कम हो जाता है। माइटोकॉन्ड्रिया सूजन और क्राइस्टा विखंडन, पतन या क्लंपिंग, और आंशिक टीकाकरण को माइटोकॉन्ड्रियल अध: पतन के रूप में पहचाना जाता है। परिणाम प्रदर्शित करते हैं कि ईसीएच प्रभावी रूप से मायोकार्डियल अल्ट्रास्ट्रक्चर की रक्षा करता है, और विशेष रूप से एचएफ चूहों में माइटोकॉन्ड्रियल आकारिकी की रक्षा करता है, जैसा कि चित्र 4सी-एफ से पता चलता है।

चित्र 4 ईसीएच आईएसओ द्वारा प्रेरित एचएफ चूहों के कार्डियोमायोसाइट्स और माइटोकॉन्ड्रियल आकारिकी की संरचना की रक्षा करता है।

3.4|ECH SIRT1, FOXO3a और MnSOD . की प्रोटीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है

पश्चिमी धब्बा विश्लेषण दर्शाता है कि SIRT1, FOXO3a, और MnSOD का प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर HF चूहों में काफी कम-विनियमित है, हालांकि, ECH स्पष्ट रूप से घटी हुई प्रोटीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है। इम्युनोब्लॉटिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण परिणामों के प्रतिनिधि प्रोटीन बैंड चित्र 5 में दिखाए गए हैं। डेटा का हिस्सा इंगित करता है कि ECH SIRT1, FOXO3a और MnSOD की प्रोटीन अभिव्यक्ति को बढ़ाता है।

3.5|ईसीएच बाएं वेंट्रिकुलर मायोकार्डियल ऊतक में माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है

इस भाग में, माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस, एमएमपी, माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए की ऑक्सीडेटिव क्षति, कार्बोनिल प्रोटीन सामग्री, और चूहों के बाएं वेंट्रिकुलर मायोकार्डियल ऊतक में माइटोकॉन्ड्रिया में लिपिड पेरोक्सीडेशन स्तर सभी को मापा जाता है, और परिणाम सेल प्रयोगों के अनुरूप होते हैं, अर्थात, ईसीएच माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस को कम करता है, एमएमपी की रक्षा करता है, एमटीडीएनए की क्षति की डिग्री से राहत देता है, माइटोकॉन्ड्रियल में कार्बोनिल प्रोटीन सामग्री और लिपिड पेरोक्सीडेशन को कम करता है, जैसा कि चित्र 6 दिखाता है।

चित्र 5 ECH SIRT1, FOXO3a, और MnSOD के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर को नियंत्रित करता है जो HF चूहों में डाउन-रेगुलेटेड होता है।

4|बहस

यह अध्ययन दर्शाता है कि ECH SIRT1/FOXO3a/MnSOD सिग्नलिंग अक्ष को विनियमित करके और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग की रोकथाम और हृदय समारोह में सुधार में प्रभावी भूमिका निभाता है।

माइटोकॉन्ड्रिया ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण के उप-उत्पाद के रूप में आरओएस की पीढ़ी का प्रमुख स्थल है, आरओएस से उनकी निकटता के कारण, माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन, लिपिड, और एमटीडीएनए को माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस के अत्यधिक उत्सर्जन के बाद ऑक्सीडेटिव क्षति का प्राथमिक लक्ष्य माना जाता है, 34,35 यह क्षति आरओएस के आगे उत्पादन को उत्तेजित करती है, दुष्चक्र जारी रहता है, आरओएस और ऑक्सीडेटिव तनाव कई सिग्नलिंग मार्गों के सक्रियण के माध्यम से मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी, एपोप्टोसिस, इंटरस्टीशियल फाइब्रोसिस और एचएफ को जन्म दे सकता है। 35 तो, ऐसा लगता है कि दवाएं जो माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव के निषेध को लक्षित करती हैं। मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग की रोकथाम के लिए तनाव प्रभावी हैं। ECH एक प्राकृतिक फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड है, जो पारंपरिक चीनी जड़ी-बूटी सिस्टैंच ट्यूबुलोसा का एक घटक है। यह व्यापक रूप से अध्ययन किया गया है और हाल के वर्षों में औषधीय गतिविधियों के प्रकार के अधिकारी साबित हुए हैं, जैसे कि एंटी-ट्यूमर, एंटी-एपोप्टोसिस, एंटी-एजिंग, न्यूरोप्रोटेक्टिव एक्शन, और इसी तरह। अध्ययनों ने साबित किया है कि ईसीएच की औषधीय क्रियाएं मुख्य रूप से एंटीऑक्सिडेंट और विरोधी भड़काऊ गतिविधि की संपत्ति पर निर्भर करती हैं, 18,21 और ईसीएच माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस को कम करती है और तंत्रिका कोशिकाओं में ऑक्सीडेटिव क्षति के खिलाफ माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन की रक्षा करती है। यहां, हमने सबसे पहले यह प्रदर्शित किया कि ईसीएच कार्डियोमायोसाइट्स के माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस को कम करता है, इसलिए, एमएमपी में सुधार, एमटीडीएनए, प्रोटीन और लिपिड के ऑक्सीडेटिव क्षति को कम करता है, प्रभावी रूप से माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव क्षति को रोकता है और इन विट्रो और विवो में एपोप्टोसिस को कम करता है, इसलिए, यह मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट देता है और हृदय समारोह में सुधार करता है। इसका मतलब है कि मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग और एचएफ की रोकथाम के लिए ईसीएच एक संभावित नई दवा है।

सामान्य परिस्थितियों में, माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस मुख्य रूप से एमएनएसओडी द्वारा साफ किया जाता है जो माइटोकॉन्ड्रिया में वितरित होता है और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव क्षति से बचाता है। Ang II कार्डियोमायोसाइट्स की MnSOD अभिव्यक्ति को काफी कम कर देता है और मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी को प्रेरित करता है, हालांकि, रेस्वेराट्रोल MnSOD की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है और Ang II द्वारा प्रेरित मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी को रोक सकता है। HF में, MnSOD की गतिविधि काफी कम हो जाती है और माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस की पीढ़ी बढ़ जाती है। .37,38 कार्डियक-विशिष्ट MnSOD जीन नॉकआउट चूहों में, माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस को साफ नहीं किया जा सकता है और कार्डियोमायोसाइट्स में आरओएस बढ़ जाता है, इससे माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन और प्रगतिशील कार्डियक इज़ाफ़ा होता है, जो अंततः दिल की विफलता का कारण बनता है। 39 वर्तमान अध्ययन में, हम पुष्टि करते हैं कि MnSOD की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई है, जिसे ECH उपचार द्वारा देखा जाता है, और इस प्रकार, माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस कम हो जाता है और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव बाधित होता है। इसका मतलब है कि ईसीएच एमएनएसओडी की अभिव्यक्ति के अप-विनियमन के माध्यम से ऑक्सीडेटिव क्षति के खिलाफ कार्डियोमायोसाइट्स की रक्षा करता है, हम आगे इन प्रभावों के अंतर्निहित आणविक तंत्र का पता लगाते हैं।

MnSOD की अभिव्यक्ति FOXO3a द्वारा नियंत्रित होती है, जो एक प्रतिलेखन कारक है और MnSOD के जीन प्रमोटर क्षेत्र में बांधता है और जीन प्रतिलेखन को बढ़ावा देता है। 40 SIRT1 FOXO3a का एक अपस्ट्रीम आणविक है और यह FOXO3a को डीसेटाइलेशन द्वारा सक्रिय कर सकता है। SIRT1/FOXO3a/MnSOD सिग्नलिंग अक्ष सेल प्रकारों के प्रकार में ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ सुरक्षा में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, एस्ट्राडियोल द्वारा सिग्नलिंग अक्ष की सक्रियता ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है और कार्डियक सुरक्षा को बढ़ाता है; रेस्वेराट्रोल द्वारा सिग्नलिंग अक्ष का सक्रियण ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित कोशिका मृत्यु को रोकता है40; अन्यथा, एंजियोटेंसिन II SIRT1/FoxO3a/MnSOD मार्ग को रोकता है और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को प्रेरित करता है, ओस्टियोब्लास्ट्स में mtDNA क्षति, 41types 5 adenylyl cyclase, Sirt1/FoxO3a पाथवे के माध्यम से MnSOD की अभिव्यक्ति पर अवरोध द्वारा ऑक्सीडेटिव तनाव को बढ़ाता है। वर्तमान अध्ययन में पाया गया है कि SIRT1, FoxO3a, और MnSOD की अभिव्यक्ति एचएफ चूहों में काफी कम हो जाती है और माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस ऊंचा हो जाता है और ऑक्सीडेटिव तनाव बढ़ जाता है, हालांकि, परिवर्तन ईसीएच द्वारा उलट दिए जाते हैं। नए शोध से संकेत मिलता है कि ECH सीधे SIRT1 को एक लिगैंड के रूप में बांधता है और 9 सहसंयोजक बंधों के साथ एक कॉम्प्लेक्स बनाता है और तंत्रिका कोशिकाओं में SIRT1 की अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है। इस अध्ययन के अनुरूप, वर्तमान अध्ययन दर्शाता है कि ECH अभिव्यक्ति को भी नियंत्रित करता है कार्डियोमायोसाइट्स में SIRT1, तब फॉक्सो3ए के माध्यम से MnSOD की जीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है और माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस और ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है।

लंबे समय तक क्रोनिक इस्किमिया मायोकार्डियल हाइबरनेशन का कारण बन सकता है, ये हाइबरनेटिंग मायोकार्डियल कोशिकाएं आमतौर पर सिकुड़ा हुआ तंतुओं का नुकसान दिखाती हैं, साइटोसोल में अतिरिक्त ग्लाइकोजन ग्रैन्यूल होते हैं, सार्कोप्लास्मिक रेटिकुलम, और अनुप्रस्थ नलिकाएं खो जाती हैं, 43भी, माइटोकॉन्ड्रियल आकार और आकार में असामान्यताएं हैं , प्रतिक्रियाशील मायोकार्डियल हाइपरट्रॉफी और इंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस, जो मायोसाइट हानि के लिए माध्यमिक है। हमने अपने अध्ययन में एचएफ चूहों में उपरोक्त परिवर्तनों को भी देखा, जबकि ईसीएच इन परिवर्तनों से काफी राहत देता है, क्योंकि नवीनतम अध्ययन में इस्केमिक तनाव के बाद कार्डियक फ़ंक्शन की वसूली की सूचना दी जा सकती है। मायोकार्डियल हाइबरनेशन की विशेषता, 45 मायोकार्डियल ग्लाइकोजन स्तर भी मापा जाता है, परिणाम इंगित करते हैं कि तीन समूहों में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं है, जैसा कि चित्र 7J में दिखाया गया है।

पिछले अध्ययन में उच्च आवृत्ति के साथ एलवी मुक्त दीवार को पेसिंग करके एक गैर-इस्केमिक हृदय विफलता सुअर मॉडल में मायोकार्डियल हाइबरनेशन का भी पता लगाया गया था, क्योंकि माइक्रोवैस्कुलर बाधा मायोकार्डियल हाइबरनेशन और परिणामस्वरूप सिकुड़ा हुआ रोग में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है, और यह स्पष्ट रूप से सुधार होता है जब माइक्रोवैस्कुलर बाधा को एक दवा द्वारा उलट दिया जाता है। 47 वर्तमान में, कुछ अध्ययनों ने निष्कर्ष निकाला है कि रिवास्कुलराइजेशन थेरेपी मायोकार्डियम को हाइबरनेट करने में प्रभावी है, 43 एचई और मेसन धुंधला का उपयोग करके, हम देखते हैं कि एचएफ चूहों में मायोकार्डियल केशिका और धमनी घनत्व स्पष्ट रूप से कम हो जाते हैं और काफी राहत मिलती है ECH द्वारा, जैसा कि चित्र 7A-H में दिखाया गया है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि अन्य प्राकृतिक यौगिक, जैसे जौ बीटा-ग्लूकेन, MnSOD, 48,49 की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर कार्डियोप्रोटेक्टिव प्रभाव डालते हैं, और MnSOD का बढ़ना मायोकार्डियल केशिका घनत्व और VEGF अभिव्यक्ति से संबंधित है। हमने वीईजीएफ़ की अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए आरटी-पीसीआर का प्रदर्शन किया, डेटा हिस्टोलॉजिकल स्टेनिंग की खोज के अनुरूप है, जिसका अर्थ है कि ईसीएच एंजियोजेनेसिस को बढ़ावा दे सकता है और वीईजीएफ़ अभिव्यक्ति को विनियमित करके मायोकार्डियल केशिका घनत्व को बढ़ा सकता है, जैसा कि चित्र 7I में दिखाया गया है। वर्तमान अध्ययन में पाया गया है कि ECH SIRTI / FOXO3a / MnSOD मार्ग और VEGF की अभिव्यक्ति को विनियमित करके मायोकार्डियल केशिका और धमनी की रक्षा और वृद्धि कर सकता है, जिससे हाइबरनेटिंग मायोकार्डियम को दबाने और हृदय समारोह में सुधार करने में योगदान होता है।

Cistanche योगदान देता हैप्रतिहृदय समारोह में सुधार.

अधिक जानकारी के लिए कृपया यहां क्लिक करें।

ध्यान दें, कार्डियोमायोसाइट एपोप्टोसिस को दिल की विफलता में एक महत्वपूर्ण रोग परिवर्तन के रूप में जाना जाता है, और वर्तमान अध्ययन वास्तव में पुष्टि करता है कि एचएफ चूहों और ईसीएच में एपोप्टोटिक कोशिकाओं की एक बड़ी मात्रा SIRTI / FOXO3a / MnSOD मार्ग को विनियमित करके एपोप्टोसिस को काफी कम कर देती है। जैसा कि ऊपर बताया गया है, माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव।

इन सबसे ऊपर, ECH मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग को उलट देता है और SIRT1/FoxO3a/MnSOD सिग्नलिंग अक्ष को ऊपर-विनियमित करके हृदय क्रिया में सुधार करता है, इस प्रकार माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है और हाइबरनेटिंग मायोकार्डियम को कम करता है। इस प्रकार, यह सुझाव दिया जाता है कि ईसीएच मायोकार्डियल रीमॉडेलिंग और एचएफ की रोकथाम या उपचार के लिए एक संभावित दवा है।