विकास और प्रतिरक्षा भाग 1 की दीर्घायु पर पुलेट टीकाकरण का प्रभाव

अमूर्त:

एवियन श्वसन रोग वाणिज्यिक पोल्ट्री में महत्वपूर्ण आर्थिक नुकसान का कारण बनता है। कम उम्र से ही लंबे समय तक रहने वाले कुक्कुट को श्वसन पथ के रोगजनकों से बचाने की आवश्यकता के कारण, चूजों के लिए टीकाकरण कार्यक्रमों में आम तौर पर संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस (आईबीवी), न्यूकैसल रोग वायरस (एनडीवी), और संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस (आईबीवी), और संक्रामक सहित विभिन्न प्रकार के टीकों का क्रमिक प्रशासन शामिल होता है। लैरींगोट्राकाइटिस वायरस (ILTV)। अक्सर टीकाकरण के बीच का अंतराल केवल कुछ हफ्तों का होता है, फिर भी यह अज्ञात है कि क्या इन पक्षियों में प्रतिरोधक क्षमता का विकास और चुनौती के खिलाफ सुरक्षा जब टीके थोड़े समय में दिए जाते हैं, वायरल हस्तक्षेप के रूप में जाना जाता है। हमारा उद्देश्य यह निर्धारित करना था कि क्या IBV, NDV, और ILTV के खिलाफ क्रमिक रूप से प्रशासित, जीवित क्षीण टीके लंबे समय तक रहने वाले पक्षियों में प्रतिरक्षा के विकास और दीर्घायु और चुनौतियों के खिलाफ सुरक्षा को प्रभावित करते हैं।

एक विशिष्ट पुलेट टीकाकरण कार्यक्रम के आधार पर, विशिष्ट-रोगजनक-मुक्त सफेद लेघॉर्न को 16 सप्ताह की आयु (WOA) तक IBV, NDV, और ILTV के खिलाफ कई जीवित क्षीण टीके दिए गए, जिसके बाद कुछ समूहों को IBV, NDV, या ILTV के साथ चुनौती दी गई। 20, 24, 28, 32 और 36 WOA पर। पांच दिनों के बाद की चुनौती, वायरल लोड, नैदानिक ​​​​संकेत, क्रायोस्टेसिस, ट्रेकिअल हिस्टोपैथोलॉजी और सीरम और आँसू में एंटीबॉडी टाइटर्स का मूल्यांकन किया गया। हम प्रदर्शित करते हैं कि IBV, NDV, और ILTV के खिलाफ क्रमिक रूप से प्रशासित जीवित क्षीण टीकों को IBV, NDV, या ILTV के साथ कम से कम 36 सप्ताह के लिए संरक्षित किया गया था, और निष्कर्ष निकाला है कि इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए टीकाकरण के बीच अंतराल (कम से कम 2 सप्ताह) ) सुरक्षा में हस्तक्षेप नहीं किया। यह जानकारी महत्वपूर्ण है क्योंकि यह दर्शाता है कि एक विशिष्ट पुलेट टीकाकरण कार्यक्रम जिसमें कई श्वसन रोगजनकों के खिलाफ क्रमिक रूप से प्रशासित लाइव क्षीण टीके शामिल हैं, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्येक रोग एजेंट के खिलाफ सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा का विकास हो सकता है।

प्रतिरक्षा की बात करें तो, मानव शरीर में भी कई चीजें हैं जो प्रतिरक्षा में सुधार कर सकती हैं, जैसे कि सिस्टैंच, जो जैविक रूप से सक्रिय पदार्थों में भी समृद्ध है, जैसे पेप्टाइड्स, टेरपेन, फेनोलिक एसिड आदि, जो प्रतिरक्षा कोशिकाओं की सक्रियता को उत्तेजित कर सकते हैं और प्रतिरक्षा कोशिकाओं में सुधार। कार्य करता है, और शरीर की प्रतिरोधक क्षमता को बढ़ाता है। ये जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ शरीर के ऑटोइम्यून फ़ंक्शन को विनियमित और सक्रिय कर सकते हैं, जिससे मानव प्रतिरक्षा में और सुधार हो सकता है।

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कीवर्ड:

संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस; न्यूकैसल रोग वायरस; संक्रामक लैरींगोट्राकाइटिस वायरस; टीकाकरण कार्यक्रम; रोग प्रतिरोधक क्षमता; श्वसन संबंधी रोग; क्रायोस्टेसिस; एंटीबॉडी प्रतिक्रिया।

1 परिचय

वाणिज्यिक कुक्कुट प्रचालनों में श्वसन विषाणुजनित रोग के विरुद्ध टीकाकरण मानक अभ्यास है। जीवित और मारे गए दोनों प्रकार के टीके कुक्कुट को दिए जाते हैं, और जीवित टीके आमतौर पर विभिन्न प्रकार के रोगजनकों के लिए उपयोग किए जाते हैं क्योंकि वे बड़े पैमाने पर लागू होने पर प्रभावी होते हैं और अपेक्षाकृत किफायती होते हैं [1]। सामान्य तौर पर, जीवित टीके स्थानीय और कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा को प्रेरित करते हैं और मारे गए टीकों की तुलना में व्यापक सुरक्षात्मक प्रतिक्रिया प्रदान करते हैं, जबकि मारे गए टीके मुख्य रूप से हास्य प्रतिरक्षा को प्रेरित करते हैं और प्रतिजन-विशिष्ट होते हैं। लाइव वैक्सीन प्रशासन के बाद प्राप्त प्रतिरक्षा की अवधि पक्षी की उम्र और प्रकार, मातृ प्रतिरक्षा के स्तर, वैक्सीन द्वारा लक्षित बीमारी, वैक्सीन की इम्युनोजेनेसिटी, वैक्सीन लगाने की विधि, बूस्टर की संख्या और अंतराल, विषाणु और समानता पर निर्भर करती है। क्षेत्र चुनौती वायरस का, टीकाकरण और चुनौती के बीच का अंतराल, और मेजबान की प्रतिरक्षण क्षमता [1-3]।

एवियन कोरोनावायरस संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस (IBV) पोल्ट्री का एक ऊपरी श्वसन पथ वायरल रोगज़नक़ है और वजन कम करने और फ़ीड दक्षता को कम करता है, अंडे के उत्पादन और अंडे की गुणवत्ता में गिरावट, वृद्धि को रोकता है, और द्वितीयक जीवाणु संक्रमण जिसके परिणामस्वरूप एयरसैक्यूलाइटिस [4] होता है। वायरस शुरू में ऊपरी श्वसन पथ में प्रतिकृति बनाता है, इसके बाद प्रजनन पथ में प्रणालीगत प्रतिकृति होती है, और कुछ उपभेद गुर्दे [4] में घाव पैदा कर सकते हैं। संक्रमित पक्षियों में नाक से स्राव, खाँसी, छींक और श्वासनली में जलन [4] हो सकती है। रोग को टीकाकरण से रोका जाता है, और जीवित टीकों का उपयोग आमतौर पर स्थानीय प्रतिरक्षा और सुरक्षा को प्रेरित करने के लिए किया जाता है। प्रारंभिक सुरक्षा प्राप्त करने के लिए आम तौर पर युवा पक्षियों को जीवित टीके लगाए जाते हैं, और जीवित या निष्क्रिय टीकों के साथ परतों और प्रजनकों को भी बढ़ावा दिया जाता है, जो परिसंचारी क्षेत्र वायरस [2] के समान होने के आधार पर भिन्न होते हैं।

न्यूकैसल रोग (एनडी) एवियन पैरामाइक्सोवायरस टाइप 1 के विषाणुजनित उपभेदों के कारण होता है, जिसे हाल ही में एवियन एवुलावायरस 1 (एएवीवी -1) [5] के रूप में पुनर्वर्गीकृत किया गया है। वायरस के तनाव के आधार पर, एनडी संक्रमण के नैदानिक ​​लक्षण अनुपस्थित हो सकते हैं या इसमें अवसाद, भूख न लगना, श्वसन संकेत (नाक से स्राव, छींक आना, खाँसी), अंडे का उत्पादन कम होना और अंडे की गुणवत्ता, और स्नायविक संकेत (टोर्टिकोलिस, चक्कर आना, पक्षाघात) शामिल हो सकते हैं। ) [3]। न्यूकैसल रोग वायरस (एनडीवी) के उपभेदों को भ्रूण [6] में उनके औसत मृत्यु समय के अनुसार लेंटोजेनिक, मेसोजेनिक और वेलोजेनिक के रूप में जाना जाता है। लेंटोजेनिक उपभेद कम रोगजनकता वाले होते हैं जो हल्के श्वसन या आंतों के संक्रमण का कारण बनते हैं, इसके बाद मेसोजेनिक उपभेद होते हैं, जबकि वेलोजेनिक आइसोलेट्स अत्यधिक रोगजनक होते हैं जो अक्सर न्यूरोलॉजिकल संकेत और मृत्यु दर पैदा करते हैं [3]। एनडीवी के खिलाफ टीकाकरण के नियम अलग-अलग होते हैं और जीवित, निष्क्रिय और वायरस-वेक्टर टीकों के संयोजन का उपयोग कर सकते हैं [7]। संयुक्त राज्य अमेरिका में, सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किए जाने वाले पारंपरिक वैक्सीन स्ट्रेन में लेंटोजेनिक बी1 (या बी1 स्ट्रेन के वायरस क्लोन) और लासोटा स्ट्रेन [3] शामिल हैं।

संक्रामक लैरींगोट्राकाइटिस (ILT) पोल्ट्री का एक श्वसन रोग है जो गॉल्ड अल्फाहेरपीसवायरस I के कारण होता है और दुनिया भर में आर्थिक रूप से महत्वपूर्ण है [8]। ILT की नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों में मृत्यु दर में वृद्धि, अंडे का उत्पादन कम होना, शरीर के वजन में कमी, नेत्रश्लेष्मलाशोथ, गंभीर मामलों में खूनी बलगम के निष्कासन के साथ ट्रेकाइटिस, अवसाद, गंभीर श्वास कष्ट, और अन्य श्वसन रोगजनकों के प्रति संवेदनशीलता शामिल हैं। ILT वायरस (ILTV) के खिलाफ लाइव टीके चिकन भ्रूण मूल (CEO) या टिशू कल्चर मूल (TCO) के हो सकते हैं, जिसमें वे क्रमशः अंडे या टिशू कल्चर में कई बार पारित किए जाते हैं। हालांकि ILT के लिए पुनः संयोजक टीके व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, लेकिन CEO टीका ILTV के खिलाफ दुनिया भर में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला टीका है।

कम उम्र से ही मुर्गियों को विभिन्न वायरल रोगजनकों से बचाने की आवश्यकता के कारण, टीकाकरण कार्यक्रमों में आमतौर पर विभिन्न प्रकार के रोगजनकों के खिलाफ कई टीके शामिल होते हैं। मर्क वेटरनरी मैनुअल में विभिन्न पोल्ट्री क्षेत्रों में नमूना टीकाकरण व्यवस्था की समीक्षा की जाती है, जिसमें टीकाकरण के बीच का अंतराल अक्सर कुछ ही हफ्तों का होता है।

हालांकि, यह दिखाने वाली बहुत कम जानकारी है कि टीकाकरण के बीच का अंतराल पक्षियों के लिए प्रत्येक वायरस की चुनौतियों के खिलाफ पर्याप्त प्रतिरक्षा सुरक्षा विकसित करने के लिए पर्याप्त है। साहित्य से पता चलता है कि अनुक्रमिक वायरल संक्रमण के परिणामस्वरूप वायरल हस्तक्षेप हो सकता है, जिसमें एक वायरस बाद के संक्रमण और/या मेजबान [9,10] में दूसरे वायरस की प्रतिकृति को अवरुद्ध करता है, लेकिन अब तक यह अज्ञात है कि क्या इस घटना के परिणामस्वरूप सुरक्षा कम हो जाती है मुर्गियों में क्रमिक रूप से प्रशासित तनु जीवित टीकों से। दिलचस्प बात यह है कि यह बताया गया है कि मुर्गियों या टर्की को वायरस के एक साथ प्रशासन के परिणामस्वरूप वायरल हस्तक्षेप [11] नहीं होता है। इस अध्ययन में, हम जांच करते हैं कि कैसे एक सामान्य वाणिज्यिक टीकाकरण कार्यक्रम जिसमें क्रमिक रूप से प्रशासित, जीवित क्षीण वायरल श्वसन रोग के टीके शामिल हैं, प्रतिरक्षा के विकास और दीर्घायु को प्रभावित करता है और घरेलू चुनौतियों से सुरक्षा करता है।

2। सामग्री और विधि

2.1। वायरस

इस अध्ययन में एक वाणिज्यिक IBV वैक्सीन MILDVAC-GA-98® (मर्क एनिमल हेल्थ, समिट, एनजे, यूएसए) का उपयोग किया गया था। निर्माता की सिफारिशों के अनुसार वैक्सीन को पतला किया गया था। इस्तेमाल किया गया चैलेंज वायरस IBV GA98/CWL0474/98 था और इसे 103.19 के औसत भ्रूण संक्रामक खुराक (EID50) पर तैयार किया गया था। वायरस टाइटर्स की गणना रीड और म्यूंच विधि [12] द्वारा की गई थी। एक वाणिज्यिक NDV वैक्सीन B1 (NEWHATCH-C2, मर्क एनिमल हेल्थ, समिट, NJ, USA) का उपयोग टीकाकरण और चुनौती दोनों के लिए किया गया था और निर्माता के निर्देशों के बाद इसका पुनर्गठन किया गया था।

चूंकि एनडीवी के मेसोजेनिक और वेलोजेनिक उपभेदों को बीएसएल2 से ऊपर जैव सुरक्षा स्तर की आवश्यकता होती है, जो हमारी प्रयोगशाला में उपलब्ध नहीं है, एनडीवी के खिलाफ सुरक्षा के लिए हमारे प्रायोगिक मॉडल में वैक्सीन वायरस के साथ एक दूसरे जोखिम (चुनौती) के खिलाफ काफी कम वायरस टाइटर्स या बाँझ प्रतिरक्षा शामिल है। एक ILTV कमर्शियल CEO वैक्सीन (Trachivax® Merck Animal Health, Summit, NJ, USA) और रोगजनक ILTV जॉर्जिया ब्रॉयलर स्ट्रेन 63140 [13] का उपयोग क्रमशः टीकाकरण और चुनौती के लिए किया गया था। स्ट्रेन 63140 को 3- से 4-सप्ताह पुराने विशिष्ट रोगज़नक़-मुक्त (एसपीएफ़) मुर्गियों [14] से प्राप्त चिकन किडनी कोशिकाओं में प्रचारित किया गया था। निर्माता की सिफारिशों के बाद सीईओ का टीका तैयार किया गया था। इनोक्यूलेशन के बाद, चिकन किडनी कोशिकाओं में दोनों वायरस के अनुमापन द्वारा मीडियन टिश्यू कल्चर इंफेक्टिव डोज़ (TCID50) की पुष्टि की गई [14]।

2.2। प्रयोगात्मक परिरूप

पोल्ट्री डायग्नोस्टिक एंड रिसर्च सेंटर, एथेंस, जीए में ऊष्मायन के 18 दिनों में विशिष्ट-रोगजनक-मुक्त अंडे प्राप्त किए गए थे। कॉलोनी के घरों और कलमों में चीड़ की ताजा छीलन पर चूजों को रखा गया था। निम्नलिखित अनुसूची के अनुसार ओकुलोनसाल मार्ग के माध्यम से 100 μL में निर्माताओं की सिफारिश की खुराक के साथ चूजों को टीका लगाया गया था; IBV पर 1 DOA, NDV पर 2 सप्ताह की आयु (WOA), IBV पर 4 WOA, ILTV पर 8 WOA, NDV पर 12 WOA, और ILTV पर 16 WOA।

इसके अलावा, एक नियंत्रण समूह को टीका नहीं लगाया गया था। 20, 24, 28, 32, और 36 WOA में घरेलू चुनौतियों का आयोजन किया गया था, और नेक्रोप्सिस को पांच दिनों के बाद चुनौती (डीपीसी) का प्रदर्शन किया गया था। चुनौती पर, पक्षियों को चार उपचारों में से एक प्राप्त हुआ: IBV GA98, NDV B1, ILTV 63140, या कोई चुनौती नहीं। प्रत्येक चुनौती वायरस के लिए उपचार समूह प्रति समय बिंदु इस प्रकार थे: गैर-टीकाकृत, गैर-चुनौतीपूर्ण (n=9-10); टीकाकृत, गैर-चुनौतीपूर्ण (n=9–10); टीका लगाया गया, चुनौती दी गई (एन=17–19); गैर-टीकाकृत, चुनौती दी गई (n=9–10)। सभी IBV-चुनौती वाले पक्षियों को 100 μL आंतरिक रूप से प्रति पक्षी 1 × 103.2 का EID50 प्राप्त हुआ। सभी एनडीवी-चुनौती वाले पक्षियों को निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार पुनर्गठित 100 μL आंतरिक रूप से एनडीवी बी1 टीका प्राप्त हुआ। सभी ILTV-चुनौती वाले पक्षियों को आईड्रॉप और इंट्रानैसल मार्गों के बीच समान रूप से विभाजित 100 µL में 1 × 103.5 TCID50 प्रति पक्षी की खुराक पर 63140 रोगजनक तनाव प्राप्त हुआ। IBV और NDV चुनौतियों के लिए, श्वसन संकेतों के लिए पक्षियों को 5 dpc पर देखा गया, जैसा कि पहले बताया गया है [15]: 0=अनुपस्थित; 1=हल्का; 2=मध्यम; 3=गंभीर। ILTV चुनौतियों के लिए, पक्षियों को 3 और 5 dpc पर डिस्पेनिया, नेत्रश्लेष्मलाशोथ, अवसाद और मृत्यु दर के लिए देखा गया था, जैसा कि पहले [16] में वर्णित है।

चोनल फांक (आईबीवी- और एनडीवी-चुनौतीपूर्ण और 5 डीपीसी पर नियंत्रण पक्षी) या ट्रेकिआ (3 और 5 डीपीसी पर आईएलटीवी-चुनौतीपूर्ण और नियंत्रण पक्षी) को वायरस का पता लगाने के लिए स्वैब किया गया था, और स्वैब को पीबीएस में -80 ◦C पर संग्रहीत किया गया था। 28, 32, और 36 WOA पर, आँख में दानेदार NaCl जोड़कर 50 µL आँसू एकत्र किए गए। रक्त को विंग या कार्डियक पंचर द्वारा एकत्र किया गया था और एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए सीरम एकत्र करने के लिए एक माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में जोड़ा गया था। पक्षियों को मानवीय रूप से इच्छामृत्यु दी गई, और पलक, हार्डेरियन ग्रंथि (एचजी), थाइमस, यकृत, प्लीहा, सेकल टॉन्सिल, और फैब्रिकियस के बर्सा को एकत्र किया गया और वायरस का पता लगाने के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर और 10 प्रतिशत तटस्थ बफ़र्ड फॉर्मेलिन में संग्रहीत किया गया। श्वासनली को हटा दिया गया था, एक खंड को 10 प्रतिशत तटस्थ बफ़र्ड फॉर्मेलिन में रखा गया था, और श्वासनली के शेष हिस्से को नीचे वर्णित आइकोस्टेसिस परीक्षण के लिए टिशू कल्चर मीडिया में डूबा दिया गया था। प्रक्रियाओं को यूनिवर्सिटी ऑफ जॉर्जिया इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी (AUP #: A2015 05-001-R2) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

2.3। सिलियोस्टेसिस टेस्ट

Iconostasis परीक्षण 37 डिग्री सेल्सियस पर सेल कल्चर मीडिया (Dulbecco के संशोधित ईगल के माध्यम) में एकत्र किए गए कटे हुए ट्रेकिआ पर किया गया था। प्रत्येक श्वासनली के लिए, लगभग 1 मिमी मोटी मापने वाले पांच श्वासनली के छल्ले काटे गए और समीपस्थ, मध्य और बाहर के हिस्से [17,18] का प्रतिनिधित्व किया। उल्टे माइक्रोस्कोप (ओलिंप, सेंटर वैली, पीए, यूएसए) का उपयोग करके सिलिया गतिविधि देखी गई। स्कोरिंग सिस्टम 0=सभी सिलिया बीटिंग का अनुसरण करता है; 1=75 सिलिया बीटिंग का प्रतिशत; 2=50 सिलिया बीटिंग का प्रतिशत; 3=25 सिलिया बीटिंग का प्रतिशत; 4=कोई सिलिया बीटिंग नहीं जैसा कि पहले बताया गया [17]। प्रत्येक श्वासनली के लिए अधिकतम संभव स्कोर 20 है। प्रत्येक श्वासनली की अंगूठी को तीन व्यक्तियों द्वारा बनाया गया था, और प्रत्येक श्वासनली के लिए औसत कुल स्कोर की गणना की गई थी। प्रत्येक समूह के लिए आइकोस्टेसिस सुरक्षा स्कोर निम्न सूत्र द्वारा निर्धारित किया गया था: 100 - [(समूह के लिए व्यक्तिगत स्कोर का कुल)/(समूह में व्यक्तियों की संख्या × 20) × 100], और एक स्कोर इससे अधिक या बराबर 50 तक संरक्षित माना जाता था।

2.4। ट्रेकिअल हिस्टोपैथोलॉजी

प्रत्येक श्वासनली का एक खंड 1 0 प्रतिशत तटस्थ बफ़र्ड फॉर्मेलिन में तय किया गया था, संसाधित किया गया था, और पैराफिन में एम्बेडेड था, और 5- μm वर्गों को हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन धुंधला करने के लिए काटा गया था। IBV घावों के लिए, प्रत्येक श्वासनली के लिए उपकला हाइपरप्लासिया, लिम्फोसाइट घुसपैठ और उपकला विकृति का स्कोर किया गया था। स्कोर निम्नानुसार निर्धारित किए गए थे: 1=सामान्य, 2=फोकल, 3=मल्टीफोकल, और 4=डिफ्यूज़, जैसा कि पहले बताया गया है [19]। एनडीवी घावों के लिए, एक वर्णनात्मक विश्लेषण किया गया था। ILTV घावों के लिए, सूक्ष्म घावों को 0-5 (सामान्य से बहुत गंभीर) के पैमाने पर स्कोर किया गया था, जैसा कि पहले बताया गया है [20]।

2.5। आरएनए एक्सट्रैक्शन और क्वांटिटेटिव रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (qRT-PCR)

IBV और NDV का पता लगाने के लिए, प्रत्येक स्वैब से PBS के 50 µL से वायरल RNA निष्कर्षण एक 5 × MagMAX-96 वायरल आइसोलेशन किट (थर्मो फिशर, वाल्थम, MA, USA) का उपयोग करके MagMAX™ Express{{ 3}} निर्माता के निर्देशों के अनुसार डीप वेल मैग्नेटिक पार्टिकल प्रोसेसर (थर्मो साइंटिफिक, वाल्थम, एमए, यूएसए)। मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (qRT-PCR) निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए AgPath-IDTM वन-स्टेप RT-PCR किट (थर्मो फिशर, वॉलथम, MA, USA) के साथ किया गया था। प्रत्येक 25-μL प्रतिक्रिया मिश्रण में 2 × RT-PCR बफर के 12.5 µL, प्रत्येक प्राइमर के 10 µM, जांच के 4 µM, 25× RT-PCR एंजाइम मिश्रण के 1 µL, और वायरल RNA के 5 µL शामिल हैं। निम्नलिखित स्थितियों में एप्लाइड बायोसिस्टम्स® 7500 फास्ट रीयलटाइम पीसीआर सिस्टम (लाइफ टेक्नोलॉजीज लिमिटेड, कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) पर क्यूआरटी-पीसीआर प्रतिक्रियाएं चलाई गईं: 30 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस का एक चक्र और 15 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस। , उसके बाद 1 एस के लिए 94 ◦C के 40 चक्र और 60 ◦C के लिए 60 ◦C। IBV qRT-PCR के लिए प्राइमर और प्रोब पहले [21] प्रकाशित किए गए थे, और इसमें एक फॉरवर्ड प्राइमर IBV50GU391 (50 -GCT TTT GAG CCT AGC GTT-30), एक रिवर्स प्राइमर IBV50GL533 (50 - GCT TTT GAG CCT AGC GTT) शामिल है। {38}}GCC ATG TTG TCA CTG TCT ATT G-30), और एक Taqman® ड्युअल-लेबल जांच IBV50G जांच (50 -FAM-CAC CAC CAG AAC CTG TCA CCT C-BHQ{{45) }})। एनडीवी क्यूआरटी-पीसीआर के लिए प्राइमर और जांच का पहले वर्णन किया गया था [22] और इसमें एक फॉरवर्ड प्राइमर एनडीवी एम प्लस 4100 (5'-एजीटी गैट जीटीजी सीटीसी जीजीए सीसीटी टीसी -3'), एक रिवर्स प्राइमर एनडीवी एम शामिल है। -4220 (5'-सीसीटी गैग गैग एजीजी कैट टीटीजी सीटीए-3'), और एक टैक्मैन® डुअल-लेबल जांच एनडीवी एम प्लस 4169 (5'-एफएएम-टीटीसी टीसीटी एजीसी एजीटी जीजीजी एसीए जीसीसी टीजीसी -बीएचक्यू 1-3')।

प्राइमरों को इंटीग्रेटेड डीएनए टेक्नोलॉजीज (कोरलविले, आईए, यूएसए) से प्राप्त किया गया था, और तक्मान जांच को बायोसर्च टेक्नोलॉजीज (नोवाटो, सीए, यूएसए) द्वारा संश्लेषित किया गया था। वास्तविक समय आरटी-पीसीआर घटकों और थर्मोसायकलर मापदंडों को पहले वर्णित किया गया था [21]। डेटा को प्रत्येक समूह में सभी नमूनों के लिए औसत चक्र दहलीज (सीटी) मान के रूप में व्यक्त किया जाता है, अंडे में वायरस का पता लगाने से जुड़े इस परीक्षण के लिए पहचान की सीमा के आधार पर सकारात्मक सीटी मान [23]।

प्रत्येक क्यूआरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया प्लेट में आरएनए निष्कर्षण नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण के रूप में एक मानक वक्र शामिल था। GA98 IBV को एलेंटोइक तरल पदार्थ से पृथक मानक वक्र के लिए टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया गया था। प्रत्येक प्लेट में नकारात्मक नियंत्रण भी शामिल थे और इसमें बिना आरएनए वाले पीसीआर अभिकर्मक शामिल थे।

2.6। डीएनए निष्कर्षण

ILTV के लिए, MegaZorb® DNA निष्कर्षण मिनीप्रेप 96-वेल किट (Promega, Madison, WI, USA) का उपयोग करके ट्रेकिअल स्वैब से कुल डीएनए निकाला गया था, जैसा कि पहले बताया गया है [24]।

2.7। qPCR

एक डुप्लेक्स रीयल-टाइम पीसीआर परख जो आईएलटीवी में यूएल44 वायरल जीन के एक टुकड़े को बढ़ाता है और चिकन अल्फा 2-कोलेजन जीन का एक टुकड़ा पहले वर्णित [25] के रूप में किया गया था।

2.8। सीरम संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस (IBV)-विशिष्ट IgG एंटीबॉडी टाइटर्स

IBV- विशिष्ट IgG टाइटर्स का पता एक वाणिज्यिक IgG एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (ELISA) IBV एंटीबॉडी टेस्ट किट (IDEXX, Westbrook, ME, USA) का उपयोग करके लगाया गया। संक्षेप में, सीरम के नमूने (−20 ◦C पर संग्रहीत) को 1:500 पतला किया गया था, और प्रक्रिया निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार की गई थी।

2.9। आंसू-स्रावित IBV-विशिष्ट IgA एंटीबॉडी टाइटर्स

एक वाणिज्यिक आईजीजी एलिसा आईबीवी एंटीबॉडी परीक्षण किट (आईडीईएक्सएक्स, वेस्टब्रुक, एमई, यूएसए) का उपयोग करके आईबीवी-विशिष्ट आईजीए का पता लगाया गया था। संक्षेप में, आँसुओं को क्रमिक रूप से पीबीएस में दो गुना पतला किया गया और रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर डुप्लीकेट कुओं में डाला गया। पीबीएस-ट्वीन 20 (0.05 प्रतिशत ट्वीन 20) का उपयोग करके सभी धुलाई चरणों का प्रदर्शन किया गया। मोनोक्लोनल माउस एंटी-चिकन IgA-BIOT (1:1000, क्लोन A -1, सदर्न बायोटेक, बर्मिंघम, AL, USA) में 2 घंटे के लिए प्लेट्स को 23 ◦C पर इनक्यूबेट किया गया, इसके बाद स्ट्रेप्टाविडिन-HRP में 1hr ( 1:4000, सदर्न बायोटेक, बर्मिंघम, एएल, यूएसए)। निर्माता के निर्देशों के अनुसार अंतिम एंटीबॉडी का पता लगाने के चरण पूरे किए गए। एंडपॉइंट टाइटर्स को सबसे कम कमजोर पड़ने की रिपोर्ट करके निर्धारित किया गया था, जिस पर ऑप्टिकल घनत्व (OD), 650 एनएम तरंग दैर्ध्य में दर्ज किया गया था, जो 12 नियंत्रण कुओं के माध्यम से कम से कम तीन मानक विचलन थे, जो बिना किसी आंसू के नमूने के साथ थे। अवशिष्ट सब्सट्रेट या हवा के बुलबुले के कारण एक पिनपॉइंट रंग परिवर्तन वाले कुओं के डेटा को विश्लेषण से बाहर रखा गया था, और परिणाम समापन बिंदु टिटर के लॉग 2 के रूप में रिपोर्ट किए गए थे।

2.10। सांख्यिकीय विश्लेषण

प्रिज्म v.6.0 सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, इंक., ला जोला, सीए, यूएसए) का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। वायरल लोड डेटा के लिए, प्रत्येक संग्रह अवधि के भीतर उपचार समूहों की तुलना करने के लिए डननेट के पोस्टटेस्ट के साथ विचरण (ANOVA) का एक तरफ़ा विश्लेषण किया गया था। प्रत्येक संग्रह अवधि के भीतर उपचार समूहों की तुलना करने के लिए डन के पोस्टटेस्ट के साथ क्रुस्कल-वालिस परीक्षण का उपयोग करके अन्य सभी डेटा का विश्लेषण किया गया। महत्वपूर्ण अंतर p <0.05 पर निर्धारित किए गए थे।

3। परिणाम

3.1। संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस

IBV GA98 के साथ चुनौती के बाद 5 दिनों में, टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों में 24 WOA (तालिका 1) में cecal टॉन्सिल को छोड़कर, सभी संग्रह समय और सभी ऊतक नमूनों में सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में काफी कम RNA भार था। टीकाकरण किए गए नियंत्रणों में, 20 और 24 WOA पर cecal टॉन्सिल और 20 WOA पर चोनल फांक को छोड़कर सभी संग्रह समयों में कोई IBV RNA नहीं पाया गया है। सभी ऊतकों में नकारात्मक नियंत्रणों में IBV भार, 24 WOA HG नकारात्मक नियंत्रणों को छोड़कर सभी संग्रह समयों पर पहले बताए गए [23] से अधिक या 36.17 के बराबर के CT मान का उपयोग करके पता लगाने की सीमा से नीचे था।

5 दिनों के बाद चुनौती के बाद मापे गए IBV संक्रमण के नैदानिक ​​​​संकेत 28 WOA को छोड़कर सभी सप्ताहों में सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों में काफी कम थे, लेकिन टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों (तालिका 2) के बीच नैदानिक ​​​​संकेत स्कोर में रुझान संख्यात्मक रूप से कम थे। . गैर-चुनौतीपूर्ण नकारात्मक और टीकाकृत नियंत्रण पक्षियों में नैदानिक ​​​​संकेत अनुपस्थित थे, और टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में संकेत गैर-चुनौतीपूर्ण नियंत्रणों में संकेतों से महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नहीं थे।

तालिका 1. संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस (आईबीवी) आरएनए के लिए औसत मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूआरटी-पीसीआर) चक्र थ्रेशोल्ड (सीटी) मान आईबीवी के साथ चुनौती के 5 दिनों के बाद चोनल फांक, हार्डेरियन ग्रंथि, कंजंक्टिवा और सेकल टॉन्सिल से एकत्र किए गए GA98 20, 24, 28, 32, और 36 सप्ताह की उम्र में। पत्र (ए-डी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीका और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)।

तालिका 2. IBV GA98 चुनौती के 5 दिनों के बाद नैदानिक ​​​​संकेत और सूक्ष्म घावों को मापा गया। पत्र (ए-बी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)।

सभी समूहों से श्वासनली की हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा सामान्य सीमा के भीतर से लेकर फोकल से मल्टीफोकल न्यूनतम से मध्यम लिम्फोसाइटिक ट्रेकाइटिस तक होती है; हालाँकि, मध्यम लिम्फोसाइटिक घुसपैठ को सकारात्मक नियंत्रणों में अधिक बार देखा गया था। सभी हफ्तों में, सकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में डेसीलिएशन या तीव्र ट्रेकिअल नेक्रोसिस वाले टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों का अनुपात काफी कम हो गया था और यह नकारात्मक और टीकाकरण नियंत्रण (तालिका 2) से अलग नहीं था।

Ciliostasis, defined as the cessation of tracheal ciliary movement, was measured at 5 DPC, and the number of birds positive for cryostasis and cryostasis protection scores was calculated for each group (Figure 1). At all collection times, vaccinated/challenged birds were protected from cryostasis (scores were >50), और सकारात्मक नियंत्रण सुरक्षित नहीं थे (स्कोर थे<50). The non-challenged negative controls and vaccinated controls were protected (scores were >50) सभी संग्रह समय पर।

Figure 1. Ciliostasis protection scores among tracheas were collected 5 days post-challenge with IBV GA98 for different groups of birds challenged at 20, 24, 28, 32, and 36 weeks of age (WOA). Groups with a protection score >50 (क्षैतिज रेखा) संरक्षित हैं, और सुरक्षा स्कोर वाले समूह हैं<50 are not protected. Fractions above each bar represent the proportion of birds positive for cryostasis for the respective group. −/− = non-vaccinated/non-challenged, +/− = vaccinated/non-challenged, +/+ = vaccinated/challenged, −/+ = non-vaccinated/challenged.

IBV-विशिष्ट IgG टाइटर्स को 5 DPC पर एकत्रित सीरम में मापा गया। 32 WOA को छोड़कर हर समय, गैर-चुनौती वाले और चुनौतीपूर्ण दोनों समूहों के टीकाकरण वाले पक्षियों ने गैर-चुनौती वाले और चुनौती वाले दोनों समूहों (चित्र 2) के गैर-टीकाकृत पक्षियों की तुलना में काफी अधिक टाइटर्स प्रदर्शित किए। 32 WOA में, टीकाकृत पक्षियों में टाइटर्स, चुनौती की स्थिति की परवाह किए बिना, सकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में काफी अधिक थे। टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में टिटर्स टीकाकरण नियंत्रण में टिटर्स से 36 WOA तक महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नहीं थे, जब टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में काफी अधिक टाइटर्स थे। नकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में हर समय उल्लेखनीय रूप से उच्च अनुमापांक होते थे।

IBV-विशिष्ट IgA टाइटर्स को 28, 32 और 36 WOA पर 5 DPC पर एकत्र किए गए आँसुओं में मापा गया। 28 WOA में, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में टाइटर्स गैर-चुनौती वाले नकारात्मक नियंत्रणों (चित्र 3) में टाइटर्स की तुलना में काफी अधिक थे। 32 WOA में, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों ने सकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में काफी कम टिटर्स दिखाए। इसके अलावा, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में 28 डब्ल्यूओए में टीकाकृत/अनचैलेंज्ड समूह की तुलना में काफी अधिक टिटर थे। कोई अन्य महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया। वायरस 2019।

चित्र 2. सीरम में IBV-विशिष्ट IgG टाइटर्स को 20, 24, 28, 32, और 36 WOA में चुनौती दिए गए पक्षियों के विभिन्न समूहों के लिए IBV GA98 के साथ चुनौती के 5 दिनों के बाद एकत्र किया गया था। पत्र (ए-सी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)। −/−=गैर-टीकाकृत/गैर-चुनौतीपूर्ण, प्लस /-=टीकाकृत/गैर-चुनौतीयुक्त, प्लस / प्लस=टीकाकृत/चुनौती प्राप्त, −/ प्लस=गैर-टीकाकरण / चुनौती दी।

चित्र 3. 20, 24, 28, 32, और 36 WOA में चुनौती दिए गए पक्षियों के विभिन्न समूहों के लिए IBV GA98 के साथ चुनौती के 5 दिन बाद आँसू में IBV-विशिष्ट IgA टिटर को फाड़ें। पत्र (ए-सी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)। −/−=गैर-टीकाकृत/गैर-चुनौतीपूर्ण, प्लस /-=टीकाकृत/गैर-चुनौतीयुक्त, प्लस / प्लस=टीकाकृत/चुनौती प्राप्त, −/ प्लस=गैर-टीकाकरण / चुनौती दी।

3.2। न्यूकैसल रोग वायरस (एनडीवी)

NDV B1 के साथ 5 dpc पर, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में या तो undetectable RNA भार था या सभी संग्रह समयों पर और सभी नमूनों (तालिका 3) में सकारात्मक नियंत्रण टाइटर्स की तुलना में काफी कम भार था। आरएनए वायरस के लिए गैर-चुनौतीपूर्ण नकारात्मक नियंत्रण और टीकाकरण नियंत्रण 35 से अधिक या उसके बराबर के सीटी मान का उपयोग करके नकारात्मक थे। 0 जैसा कि पहले रिपोर्ट किया गया था [22]।

तालिका 3. एनडीवी आरएनए के लिए औसत क्यूआरटी-पीसीआर सीटी मान एनडीवी बी1 वैक्सीन के साथ चुनौती के 5 दिनों के बाद चोनल फांक, हार्डेरियन ग्रंथि और कंजंक्टिवा से एकत्र किए गए। पत्र (ए-सी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)।

सकारात्मक नियंत्रण में 20 WOA पर 5 dpc पर मापे गए नैदानिक ​​संकेत महत्वपूर्ण थे, जिसके बाद सकारात्मक नियंत्रण में नैदानिक ​​संकेत किसी भी अन्य उपचार समूह (तालिका 4) से अलग नहीं थे। किसी भी समय टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों और गैर-चुनौती वाले नियंत्रणों के बीच नैदानिक ​​​​संकेतों में कोई महत्वपूर्ण अंतर मौजूद नहीं था। सभी हफ्तों में, श्वासनली की हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षा सामान्य सीमा के भीतर थी या मल्टीफोकल न्यूनतम से हल्के लिम्फोसाइटिक ट्रेकाइटिस के लिए फोकल थी, और समूह से संबंधित कोई अंतर नहीं था।

क्रायोस्टेसिस के लिए ट्रेकिआ का भी मूल्यांकन किया गया था, और किसी भी समूह ने क्रायोस्टेसिस का प्रदर्शन नहीं किया।

एनडीवी-विशिष्ट सीरम आईजीजी टाइटर्स टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों और टीकाकरण नियंत्रण सभी संग्रह समय (चित्रा 4) पर सकारात्मक और नकारात्मक दोनों नियंत्रणों में टाइटर्स की तुलना में काफी अधिक थे। किसी भी समय टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों और टीकाकृत नियंत्रणों के बीच टाइटर्स में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। इसी तरह, गैर-टीकाकृत/चुनौती वाले और नकारात्मक नियंत्रणों के बीच टाइटर्स में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया, 28 डब्ल्यूओए को छोड़कर जिसमें गैर-टीकाकृत/चुनौती वाले नियंत्रणों से टाइटर्स काफी अधिक थे।

तालिका 4. NDV B1 चुनौती के 5 दिन बाद नैदानिक ​​संकेतों को मापा गया। पत्र (ए-बी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)।

चित्र 4. सीरम में NDV-विशिष्ट IgG टाइटर्स को 20, 24, 28, 32, और 36 WOA में चुनौती दिए गए पक्षियों के विभिन्न समूहों के लिए NDV B1 वैक्सीन के साथ चुनौती के 5 दिनों के बाद एकत्र किया गया था। पत्र (ए-सी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)। −/−=गैर-टीकाकृत/गैर-चुनौतीपूर्ण, प्लस /-=टीकाकृत/गैर-चुनौतीयुक्त, प्लस / प्लस=टीकाकृत/चुनौती प्राप्त, −/ प्लस=गैर-टीकाकरण / चुनौती दी।

3.3। संक्रामक Laryngotracheitis वायरस (ILTV)

ILTV स्ट्रेन 6314 0 के साथ 5 dpc पर, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में सभी संग्रह समयों और सभी ऊतकों (तालिका 5) में सकारात्मक नियंत्रणों की तुलना में वायरल डीएनए लोड काफी कम था। ट्रेकेआ और एचजी में डीएनए भार ज्ञानी या कम था और गैर-चुनौतीपूर्ण नकारात्मक और टीकाकरण नियंत्रणों में डीएनए भार से महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नहीं था, जो पहले की रिपोर्ट [26] के मुकाबले 38.0 के बराबर या उससे अधिक के सीटी मान का उपयोग कर नकारात्मक थे। कंजंक्टिवा में, टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में डीएनए भार गैर-चुनौती वाले नकारात्मक और टीकाकरण नियंत्रण दोनों से डीएनए भार की तुलना में काफी अधिक था, 28 WOA को छोड़कर जिसमें टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों और टीकाकृत नियंत्रणों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया था।

तालिका 5. श्वासनली, हार्डेरियन ग्रंथि और कंजंक्टिवा से एकत्र किए गए ILTV डीएनए के लिए औसत qPCR CT मान रोगजनक ILTV तनाव 6314 0 के साथ चुनौती के 5 दिन बाद। पत्र (ए-सी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)।

3 डीपीसी में चुनौतीपूर्ण पक्षियों में नैदानिक ​​​​संकेत और वायरल डीएनए का पता चला था, लेकिन सकारात्मक नियंत्रण में संकेत 5 डीपीसी से अधिक गंभीर हो गए थे क्योंकि ट्रेकिअल वायरल लोड बढ़ गया था (तालिका 6)। 36 WOA को छोड़कर सभी संग्रह बिंदुओं पर सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में टीकाकृत/चुनौती वाले पक्षियों में 5 dpc पर मापा गया क्लिनिकल साइन स्कोर काफी कम हो गया था, जब क्लिनिकल साइन स्कोर संख्यात्मक रूप से कम हो गए थे। सभी नकारात्मक नियंत्रणों और टीकाकृत नियंत्रणों का कोई नैदानिक ​​संकेत नहीं था, और टीकाकरण/चुनौती वाले पक्षियों में नैदानिक ​​संकेत इन नियंत्रणों की तुलना में काफी अलग नहीं थे, सिवाय 36 WOA के जब नैदानिक ​​संकेत स्कोर काफी अधिक थे।

तालिका 6. नैदानिक ​​संकेतों को ILTV 63140 चुनौती के 5 दिन बाद मापा गया। पत्र (ए-बी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)।

ट्रेकिअल हिस्टोलॉजिकल परीक्षा सामान्य सीमा के भीतर थी या सभी समूहों से ट्रेकिआ में न्यूनतम से हल्के लिम्फोसाइटिक ट्रेकाइटिस को फैलाने के लिए फोकल थी। सकारात्मक नियंत्रणों के लिए, क्रमशः 20 और 28 सप्ताहों में 3/9 और 1/10 में सिंकाइटिया और इंट्रान्यूक्लियर समावेशन (चित्र 5) के साथ तीव्र फोकल नेक्रोटाइज़िंग ट्रेकाइटिस था।

चित्रा 5. सांस की नली के सूक्ष्म घाव 20 सप्ताह की उम्र में संक्रामक लैरींगोट्राकाइटिस संक्रमण के अनुरूप होते हैं। (ए) इंट्रान्यूक्लियर समावेशन (तीर) के साथ कई सिंकाइटिया। (बी) एक ही समूह से एक अन्य श्वासनली ने इंट्रान्यूक्लियर समावेशन (तीर) के साथ सिंकाइटिया का प्रदर्शन किया।

किसी भी समूह के पक्षियों के श्वासनली में कोई आइकोस्टेसिस नहीं देखा गया।

सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रणों (चित्र 6) की तुलना में चुनौतीपूर्ण और गैर-चुनौती वाले दोनों समूहों से टीकाकृत पक्षियों में 5 दिनों के बाद सीरम में ILTV-विशिष्ट IgG टाइटर्स एकत्र किए गए थे।

चित्रा 6. सीरम में आईएलटीवी-विशिष्ट आईजीजी टाइटर्स को 20, 24, 28, 32, और 36 डब्ल्यूओए में चुनौती देने वाले पक्षियों के विभिन्न समूहों के लिए आईएलटीवी स्ट्रेन 63140 के साथ चुनौती के 5 दिनों के बाद एकत्र किया गया था। पत्र (ए-बी) प्रत्येक सप्ताह के लिए टीके और चुनौती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं (पी <0.05)। −/−=गैर-टीकाकृत/गैर-चुनौतीपूर्ण, प्लस /-=टीकाकृत/गैर-चुनौतीयुक्त, प्लस / प्लस=टीकाकृत/चुनौती प्राप्त, −/ प्लस=गैर-टीकाकरण / चुनौती दी।

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