सेरेब्रल इस्केमिया-रिपर्फ्यूजन वाले चूहों में ऑक्सीडेटिव तनाव चोट और सेल एपोप्टोसिस पर सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला टोटल ग्लाइकोसाइड्स का प्रभाव Ⅰ

अबस्टरैक्ट

उद्देश्य: के प्रभावों और संभावित तंत्रों का पता लगानासिस्टान्चे डेज़र्टिकोला टोटल ग्लाइकोसाइड्स(जीसी) सेरेब्रल स्ट्रोक वाले चूहों में ऑक्सीडेटिव तनाव क्षति और तंत्रिका कोशिका एपोप्टोसिस परइस्केमिया रिपेरफ्यूजन चोट(सीआईआरआई)

विधियाँ: मॉडल चूहों में सिवनी एम्बोलिज़ेशन विधि का उपयोग करके मध्य मस्तिष्क धमनी अवरोधन (MCAO) मॉडल का निर्माण किया गया। मॉडल के सफलतापूर्वक स्थापित होने के बाद, दवा समूह (GCs) के चूहों को लगातार 14 दिनों तक गैवेज द्वारा GCs 50 mg/(kg·d) दिया गया; शैम ऑपरेशन समूह (शैम) और मॉडल समूह (मॉडल) के चूहों को सामान्य खारा की समान मात्रा दी गई। मौखिक प्रशासन। प्रशासन के बाद, न्यूरोलॉजिकल कमी का मूल्यांकन करने के लिए लोंगा स्कोर विधि का उपयोग किया गया; फिर चूहों की बलि दी गई, और मस्तिष्क रोधगलन क्षेत्र के प्रतिशत की गणना करने के लिए TTC धुंधलापन किया गया; सीरम का पता लगाने के लिए ELISA विधि का उपयोग किया गयामैलोनडायल्डिहाइड(एमडीए) सामग्री,सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज़(एसओडी) औरग्लूटाथिऑन पेरोक्सीडेज (GSH-Px)गतिविधि; मस्तिष्क के ऊतकों में परमाणु कारक E2-संबंधित कारक 2 (Nrf2), हीम ऑक्सीजेनेज-1 (HO-1) और B का पता लगाने के लिए वेस्टर्न ब्लॉटसेलुलर लिंफोमा/ल्यूकेमिया-2 (बीसीएल-2), बीसीएल-2-संबद्ध एक्स प्रोटीन (बैक्स), और कैस्पेस-3 (कैस्पेस-3) अभिव्यक्ति।

परिणाम: शम समूह की तुलना में, मॉडल समूह में न्यूरोलॉजिकल डेफिसिट स्कोर में वृद्धि हुई, मस्तिष्क रोधगलन क्षेत्र प्रतिशत में वृद्धि हुई,एमडीए सामग्री में वृद्धि, एसओडी और जीएसएच-पीएक्स गतिविधियों में कमी, और एनआरएफ 2, एचओ -1 और बीसी एल-2 प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर में कमी बैक्स और कैस्पेस-3 के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर में वृद्धि हुईमॉडल समूह की तुलना में, जीसीएस समूह में चूहों के न्यूरोलॉजिकल डेफिसिट स्कोर में कमी आई, सेरेब्रल इंफार्क्शन क्षेत्र का प्रतिशत कम हो गया,एमडीए सामग्री में कमी आई, एसओडी और जीएस एच-पीएक्स गतिविधि बढ़ जाती है, एनआरएफ 2, एचओ -1 और बीसीएल - 2 के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर में वृद्धि हुई, और बैक्स और कैस्पेज़ - 3 के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर में कमी आई। निष्कर्ष: जीसी प्रभावी रूप से सेरेब्रल इस्केमिया-रिपर्फ्यूजन चोट को कम कर सकते हैं, और इसका तंत्र एनआरएफ 2 / एचओ - 1 मार्ग को सक्रिय करने से संबंधित हो सकता है, जिससे ऑक्सीडेटिव तनाव के स्तर को कम किया जा सकता है और तंत्रिका कोशिका एपोप्टोसिस को बाधित किया जा सकता है।

[मुख्य शब्द]सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला टोटल ग्लाइकोसाइड्स; सेरेब्रल इस्केमिया-रिपर्फ्यूजन चोट; ऑक्सीडेटिव तनाव; कोशिका अपोप्टोसिस

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सेरेब्रल इस्केमिया-रिपर्फ्यूजन,

सी.आई.एस. एक अत्यंत गंभीर बीमारी हैउच्च रुग्णता, विकलांगताऔरमरण दरमस्तिष्क की कोशिकाएँ इस्केमिया और हाइपोक्सिया के प्रति बेहद संवेदनशील होती हैं, इसलिए जितनी जल्दी हो सके मस्तिष्क की रक्त वाहिकाओं को फिर से चालू करना तीव्र इस्केमिक स्ट्रोक से निपटने का सबसे प्रभावी तरीका है। अंतःशिरा थ्रोम्बोलिसिस और मैकेनिकल थ्रोम्बेक्टोमी वर्तमान में व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधियाँ हैं, लेकिन उनकी अपेक्षाकृत कमज़ोरी के कारण

संकीर्ण समय सीमा और अन्य अनियंत्रित कारकों के कारण, केवल<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. सेरेब्रल इस्केमिया रिपरफ्यूजन, सीआईआरआई स्टेनोसिस ए सुपरइम्पोज़्ड पैथोलॉजिकल डैमेज से मस्तिष्क रक्त वाहिका रिकवरी का एक प्रकार है जो रक्त प्रवाह के दौरान होता है। वर्तमान में यह माना जाता है कि इसका रोग तंत्र उत्तेजक अमीनो एसिड विषाक्तता, कैल्शियम अधिभार, भड़काऊ कारकों की रिहाई और माइटोकॉन्ड्रियल क्षति के कारण ऑक्सीजन मुक्त कणों के संचय से संबंधित हो सकता है [1], जो अंततः रक्त-मस्तिष्क अवरोध विनाश, माइक्रोकिरकुलेशन विकार, तंत्रिका कोशिका एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस [1] 2] और प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला की ओर जाता है, जिससे न्यूरोलॉजिकल घाटे में और वृद्धि होती है।

सिस्टांच डेज़र्टिकोला कुल ग्लाइकोसाइड्स (सिस्टैंच के ग्लाइकोसाइड्स, जीसी) पारंपरिक चीनी दवा हर्बा सिस्टांच से प्राप्त होते हैं। मुख्य सक्रिय घटक इंच के तने और जड़ों से निकाला जाता है)। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि जीसी प्रभावी रूप से लिपिड पेरोक्सीडेशन को रोक सकते हैं, माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में सुधार कर सकते हैं, अतिरिक्त ऑक्सीजन मुक्त कणों को हटा सकते हैं, भड़काऊ साइटोकिन्स की रिहाई को रोक सकते हैं, साइटोटॉक्सिसिटी को कम कर सकते हैं, प्लेटलेट एकत्रीकरण को रोक सकते हैं, सेल प्रसार को रोक सकते हैं, न्यूरोनल एपोप्टोसिस को रोक सकते हैं और हार्मोन के स्तर को कम कर सकते हैं, जिससे एंटी-एजिंग, एंटी-ट्यूमर, एंटी-डिप्रेशन, प्रतिरक्षा को बढ़ाने, इस्केमिक कार्डियोवैस्कुलर और सेरेब्रोवास्कुलर रोगों में सुधार, सीखने और स्मृति क्षमताओं और संज्ञानात्मक कार्यों में सुधार और प्रजनन में सुधार होता है [3]।

अध्ययनों से पता चला है कि जी.सी. कोशिकाओं को होने वाली ऑक्सीडेटिव क्षति को कम कर सकते हैं तथा रक्त-मस्तिष्क अवरोध की अखंडता को बनाए रख सकते हैं।

[4]; जीसी प्रभावी रूप से सेल व्यवहार्यता में सुधार कर सकते हैं और इस्केमिया-रिपर्फ्यूजन के बाद प्रेरित सूजन और एपोप्टोसिस को रोक सकते हैं [5]; एनआरएफ 2 एंटी-इंफ्लेमेटरी और एंटीऑक्सीडेंट प्रक्रियाओं में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है [6]। उपरोक्त पृष्ठभूमि के आधार पर, इस लेख का उद्देश्य सीआईआरआई मॉडल की प्रतिकृति बनाकर सीआईआरआई के बाद ऑक्सीडेटिव तनाव और एपोप्टोसिस पर जीसी के प्रभावों और संभावित मार्गों का आगे अध्ययन करना है।

1 सामग्री और विधियाँ

1. 1 ड्रग्स और अभिकर्मक जीसी (एसएन-5692, शुद्धता 98%, पश्चिमी

एंशेनॉन्ग बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड), 2% ट्राइफेनिलटेट्राजोलियम क्लोराइड (टीटीसी) डाई सॉल्यूशन (बीजिंग सोलेबाओ टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड), एलिसा किट (बीजिंग बूसेन कंपनी लिमिटेड), बीसीए प्रोटीन मात्रात्मक विश्लेषण किट (यूएसए सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी कंपनी), खरगोश विरोधी माउस एंटीबॉडी बीसीएल-2, बाक्स, कैस्पास एंटीबॉडी जैसे ई-3, एनआरएफ 2, एचओ-1, और बकरी विरोधी खरगोश माध्यमिक एंटीबॉडी सभी संयुक्त राज्य अमेरिका की प्रोटीनटेक कंपनी से खरीदे गए थे।

1. 2 उपकरण

सेंट्रीफ्यूज (मॉडल: टीडीएल-40बी, शंघाई अनहेंग साइंटिफिक इंस्ट्रूमेंट फैक्ट्री), माइक्रोप्लेट रीडर (मॉडल: मैक्स-एम5, अमेरिकन मॉलिक्यूलर डिवाइसेज कंपनी), एसडीएस-पीएजीई इलेक्ट्रोफोरेसिस इंस्ट्रूमेंट (मॉडल: डीवाईवाई-7सी, बीजिंग लियुई बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड कंपनी), जेल स्कैनर (मॉडल: 4466611, यूएस बायो-आरएडी कंपनी)।

1. 3 जानवर

नर विस्टार चूहे [एससीएक्सके (बीजिंग) 2019-0010], स्वच्छ ग्रेड, 8 सप्ताह पुराने, शरीर का वजन 250-280 ग्राम।

1. 3 विधियाँ

1. 3. 1 समूहीकरण और मॉडलिंग

चूहों को एक सरल यादृच्छिकरण विधि का उपयोग करके शम समूह (शम), मॉडल समूह (मॉडल), और दवा समूह (जीसी) में विभाजित किया गया था। प्रत्येक समूह में 15 चूहे थे। उन्हें 1 सप्ताह के लिए अनुकूली रूप से उठाया गया और फिर मॉडल बनाया गया। सर्जरी से 12 घंटे पहले सख्ती से उपवास और उपवास, मॉडल समूह और जीसी समूह ने मध्य सेरेब्रल धमनी अवरोध (मध्य सेरेब्रल धमनी अवरोध) बनाने के लिए सिवनी एम्बोलिज़ेशन विधि [7] का उपयोग किया। अवरोध, एमसीएओ) चूहे मॉडल, रिपेरफ्यूजन को प्राप्त करने के लिए इस्केमिया के 2 घंटे बाद एम्बोलस को हटाया गया।, रिपेरफ्यूजन का प्रारंभ समय रिकॉर्ड करें। घाव को सीवन किया गया था, त्वचा को आयोडोफोर से कीटाणुरहित किया गया था

1. 3. 2. प्रशासन पद्धति

जी.सी. पाउडर लें और उसमें शुद्ध पानी मिलाकर 15 मि.ग्रा./एम.एल. घोल तैयार करें। प्रारंभिक अध्ययनों से पता चला है कि 50 मि.ग्रा./(किग्रा·दिन) की खुराक अन्य खुराक समूहों [8] से बेहतर है, इसलिए इस प्रयोग के लिए चुनी गई खुराक पहले जैसी ही है। जी.सी. समूह के चूहों को इस्केमिया और रिपरफ्यूजन के 24 घंटे बाद गैवेज द्वारा जी.सी. दिया गया, और शम समूह और मॉडल समूह के चूहों को 14 दिनों के लिए गैवेज द्वारा समान मात्रा में सामान्य खारा दिया गया।

1. 3. 3 न्यूरोलॉजिकल डेफिसिट स्कोर

सर्जरी के 24 घंटे बाद स्कोर करने के लिए लोंगा स्कोरिंग विधि [7] का इस्तेमाल किया गया और 1 से 3 के स्कोर वाले मॉडल चूहों को बाद के प्रयोगों के लिए बनाए रखा गया। अंतिम खुराक के बाद स्कोर। 0 अंक: कोई नहीं

तंत्रिका संबंधी लक्षण; 1 अंक: मामूली तंत्रिका संबंधी कमी, जब पूंछ उठाई जाती है तो विपरीत अग्रपाद मुड़ता है और ऊपर उठता है, तथा कंधा जुड़ता है; 2 अंक: मध्यम तंत्रिका संबंधी कमी, जब पूंछ उठाई जाती है तो विपरीत अग्रपाद मुड़ता है और ऊपर उठता है, कंधा जुड़ता है, चलते समय घाव के विपरीत दिशा में गोल-गोल घूमता है; 3 अंक: गंभीर तंत्रिका संबंधी कमी, चलते समय घाव के विपरीत दिशा में झुकना; 4 अंक: अचेतन और स्वायत्त गतिविधियां।

1. 3. 4 मस्तिष्क रोधगलन क्षेत्र के प्रतिशत का निर्धारण

अंतिम प्रशासन के बाद, प्रत्येक समूह से 4 चूहों को यादृच्छिक रूप से चुना गया, उन्हें गहन रूप से बेहोश कर दिया गया, उनका सिर काट दिया गया, तथा उनके मस्तिष्क को शीघ्रता से निकाल लिया गया।

मस्तिष्क के ऊतकों को जल्दी से 20 मिनट के लिए -20 डिग्री रेफ्रिजरेटर में जमाएं। मस्तिष्क के ऊतक के अपेक्षाकृत स्थिर हो जाने के बाद, इसे बाहर निकालें। मस्तिष्क के पूर्ववर्ती ध्रुव के चौराहे से ऑप्टिक चियास्म तक, और माथे से ओसीसीपट तक, कोरोनल तल के साथ चूहे के मस्तिष्क को काटें। 2 मिमी की मोटाई के साथ 5 मस्तिष्क के स्लाइस में काटें, उन्हें 2% टीटीसी घोल में डुबोएं, उन्हें 15 मिनट के लिए रंगाई के लिए 37 डिग्री पानी के स्नान में रखें, उन्हें पलट दें, और उन्हें 15 मिनट के लिए और रंग दें। अंत में, मस्तिष्क के स्लाइस को 4% पैराफॉर्मलडिहाइड घोल में डुबोया गया और फोटो खींचने से पहले 12 घंटे के लिए स्थिर किया गया। सामान्य मस्तिष्क के ऊतक को लाल रंग में और रोधगलित मस्तिष्क के ऊतक को सफेद रंग में दिखाया गया

1. 3. 5 ऑक्सीडेटिव तनाव से संबंधित संकेतकों का पता लगाना

चूहे को बेहोश करें, 4 एमएल उदर महाधमनी रक्त लें, इसे साफ ईपी ट्यूब में डालें और इसे 0 के लिए 4 डिग्री रेफ्रिजरेटर में रखें। 15 मिनट के लिए 4 डिग्री पर 5 घंटे के लिए 3 500 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें, सुपरनेटेंट लें, और अंत में प्रत्येक समूह में 3 चूहों के सीरम को बनाए रखें। एलिसा किट ऑपरेटिंग विधि के अनुसार मैलोनडायल्डिहाइड (एमडीए) और सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस) की सामग्री निर्धारित की गई। ई डिसम्यूटेस,

एसओडी), ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज, जीएसएच-पीएक्स) गतिविधि।

1. 3. 6 वेस्टर्न ब्लॉट का पता लगाना

मस्तिष्क के ऊतकों में Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax, और Caspase -3 प्रोटीन की अभिव्यक्ति को मापने के लिए ऑक्सीडेटिव तनाव और एपोप्टोसिस-संबंधी प्रोटीन को मापा गया। प्रत्येक समूह से तीन चूहों को चुना गया, और रोगग्रस्त क्षेत्र से सेरेब्रल कॉर्टेक्स की एक उचित मात्रा ली गई, इसमें लाइसिस घोल मिलाया गया, और प्रोटीन निष्कर्षण के बाद प्रोटीन सांद्रता की गणना की गई। प्रोटीन जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद, झिल्ली में स्थानांतरण, 2 घंटे के लिए अवरोधक समाधान के साथ अवरुद्ध करना, धोना, और फिर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ 4 डिग्री पर रात भर इनक्यूबेट करना, अगले दिन, टीबीएसटी को हटा दिया गया, धोया गया, और 2 घंटे के लिए ऊष्मायन के लिए द्वितीयक एंटीबॉडी जोड़ा गया।

1. 4 सांख्यिकीय विश्लेषण विधियाँ

डेटा विश्लेषण के लिए डेटा एप्लीकेशन SPSS 25. 0 सॉफ़्टवेयर, और इस लेख में सांख्यिकीय ग्राफ़ ग्राफ़पैड प्रिज्म 8 सॉफ़्टवेयर के साथ तैयार किए गए थे। सामान्य वितरण के अनुरूप डेटा परिणाम औसत ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। कई नमूनों के बीच तुलना के लिए विचरण का एक-कारक विश्लेषण इस्तेमाल किया गया था, और दो स्वतंत्र नमूनों के बीच तुलना के लिए LSD-t का इस्तेमाल किया गया था। P < 0. 05 के साथ परीक्षण इंगित करता है कि अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण है।