सिस्टांच डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों का डीबी/डीबी ब्लैक चूहों के हाइपोग्लाइसेमिक प्रभावों पर प्रभाव Ⅱ

2 प्रायोगिक विधियाँ

2.1 सिस्टैंचे डेज़र्टिकोला प्रसंस्कृत उत्पादों की तैयारी सिस्टैंचे डेज़र्टिकोला:

सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला औषधीय सामग्री लें, अशुद्धियों को धो लें, 2 घंटे के लिए सामान्य दबाव में एक बर्तन में भाप दें, 6 मिमी में काट लें, और 70 डिग्री पर सुखाएं। सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला: सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला काढ़ा के टुकड़े लें, उचित मात्रा में चावल की शराब डालें, अच्छी तरह मिलाएँ, 8 घंटे के लिए गीला करें (पीले चावल की शराब: पानी=1: 1), 4 घंटे के लिए उच्च दबाव में भाप दें, और 70 डिग्री पर सुखाएँ। (सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला के प्रत्येक 100 ग्राम के लिए 30 एमएल चावल की शराब का उपयोग करें)।

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2.2 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों का संवर्धन

30 ग्राम सिस्टांच डेजर्टीकोला/टैमारोकोकस डेजर्टीकोला पाउडर लें, उसमें 10 गुना पानी मिलाएं, गर्म करें और निष्कर्षण के लिए दो बार, प्रत्येक बार 2 घंटे के लिए रिफ्लक्स करें, अर्क को मिलाएं, सांद्रण करें, अल्कोहल की मात्रा 60% तक पहुंचने तक इथेनॉल मिलाएं, 12 घंटे के लिए कम तापमान पर अवक्षेपित करें और चूषण के साथ छान लें। , अवक्षेप अपरिष्कृत पॉलीसैकराइड भाग है। सतह पर तैरनेवाला को उचित सांद्रता में केंद्रित करें, इसे D101 मैक्रोपोरस अधिशोषण राल पर लागू करें, और क्रम में विभिन्न सांद्रता के पानी और इथेनॉल के साथ इसे निक्षालित करें। कम दबाव में पानी के निक्षालन और सांद्रण को एक गाढ़े पेस्ट में इकट्ठा करें, जो कुल ओलिगोसेकेराइड अंश है

2.3 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों की सामग्री का निर्धारण

2.3.1 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला की कुल पॉलीसैकेराइड सामग्री का निर्धारण।

0 बनाने के लिए 50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में ग्लूकोज नमूने का वजन 20. 00 मिलीग्राम करें। 4 मिलीग्राम·एमएल-1 ग्लूकोज मानक समाधान के लिए, 50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में क्रमशः 3, 4, 5, 6, और 7 एमएल पिपेट करें, पानी के साथ मात्रा को पतला करें, और एक टेस्ट ट्यूब में प्रत्येक सांद्रता ढाल ग्लूकोज समाधान के 2.0 एमएल पिपेट करें। एक खाली नियंत्रण के रूप में आसुत जल की एक और बराबर मात्रा लें, प्रत्येक ट्यूब में 5% फिनोल का 1 एमएल जोड़ें, अच्छी तरह से हिलाएं, जल्दी से 5 एमएल केंद्रित सल्फ्यूरिक एसिड जोड़ें, इसे 10 मिनट के लिए छोड़ दें, इसे 15 मिनट के लिए 40 डिग्री पानी के स्नान में डालें, इसे बाहर निकालें, जल्दी से कमरे के तापमान पर ठंडा करें, और 490 एनएम पर अवशोषण मूल्य को मापें, अवशोषण (ए) को कोटि के रूप में और ग्लूकोज सांद्रता (सी) को एब्सिस्सा के रूप में लें, एक मानक वक्र बनाएं, और प्रतिगमन समीकरण Y=8.37X-0.162 8 (R2=0.994 6) प्राप्त करें। कच्चे माल और उत्पादों के कुल पॉलीसैकराइड पाउडर के 1.0 ग्राम का सटीक वजन करें , इतना ही।

2.3.2 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला में बीटाइन सामग्री का निर्धारण

2.3.2.1 संदर्भ समाधान की तैयारी:

बीटाइन संदर्भ विलयन के 1.17 मिलीग्राम को सही ढंग से तौलें, इसे 5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डालें, घुलने के लिए 50% मेथनॉल मिलाएं और मात्रा तक पतला करें, और यह तैयार है।

2.3. 2． 2 क्रोमैटोग्राफिक स्थितियां

क्रोमैटोग्राफिक कॉलम इकोसिल {{0}}एमिनो क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (4.6 मिमी × 25 0 मिमी, 5 माइक्रोन), मोबाइल चरण: एसिटोनिट्राइल-पानी (99.5 ∶ 0.5), कॉलम तापमान: 3 0 डिग्री, पता लगाने की तरंग दैर्ध्य: 194 एनएम, प्रवाह दर: 0.6 एमएल · मिनट -1, इंजेक्शन की मात्रा 10 μL, क्रोमैटोग्राम चित्रा 1 में दिखाया गया है। 2.3.2.3 परीक्षण समाधान की तैयारी कच्चे और तैयार उत्पादों के कुल ओलिगोसेकेराइड अंश के पाउडर को क्रमशः 1.0 ग्राम वजन करें, 5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें, मात्रा में घुलने और पतला करने के लिए आसुत जल जोड़ें, अच्छी तरह से हिलाएं, 0.45 μL माइक्रोपोरस फिल्टर झिल्ली से गुजारें, और यह तैयार है।

2.3.2.4 नमूना सामग्री निर्धारण

कच्चे और तैयार सिस्टैंचे डेज़र्टिकोला में कुल ओलिगोसेकेराइड परीक्षण समाधान को सटीक रूप से अवशोषित करें, इसे "2.3.2.2" के तहत शर्तों के अनुसार मापें, और नमूने में बीटाइन सामग्री की गणना करें।

2.3.3 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला में इचिनाकोसाइड, वर्बास्कोसाइड और हेटेरोसाइमिसिफ़ुगरिन की सामग्री का निर्धारण

2.3.3.1 संदर्भ समाधान की तैयारी

5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 4.50 मिलीग्राम इचिनाकोसाइड, 4.80 मिलीग्राम वर्बास्कोसाइड और 5.05 मिलीग्राम हेटेरोलॉगस कॉमिमिसिन को ठीक से तौलें, निशान तक घुलने और पतला करने के लिए 50% मेथनॉल मिलाएं और प्रत्येक नियंत्रण लें। इंजेक्शन शीशी में नमूना समाधान के 200 μL डालें, 50% मेथनॉल के 400 μL जोड़ें, और मिश्रित संदर्भ समाधान बनाने के लिए अच्छी तरह मिलाएं, अच्छी तरह हिलाएं, और यह तैयार है।

2.3.3.2 क्रोमैटोग्राफिक स्थितियां

क्रोमैटोग्राफिक कॉलम इकोसिल C18 (4.6 मिमी × 25 मिमी, 5 माइक्रोन) है, मेथनॉल मोबाइल चरण ए है, 0.1% फॉर्मिक एसिड मोबाइल चरण बी है, ग्रेडिएंट एल्यूशन, 0 ~ 45 मिनट, 30% ए → 70% ए, प्रवाह दर 1.0 एमएल · मिनट -1 है, कॉलम तापमान 30 डिग्री है, पता लगाने की तरंग दैर्ध्य 330 एनएम है, इंजेक्शन की मात्रा 10μL है, और क्रोमैटोग्राम चित्रा 2 में दिखाया गया है।

2.3.3.3 परीक्षण समाधान की तैयारी

कच्चे माल और उत्पादों के कुल ग्लाइकोसाइड पाउडर का 1.0 ग्राम वजन करें, उन्हें 100 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें, घुलने के लिए 50% मेथनॉल डालें, वॉल्यूम को निशान के अनुसार समायोजित करें, और अच्छी तरह से हिलाएं। प्रत्येक नमूने के 5 एमएल को 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डालें, वॉल्यूम बनाने के लिए 50% मेथनॉल डालें, अच्छी तरह से हिलाएं, और प्राप्त करने के लिए 0.45 माइक्रोन माइक्रोपोरस फ़िल्टर झिल्ली से गुजारें।

2.3.3.4 नमूना सामग्री निर्धारण

सिस्टांच डेज़र्टिकोला कुल ग्लाइकोसाइड्स का नमूना सटीक रूप से बनाएं और इसे "2.3.3.2" के तहत शर्तों के अनुसार मापें। नमूने में इचिनाकोसाइड, वर्बास्कोसाइड और हेटेरोलॉगस कॉम्प्लिसिट की सामग्री की गणना करें।

2.4 पशु समूहीकरण, मॉडलिंग और दवा प्रशासन

पशु कक्ष में 12 घंटे प्रकाश और 12 घंटे अंधेरा, 50% से 70% की सापेक्ष आर्द्रता और 18 से 22 डिग्री का कमरे का तापमान होता है। डीबी/डीबी काले चूहों और डीबी/एम काले चूहों (सामान्य नियंत्रण समूह) को सामान्य फ़ीड के साथ सामान्य रूप से खिलाया गया था, और प्रयोग 9 सप्ताह की उम्र में शुरू हुआ था। सामान्य नियंत्रण समूह को छोड़कर, शेष डीबी/डीबी काले चूहों को रक्त शर्करा के स्तर और शरीर के वजन के अनुसार यादृच्छिक रूप से चुना गया था। 8 समूहों में विभाजित, अर्थात् मॉडल समूह, सकारात्मक नियंत्रण समूह, सिस्टांच डेसर्टिकोला कुल पॉलीसैकराइड समूह, सिस्टांच डेसर्टिकोला कुल ओलिगोसेकेराइड समूह, सिस्टांच डेसर्टिकोला कुल ग्लूकोसाइड्स समूह, टार्टशिस्टैन्च डेसर्टिकोला कुल पॉलीसैकराइड समूह, टार्थहाउस डेसर्टिकोला कुल ओलिगोसेकेराइड समूह

मॉडल समूह और मॉडल समूह को छोड़कर, अन्य समूहों के चूहों को लगातार 4 सप्ताह तक 2 एमएल/100 ग्राम की खुराक पर इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन दिया गया। तरल की सांद्रता 4.1 ग्राम·किग्रा-1 थी। सामान्य नियंत्रण समूह और मॉडल समूह का एक ही तरीके से इलाज किया गया। पेट में सामान्य खारा की एक निश्चित मात्रा दें।

2.5 सिस्टांच डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों का डीबी/डीबी काले चूहों के रक्त ग्लूकोज स्तर पर प्रभाव

2.5.1 मौखिक ग्लूकोज सहनशीलता (OGTT) परीक्षण

प्रशासन के 26 दिनों के बाद, उन्होंने 12 घंटे तक उपवास किया, और अगले दिन प्रशासन के 60 मिनट बाद, प्रत्येक समूह के काले चूहों को क्रमशः 0, {{10}}.5, 1.0, और 2 पर 2.0 ग्राम·किग्रा-1 ग्लूकोज दिया गया। रक्त शर्करा के मान को मापने के लिए पूंछ शिरा से रक्त लिया गया। रक्त शर्करा के मान को कोर्डिनेट और समय को एब्सिस्सा के रूप में लेकर, एक रक्त शर्करा परिवर्तन चार्ट बनाया गया था, और प्रत्येक प्रायोगिक समूह के रक्त शर्करा वक्र की रेखा के नीचे के क्षेत्र की गणना सूत्र (AUC, hmmoL·L-1) [19] के अनुसार की गई थी। एयूसी=ए × {{20}}.25 + बी × 0.50 + सी × 0.75 + डी. सूत्र में: ए, बी, सी, और डी क्रमशः 0, 0.5, 1.0, और 2.0 घंटे पर रक्त ग्लूकोज मान हैं।

2.5.2 इंसुलिन प्रतिरोध सूचकांक और धमनीकाठिन्य सूचकांक की गणना

इंसुलिन प्रतिरोध सूचकांक की गणना साहित्य पद्धति [20] के अनुसार की गई: HOMA-IR=ग्लूकोज × इंसुलिन / 22. 5. HOMA - =20 × इंसुलिन / (ग्लूकोज - 3.5) × 100%। IR इंसुलिन प्रतिरोध है और (%) -सेल फ़ंक्शन है। ग्लूकोज की मोलर इकाई mmoL·L-1 है

इंसुलिन mU·L-1 में दिया जाता है। उपवास के दौरान ग्लूकोज और इंसुलिन की संख्या मापी जाती है। धमनीकाठिन्य सूचकांक (एथेरोजेनिक इंडेक्स) की गणना झेंग एट अल [21] द्वारा वर्णित विधि के अनुसार की गई थी। गणना विधि: एथेरोजेनिक इंडेक्स=(टीसी-एचडीएल-सी) / एचडीएल-सी।

2.5.3 सिस्टांचे डेज़र्टिकोला/सिस्टांचे डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों का डीबी/डीबी ब्लैक चूहों के सीरम आईएनएस और एचबीए1सी पर प्रभाव

जमे हुए सीरम के नमूने लें और उन्हें INS और HbA1c एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे किट के साथ परीक्षण के लिए उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान पर लाएँ। किट निर्देशों में दिए गए तरीकों और चरणों का सख्ती से पालन करें।

2.6 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों का डीबी/डीबी काले चूहों के यकृत ऑक्सीडेटिव तनाव स्तर पर प्रभाव

जमे हुए सीरम के नमूने लें और उन्हें एमडीए और एसओडी एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे किट के साथ परीक्षण के लिए उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान पर लाएँ। किट निर्देशों में दिए गए तरीकों और चरणों का सख्ती से पालन करें।

2.7 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला के विभिन्न निकाले गए भागों का डीबी/डीबी काले चूहों के यकृत वसा चयापचय पर प्रभाव

चूहे के सीरम टीजी, टीसी, एचडीएल-सी और एलडीएल-सी के स्तर को संबंधित किट का उपयोग करके मापा गया। विशिष्ट माप चरणों के लिए, किट के निर्देशों को देखें।

2.8 सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला/रतियाना कपूर के विभिन्न निकाले गए भागों का डीबी/डीबी काले चूहों के प्लाज्मा और मूत्र में यूए, सीआर और एमएएलबी पर प्रभाव

जमे हुए प्लाज्मा और मूत्र के नमूने लें और उन्हें UA, Cr, और mALB एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे किट के परीक्षण के लिए उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान पर लाएँ। किट निर्देशों में दिए गए तरीकों और चरणों का सख्ती से पालन करें।

2.9 HE स्टेनिंग द्वारा अग्नाशय और गुर्दे के रोगग्रस्त भागों का अवलोकन

24 घंटे तक 10% पैराफॉर्मेल्डिहाइड फिक्सेटिव में भिगोए गए अग्न्याशय और गुर्दे के ऊतकों को निकाला गया, आसुत जल से धोया गया और 70% इथेनॉल में संग्रहीत किया गया। ऊतक के नमूने निकाले गए, ग्रेडेड इथेनॉल से निर्जलित किए गए, साफ किए गए, पैराफिन में एम्बेडेड किए गए, खंडित किए गए, और फिर हेमाटोक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई धुंधला) के साथ दाग दिए गए। अनुभाग गोंद के सूखने के बाद, अनुभागों का निरीक्षण करने और उनकी तस्वीरें लेने के लिए एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन डिजिटल इमेजिंग सिस्टम का उपयोग करें।

2.10 इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा किडनी ऊतक प्रकार-IV कोलेजन का निर्धारण

अभिव्यक्ति के लिए, किडनी के हिस्सों को पानी से डीवैक्स किया गया और फिर एंटीजन रिट्रीवल के अधीन किया गया। उन्हें 10% बकरी के सीरम से ब्लॉक किया गया और रात भर 4 डिग्री पर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ इनक्यूबेट किया गया। धोने के बाद, द्वितीयक एंटीबॉडी को इनक्यूबेट किया गया। रंग विकास के लिए वर्तमान समाधान DAB था। धुलाई, निर्जलीकरण और सीलिंग एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत की गई थी। किडनी के ऊतकों में टाइप-IV कोलेजन प्रोटीन अभिव्यक्ति का निरीक्षण करें।

2.11 सांख्यिकीय विधियाँ

डेटा और परिणामों का विश्लेषण करने के लिए ग्राफपैड प्रिज्म संस्करण 5.01 (2007, ग्राफपैड सॉफ्टवेयर री इंक) सॉफ्टवेयर का उपयोग करना

परिणाम माध्य ± एसईएम है जो दर्शाता है कि दो समूहों के बीच का अंतर एकतरफा है

ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏｅｄｅＢｏｎｅｒｒｎｎ′ एक जोड़ा कॉलम परीक्षण) विधि, पी<0.05 is a significant difference and has statistical significance.