लीची चिनेंसिस सोन के बीज से टीजीएफ- 1, एफएन और एसओसीएस-1 पर उच्च ग्लूकोज के तहत रेनल ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं में सैपोनिन का प्रभाव
Mar 11, 2022
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हाई-यांग नी, रुई चेन, होंग-ना झांग, ज़ी पनो
1 चांगचुन चीनी चिकित्सा विश्वविद्यालय, चांगचुन, चीन।
2 बीजिंग चीनी चिकित्सा अस्पताल, बीजिंग, चीन के शुनी अस्पताल।
हाइलाइट
लीची चिनेंसिस सोन के बीज से सैपोनिन रीनल ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं के एपोप्टोसिस और टीजीएफ- 1 और एफएन के स्राव को कम करता है।
सार
उद्देश्य: लीची चिनेंसिस सोन (एसएलएस) के बीज से सैपोनिन के विकास और एपोप्टोसिस पर प्रभाव की जांच करना।मानवगुर्दाउच्च ग्लूकोज में सुसंस्कृत उपकला कोशिकाएं (HKC)। तरीके: HKC को DMEM/F12 माध्यम में 30 mmol/L ग्लूकोज के साथ पूरक किया गया और SLS के साथ या उसके बिना इलाज किया गया। सामान्य समूह में, 5.5mmol/L ग्लूकोज के साथ एक आइसोमेट्रिक DMEM/F12 माध्यम जोड़ा गया। एलिसा द्वारा टीजीएफ - 1 और फाइब्रोनेक्टिन (एफएन) के स्राव का पता लगाया गया। सेल एपोप्टोसिस का पता एनेक्सिन वी-एफआईटीसी / पीआई डबल स्टेनिंग की विधि से लगाया गया था। पश्चिमी धब्बा का उपयोग साइटोकाइन सिग्नलिंग -1 (SOCS-1) के शमन के स्तर का पता लगाने के लिए किया गया था।
परिणाम: एलिसा के परिणाम से पता चला है कि एसएलएस समूहों में टीजीएफ {0}} और एफएन का स्राव 3 0 मिमीोल / एल ग्लूकोज-उपचारित समूहों (पी <{{) की="" तुलना="" में="" कम="" हो="" गया="" था।="" 9}}.05)।="" सामान्य="" समूह="" (पी=""><0.01) की="" तुलना="" में="" 30="" मिमीोल="" एल="" ग्लूकोज="" उपचारित="" समूह="" में="" अधिक="" कोशिकाएं="" एपोप्टोसिस="" थीं।="" 30="" mmol="" l="" ग्लूकोज="" उपचारित="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" sls="" समूहों="" (p=""><0.01) में="" hkc="" के="" एपोप्टोसिस="" में="" काफी="" कमी="" आई="" थी।="" पश्चिमी="" धब्बा="" ने="" दिखाया="" कि="" उच्च="" ग्लूकोज="" समूह="" की="" तुलना="" में="" उच्च="" ग्लूकोज="" प्लस="" एसएलएस="" समूह="" में="" एसओसीएस="" -1="" का="" स्तर="" कम="" हो="" गया="" था="" (पी=""><>
निष्कर्ष: एसएलएस बाह्य मैट्रिक्स के जमाव को कम करके एचकेसी में टीजीएफ- 1 और एफएन के स्राव को कम कर सकता है। एसएलएस ने एसओसीएस के स्तर को बाधित करके एचकेसी के एपोप्टोसिस को भी काफी कम कर दिया है -1। ये परिणाम ग्लोमेरुलर स्केलेरोसिस की प्रगति को रोकने में एसएलएस की भूमिका का सुझाव देते हैं।
कीवर्ड: सैपोनिन, लीची चिनेंसिस सोन का बीज, ग्लूकोज,गुर्दाउपकला कोशिकाएं, टीजीएफ- 1, फाइब्रोनेक्टिन, एपोप्टोसिस
सिस्टैंचेइलाज कर सकते हैंगुर्दे की बीमारीसुधारेंगुर्दे समारोह
पार्श्वभूमि
मधुमेह अपवृक्कता (डीएन) मधुमेह मेलेटस की सबसे गंभीर जटिलताओं में से एक है, जिसमें उच्च घटना और घातकता होती है, जो ग्लोमेरुलर स्केलेरोसिस और रीनल इंटरस्टीशियल फाइब्रोसिस की विशेषता होती है। मानवीयगुर्दाउपकला कोशिकाएं (HKC) DN में प्रमुख लक्ष्य हैं और वे बड़ी संख्या में साइटोकिन्स को गुप्त करती हैं, जैसे TGF- 1 और फ़ाइब्रोनेक्टिन (FN), जो ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और रीनल इंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस की घटना का कारण बनते हैं। इस बीच, यह बताया गया है कि उच्च ग्लूकोज साइटोकाइन सिग्नलिंग के शमन के स्तर को बढ़ाकर एचकेसी एपोप्टोसिस को तेज कर सकता है-1(SOCS-1)[1,2]। इसलिए, ग्लोमेर्युलर स्केलेरोसिस की प्रगति को रोकने के लिए टीजीएफ - 1, एफएन और एसओसीएस -1 के स्तर को रोकना महत्वपूर्ण है। लीची चिनेंसिस सोम (एसएलएस) का बीज, मुख्य रूप से ग्वांगडोंग में वितरित एक चीनी जड़ी बूटी है। चीन के फ़ुज़ियान और गुआंग्शी प्रांतों को पहली बार चीन के मिंग राजवंश (1518 ईस्वी -1593 ईस्वी) में बेनकाओगांगमु में दर्ज किया गया था। सैपोनिन लीची चिनेंसिस सोनी के बीज का सक्रिय संघटक है। हमारे पिछले अध्ययन के आधार पर, यह अध्ययन आगे उच्च ग्लूकोज के साथ सुसंस्कृत एचकेसी में टीजीएफ - 1 और एफएन के स्तर पर एसएलएस के प्रभाव की पड़ताल करता है, एचकेसी का एपोप्टोसिस, और ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस की रोकथाम और चिकित्सा पर अंतर्निहित तंत्र [ 3]।
सिस्टैंचेइलाज कर सकते हैंएक्यूट रीनल फ़ेल्योर
सामग्री और तरीके सामग्री
98 प्रतिशत से अधिक शुद्धता वाले एसएलएस को जियानकिंगल बायोलॉजिकल कं, लिमिटेड (शीआन, चीन) से खरीदा गया था। एचकेसी को शंघाई फुक्सियांग बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड (शंघाई, चीन) से खरीदा गया था। डीएमईएम/एफ12 माध्यम, मानक भ्रूण गोजातीय सीरम, और ट्रिप्सिन हाइक्लोन (यूएसए) से थे। डाइमिथाइल सबफ़ैमिली सिग्मा (यूएसए) से थी। एलिसा किट शंघाई लॉन्गटन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी (शंघाई, चीन) से खरीदी गई थी। एनेक्सिन वी-एफआईटीसी/पीआई एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट नानजिंग काइजी बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड (नानजिंग, चीन) से थी।
सेल कल्चर
एचकेसी को डीएमईएम/एफ12 में 10 प्रतिशत भ्रूण बछड़ा सीरम के साथ बनाए रखा गया था और 95 प्रतिशत हवा और 5 प्रतिशत सीओ के आर्द्र वातावरण में 37 डिग्री पर सुसंस्कृत किया गया था। 2-3 के बाद 0.25 प्रतिशत ट्रिप्सिन के साथ कोशिकाओं को पचाया गया था। उपयोग के लिए दिन।
एंजाइम से जुड़ी इम्मोनुसोर्बेन्त अस्से
एचकेसी को छह समूहों में विभाजित किया गया था, जिसमें नियंत्रण समूह (5.5 मिमी / एल ग्लूकोज के साथ डीएमईएम), उच्च ग्लूकोज समूह (30 मिमीोल / एल ग्लूकोज के साथ डीएमईएम), एसएलएस कम खुराक समूह (5 मिलीग्राम / एमएल, एस 1 प्लस 30 मिमीोल / एल ग्लूकोज), एसएलएस शामिल हैं। मध्यम खुराक समूह (10 मिलीग्राम / एमएल, एस 2 प्लस 30 मिमीोल / एल ग्लूकोज), एसएलएस उच्च खुराक समूह (20 मिलीग्राम / एमएल, एस 3 प्लस 30 मिमीोल / एलग्लूकोज), और रिक्त स्वर समूह (कोशिकाओं के बिना डीएमईएम)।
48 घंटे बाद, प्रत्येक समूह के सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था, और एलिसा द्वारा टीजीएफ - 1 और एफएन की सामग्री का पता लगाया गया था। ऑपरेशन मैनुअल के अनुसार किया गया था। एक माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा OD मान 450nm पर पढ़ा गया था। TGF - 1 और FN की सांद्रता मानक वक्र के अनुसार निर्धारित की गई थी।
एक्टोसाइडमेंसिस्टैंचेपर अच्छा प्रभाव पड़ता हैगुर्दा
फ़्लो साइटॉमेट्री
प्रयोगात्मक समूह ऊपर के समान ही थे। एपोप्टोसिस कोशिकाओं का पता एनेक्सिन वी-एफआईटीसी / पीआई डबल धुंधला के साथ फ्लो साइटोमेट्री द्वारा लगाया गया था। ऊपरी बाएँ चतुर्थांश नेक्रोटिक कोशिकाओं के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है, ऊपरी दायाँ चतुर्थांश देर से एपोप्टोसिस कोशिकाओं के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है, निचला बायाँ चतुर्थांश व्यवहार्य कोशिकाओं के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है, और निचला दायाँ चतुर्थांश प्रारंभिक एपोप्टोसिस कोशिकाओं के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है।
वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण
एचकेसी का 10* mol/L एंजियोटेंशन (Ang)Ⅱ,20mg/Lof SLS और 10*mol/L ofAngⅡ, DMEM/F12 माध्यम, 20mg/L SLS और 25mmol/L ग्लूकोज और 25mmol/L ग्लूकोज से किया गया। , क्रमश।
सेल लाइसेट प्रोटीन को सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन पर हल किया गया और पीवीडीएफ झिल्ली में स्थानांतरित कर दिया गया। प्रत्येक झिल्ली को एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था, इसके बाद पेरोक्सीडेज-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी और केमिलुमिनेसिसेंस डिटेक्शन के साथ ऊष्मायन किया गया था।
सांख्यिकीय विश्लेषण
सभी सांख्यिकीय विश्लेषण SPSS संस्करण 19.0 का उपयोग करके किए गए। प्रयोगात्मक डेटा समूहों के बीच अंतर का विश्लेषण एकतरफा एनोवा द्वारा किया गया था, और समूहों के बीच कम से कम महत्वपूर्ण अंतर का उपयोग किया गया था। पी<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">
परिणाम
टीजीएफ-बी1 और एफएन के स्राव पर एसएलएस का प्रभाव उच्च ग्लूकोज समूह की तुलना में, एसएलएस एचकेसी (पी) में टीजीएफ-बी1 और एफएन के स्तर को बाधित कर सकता है।<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">
उच्च ग्लूकोज समूह की तुलना में: * पी<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">
एचकेसी एपोप्टोसिस पर एसएलएस का प्रभाव प्रवाह साइटोमेट्री के परिणाम से पता चला है कि उच्च ग्लूकोज समूह का एपोप्टोसिस सामान्य समूह (पी <{0}}.01) की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" था।="" उच्च="" ग्लूकोज="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" एचकेसी="" की="" एपोप्टोसिस="" दर="" को="" एसएलएस="" (पी=""><0.01) (चित्रा="" 3)="" की="" सांद्रता="" के="" साथ="" नकारात्मक="" रूप="" से="" सहसंबद्ध="" किया="" गया="">
SOCS के स्तर पर SLS का प्रभाव{{0}} AngII समूह में SOCS-1 प्रोटीन का स्तर सामान्य समूह की तुलना में काफी अधिक था (P <0.{ {8}}1)।="" angii="" प्लस="" sls="" समूह="" में="" socs-1="" का="" स्तर="" angii="" समूह="" की="" तुलना="" में="" कम="" था,="" लेकिन="" फिर="" भी="" नियंत्रण="" समूह="" (p=""><0.01) से="" अधिक="" था।="" सामान्य="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" उच्च="" ग्लूकोज="" समूह="" में="" socs-1="" प्रोटीन="" का="" स्तर="" बढ़ा="" दिया="" गया="" था="" (p=""><0.01)। उच्च="" ग्लूकोज="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" उच्च="" ग्लूकोज="" प्लस="" एसएलएस="" समूह="" का="" प्रोटीन="" स्तर="" कम="" हो="" गया="" था="" (पी=""><0.01) (चित्र="">
चित्र 4 SOCS की अभिव्यक्ति पर SLS का प्रभाव-1 a. AngII समूह: 10-6 mol/L एंजियोटेंशन , b. AngII प्लस SLS समूह: 20mg/L SLS और 10-6 mol/L AngⅡ, c. नियंत्रण समूह: DMEM/F12 मध्यम, d. उच्च ग्लूकोज प्लस SLS समूह: 20mg/L SLS प्लस 25mmol/L ग्लूकोज, उदा। नियंत्रण समूह: DMEM/F12 मध्यम, f. उच्च ग्लूकोज समूह: 25mmol/L ग्लूकोज। SOCS-1, साइटोकाइन सिग्नलिंग का शमनकर्ता-1। एसएलएस, लीची चिनेंसिस सोन का बीज।
बहस
बाह्य मैट्रिक्स का जमाव और वृक्क ट्यूबलर एपिथेलियम का एपोप्टोसिस डीएन के विकास में मुख्य रोग परिवर्तन है। सामान्य परिस्थितियों में, एचकेसी की आकृति विज्ञान और संख्या अपेक्षाकृत स्थिर रही। लेकिन सूजन जैसे विभिन्न उत्तेजक कारकों में, एचकेसी महत्वपूर्ण रूप से बढ़ सकता है [4]। उच्च ग्लूकोज एचकेसी के टीजीएफ - 1 और एफएन के उच्च स्राव की ओर जाता है और एचकेसी के एपोप्टोसिस को तेज करता है, जो डीएन की घटना को बढ़ावा देने का एक प्रत्यक्ष कारक है। इस प्रयोग में, उच्च ग्लूकोज को एक प्रोत्साहन के रूप में इस्तेमाल किया गया था। यह पाया गया कि एसएलएस टीजीएफ- 1, एफएन के स्राव को रोक सकता है और एसओसीएस के स्तर को कम करके एचकेसी एपोप्टोसिस को कम कर सकता है-1।
लीची चिनेंसिस सोन मुख्य रूप से चीन के गुआंग्डोंग, फ़ुज़ियान और गुआंग्शी प्रांतों में वितरित किया जाता है। यह बताया गया कि एसएलएस में एंटीहाइपरग्लाइसेमिक, एंटीहाइपरलिपिडेमिक, एंटीप्लेटलेट और एंटीवायरल गतिविधियां हैं [5]। चीन के मिंग राजवंश (1518 ईस्वी - 1593 ईस्वी) में बेनकाओगांगमु के रिकॉर्ड के अनुसार, एसएलएस "प्यास से राहत" दे सकता है। हाल के वर्षों में, कई विद्वानों ने इसके औषधीय प्रभावों और रासायनिक संरचना पर काफी शोध किया है। एसएलएस के मुख्य रासायनिक घटक लीची सैपोनिन, फ्लेवोनोइड्स, पॉलीफेनोल्स, छेनी, अमीनो एसिड, फैटी एसिड और वाष्पशील घटक जैसे यौगिक हैं। एसएलएस मुख्य सक्रिय संघटक है। SLS व्यापक रूप से मधुमेह और मधुमेह अपवृक्कता में उपयोग किया जाता है, जिसमें हाइपोग्लाइसेमिक, हाइपोलिपिडेमिक, प्रतिरक्षा सूजन प्रभाव का निषेध [6] है। आधुनिक प्रायोगिक अध्ययनों ने भी पुष्टि की है कि एसएलएस का हाइपोग्लाइसेमिक प्रभाव [7] है। हालांकि, इस प्रभाव का तंत्र स्पष्ट नहीं है।
इस अध्ययन में, उच्च ग्लूकोज के साथ उत्तेजना के बाद एचकेसी में टीजीएफ - 1 और एफएन के स्तर में काफी वृद्धि हुई थी, और खुराक पर निर्भर तरीके से एसएलएस उपचार के बाद टीजीएफ - 1 और एफएन के स्तर में काफी कमी आई थी। . एसएलएस उपचार के बाद एसओसीएस -1 प्रोटीन का स्तर काफी कम हो गया था। इस अध्ययन को एसएलएस के नैदानिक अनुप्रयोग के लिए सैद्धांतिक आधार प्रदान किया गया था।
सिस्टांचेराहत दे सकता हैगुर्दे की बीमारी
संदर्भ
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