क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के उपचार में एनएलआरपी3 सूजन-मध्यस्थ पायरोप्टोसिस को विनियमित करने वाले सिस्टैंच फॉर्मूला के तंत्र की खोज
Jun 05, 2025
उद्देश्य:
इस अध्ययन का उद्देश्य इसकी जांच करना थातंत्र जिसके द्वारा एक सिस्टैंच-आधारित हर्बल फार्मूलाकी सक्रियता को नियंत्रित करता हैएनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोमऔर रोकता हैपायरोप्टोसिसके इलाज मेंटाइप III क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस (सीपी/सीपीपीएस).
तरीके:
(1) पशु प्रयोग:
पचास नर एसडी चूहों को बेतरतीब ढंग से पांच समूहों में बांटा गया: नियंत्रण, मॉडल और सिस्टैंच फॉर्मूला-उपचारित समूहनिम्न (4.9 ग्राम/किग्रा), मध्यम (9.8 ग्राम/किलो), और उच्च (19.6 ग्राम/किग्रा)खुराक, प्रत्येक समूह में 10 चूहों के साथ। नियंत्रण समूह को छोड़कर, सभी चूहों को प्रेरित किया गयाटाइप III प्रोस्टेटाइटिससीएफए के साथ संयुक्त प्रोस्टेट प्रोटीन अर्क के इंट्राप्रोस्टैटिक इंजेक्शन के माध्यम से। सफल मॉडलिंग के बाद, चूहों को या तो सामान्य सलाइन (नियंत्रण और मॉडल समूह) या का दैनिक इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन प्राप्त हुआसिस्टैंच-आधारित फ़ॉर्मूला30 दिनों के लिए.
प्रोस्टेट ऊतक सूजन का मूल्यांकन किया गया थाहेमेटोक्सिलिन-इओसिन (एचई) धुंधलापन. सीरमIL-1औरIL-18द्वारा मापा गयाएलिसा, जबकि ऑक्सीडेटिव तनाव मार्कर (म्दा, एसओडी, औरजीएसएच-पीएक्स) का जैव रासायनिक मूल्यांकन किया गया।एनएलआरपी3 अभिव्यक्तिद्वारा प्रोस्टेट ऊतक का पता लगाया गया थाइम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री, औरएनएलआरपी3, कैस्पेज़-1, और जीएसडीएमडी प्रोटीन स्तरका उपयोग करके विश्लेषण किया गयापश्चिमी ब्लॉट.
(2) सेल प्रयोग:
मानव प्रोस्टेट उपकला कोशिकाएं (RWPE-1)नियंत्रण, मॉडल, में विभाजित किया गयासिस्टैंच फॉर्मूला, औरएनएलआरपी3 अवरोधक (एमसीसी950)समूह. नियंत्रण समूह को छोड़कर, सभी कोशिकाओं को उत्तेजित किया गयाएलपीएस (100 एनजी/एमएल, 4 घंटे)औरएटीपी (5 एमएमओएल/एमएल, 30 मिनट)पायरोप्टोसिस को प्रेरित करने के लिए। मॉडलिंग के बाद, नियंत्रण और मॉडल समूहों को खाली सीरम प्राप्त हुआ, जबकिसिस्टैंच समूहप्राप्त6.25 यूजी/एमएल दवा युक्त सीरम. अवरोधक समूह का उपचार किया गयाMCC950.
पीआई उठावऔरकैस्पेज़-1 अभिव्यक्तिके माध्यम से मूल्यांकन किया गयाप्रवाह साइटोमेट्री. एलडीएच रिलीजजैवरासायनिक रूप से मापा गया।सतह पर तैरनेवाला IL-1 और IL-18 स्तरएलिसा द्वारा मात्रा निर्धारित की गई।पश्चिमी ब्लॉटका पता लगाने के लिए उपयोग किया गया थाएनएलआरपी3, कैस्पेज़-1, और जीएसडीएमडीअभिव्यक्ति।
परिणाम:
(1) पशु प्रयोग:
नियंत्रण समूह की तुलना में, मॉडल समूह ने प्रोस्टेट ऊतक में महत्वपूर्ण सूजन कोशिका घुसपैठ, उपकला अध: पतन और अंतरालीय शोफ का प्रदर्शन किया।सिस्टैंच-उपचारित समूहइन रोग परिवर्तनों में खुराक पर निर्भर कमी देखी गई।
सीरम IL-1 और IL-18 स्तरमॉडल समूह में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि हुई (P<0.01) और में उल्लेखनीय रूप से कमी आईसिस्टैंच कम, मध्यम और उच्च खुराक वाले समूह (P<0.01).
एमडीए स्तरमॉडल समूह में पदोन्नत किया गया (P<0.01) लेकिन सिस्टैंच उपचार से काफी कमी आई है (P<0.01).
एसओडी और जीएसएच-पीएक्स स्तरमॉडल समूह में कमी की गई (P<0.05) और सभी सिस्टैंच-उपचारित समूहों में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि हुई है (P<0.01, P<0.05).
इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्रीऊंचा दिखायाएनएलआरपी3 अभिव्यक्तिमॉडल समूह में, जिसे सिस्टैंच उपचार द्वारा काफी कम कर दिया गया था।
पश्चिमी ब्लॉटपरिणामों से पता चला कि प्रोटीन का स्तर बढ़ा हुआ हैएनएलआरपी3, कैस्पेज़-1, और जीएसडीएमडीमॉडल समूह में (P<0.01), जिनमें से सभी को सिस्टैंच द्वारा महत्वपूर्ण रूप से बाधित किया गया था (P<0.01).
(2) सेल प्रयोग:
पीआई ग्रहण दर, कैस्पेज़-1 अभिव्यक्ति, औरएलडीएच रिलीजमॉडल समूह में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि हुई (P<0.01), लेकिन दोनों में काफी कमी आईCistancheऔरMCC950समूह (P<0.01).
IL-1 और IL-18 स्तरसतह पर तैरनेवाला में मॉडल समूह में काफी वृद्धि हुई थी (P<0.01) और में उल्लेखनीय रूप से कमी आईCistancheऔरअवरोधक समूह (P<0.01).
पश्चिमी ब्लॉटमॉडल समूह में एनएलआरपी3, कैस्पेज़-1, और जीएसडीएमडी प्रोटीन अभिव्यक्ति में उल्लेखनीय वृद्धि देखी गई (P<0.01), जिन्हें काफी हद तक कम कर दिया गया थाCistancheऔरअवरोधक समूह (P<0.01).
निष्कर्ष:
सिस्टैंच-आधारित हर्बल फॉर्मूलापर चिकित्सीय प्रभाव डालता हैटाइप III क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिसद्वाराएनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोम सक्रियण को रोकना, जिससे कमी आती हैकैस्पेज़-1 सक्रियण, रोकनाजीएसडीएमडी दरार और पायरोप्टोसिस, और दबानाप्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन रिलीज. ये निष्कर्ष यही सुझाव देते हैंCistancheएक आशाजनक हो सकता हैसीपी/सीपीपीएस के लिए प्राकृतिक हर्बल उपचार, भेंटसूजनरोधी, एंटीऑक्सीडेंट, औरपायरोप्टोसिस-निरोधकके मॉड्यूलेशन के माध्यम से प्रभावएनएलआरपी3/कैस्पासे-1/जीएसडीएमडीसिग्नलिंग मार्ग.
कीवर्ड: क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस; गुइहुआंग फॉर्मूला;एनएलआरपी3 सूजन संबंधी; पायरोप्टोसिस ; योजनाबध्द कोशिका मृत्यु
सिस्टैंच प्रोस्टेट स्वास्थ्य के लिए लाभकारी है
क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के लिए सिस्टैंच-आधारित हर्बल फॉर्मूला: तंत्र और प्रभावकारिता का प्रायोगिक अध्ययन
क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस (सीपी)मूत्रविज्ञान और पुरुषों के स्वास्थ्य में सबसे आम स्थितियों में से एक है। महामारी विज्ञान के अध्ययन से पता चलता है कि लगभग8.4%चीन में अधिकांश वयस्क पुरुष प्रोस्टेटाइटिस के लक्षणों का अनुभव करते हैं [1]। के अनुसारराष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच)वर्गीकरण के अनुसार, प्रोस्टेटाइटिस को चार प्रकारों में वर्गीकृत किया गया हैटाइप III प्रोस्टेटाइटिस (क्रोनिक पेल्विक दर्द सिंड्रोम, सीपी/सीपीपीएस)से अधिक का हिसाब-किताब90%सभी पुराने मामलों में से [2]। टाइप III प्रोस्टेटाइटिस से पैल्विक दर्द और मूत्र संबंधी शिथिलता होती है और अक्सर चिंता और अवसाद जैसे मनोवैज्ञानिक संकट के साथ होता है, जिससे जीवन की गुणवत्ता में काफी गिरावट आती है [3-4]।
पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) में, क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस "लिन सिंड्रोम" या "जिंग झूओ" जैसे सिंड्रोम से मेल खाता है, और मुख्य रूप से रोगजनक कारकों के कारण होता है जैसेनमी, गर्मी, रक्त ठहराव, और ठहराव[5-7]।गुइहुआंग सूत्रपारंपरिक रूप से नमी-गर्मी और रक्त ठहराव के साथ सीपी/सीपीपीएस का इलाज करने के लिए उपयोग किया जाता है, इस अध्ययन में इसका उपयोग करने के लिए संशोधित किया गया हैCistancheएक मुख्य घटक के रूप में, एक उपन्यास का निर्माणसिस्टैंच-आधारित हर्बल फॉर्मूला. इस संशोधित फ़ॉर्मूले का उद्देश्य मूत्र संबंधी लक्षणों और पैल्विक सूजन दोनों में सुधार करना हैनैदानिक प्रभावकारिता और सुरक्षा [8–10].
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पृष्ठभूमि और तंत्र
हमारे पिछले अध्ययनों से पता चला है कि सिस्टैंच-आधारित हर्बल फॉर्मूला ने पैथोलॉजिकल सूजन को कम करके और प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स को दबाकर चूहे के मॉडल में प्रोस्टेटाइटिस जैसे घावों को काफी हद तक कम कर दिया है। यह प्रभाव के निषेध से जुड़ा हैPI3Kऔरएनएफ-κBसिग्नलिंग मार्ग [11]।
की ओर और अधिक ध्यान केन्द्रित किया गया हैएनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोम, एक मल्टीप्रोटीन कॉम्प्लेक्स जो सूजन संबंधी प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करता है। एनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोम के सक्रिय होने से IL-1 और IL-18 जैसे इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स का स्राव होता है, जो सीपी/सीपीपीएस [12-13] में इंफ्लेमेटरी कैस्केड में योगदान देता है। क्या इसकी जांच की जा रही हैCistancheएनएलआरपी 3 को मॉड्यूलेट कर सकता है, इसे समझने के लिए इन्फ्लेमसोम सक्रियण महत्वपूर्ण हैसूजनरोधी तंत्रक्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस उपचार में।
1. सामग्री
1.1 पशु और कोशिकाएँ
नर एसडी चूहे (6 सप्ताह पुराने, 240-260 ग्राम) एसपीएफ (बीजिंग) बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड [एससीएक्सके (जिंग) 2019-0010] से प्राप्त किए गए थे, जिन्हें भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ एसपीएफ स्थितियों में रखा गया था। कमरे का तापमान (23±2) डिग्री और आर्द्रता (60±5)% पर बनाए रखा गया। सभी पशु प्रक्रियाओं को ज़ियुआन अस्पताल, चीन एकेडमी ऑफ चाइनीज मेडिकल साइंसेज की पशु आचार समिति (नैतिकता संख्या: 2020XLC005-3) द्वारा अनुमोदित किया गया था। सामान्य प्रोस्टेट उपकला कोशिकाएं (RWPE-1, एटीसीसी, कैटलॉग संख्या IM-H299) का उपयोग परिच्छेद 5 में इन विट्रो प्रयोगों के लिए किया गया था।
1.2 हर्बल फॉर्मूला
सिस्टैंच-आधारित फ़ॉर्मूलानिम्नलिखित पारंपरिक जड़ी-बूटियाँ शामिल हैं (ग्राम में):
Cistanche 12 g
करकुमा लोंगा (हल्दी) 10 ग्राम
एंजेलिका साइनेंसिस 12 ग्राम
मैगनोलिया ऑफिसिनैलिस 10 ग्राम
बोसवेलिया कार्टेरी (लोबान) 5 ग्राम
कॉमिफोरा लोहबान (लोहबान) 5 ग्राम
लोनीसेरा जैपोनिका (हनीसकल) 15 ग्राम
हेडियोटिस डिफ्यूसा 15 ग्राम
प्लांटैगो एशियाटिका (प्लांटैन हर्ब) 15 ग्राम
सिट्रस रेटिकुलाटा (टेंजेरीन पील) 10 ग्राम
हर्बल दाने ज़ियुआन अस्पताल के फार्मेसी विभाग द्वारा प्रदान किए गए थे और कांगरेंटांग फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड (बैच संख्या: 19018391) द्वारा निर्मित किए गए थे।
एसईओ कीवर्ड:
क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के लिए सिस्टैंच, सीपीपीएस के लिए हर्बल उपचार, पेल्विक दर्द सिंड्रोम के लिए टीसीएम, सिस्टैंच प्रोस्टेट सूजन, पुरुषों के लिए प्राकृतिक सूजन-रोधी जड़ी-बूटियाँ, सिस्टैंच प्रतिरक्षा मॉड्यूलेशन.
1.3 अभिकर्मक और किट
बीसीए प्रोटीन परख किट (बायोटाइम, कैट# P0010)
IL-1 और IL-18 एलिसा किट (बायोसवाम्प, कैट# ZN2877, ZN2883)
पायरोप्टोसिस/कैस्पेज़-1 परख किट (इम्यूनोकैमिस्ट्री, कैट# 9145)
एनएलआरपी3 एंटीबॉडी (नोवस, कैट# एनबीपी2-12446)
सीएफए (कम्प्लीट फ्रायंड्स एडजुवेंट, सिग्मा, कैट# सी104202)
सामान्य अभिकर्मक: जाइलीन, एब्सोल्यूट इथेनॉल, न्यूट्रल गम (सिनोफार्म)
ऑक्सीडेटिव तनाव किट: एसओडी, एमडीए, जीएसएच-पीएक्स, एलडीएच (नानजिंग जियानचेंग, कैट# ए001-3, ए003-2, बीसी1190, 20121225)
एंटीबॉडीज: एंटी-जीएसडीएमडी, कैस्पेज़-1, जीएपीडीएच (एबीकैम, कैट# एबी219800, एबी179515, एबी8245)
एमसीसी950 (एनएलआरपी3 अवरोधक, सेलेक, कैट# एस8930)
PYCARD/ASC एंटीबॉडी (थर्मो, कैट# PA5-95826)
1.4 उपकरण
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप (निकॉन एक्लिप्स टीआई-एसआर, जापान)
माइक्रोटोम (लेइका आरएम2016, शंघाई)
डिजिटल स्लाइड स्कैनर (3डी हिस्टेक पैनोरॉमिक मिडी, हंगरी)
हाई-स्पीड रेफ्रिजेरेटेड सेंट्रीफ्यूज (थर्मो फिशर IECCL31R, यूएसए)
वैद्युतकणसंचलन उपकरण (CAVOY PP-1150, MP-8001, MP-3030, बीजिंग)
शेकर इनक्यूबेटर (किलिनबीयर TS-2000A, जियांग्सू)
क्रायोजेनिक ग्राइंडर (जिंगक्सिन JXFSTPRP-CL-BSC, शंघाई)
CO₂ इनक्यूबेटर (Sanyo MCO-20AIC, जापान)
माइक्रोप्लेट रीडर (बायो-रेड DNM-9602, बीजिंग)
जैव रासायनिक विश्लेषक (रायटो केमरे 800, शेन्ज़ेन)
फ्लो साइटोमीटर (बेकमैन साइटोफ्लेक्स एस, यूएसए)
2. तरीके
2.1 मॉडल स्थापना
(1) पशु मॉडल
पिछले मॉडलिंग अनुभव के आधार पर, ऑटोइम्यून का एक चूहा मॉडलटाइप III क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिसद्वारा स्थापित किया गया थाइंट्राप्रोस्टेटिक इंजेक्शनशुद्ध प्रोस्टेट प्रोटीन अर्क को कंप्लीट फ्रायंड एडजुवेंट (सीएफए) के साथ मिलाया गया [14]। सफल मॉडलिंग को पैथोलॉजिकल विशेषताओं द्वारा निर्धारित किया गया था जिनमें शामिल हैं: प्रोस्टेट कैप्सूल का मोटा होना, ग्रंथियों की परतों का गायब होना, एसिनी का विनाश, महत्वपूर्ण स्ट्रोमल एडिमा, धुंधली संरचना, लिम्फोसाइट्स, मोनोसाइट्स और प्लाज्मा कोशिकाओं की बड़े पैमाने पर घुसपैठ। प्रोस्टेटिक सेप्टा में चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाएं और संयोजी ऊतक हाइपरप्लासिया ध्यान देने योग्य थेसंवहनी फैलाव और जमाव. जैव रासायनिक रूप से, मॉडल की पुष्टि की गई थील्यूकोसाइट्स में वृद्धिऔरलेसितिण निकायों में कमी आईप्रोस्टेट समरूपता में.
(2) सेल मॉडल
साहित्य रिपोर्टों और पूर्व-पूर्व प्रयोगों के बाद [15-17], एदो-चरणीय उत्तेजना विधिको सक्रिय करने के लिए उपयोग किया गया थाएनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोमRWPE-1 कोशिकाओं में. चरण 1: कोशिकाओं का उपचार किया गयाएलपीएस (100 एनजी/एमएल)इन्फ्लेमसोम प्राइमिंग शुरू करने के लिए 4 घंटे तक। चरण 2: फिर कोशिकाओं का उपचार किया गयाएटीपी (5 mmol/mL)सक्रियण संकेत के रूप में 30 मिनट के लिए। इष्टतम मॉडल स्थितियों का उपयोग करके जांच की गईपीआई ग्रहण दरएक मार्कर के रूप में.
2.2 समूहीकरण
(1) पशु अध्ययन समूह
चूहों को यादृच्छिक रूप से विभाजित किया गया थापांच समूहएक यादृच्छिक संख्या तालिका का उपयोग करना:
नियंत्रण समूह
मॉडल समूह
सिस्टैंच फॉर्मूला कम खुराक वाला समूह
सिस्टैंच फॉर्मूला मध्यम-खुराक समूह
सिस्टैंच फॉर्मूला उच्च खुराक समूह
प्रत्येक समूह में 10 चूहे शामिल थे। नियंत्रण समूह को छोड़कर सभी समूहों को मॉडलिंग के अधीन किया गया।समतुल्य मानव खुराकसिस्टैंच-आधारित सूत्र की गणना 109 ÷ 70 × 6.3=9.8 ग्राम/किग्रा के रूप में की गई थीमध्यम खुराक, साथकम खुराक4.9 ग्राम/किग्रा औरउच्च खुराक19.6 ग्राम/किग्रा [11] पर। सेमॉडलिंग के बाद तीसरा दिनउपचार समूहों को संबंधित खुराक का दैनिक इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन प्राप्त हुआसिस्टैंच-आधारित हर्बल फॉर्मूलाके लिएलगातार 30 दिन, जबकि नियंत्रण और मॉडल समूहों को समान मात्रा में खारा प्राप्त हुआ।
(2) कोशिका अध्ययन समूह
RWPE-1 कोशिकाओं को चार समूहों में विभाजित किया गया था:
नियंत्रण समूह: खाली सीरम के साथ सुसंस्कृत
मॉडल समूह: एलपीएस (100 एनजी/एमएल, 4 घंटे) और एटीपी (5 एमएमओएल/एमएल, 30 मिनट) के साथ इलाज किया गया
सिस्टैंच समूह: व्यवहार किया गया6.25 ug/mL सिस्टैंच फॉर्मूला औषधीय सीरम
एमसीसी950 समूह: मॉडल +एनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोम अवरोधक एमसीसी950
2.3 नमूना संग्रह
30 दिनों के उपचार के बाद, चूहों को आइसोफ्लुरेन से बेहोश किया गया। पेट की महाधमनी से रक्त एकत्र किया गया और सीरम को अलग करने के लिए 10 मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, जिसे -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया थाएलिसाऔर जैव रासायनिक विश्लेषण।
बायां प्रोस्टेट लोब: हिस्टोपैथोलॉजी, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और इम्यूनोफ्लोरेसेंस के लिए 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड में तय किया गया।
दायां प्रोस्टेट लोब: में संरक्षिततरल नाइट्रोजनके लिएवेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण.
2.4 पशु सूचकांक का पता लगाना
2.4.1 वह धुंधला हो जाना
प्रोस्टेट ऊतकों में सूजन संबंधी घुसपैठ का निरीक्षण करने के लिए हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एचई) स्टेनिंग का उपयोग किया गया था। ग्रंथियों, नलिकाओं और अंतरालीय संरचनाओं में रूपात्मक परिवर्तनों का मूल्यांकन एक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के तहत किया गया।
2.4.2 एलिसा IL-1 और IL-18 के लिए
मात्रा निर्धारित करने के लिए एलिसा किट का उपयोग किया गयाIL-1औरIL-18चूहे के सीरम में स्तर. नमूनों को मानक एलिसा प्रोटोकॉल का पालन करते हुए संसाधित किया गया और उनका विश्लेषण किया गया450 nmमाइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करना।
2.4.3 एमडीए, एसओडी, जीएसएच-पीएक्स का जैव रासायनिक पता लगाना
का सीरम स्तरम्दा, एसओडी, औरजीएसएच-पीएक्सप्रोस्टेट ऊतकों में ऑक्सीडेटिव तनाव का आकलन करने के लिए वाणिज्यिक किटों का उपयोग करके मापा गया।
2.4.4 एनएलआरपी3 के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी)।
प्रोस्टेट ऊतक अनुभागों में डीपराफिनाइजेशन, एंटीजन पुनर्प्राप्ति, अवरोधन और ऊष्मायन किया गयाएंटी-एनएलआरपी3 एंटीबॉडी (1:1000). डीएबी स्टेनिंग का प्रदर्शन किया गया और हेमेटोक्सिलिन के साथ इसका प्रतिदाग किया गया। एनएलआरपी3 अभिव्यक्ति को सूक्ष्मदर्शी रूप से देखा गया।
2.4.5 जीएसडीएमडी के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस
जमे हुए प्रोस्टेट खंडों को इनक्यूबेट किया गयाएंटी-जीएसडीएमडी एंटीबॉडी (1:100), इसके बाद फ्लोरोसेंट सेकेंडरी एंटीबॉडी और डीएपीआई परमाणु काउंटरस्टेन आते हैं। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके जीएसडीएमडी अभिव्यक्ति की कल्पना की गई थी।
2.4.6 एनएलआरपी3, कैस्पेज़-1, जीएसडीएमडी के लिए वेस्टर्न ब्लॉट
प्रोटीन को प्रोस्टेट ऊतकों से निकाला गया थावेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण. अभिव्यक्ति का स्तरएनएलआरपी3 (1:1000), जीएसडीएमडी (1:2000), औरकैस्पासे-1 (1:2000)पता चला कि एक्टिन को आंतरिक नियंत्रण के रूप में कार्य किया गया है। का उपयोग करके परिमाणीकरण किया गयाछवि जेसॉफ़्टवेयर।
2.5 सेलुलर इंडेक्स डिटेक्शन
2.5.1 पीआई अपटेक के लिए फ्लो साइटोमेट्री
कोशिकाओं को धोया गया, 1×10⁶ कोशिकाओं/एमएल पर पुनः निलंबित किया गया, और प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) से रंगा गया। पीआई अपटेक दरों का उपयोग करके विश्लेषण किया गयाप्रवाह साइटोमेट्रीऔरफ्लोजोसॉफ़्टवेयर।
2.5.2 एलडीएच रिलीज परख
उपचार के बाद,एलडीएचकल्चर सतह पर तैरनेवाला के स्तर का मूल्यांकन वर्णमिति परख का उपयोग करके कोशिका झिल्ली क्षति के एक मार्कर के रूप में किया गया था490 nm.
2.5.3 कैस्पेज़-1 के लिए फ्लो साइटोमेट्री
कोशिकाओं को स्थिर किया गया, पारगम्य बनाया गया और दाग दिया गयाकैस्पेज़-1 एंटीबॉडी (1:1000). अभिव्यक्ति को मापा गयाप्रवाह साइटोमेट्री.
2.5.4 सतह पर तैरनेवाला में IL-1 और IL-18 के लिए एलिसा
पता लगाने के लिए संस्कृति मीडिया एकत्र किया गयाIL-1औरIL-18एलिसा के माध्यम से स्तर। साइटोकिन के स्तर को सामान्य करने के लिए बीसीए परख का उपयोग करके सेल लाइसेट्स में प्रोटीन सामग्री की मात्रा निर्धारित की गई थी।
2.5.5 एनएलआरपी3, कैस्पेज़-1, जीएसडीएमडी के लिए वेस्टर्न ब्लॉट
वेस्टर्न ब्लॉट का परीक्षण एंटीबॉडी वाले सेल लाइसेट्स पर किया गयाएनएलआरपी3 (1:1000), जीएसडीएमडी (1:2000), औरकैस्पासे-1 (1:2000). ईसीएल और इमेजिंग सिस्टम का उपयोग करके पता लगाया गया था . -एक्टिन का उपयोग लोडिंग नियंत्रण के रूप में किया गया था।
2.6 सांख्यिकीय विश्लेषण
का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गयाग्राफपैड प्रिज्म 8.0. परिणाम इस प्रकार व्यक्त किये गये हैंमाध्य ± एसडी. समूह तुलना का उपयोग करके किया गयास्वतंत्र-नमूना टी-परीक्षणयावन-वे एनोवा. A पी-वैल्यू <0.05सांख्यिकीय दृष्टि से महत्वपूर्ण माना गया।
