नेटवर्क फार्माकोलॉजी और सेलुलर प्रयोगों के आधार पर गैर-अल्कोहलिक फैटी लीवर रोग पर सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के प्रभावों की खोज

 

अमूर्त

उद्देश्य: गैर-अल्कोहल फैटी लीवर रोग (एनएएफएलडी) पर सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के सुधारात्मक प्रभावों की जांच करना।

तरीकों: एनएएफएलडी के खिलाफ सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के संभावित तंत्र की भविष्यवाणी करने के लिए नेटवर्क फार्माकोलॉजी का उपयोग किया गया था। मुक्त फैटी एसिड (एफएफए) के साथ हेपजी2 कोशिकाओं को प्रेरित करके एक इन विट्रो एनएएफएलडी मॉडल स्थापित किया गया था। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन CCK-8 परख का उपयोग करके किया गया था; ऑयल रेड ओ स्टेनिंग का उपयोग लिपिड संचय का निरीक्षण करने के लिए किया गया था; ट्राइग्लिसराइड (टीजी) और कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी) का स्तर परख किट का उपयोग करके मापा गया; JC-1 माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का आकलन करने के लिए धुंधलापन का उपयोग किया गया था; डीसीएफएच-डीए फ्लोरोसेंट जांच के साथ इंट्रासेल्युलर आरओएस स्तरों का मूल्यांकन किया गया; Hoechst 33342 स्टेनिंग का उपयोग करके एपोप्टोसिस का पता लगाया गया था; और TNF-, PI3K, Akt, और Bax प्रोटीन की अभिव्यक्ति को वेस्टर्न ब्लॉट द्वारा मापा गया था।

परिणाम: दस सक्रिय यौगिकों और एंटी-एनएएफएलडी प्रभावों से संबंधित 77 संभावित लक्ष्यों की पहचान की गई, जिनमें टीएनएफ, एनएफकेबी1 और टीएलआर4 सहित मुख्य लक्ष्य शामिल थे। यौगिकों ने लक्ष्य, विशेष रूप से टीएनएफ के साथ अच्छा बंधन संबंध दिखाया। मॉडल समूह की तुलना में, सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स ने हेपजी2 कोशिकाओं (पी <0.01) में एफएफए-प्रेरित लिपिड संचय को काफी कम कर दिया, इंट्रासेल्युलर टीजी, टीसी और आरओएस स्तर (पी <0.01) को कम कर दिया, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता को बहाल किया, माइटोकॉन्ड्रियल क्षति को कम किया, एपोप्टोसिस को कम किया, बैक्स प्रोटीन अभिव्यक्ति को कम किया (पी <0.05), और डाउनरेगुलेटेड टीएनएफ- , PI3K, और Akt प्रोटीन अभिव्यक्ति (P <0.05, P <0.01)।

निष्कर्ष: सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स हेपजी2 कोशिकाओं में एफएफए-प्रेरित लिपिड संचय, माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन, ऑक्सीडेटिव तनाव और एपोप्टोसिस में सुधार करके एनएएफएलडी विरोधी प्रभाव डालते हैं। ये प्रभाव TNF/PI3K/एक्ट सिग्नलिंग मार्ग से जुड़े हो सकते हैं।

कीवर्ड: सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स; गैर-अल्कोहल फैटी लीवर रोग (एनएएफएलडी); लिपिड चयापचय; ऑक्सीडेटिव तनाव;apoptosis; TNF/PI3K/एक्ट सिग्नलिंग पाथवे; नेटवर्क फार्माकोलॉजी; कोशिका प्रयोग

 

सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स

 

 

 

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1 परिचय

गैर-अल्कोहलिक फैटी लीवर रोग (एनएएफएलडी) एक क्रोनिक लीवर रोग है जो अत्यधिक शराब के सेवन के बिना हेपेटिक स्टीटोसिस द्वारा विशेषता है। चीन में इसका प्रसार 32.9% तक पहुंच गया है। इसके रोगजनन में इंसुलिन प्रतिरोध, ऑक्सीडेटिव तनाव और आंत माइक्रोबायोटा असंतुलन सहित कई तंत्र शामिल हैं। नैदानिक ​​लक्षणों में थकान, यकृत क्षेत्र में असुविधा और पेट में दर्द शामिल है, और गंभीर मामलों में, यह गैर-अल्कोहल स्टीटोहेपेटाइटिस (एनएएसएच) में बदल सकता है।

वर्तमान में, जीवनशैली में हस्तक्षेप एनएएफएलडी का प्राथमिक उपचार है। हालाँकि FDA ने 2024 में NAFLD, रेस्मेटिरोम (रेज़डिफ़्रा) के लिए पहली दवा को मंजूरी दे दी, लेकिन इसके संभावित प्रतिकूल प्रभाव जैसे कि लीवर की चोट और हृदय संबंधी जोखिम हैं। इसलिए, एनएएफएलडी के लिए सुरक्षित और प्रभावी उपचार खोजने की तत्काल आवश्यकता है।

पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम), कई घटकों, कई लक्ष्यों और कई मार्गों की अपनी विशेषताओं के साथ, एनएएफएलडी के जटिल रोगजनन के साथ अच्छी तरह से संरेखित होती है और इसके उपचार में अद्वितीय लाभ प्रदान करती है।

सिस्टैंच डेजर्टिकोलाऔरसिस्टैंच ट्यूबुलोसाओरोबैंचेसी परिवार के औषधीय पौधे हैं, जो में सूचीबद्ध हैंशेनॉन्ग बेनकाओ जिंग. उनके मांसल तने, तराजू से भरपूर, पारंपरिक रूप से यकृत और गुर्दे को टोन करने, सार और रक्त को फिर से भरने और आंतों को नम करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। प्राथमिक सक्रिय घटक-फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स-में सूजन-रोधी, लिपिड-कम करने वाले और हेपेटोप्रोटेक्टिव गुण होते हैं। हालाँकि, एनएएफएलडी के विरुद्ध उनके प्रभावों पर व्यवस्थित अध्ययन का अभी भी अभाव है।

इस अध्ययन का उद्देश्य नेटवर्क फार्माकोलॉजी का उपयोग करके एनएएफएलडी के उपचार में सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के औषधीय आधार और संभावित तंत्र का विश्लेषण करना और सेलुलर प्रयोगों के माध्यम से उनके तंत्र का और पता लगाना है, जो नई दवाओं के विकास के लिए एक सैद्धांतिक आधार प्रदान करता है।

 

2. सामग्री

2.1 नेटवर्क फार्माकोलॉजी उपकरण

टीसीएमएसपी: https://tcmspw.com/tcmsp.php

सीएनकेआई: https://www.cnki.net/

पबमेड: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/

पबकेम: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/

स्विसटार्गेटप्रेडिक्शन: http://www.swisstargetprediction.ch/

नेटइन्फर: http://lmmd.ecust.edu.cn/netinfer/

सुपरप्रेड: https://prediction.charite.de/subpages/target_prediction.php

जीनकार्ड: https://www.genecards.org/

डिसजीनेट: http://www.disgenet.org/

स्ट्रिंग: https://string-db.org/

जैव सूचना विज्ञान: https://www.bioinformatics.com.cn/

यूनीप्रोट: https://www.uniprot.org/

आरसीएसबी पीडीबी: https://www.rcsb.org/

साइटोस्केप 3.9.1: https://cytoscape.org/

आर 4.3.3: https://www.r-project.org/

ऑटोडॉक वीना 1.5.7: https://vina.scripps.edu/

2.2 सेल लाइन

हेपजी2 मानव लीवर कैंसर कोशिकाएं, वुहान प्रोसेल लाइफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदी गईं।

2.3 अभिकर्मक और औषधियाँ

सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (बैच संख्या {{0%), शुद्धता 80% से अधिक या उसके बराबर, 44.5% इचिनाकोसाइड और 16.1% वर्बास्कोसाइड युक्त), हॉटन डेचेन फार्मास्युटिकल बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया। स्टॉक समाधान 6.40 मिलीग्राम/एमएल पर तैयार किया गया, फ़िल्टर किया गया और -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

अतिरिक्त अभिकर्मकों में शामिल हैं:

भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), डीएमईएम माध्यम, पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन, ऑयल रेड ओ स्टेनिंग किट, बीसीए किट, आरओएस डिटेक्शन किट, होचस्ट 33342, बीएसए-वी, सोडियम ओलिएट, सोडियम पामिटेट, टीजी और टीसी परख किट, CCK-8 परख, JC-1 माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली संभावित किट, टीएनएफ-, पीआई3के पी85, एक्ट, बैक्स के लिए एंटीबॉडी -एक्टिन, और माध्यमिक एचआरपी-संयुग्मित एंटीबॉडी।

2.4 उपकरण

CO₂ इनक्यूबेटर (फॉर्मा 371)

जैव सुरक्षा कैबिनेट (हेरासेफ केएस18)

माइक्रोप्लेट रीडर (मल्टीस्कैन जीओ)

उलटा माइक्रोस्कोप (Nikon TS2-S-SM)

जल स्नान, अपकेंद्रित्र (H1750R), विश्लेषणात्मक संतुलन, केमिलुमिनसेंस इमेजिंग सिस्टम (Azure 600), प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (Leica DMi8)