नैनोक्लोरोप्सिस एसपी की क्षमता की खोज। कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों के लिए निकालें

कीवर्ड:Nannochloropsis; एंटीऑक्सिडेंट; एंटी-मेलानोजेनिक; त्वचा-मॉइस्चराइजिंग; UV संरक्षण;बुढ़ापा विरोधी

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1 परिचय

त्वचा सबसे बड़ा अंग है, जो पूरे मानव शरीर को कवर करती है और एक भौतिक प्रदान करती हैआंतरिक ऊतकों को बाहरी उत्तेजनाओं जैसे पराबैंगनी (यूवी) से बचाने के लिए बाधाविकिरण, रसायन, रोगजनक और शारीरिक तनाव [1,2]। इसके अलावा, यह शारीरिक रूप से हैके संरक्षण सहित जीवों को बनाए रखने में मदद करने में महत्वपूर्ण भूमिकाएँपानी, प्रतिरक्षात्मक कार्य, संवेदी धारणा और शरीर के तापमान का नियमन [3,4]। त्वचा में तीन परतें होती हैं: एपिडर्मिस, डर्मिस और हाइपोडर्मिस। मेंएपिडर्मिस, केराटिनोसाइट्स, लैंगरहैंस, मेलानोसाइट्स और वसामय ग्रंथियां आवश्यक भूमिका निभाती हैंत्वचा की क्षति की मरम्मत में भूमिका, त्वचा का रंग निर्धारित करना, यूवी से त्वचा की रक्षा करनाविकिरण, प्रतिरक्षा प्रदान करना और त्वचा को चिकनाई देना। डर्मिस में, नीचे स्थितएपिडर्मिस, प्रमुख फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाएं कोलेजन और लोचदार फाइबर का उत्पादन करती हैं। कोलेजनविरूपण का विरोध करने के लिए तन्य शक्ति और क्रूरता प्रदान करता है, जबकि इलास्टिन प्रदान करता हैलोच और लचीलापन, ऊतकों को हटाने पर अपने मूल आकार में लौटने की इजाजत देता हैविकृत करने वाला बल। कोलेजन और इलास्टिन के लिए संरचनात्मक समर्थन प्रदान करने के लिए क्रॉस-लिंक्ड हैंत्वचा [4–7]। Hyaluronic एसिड (HA), एक ग्लाइकोसामिनोग्लाइकेन, इसका एक प्रमुख घटक हैबाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम)। HA त्वचा की नमी को बनाए रखने के लिए एक महत्वपूर्ण अणु हैपानी के अणुओं को अपने वजन से 1000 गुना तक बांधने और बनाए रखने की क्षमता [8,9]। हापानी को अवशोषित करके एक जेल बनाता है और ऊतकों को संपीड़न के प्रतिरोध के साथ प्रदान करता है।हाइपोडर्मिस, जो मुख्य रूप से वसा और ढीले संयोजी ऊतक से बना होता है, ऊर्जा का भंडारण करता हैऔर शरीर को इन्सुलेशन प्रदान करता है [5,6]. 

त्वचा की उम्र बढ़ना एक जटिल जैविक प्रक्रिया है जो आंतरिक और बाहरी कारकों से प्रेरित होती है [10,11]। आंतरिक बुढ़ापा शारीरिक और आनुवंशिक कारणों से होने वाली एक अपरिहार्य प्रक्रिया हैसमय बीतने के साथ परिवर्तन होता है, जिसके परिणामस्वरूप महीन झुर्रियाँ, क्रमिक त्वचीय शोष, औरपतली और शुष्क त्वचा [10,12,13]। बाहरी उम्र बढ़ने के संचयी जोखिम से उत्पन्न होता हैयूवी विकिरण, धूम्रपान और वायु प्रदूषण सहित पर्यावरणीय कारक। ये पर्यावरणकारकों को त्वचा के शारीरिक और रूपात्मक परिवर्तनों को बढ़ावा देने के लिए जाना जाता है,जिसके परिणामस्वरूप समय से पहले त्वचा बूढ़ी हो जाती है [12–14]। पर्यावरणीय कारकों के बीच, जोखिमयूवी विकिरण बाहरी त्वचा की उम्र बढ़ने का प्राथमिक कारण है और इसे फोटोएजिंग कहा जाता है [14–16]। आंतरिक रूप से वृद्ध त्वचा से अलग, आमतौर पर समय से पहले फोटोज्ड त्वचाखुरदरापन, अनियमित, धब्बेदार रंजकता, एक मोटी एपिडर्मिस, गहरी झुर्रियाँ दिखाता है,ढिलाई, और खुरदरापन [5,10,17]। भले ही आंतरिक त्वचा की उम्र बढ़ने और बाहरी त्वचा की उम्र बढ़नेविभिन्न कारकों से प्रेरित हैं, दोनों समान आणविक तंत्र साझा करते हैं। विशेष रूप से,प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) ऑक्सीडेटिव सेल चयापचय द्वारा उत्पन्न होती हैं और खेलती हैंदोनों प्रक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका [18]। आरओएस माइटोजन-सक्रिय प्रोटीन की सक्रियता को ट्रिगर करता हैकिनेसेस (एमएपीके) और बाद के परमाणु कारक-κबी (एनएफ-κबी) और प्रतिलेखन कारक उत्प्रेरकप्रोटीन -1 (एपी -1), जो मेटालोप्रोटीनिस (एमएमपी: एमएमपी -1) के अपरेगुलेशन की ओर ले जाता है,एमएमपी -3, और एमएमपी -9) और प्रोकोलेजन -1 का डाउनरेगुलेशन, जिसके परिणामस्वरूप कमी हुईवृद्ध त्वचा में कोलेजन सामग्री [2,19]। आरओएस घुसपैठ करने के लिए रक्त न्यूट्रोफिल को भी सक्रिय कर सकता हैत्वचा और इलास्टेज स्रावित करता है, जो लोचदार तंतुओं को त्वचा की लोच खोने के लिए नीचा दिखाता है [20]। त्वचाउम्र बढ़ने का त्वचा की नमी के नुकसान से भी गहरा संबंध है। बताया गया है कि अत्वचा की उम्र बढ़ने के परिणामस्वरूप एपिडर्मिस में हा की उल्लेखनीय कमी के परिणामस्वरूप नुकसान होता हैत्वचा की नमी [8,21]। HA को हाइलूरोनन सिंथेस (HAS; HAS-1, -2, -3,) द्वारा संश्लेषित किया जाता है।एपिडर्मल केराटिनोसाइट्स और त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट [8]। मेलेनिन रूपांतरण द्वारा निर्मित होता हैएल-टायरोसिन से एल-डाइहाइड्रॉक्सीफेनिलएलानिन (एल-डोपा), जो टाइरोसिनेस द्वारा उत्प्रेरित होता है।मेलानिन त्वचा के रंग के लिए जिम्मेदार होता है और त्वचा को हानिकारक तत्वों से बचाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता हैधूप के संपर्क में आने से नुकसान। हालाँकि, ROS के संचय से गतिविधि बढ़ जाती हैtyrosinase की, अत्यधिक होने के कारण हाइपरपिग्मेंटेशन जैसे उम्र के धब्बे और मेलास्मामेलेनिन का उत्पादन। इसलिए, हाइपरपिग्मेंटेशन को फ्री रेडिकल द्वारा कम किया जा सकता हैमैला ढोने वाले और टायरोसिनेस अवरोधक [22,23].

पिछले दशकों में, स्वस्थ उम्र बढ़ने के लिए रणनीतियों में वृद्धि के कारण अनिवार्य रहा हैजीवन प्रत्याशा। इसके अलावा, युवा और सुंदर बनाए रखने में रुचि बढ़ रही हैउपस्थिति क्योंकि त्वचा के स्वास्थ्य और सुंदरता को महत्वपूर्ण जैविक कारकों के रूप में माना जाता हैमानव कल्याण का प्रतिनिधित्व। यह भी एक युवा और सुंदर दिखने के रूप में माना जाता हैसामाजिक व्यवहार पर सकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है [10,13]। इसलिए, लाखों उपभोक्ता उपयोग करते हैंकॉस्मेटिक त्वचा देखभाल उत्पादों दैनिक, और कॉस्मेटिक उत्पादों के वैश्विक बाजार का अनुमान है2018 से प्रति वर्ष 7.14 प्रतिशत की अनुमानित वृद्धि दर से 2023 तक $805 बिलियन तक पहुंचने के लिए2023 तक [24,25]। सिंथेटिक कॉस्मेटिक उत्पादों के प्रतिकूल दुष्प्रभावों के कारण होता हैपौधों, जानवरों के अणुओं सहित प्राकृतिक उत्पादों का उपयोग करने की बढ़ती मांग,और समुद्री जीव। Cosmeceuticals सौंदर्य प्रसाधन और फार्मास्यूटिकल्स से प्राप्त होते हैं,जो यूवी के कार्यों के साथ बायोएक्टिव अवयवों वाले कॉस्मेटिक उत्पादों को संदर्भित करता हैसुरक्षा, त्वचा को गोरा करना, झुर्रियाँ रोधी और बुढ़ापा रोधी [26]। कॉस्मेटिक उद्योग में,कॉस्मीस्यूटिकल्स सबसे तेजी से बढ़ने वाला क्षेत्र है और प्राकृतिक उत्पाद एक उपन्यास के रूप में उभर रहे हैंकॉस्मिक्यूटिकल अनुप्रयोगों के लिए संभावित बायोएक्टिव पदार्थों का स्रोत [25]. 

Cistanche प्रोकैरियोटिक या यूकेरियोटिक प्रकाश संश्लेषक सूक्ष्मजीव हैं जो कर सकते हैंतेजी से बढ़ते हैं और अत्यधिक पर्यावरणीय परिस्थितियों में जीवित रहते हैं (जैसे, तापमान भिन्नता,एनारोबायोसिस, लवणता, फोटोऑक्सीडेशन, आसमाटिक दबाव और यूवी विकिरण) [27]। सिस्टंचउच्च उत्पादकता, सीमित मौसमी भिन्नता के कारण भी स्थलीय पौधों से श्रेष्ठ हैं।आसान निकासी, और प्रचुर मात्रा में कच्चे माल [27]। सिस्टैंच लगातार उजागर होते हैंपर्यावरणीय तनावों के लिए। इस प्रकार, वे उल जैसी विभिन्न रणनीतियों को विकसित करने के लिए विकसित हुएसंरचनात्मक, शारीरिक और जैव रासायनिक परिवर्तन [28]। प्राकृतिक उत्पाद व्युत्पन्नकॉस्मेटिक या कॉस्मेस्यूटिकल उद्देश्यों के लिए क्षमता वाले सिस्टंच से प्रकाश संश्लेषक शामिल हैंरंजक, लिपिड, फेनोलिक यौगिक, अमीनो एसिड, पेप्टाइड्स, कार्बोहाइड्रेट,और विटामिन [25]। प्राकृतिक उत्पादों में, कैरोटीनॉयड, जिन्हें मजबूत के रूप में जाना जाता हैएंटी-ऑक्सीडेंट और फ्री रेडिकल स्कैवेंजर्स का उपयोग एंटी-एजिंग और फोटोप्रोटेक्शन के लिए किया जा सकता हैउद्देश्य [29]। कैरोटेनॉयड्स में, एस्टैक्सैंथिन, जो एक उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रदर्शित करता हैबजाय -कैरोटीन और एस्कॉर्बिक एसिड में एक दिलचस्प अपचयन कार्य होता है जो कर सकता हैमेलेनिन संश्लेषण को 40 प्रतिशत तक कम करके उम्र के धब्बों से त्वचा की रक्षा करें [30,31]। ज़ेक्सैन्थिन औरअन्य कैरोटेनॉयड्स भी यूवी अवशोषण और टाइरोसिनेज निषेध की गतिविधियों को प्रदर्शित करते हैं [32]. सिस्टंचअक्सर पॉलीअनसैचुरेटेड फैटी एसिड (पीयूएफए) सहित उच्च लिपिड सामग्री होती है।पीयूएफए फोटोप्रोटेक्शन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, झिल्ली की तरलता को बनाए रखते हैं औरइंट्रासेल्यूलर बर्फ क्रिस्टल गठन को रोकना, जो अत्यधिक पर्यावरण में जीवित रहने में सक्षम बनाता हैउच्च प्रकाश तीव्रता, यूवी विकिरण, और निम्न तापमान जैसी स्थितियां [33,34]. ओमेगा -3 फैटी एसिड जैसे डोकोसाहेक्साएनोइक एसिड (डीएचए) और ईकोसैपेंटेनोइक एसिड (ईपीए)यूवी-प्रेरित मेटालोप्रोटीनिस के दमन द्वारा त्वचा की फोटोएजिंग को क्षीण करने में सकारात्मक प्रभाव पड़ता है(एमएमपी) और जलनरोधी गतिविधियां [35]। इसकी सूचना भी दी गई हैवह -लिनोलेनिक एसिड के कुछ कॉस्मेटिक प्रभाव होते हैं जैसे त्वचा को पुनर्जीवित करना और धीमा करनाउम्र बढ़ने की प्रक्रिया, और त्वचा के हाइपरप्लासिया के उपचार के लिए लिनोलिक एसिड का उपयोग किया जाता है [36]. Cistanche के फेनोलिक यौगिकों को विभिन्न गतिविधियों जैसे प्रदर्शित करने के लिए जाना जाता हैएंटीऑक्सिडेंट, एंटीएलर्जिक, एंटी-इंफ्लेमेटरी और यूवी प्रोटेक्शन फंक्शन [2,37].

Nannochloropsisप्रजातियां, छोटे एककोशिकीय यूस्टिग्माटोफिसियन शैवाल, पहचाने जाते हैंउनकी उच्च लिपिड सामग्री और उच्च फोटोऑटोट्रॉफिक बायोमास उत्पादकता के साथ-साथबड़े पैमाने पर उनकी सफल खेती के लिए [38]. Nannochloropsisशोषण किया गया हैएक्वाकल्चर से उगाए गए आहार के लिए असंतृप्त फैटी एसिड (ईपीए सहित) के स्रोत के रूप मेंसमुद्री अकशेरूकीय। इनमें फेनोलिक यौगिक, विटामिन और विभिन्न भी होते हैंएंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों के साथ पिगमेंट [39]। इसके अलावा, वे विषाक्त पदार्थों का उत्पादन नहीं करते हैं औरसमुद्री मछलियों के भोजन के रूप में उनके दीर्घकालिक उपयोग से उनकी विष विज्ञान संबंधी सुरक्षा सिद्ध हुई हैऔर शेलफिश लार्वा [40]। हालांकि उनके पास विविध मूल्यवान बायोएक्टिव यौगिक हैं,के आवेदन पर कुछ रिपोर्टें हैंNannochloropsisकॉस्मेटिक और कॉस्मेटिक के लिएउद्देश्य [41]। कॉस्मेटिक को प्रभावित करने वाले सिस्टैंच की जैव रासायनिक संरचना को ध्यान में रखते हुएप्रभाव एक ही प्रजाति के आइसोलेट्स के बीच भी भिन्न हो सकते हैं [42], आगे की जांच पड़तालप्राकृतिक और की बढ़ती मांग को पूरा करने के लिए इस सूक्ष्म शैवाल प्रजाति की आवश्यकता हैसुरक्षित कॉस्मेटिक उत्पाद। इस अध्ययन में, हमने की कॉस्मिक्यूटिकल क्षमता की जांच कीसे निकालेंNannochloropsisसपा। G1-5 (NG15) के दक्षिणी पश्चिम सागर से पृथक हैकोरिया गणराज्य। हमने इसकी विभिन्न जैविक गतिविधियों का विश्लेषण किया, जिसमें इसके एंटी-मेलेनोजेनिक भी शामिल हैं, एंटीऑक्सीडेंट, त्वचा-मॉइस्चराइजिंग, एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटी-रिंकलिंग और यूवीसंरक्षण कार्य। हमने आगे इसकी जैव रासायनिक सामग्री और की संरचना का विश्लेषण कियाफैटी एसिड, कैरोटीनॉयड और फेनोलिक यौगिक।

2. परिणाम

2.1। नैनोक्लोरोप्सिस सपा का अलगाव। जी 1-5 और जैव रासायनिक संरचना का विश्लेषण

इस अध्ययन में, हमने एक कॉलोनी को एक भूरे रंग के साथ अलग किया जो उपस्थिति का संकेत देता हैकैरोटेनॉयड्स और पॉलीफेनोल्स के वर्णक, जो समुद्री जल को फैलाकर प्राप्त किए गए थेएफ/2 आगर प्लेटों पर नमूने। हमने 18S rDNA PCR का उपयोग करके आइसोलेट की पहचान कीअनुक्रमण द्वारा और इसे नाम दियाNannochloropsisसपा। जी1-5 (एनजी15)। की खेती के बादइथेनॉल का उपयोग करके एनजी 15 और निष्कर्षण, फैटी एसिड मिथाइल एस्टर की संरचना और सामग्री(FAMEs), NG15 के सत्त में कैरोटेनॉयड्स और फेनोलिक यौगिकों का निर्धारण किया गया।फैटी एसिड, कैरोटीनॉयड, फेनोलिक्स और की कुल सामग्रीflavonoidsकच्चे मेंनिष्कर्ष क्रमशः 58.2 प्रतिशत, 1.6 प्रतिशत, 7.7 प्रतिशत और 2.0 प्रतिशत थे (सारणी1–3). विशेष रूप से, कच्चाअर्क में लिपिड सामग्री में विभिन्न पीयूएफए होते हैं जैसे -लिनोलेनिक, लिनोलिक एसिड औरईपीए, जिसमें एंटी-एजिंग, फोटोप्रोटेक्शन और एंटी-इंफ्लेमेटरी गतिविधियां हैं (तालिका1). यहएस्टैक्सैन्थिन सहित विभिन्न कैरोटीनॉयड यौगिक भी थे, -कैरोटीन, ज़ेक्सैन्थिन,कैंथैक्सैंथिन, और वायलैक्सैंथिन (तालिका2, चित्र S1, तालिका S1), जिनके बारे में जाना जाता थाएंटीऑक्सिडेंट, फोटोप्रोटेक्टिव और एंटी-मेलेनोजेनिक फ़ंक्शन हैं। इसके अलावा कुलएनजी15 के क्रूड एक्सट्रेक्ट में फेनोलिक्स' और फ्लेवोनोइड सामग्री (तालिका3) अपेक्षाकृत थेअन्य पहले रिपोर्ट किए गए Cistanche की तुलना में उच्च [43–45].

2.2। NG15 सत्त की विट्रो साइटोटॉक्सिसिटी में

B16F10, CCD-986sk, सामान्य hu की व्यवहार्यता पर NG15 निष्कर्ष का प्रभावमैन डर्मल फाइब्रोब्लास्ट (NHDF), और NF-κबी ल्यूसिफरेज रिपोर्टर NIH3T3 स्थिर कोशिकाएं थींएमटीटी परख द्वारा 100-1500 की एकाग्रता पर निर्धारितµजी/एमएल। के साथ उपचारNG15 अर्क ने तक परीक्षण किए गए सभी सेल लाइनों की सेल व्यवहार्यता को महत्वपूर्ण रूप से कम नहीं किया1000 की एकाग्रताµजी/एमएल, लेकिन यह 1500 पर थोड़ा कम हो गयाµजी/एमएल (चित्र1a–d). 

2.3। NG15 एक्सट्रैक्ट की एंटी-मेलानोजेनिक गतिविधि

यह मूल्यांकन करने के लिए कि क्या NG15 अर्क का त्वचा को सफेद करने वाला प्रभाव है, हमने इसका विश्लेषण किया-टायरोसिनेज गतिविधि और इंट्रासेल्युलर मेलेनिन संश्लेषण पर प्रभाव। टायरोसिनेज निषेध सेपरख, हमने देखा कि NG15 के साथ इलाज के द्वारा tyrosinase गतिविधि कम हो गई थीखुराक पर निर्भर तरीके से निकालें। tyrosinase निषेध गतिविधियाँ थीं7.84 ± 2.54, 19.68 ± 2.64, 26.24 ± 1.21, 40.16 ± 0.55, और 59.2± 0.48 प्रतिशत NG15 से उपचार के बाद100, 250, 500, 750, और की एकाग्रता पर निकालें1000 µजी/एमएल, क्रमशः, जबकि अर्बुटिन(300 µएम), एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया, की tyrosinase निषेध गतिविधि का प्रदर्शन किया47.52 ± 3.09 प्रतिशत(आकृति2ए)। NG15 एक्सट्रैक्ट की टाइरोसिनेस निषेध गतिविधि1000 µजी/एमएलअधिक थाअरबुटिन की तुलना में (300µएम)। NG15 की एंटी-मेलेनोजेनिक गतिविधि का निर्धारण करने के लिएअर्क, B16F10 कोशिकाओं से प्रेरित थे -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन ( -एमएसएच,100 nM), और मेलेनिन सामग्री B16F10 कोशिकाओं में NG15 अर्क या अर्बुटिन के साथ इलाज किया जाता है।मापे गए थे। NG15 के अर्क ने मेलेनिन पर एक महत्वपूर्ण निरोधात्मक प्रभाव प्रदर्शित कियाखुराक पर निर्भर तरीके से संश्लेषण। गैर-उपचारित कोशिकाओं की तुलना में, मेलेनिन सामग्रीनिकालने के उपचार के बाद थे212.53 ± 4.72, 171.06 ± 3.57, और128.60 ± 3.67 प्रतिशतपर250, 500 और की एकाग्रता1000 µजी/एमएल, क्रमश। B16F10 की मेलेनिन सामग्रीकोशिकाओं के साथ ही इलाज किया -एमएसएच (100 एनएम) ने 247.65 दिखाया± 4.15 प्रतिशत। यह परिणाम दर्शाता हैतथ्य यह है कि NG15 के अर्क में मेलेनिन की मात्रा कम हो जाती है -एमएसएच-उपचारित बी16एफ10 कोशिकाएं48 प्रतिशत तक। सकारात्मक नियंत्रण, अरबुटिन (300µएम), 88.27 दिखाया± मेलेनिन सामग्री का 1.50 प्रतिशतगैर-उपचारित कोशिकाओं की तुलना में, मेलेनिन सामग्री में 64 प्रतिशत की कमी के अनुरूप -एमएसएच-उपचारित बी16एफ10 कोशिकाएं (चित्र2b). 

चित्र 1. (ए) बी16एफ1{{10}}, (बी) एनएचडीएफ, (सी) एनएफ-केबी ल्यूसिफरेज रिपोर्टरएनआईएच3टी3 की व्यवहार्यता पर एनजी15 एक्सट्रैक्ट (0-1500 यूजी/एमएल) का प्रभाव स्थिर सेल, और (d) CCD-986sk सेल। नियंत्रण का अर्थ है NG15 अर्क के बिना कोशिकाओं की सेल व्यवहार्यता; * एपी मूल्य <0.05, एन=3, छात्र का एफ परीक्षण दर्शाता है; ** एपी मूल्य <0.01, एन=3, छात्र का टी परीक्षण दर्शाता है।

2.4। एनजी15 की एंटीऑक्सीडेंट, जलनरोधी, और यूवी-संरक्षण गतिविधियां

ExtractThe DPPH परख NG15 अर्क की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए नियोजित किया गया था। NG15 अर्क की DPPH कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि खुराक पर निर्भर तरीके से 100-1000 ug/mL की एकाग्रता सीमा पर बढ़ी। विशेष रूप से, DPPH कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियाँ 8.71 士 1.38,20.12 土 1.38, 51.65  1.88, 54.95 से 2.38, और 57.{{20}} थीं। क्रमशः 100, 250, 500, 750, और 1000 ug/mL NG15 सत्त से उपचार के बाद 52 प्रतिशत, जबकि एस्कॉर्बिक एसिड (5 ug/mL) ने 54.86 0.31 प्रतिशत DPPH रेडिकल स्कैवेंजिंग गतिविधि दिखाई। एनजी15 के 1000 ug/mL पर डीपीपीएचरेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि एस्कॉर्बिक एसिड (5 ug/mL) (चित्र 3a) की तुलना में थोड़ी अधिक थी। NG15 अर्क की विरोधी भड़काऊ गतिविधि की जांच करने के लिए, हमने NF-kB-निर्भर ल्यूसिफरेज रिपोर्टर परख द्वारा TNF-a-प्रेरित NF-B सक्रियण पर अर्क के प्रभाव का विश्लेषण किया। जब NF-kB ल्यूसिफरेज रिपोर्टर NIH3T3stable कोशिकाओं को NG15 अर्क के विभिन्न सांद्रणों के साथ इलाज किया गया था, TNF-a-प्रेरित ल्यूसिफरेज गतिविधि को खुराक पर निर्भर तरीके से 15.40 प्लस 0.38 प्रतिशत at1000 ug/mL तक कम किया गया था, केवल इलाज की गई कोशिकाओं की तुलना में टीएनएफ-ए (चित्रा 3बी)। यूवीबी, व्यवहार्यता के संपर्क के बाद त्वचा कोशिकाओं पर एनजी 15 निकालने के सुरक्षात्मक प्रभाव को निर्धारित करने के लिएCCD-986sk कोशिकाओं का MTT परख द्वारा मापा गया था। बाद में सीसीडी -986sk कोशिकाओं की व्यवहार्यता30 एमजे / सेमी के संपर्क में2 यूवीबी को घटाकर 79.01 कर दिया गया था± नियंत्रण कोशिकाओं का 2.57 प्रतिशत। हालाँकि,NG15 अर्क के साथ उपचार ने यूवीबी-प्रेरित कोशिका मृत्यु को उल्लेखनीय रूप से कम कर दियाखुराक - आधारित तरीका। NG15 अर्क से उपचारित CCD-986sk की सेल व्यवहार्यता थी87.49 ± 7.49, 89.00 ± 2.89, 97.17 ± 7.19, 100.45 ± 5.62, और 109.48± इलाज के बाद 8.25 प्रतिशत100, 250, 500, 750 और 1000 के साथµनियंत्रण की तुलना में क्रमशः NG15 अर्क का g/mLकोशिकाएं (चित्र3c). 

चित्रा 2. एनजी 15 निकालने का एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव। (ए) मशरूम टाइरोसिनेज के खिलाफ एनजी 15 एक्सट्रैक्ट की इन विट्रो टाइरोसिनेज निषेध गतिविधि। ** एक पी-वैल्यू <0। 0 1 बनाम एक सामान्य (अनुपचारित) समूह को दर्शाता है। # एपी वैल्यू <0 को दर्शाता है। 01 बनाम सर्बुटिन-उपचारित कोशिकाएं; n=3: छात्र का f परीक्षण। (बी) मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (एमएसएच) -उत्तेजित बी16एफ10 कोशिकाओं में मेलेनिन सामग्री पर एनसी15 अर्क का प्रभाव। ## और ** डीनो एपी वैल्यू <0.01 बनाम सी-एमएसएच-ओनली-ट्रीटेड सेल; एन=3; छात्र की परीक्षा। Arbutin (300 uM) का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

2.5। NG15 एक्सट्रैक्ट की त्वचा मॉइस्चराइजिंग और एंटी-रिंकल एक्टिविटीज

NG15 एक्सट्रैक्ट की त्वचा हाइड्रेशन गतिविधि का आकलन करने के लिए, की अभिव्यक्तिहै-2 (मॉइस्चराइजिंग-संबंधित जीन) NHDF कोशिकाओं में qPCR का उपयोग करके जांच की गई थी।है-2एनजी 15 एक्सट्रैक्ट के साथ उपचार द्वारा एमआरएनए अभिव्यक्ति को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ाया गया थाखुराक - आधारित तरीका। के सापेक्ष mRNA अभिव्यक्ति स्तरहै-2अनुपचारित की तुलना मेंकोशिकाएं 199.88 थीं± 10.63, 263.91 ± 2.47, और 274.58± 1.37 प्रतिशत, के साथ उपचार के बाद250, 500 और 1000µNG15 का g/mL क्रमशः 24 घंटे के लिए निकाला जाता है, जबकिहै-2एमआरएनएएनएचडीएफ कोशिकाओं का रेटिनोइक एसिड (50 एनएम) के साथ इलाज का अभिव्यक्ति स्तर 316.31 था± 8.89 प्रतिशत(आकृति4ए)। कोलेजन क्षरण पर NG15 अर्क के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए औरसंश्लेषण, की अभिव्यक्तिएमएमपी-1औरCol1A1qPCR का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था।एमएमपी-1एनएचडीएफ कोशिकाओं की एमआरएनए अभिव्यक्ति एनजी 15 निकालने के साथ इलाज से कम हो गई थीखुराक पर निर्भर तरीके से, 1000 पर 26.71 प्रतिशत तकµg/mL, अनुपचारित की तुलना मेंनियंत्रण (चित्र4बी)।Col1A1एनएचडीएफ कोशिकाओं की एमआरएनए अभिव्यक्ति के साथ इलाज किया गयाNG15 अर्क ने 500 से नीचे की खुराक पर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखायाµजी / एमएल,लेकिन इसमें 15.53 की वृद्धि हुई± 1000 पर 2.75 प्रतिशतµg/mL, अनुपचारित नियंत्रण की तुलना में(आकृति4c). हमने इलास्टेज के निषेध पर NG15 अर्क के प्रभाव की भी जांच कीगतिविधि। NG15 के अर्क ने खुराक पर निर्भर तरीके से इलास्टेज निरोधात्मक गतिविधि दिखाई,24.88 तक± 0.80 प्रतिशत 1000 परµजी/एमएल, गैर-उपचारित नियंत्रण की तुलना में (चित्र4d)

चित्र 3. एनजी15 सत्त की एंटीऑक्सीडेंट, जलनरोधी और यूवी-संरक्षण गतिविधियां। (ए) एनजी 15 एक्सट्रैक्ट की डीपीपीएच फ्री रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि। एल-एस्कॉर्बिक एसिड (5 ug/mL) का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। ** सामान्य (अनुपचारित) समूह बनाम पी-मान <0.01 दर्शाता है। n {{1{{30}}}}; छात्र का टी-टेस्ट। (बी) एनएफ-बी ल्यूसिफरेज रिपोर्टर एनएलएच313 स्थिर कोशिकाओं में एनएफ-एक्सबी-आश्रित, टीएनएफ-ए-इंड्यूस्डुसिफेरेज एसिविटी पर एनजी15 एक्सट्रेक्ट का प्रभाव। ** एपी एल्यू <0.01 बनाम टीएनएफ-ए-ओनली-ट्रीटेड सेल को दर्शाता है। एन=3; छात्र का टी-टेस्ट। (सी) यूवीबी (30 मीटर)/सेमी') के संपर्क में आने के बाद सीसीडी -986 एसके कोशिकाओं की व्यवहार्यता पर एनजी 15 निकालने का सुरक्षात्मक प्रभाव। ## पी-वैल्यू <0.01 बनाम सामान्य (यूवीबी के लिए अनुपचारित और अप्रभावित) समूह को दर्शाता है। ** एपी वैल्यू <0.01 बनाम यूवीबी-ओनली-ट्रीटेड ग्रुप को दर्शाता है। एन=3; छात्र का एफ परीक्षण।

चित्र 4. NG15 सत्त की त्वचा को मॉइस्चराइजिंग और झुर्रियों से बचाने वाली गतिविधियां। (a) HAS-2b)MMP-1, और (C) Col1A1 का mRNA व्यंजक स्तर। (डी) एनएचडीएफ कोशिकाओं से इलास्टेज के खिलाफ एनजी 15 निकालने की इन विट्रो इलास्टेज निषेध गतिविधि एक पी-वैल्यू <0। 0 5 बनाम एक सामान्य (अनुपचारित) समूह को दर्शाता है। एपी मूल्य <0.01 बनाम एक सामान्य (अनुपचारित) समूहन=3 को दर्शाता है; छात्र का टी टेस्ट। रेटिनोइक एसिड (50 एनएम), टीसीएफ -3 (5 एनजी / एमएल, और फॉस्फोरामिडोन डिसोडियम नमक (10 यूएम) क्रमशः सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग किए जाते थे। प्रत्येक जीन का एमआरएनए अभिव्यक्ति स्तर बी के स्तर पर सामान्यीकृत होता था। -एक्टिन जीन।