सौंदर्य प्रसाधन उद्योग भाग 2 में बहुआयामी रंगों के रूप में फूलों का अर्क

कृपया संपर्क करेंoscar.xiao@wecistanche.comअधिक जानकारी के लिए

दर्द और सूजन से लक्षणों की राहत के इलाज के लिए पारंपरिक चिकित्सा प्रणालियों में कई प्राकृतिक उत्पादों का उपयोग किया जाता है, [61] इसलिए, लिपोक्सीजेनेस और प्रोटीनएज़ गतिविधि के निषेध पर विश्लेषण किए गए अर्क के प्रभाव की जांच की गई। विश्लेषण किए गए सांद्रता (100-500 ug/mL) की श्रेणी में, CTE पानी के अर्क ने प्रोटीनएज़ (चित्र 4) (500 ug/mL की एकाग्रता के लिए 57 प्रतिशत पर) को बाधित करने की सबसे मजबूत क्षमता दिखाई। इस गतिविधि की तुलना जाने-माने प्रोटीनएज़ इनहिबिटर डाइक्लोफेनाक से की गई थी, जिसका उपयोग नियंत्रण के रूप में किया जाता था (परीक्षण की गई उच्चतम सांद्रता पर लगभग 89 प्रतिशत निषेध)। हालांकि, जीजीई और केटीई निकालने के लिए समान परिणाम प्राप्त हुए (लगभग 56 प्रतिशत और 53 प्रतिशत, क्रमशः, उच्चतम सांद्रता के लिए)। PRE और PGE अर्क के लिए कम प्रोटीनएज़ अवरोध देखा गया। लिपोक्सीजेनेस को बाधित करने की क्षमता को मापने के एक और परीक्षण में, केटीई और सीटीई से जलीय अर्क 500 ug/mL） की सांद्रता के लिए उच्चतम मान (क्रमशः लगभग 67 प्रतिशत और 64 प्रतिशत अवरोध) दिखाते हैं। डिक्लोफेनाक का उपयोग नियंत्रण के रूप में भी किया जाता था। जीजीई, पीजीई, और प्री अर्क में भी काफी उच्च मान (क्रमशः 60 प्रतिशत, 57 प्रतिशत, और 54 प्रतिशत) शामिल हैं। यह भी नोट किया गया था कि एलओएक्स और प्रोटीनेज एंजाइमों को बाधित करने की क्षमता निकालने की एकाग्रता (चित्रा 5) पर निर्भर करती है।

पिछले अध्ययनों से संकेत मिलता है कि कई पॉलीफेनोलिक यौगिकों ने कई पौधों के अर्क की सूजन-रोधी गतिविधियों में महत्वपूर्ण योगदान दिया है [62]। अध्ययनों ने भड़काऊ प्रक्रिया में आरओएस की भागीदारी को दिखाया है, और फेनोलिक यौगिक जैसे कि गैलिक और क्विनिक एसिड, लिपोक्सीजेनेस गतिविधि की गतिविधि को रोककर एराकिडोनिक एसिड चयापचय को अवरुद्ध कर सकते हैं, या वे मैला ढोने वाले प्रतिक्रियाशील मुक्त कणों के रूप में काम कर सकते हैं, जो एराकिडोनिक एसिड के दौरान उत्पन्न होते हैं। [63]। बेनसाद एट अल द्वारा प्राप्त परिणाम । संकेत मिलता है कि पी. ग्रेनाटम से पृथक एलाजिक एसिड, गैलिक एसिड, और पुनीकैगिन ए एंड बी लिपोपॉलीसेकेराइड (एलपीएस) में नाइट्रिक ऑक्साइड (एनओ), प्रोस्टाग्लैंडीन ई 2 (पीजीई 2), और इंटरल्यूकिन 6 (आईएल -6) के उत्पादन को रोकता है। रॉ 267.4 मैक्रोफेज। क्या ये यौगिक एकमात्र एजेंट के रूप में काम करते हैं या इनका सहक्रियात्मक प्रभाव अभी भी एक प्रश्न बना हुआ है [64]। चूंकि कई फ्लेवोनोइड्स विरोधी भड़काऊ गुण दिखाते हैं, उनके आंतरिक एंटीऑक्सिडेंट व्यवहार के कारण, उन्हें विभिन्न सूजन संबंधी विकारों में फंसाया गया है।फ्लेवोनोइड निष्कर्षण विधि पीडीएफ,विशेष रूप से, क्वेरसेटिन सबसे दिलचस्प अणु है क्योंकि यह विशिष्ट जैविक मार्गों में हस्तक्षेप करता है। इसके अलावा, अध्ययनों से पता चलता है कि यह विभिन्न तंत्रों के माध्यम से कई मॉडलों में शामिल भड़काऊ प्रक्रिया को कम कर सकता है [65]। विशेष रूप से, एएमपी-सक्रिय प्रोटीन किनेज और हिस्टोन/प्रोटीन डीएसेटाइलेज़ (एएमपीके/एसआईआरटी1) मार्ग के परिणामस्वरूप अधिक दिलचस्प सूजन प्रबंधन होता है। इस प्रकार, एएमपीके कार्यकर्ता मैक्रोफेज सूजन को कम कर सकते हैं। क्वेरसेटिन और अन्य फ्लेवोनोइड्स, AMPK और SIRT1 के उत्प्रेरक के रूप में, इस मार्ग में हस्तक्षेप करके सूजन को कम कर सकते हैं [66]। यह भी दिखाया गया है कि क्वेरसेटिन और क्वेरसेटिन मोनोग्लुकोसाइड एक उच्च LOX अवरोध क्षमता [67] नायर एट अल का प्रयोग करते हैं। ने क्वेरसेटिन की मात्रा के साथ फ्लेवोनोल्स की उपस्थिति का मूल्यांकन करके केटीई अर्क के विरोधी भड़काऊ गुणों को दिखाया है जैसे कि मैंघसलिन क्यू 3-[2जी] रमनोसिलरुटिनोसाइड, क्यू 3-ओ-दिरहामनोसाइड, और रुटिन। इन अणुओं ने सीओएक्स -2 गतिविधि और आंशिक आरओएस दमन का मजबूत निषेध दिखाया है। सामान्य तौर पर, सीटीई में मौजूद पॉलीफेनोल्स ने रॉ 264.7 मैक्रोफेज कोशिकाओं [68] में एलपीएस-प्रेरित सूजन में विरोधी भड़काऊ गुण दिखाए।

अधिक जानने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

2.5.साइटोटॉक्सिसिटी आकलन

नए कॉस्मेटिक कच्चे माल बनाने में, सबसे महत्वपूर्ण गुणों में से एक उनके उपयोग की सुरक्षा है। सौंदर्य प्रसाधनों में उपयोग के लिए समर्पित पदार्थ गैर विषैले होने चाहिए, विशेष रूप से त्वचा कोशिकाओं के संबंध में, जैसे कि केराटिनोसाइट्स और फाइब्रोब्लास्ट। HaCaT और BJ कोशिकाओं पर विश्लेषण किए गए अर्क की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए दो प्रकार के परीक्षणों का उपयोग किया गया है।flavonoidsतटस्थ लाल तेज परख का उपयोग करते हुए पहला अध्ययन, हमें विश्लेषण किए गए अर्क के साथ इलाज किए गए कोशिकाओं की व्यवहार्यता का आकलन करने में सक्षम बनाता है। यह डाई एक जीवित कोशिका के लाइसोसोम में प्रवेश करती है और मृत कोशिकाओं के कोशिका द्रव्य में छोड़ी जाती है। यह देखा गया (चित्र 6) कि सीटीई अर्क में एचसीएटी और बीजे कोशिकाओं दोनों के प्रसार को बढ़ाने की उच्चतम क्षमता है। नियंत्रण की तुलना में, इस अर्क ने क्रमशः 250 μL/mL HaCaT और B】） और 500 μL/mL（BJ कोशिकाओं की सांद्रता पर परीक्षण किए गए पैरामीटर की तुलना में लगभग 20 प्रतिशत और 40 प्रतिशत अधिक मान प्राप्त किए। 100 और 250 μL/mL की सांद्रता पर GGE अर्क और 500 μL/mL की सांद्रता पर KTE निकालने को बीजे कोशिकाओं पर थोड़ा विषाक्त प्रभाव दिखाया गया था। इन कोशिकाओं की व्यवहार्यता पर अन्य अर्क का सकारात्मक प्रभाव पड़ा। 100 μL/mL की सांद्रता पर PRE और PGE अर्क नियंत्रण से महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नहीं थे, और उन्होंने 250 और 500 μL की एकाग्रता पर नियंत्रण की तुलना में बीजे कोशिकाओं के प्रसार में लगभग 10-15 प्रतिशत की वृद्धि की। एमएल। केराटिनोसाइट्स के मामले में, सेल व्यवहार्यता में कोई कमी नहीं देखी गई। PGE, PRE और CTE अर्क के लिए, बढ़ती एकाग्रता के साथ प्रसार में वृद्धि देखी गई, जबकि KTE और GGE अर्क की बढ़ती एकाग्रता के साथ सेल व्यवहार्यता में कमी का प्रदर्शन किया गया।

परीक्षण किए गए अर्क की साइटोटोक्सिसिटी को निर्धारित करने के लिए किया गया दूसरा परीक्षण रेसज़ुरिन परीक्षण (अलामर ब्लू) था। यह दिखाया गया है (चित्र 7) कि कोशिकाओं की व्यवहार्यता उस अर्क की एकाग्रता पर निर्भर करती है जिसके साथ कोशिकाओं को ऊष्मायन किया गया था। फ़ाइब्रोब्लास्ट के मामले में, PRE, PGE और CTE के अर्क उनकी एकाग्रता में वृद्धि के साथ उच्च सेल प्रसार का कारण बनते हैं। उच्चतम विश्लेषण एकाग्रता 500 μL / mL） पर, नियंत्रण की तुलना में लगभग 20 प्रतिशत अधिक प्रसार देखा गया।हेस्परिडिन का उपयोग करता हैकेटीई और जीजीई अर्क के मामले में, अर्क की एकाग्रता में वृद्धि के साथ सेल व्यवहार्यता में कमी देखी गई। इन अर्क ने बीजे पर 250 और 500 μL/mL की सांद्रता पर थोड़ा विषैला प्रभाव दिखाया। केराटिनोसाइट्स के मामले में, त्वचा कोशिकाओं पर विश्लेषण किए गए अर्क का एक समान प्रभाव देखा गया था, लेकिन उनके प्रसार की क्षमता फाइब्रोब्लास्ट के मामले में उतनी मजबूत नहीं थी। विश्लेषण किए गए सांद्रता की पूरी श्रृंखला में सीटीई निकालने के लिए केराटिनोसाइट प्रसार को बढ़ाने की उच्चतम क्षमता देखी गई। 250 μL / mL की एकाग्रता पर PRE निकालने के लिए और 500 μL / mL की एकाग्रता पर PGE निकालने के लिए समान मान प्राप्त किए गए थे। KTE के अर्क ने GGE निकालने की तुलना में HaCa कोशिकाओं पर काफी अधिक विषाक्त प्रभाव दिखाया।

विश्लेषण किए गए अर्क को पहले त्वचा कोशिकाओं के लिए उनकी विषाक्तता के लिए बड़े पैमाने पर परीक्षण नहीं किया गया है। अर्क या उनके मुख्य सक्रिय अवयवों पर विशेष रूप से कैंसर कोशिकाओं के लिए केवल कुछ साइटोटोक्सिसिटी अध्ययन हैं। पिछले अध्ययनों के लेखकों ने संकेत दिया है कि इन अर्क का आमतौर पर त्वचा कोशिकाओं पर विषाक्त प्रभाव नहीं होता है, और सेल प्रसार को बढ़ाने की उनकी क्षमता को अक्सर पॉलीफेनोल्स, एंथोसायनिन और फ्लेवोनोइड्स की उच्च सामग्री के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है [45,69-73 ]. कुछ लेखकों ने यह भी संकेत दिया कि अर्क में निहित व्यक्तिगत घटक त्वचा कोशिकाओं पर एक विषाक्त प्रभाव प्रदर्शित कर सकते हैं, जबकि संपूर्ण रूप से अर्क नहीं होता है। अली हिजाज़ी एट अल। [69] ने दिखाया कि पुनिका ग्रेनटम से निकाले गए एल्कलॉइड सामान्य और कैंसर सेल लाइनों के लिए जहरीले होते हैं, जबकि पूरा अर्क कम विषाक्त होता है। नासिरी एट अल का अध्ययन। [70] इंगित करता है कि त्वचा कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ाने की क्षमता के कारण घाव भरने की प्रक्रिया को तेज करने में पुनिका ग्रेनाटम फूल का अर्क उपयोगी हो सकता है। हमारे पिछले शोध [45] में, यह दिखाया गया था कि विश्लेषण किए गए पौधों से प्राप्त पानी-एथेनॉलिक अर्क को बीजे कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ाने की उच्च क्षमता की विशेषता थी, और केटीई और जीजीई अर्क ने इन कोशिकाओं पर कम विषाक्त प्रभाव दिखाया। .खोया साम्राज्यHaCaT कोशिकाओं पर पानी-इथेनॉल के अर्क का प्रभाव शुद्ध जलीय अर्क के समान था, लेकिन इथेनॉल से प्राप्त अर्क के मामले में जलीय अर्क के मामले की तुलना में थोड़ा अधिक अनुकूल प्रसार गुण देखे गए थे। दोनों प्रकार के विश्लेषण किए गए अर्क की संरचना के बीच अंतर उनके विषाक्तता में अंतर पैदा कर सकता है। जैसा कि दिखाया गया है, पानी के अर्क पानी-इथेनॉल के अर्क के रूप में बायोएक्टिव अवयवों से भरपूर नहीं होते हैं। रुटिन और आइसोक्वेरिट्रिन की सामग्री में सबसे बड़ा अंतर देखा जाता है।

सिस्टैन्च एंटी-एजिंग कर सकता है

2.6. सन प्रोटेक्शन फैक्टर का निर्धारण

त्वचा पर यूवी विकिरण के प्रतिकूल प्रभाव एक्सपोजर के तुरंत बाद और साथ ही वर्षों बाद भी प्रकट हो सकते हैं। सौर विकिरण का एक प्रतिरक्षादमनकारी प्रभाव होता है जो त्वचा की उम्र बढ़ने की प्रक्रिया को इसके साथ जुड़े सभी परिणामों के साथ तेज करता है, जिसमें कार्सिनोजेनेसिस में वृद्धि भी शामिल है [74]। वर्तमान में देखे गए रुझान उत्पादों को विकसित करने की बढ़ती आवश्यकता को इंगित करते हैं जो न केवल उपयोग में बहुत उच्च स्तर की सुरक्षा की विशेषता है, बल्कि इस अर्थ में बहुक्रियाशीलता भी है कि उत्पाद अब तक उपयोग किए जाने की तुलना में कार्रवाई के व्यापक दायरे के साथ त्वचा की विकिरण-विरोधी सुरक्षा की सुविधा देंगे। कुछ पौधे पदार्थ इस पहलू में एक अमूल्य भूमिका निभाते हैं, जो न केवल सूर्य संरक्षण प्रदान करने में सक्षम है बल्कि त्वचा पर सौर विकिरण के पहले से मौजूद नकारात्मक प्रभावों को बेअसर करने में भी सक्षम है [75-77]। किए गए शोध से पता चला है कि विश्लेषण किए गए पौधे के अर्क PRE, PGE, KTE, CTE, और GGE को उच्च SPF गुणांक की विशेषता है।

उपरोक्त पौधों से प्राप्त पानी के अर्क के लिए गुणांक (एसपीएफ़) का विश्लेषण 10 और 50 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता पर किया गया था। प्रत्येक जांच किए गए पौधे के लिए अर्क की उच्च सांद्रता के परिणामस्वरूप एसपीएफ़ का मूल्य काफी अधिक हो गया।माइक्रोनाइज़्ड शुद्ध फ्लेवोनोइड अंश 1000 मिलीग्राम उपयोगअर्क के बीच तुलना से पता चलता है कि एसपीएफ़ के उच्चतम मूल्यों को केटीई निकालने के लिए देखा गया था, जो दोनों जांच की गई सांद्रता के लिए है। एक और दिलचस्प अवलोकन यह है कि जांच की गई सांद्रता के निचले हिस्से में भी केटीई अर्क ने अभी भी उच्च एसपीएफ़ का प्रदर्शन किया है, जबकि अन्य अर्क के मूल्यों में उल्लेखनीय रूप से कमी आई है। यह स्पष्ट है जब हम विश्लेषण करते हैं कि केटीई के लिए परिणाम अन्य निष्कर्षों की तुलना में कितना अधिक था। 50 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता के लिए, एसपीएफ़ 1.2 के कारक (जब पीजीई, सीटीई की तुलना में) से लगभग 1.9 (जब प्री, जीई की तुलना में) के कारक से अधिक था। 10 मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता के लिए एक ही गणना 1.4 (जब पीजीई की तुलना में) से कारक 2-3 (सीटीई, जीजीई की तुलना में) के कारकों को देगी, यहां तक ​​​​कि तुलना में 10 जैसे कारकों तक भी। पूर्व. केटीई अर्क पर ध्यान केंद्रित करते समय, कोई यह देख सकता है कि कारक 5 (50 मिलीग्राम / एमएल के मूल्य से 10 एमएल / एमएल के मूल्य तक) द्वारा अर्क की घटती एकाग्रता के परिणामस्वरूप एसपीएफ़ मूल्य में कारक 3.4 की कमी होती है। , जिसका अर्थ है कि एसपीएफ़ एकाग्रता की तुलना में धीमी गति से घटता है। उपरोक्त से पता चलता है कि कम सांद्रता (चित्रा 8) में लागू होने पर भी केटीई अर्क कुशल हो सकता है।

2.7. ट्रान्ससेपिडर्मल जल हानि (TEWL) और त्वचा जलयोजन मापन

पौधों के कच्चे माल की जैविक और औषधीय गतिविधि की विस्तृत श्रृंखला के कारण, अर्क में निहित पौधों के पदार्थ त्वचा की स्थिति पर महत्वपूर्ण प्रभाव डालते हैं। विशेष रूप से, हम यहां हमारी त्वचा की स्थिति पर द्वितीयक चयापचयों के प्रभाव के बारे में बात कर रहे हैं [78,79]।

अनुसंधान के अगले चरण में, जलयोजन और TEWL का विश्लेषण किया गया। त्वचा पर परीक्षण किए गए अर्क के प्रभाव का आकलन किया गया था। 10mg/mL के अर्क सांद्रण के लिए 60 और 360 मिनट के दो-समय के अंतराल पर माप किए गए। TEWL माप के लिए, PGE निकालने के लिए सबसे बड़ी प्रतिशत कमी दिखाई गई, जहां 13.9 का नियंत्रण मान गिरकर 8.71 हो गया, जिसके परिणामस्वरूप 37 प्रतिशत की कमी हुई। उस दृष्टिकोण से केटीई निकालने का विश्लेषण करना भी उचित है, क्योंकि यह उच्चतम एसपीएफ़ मूल्यों को प्रदर्शित करने वाला था। KTE निकालने के लिए, TEWL नियंत्रण मान घटकर 10.22 हो गया, जिसका अर्थ है 26 प्रतिशत की कमी (चित्र 9A)।

हालांकि, दूसरे उपकरण माप के मामले में, यह दिखाया गया था कि विश्लेषण किए गए अर्क 60 के बाद और साथ ही 360 मिनट के बाद, नियंत्रण नमूने के संबंध में मॉइस्चराइजेशन में वृद्धि का कारण बनते हैं।

विश्लेषण के परिणामस्वरूप, यह पाया गया कि विश्लेषण किए गए PRE, PGE, KTE, CTE, और GGE के अर्क त्वचा के जलयोजन को बढ़ाते हैं (चित्र 9B)। तैयारी में अर्क की एकाग्रता में वृद्धि के साथ-साथ मॉइस्चराइजिंग गुणों में वृद्धि देखी गई। PRE और PGE अर्क के लिए सबसे मजबूत मॉइस्चराइजिंग गुण 60 मिनट के बाद 32 प्रतिशत और 29 प्रतिशत के बराबर और 360 मिनट के बाद 21 प्रतिशत और 22 प्रतिशत के बराबर देखे गए हैं। हालांकि, त्वचा के जलयोजन का निम्नतम स्तर 60 मिनट के बाद केटीई अर्क के बराबर 18 प्रतिशत और 360 मिनट के बाद 3 प्रतिशत के करीब पाया गया है।

2.8. अनुप्रयोग विश्लेषण

2.8.1. अर्क के रंग मापदंडों का निर्धारण

अपने प्राकृतिक रंग के कारण, पौधों के फूलों के सक्रिय तत्वों का उपयोग कई व्यावसायिक उत्पादों, जैसे सौंदर्य प्रसाधन और भोजन में प्राकृतिक रंगों के रूप में किया जा सकता है। प्राप्त अर्क (तालिका 5) के लिए रंग विश्लेषण किया गया था।

PRE, KTE और CTE के अर्क में प्राकृतिक कॉस्मेटिक पिगमेंट के रूप में उच्चतम क्षमता पाई गई। हालांकि, सीटीई के लिए उच्चतम क्रोमा मान (सी *) देखा गया। एच डिग्री पैरामीटर के मूल्य के आधार पर, यह पाया गया कि यह इस अर्क का पीला रंग है जो नग्न आंखों को देखा और दिखाई देता है। KTE और PRE के अर्क के मामले में, कम C* मान (2.8) के बावजूद, इन अर्क का रंग स्पष्ट रूप से नग्न आंखों से देखा जा सकता है और PRE के लिए लाल-बैंगनी और KTE निकालने के लिए नीले-बैंगनी के रूप में निर्दिष्ट किया गया था। PGE और GGE के पानी के अर्क लाल और थोड़े नारंगी रंग के थे, और प्राप्त क्रोमा मान 1.3 के स्तर पर थे। इस रंग के लिए, इन मूल्यों को नग्न आंखों के लिए महत्वपूर्ण रूप से नहीं देखा जा सकता था।

2.8.2. अर्क के आधार पर सौंदर्य प्रसाधनों के रंग मापदंडों का निर्धारण

हाल के वर्षों में, विशेष रूप से खाद्य और कॉस्मेटिक उद्योगों में प्राकृतिक मूल के नए रंगों को विकसित करने की अत्यधिक आवश्यकता है। कृत्रिम रूप से प्राप्त रंगों की तुलना में, उनका मानव स्वास्थ्य और पर्यावरण पर कम नकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है [80]। प्राप्त अर्क का उपयोग एक मॉडल माइक्रेलर मेकअप रिमूवर तरल के निर्माण में किया गया था। प्रत्येक सूत्रीकरण में, उनका उपयोग 1 प्रतिशत की सांद्रता में किया गया था। मॉडल सौंदर्य प्रसाधनों के रंग मापदंडों के परिणाम तालिका 6 में प्रस्तुत किए गए हैं।

यह देखा गया कि PRE, PGE, CTE, और GGE से 1 प्रतिशत पानी के अर्क को मिलाने से मेकअप रिमूवर के रंग पर काफी प्रभाव पड़ा। प्रत्येक नमूना रंग में नग्न आंखों को स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा था। PRE के अर्क ने कॉस्मेटिक का रंग बदलकर नारंगी कर दिया और PGE, CTE और GGE के अर्क ने इसे पीले रंग में बदल दिया।

संभावित रंगों के रूप में विश्लेषण किए गए अर्क का उपयोग करने की संभावना की पुष्टि मेक-अप रिमूवर के अर्क / बेस मेकअप रिमूवर के अपेक्षाकृत उच्च मूल्यों से होती है, जो कि तुलना में अर्क के अतिरिक्त के साथ मॉडल सौंदर्य प्रसाधनों के रंग में एक महत्वपूर्ण बदलाव को इंगित करता है। आधार नमूने के लिए (अर्क को जोड़े बिना)। साहित्य डेटा [73] से पता चलता है कि यदि AE मान 5 से अधिक है, तो रंग नग्न पूर्व संध्या द्वारा माना जाता है और रंग प्रभाव के रूप में माना जाता है। PRE, KTE, और CTE अर्क वाले मेकअप रिमूवर के लिए, AE मान क्रमशः 8.83,9.17 और 8.14 प्राप्त किए गए थे। पीजीई और जीजीई के अर्क वाले उत्पादों के मामले में, तैयारी के रंग पर अर्क में कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं देखा गया। AE के मान 2.51-2.82 की सीमा में हैं। इसका मतलब यह है कि रंग में अंतर केवल एक अनुभवी पर्यवेक्षक [80,81] को ही दिखाई देता है।

3. सामग्री और तरीके

3.1. संयंत्र सामग्री और निष्कर्षण प्रक्रिया

शोध में प्रयुक्त पादप सामग्री P. roeas L., P.granatum L., C.ternatea L., C.tinctorius L., और G.globosa L. के सूखे फूल थे, जो स्थानीय हर्बल स्टोर से प्राप्त किए गए थे। . निष्कर्षण प्रक्रिया एक अल्ट्रासोनिक स्नान (डिजिटल Mgtrasonic Cleaner, बर्लिन, जर्मनी) में की गई थी, जिसे यांग एट अल द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके किया गया था। [82]। परीक्षण किए गए पौधों के पानी के अर्क को तैयार करने के लिए 10 ग्राम सूखे फूल और 100 ग्राम पानी का उपयोग किया गया था। प्रक्रिया कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए की गई थी। प्राप्त अर्क को फिर एकत्र किया गया और व्हाटमैन नंबर 1 फिल्टर पेपर के माध्यम से तीन बार फ़िल्टर किया गया। छानने के बाद, अर्क 40 डिग्री पर कम दबाव में वाष्पित हो गए। सूखे अर्क से 100 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता पर एक स्टॉक समाधान तैयार किया गया था और आगे के विश्लेषण तक अंधेरे में 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था। निम्नलिखित संक्षिप्त रूपों का उपयोग किया जाता है: प्री-पापावर रियोस एक्सट्रैक्ट, पीजीई-पुनिका ग्रेनाटम एक्सट्रैक्ट, जीजीई-गोम्फ्रेना ग्लोबोसा एक्सट्रैक्ट, सीटीई-कार्थमस टिनक्टरियस एक्सट्रैक्ट, केटीई-क्लिटोरिया टर्नेटिया एक्सट्रैक्ट।

3.2. एचपीएलसी-यूवी-ईएसआई-एमएस . द्वारा बायोएक्टिव यौगिकों का निर्धारण

प्राप्त अर्क का विश्लेषण उनके मुख्य बायोएक्टिव यौगिकों को निर्धारित करने के लिए एक HPLC (DionexUltiMate 300{{20}} RS थर्मो फिशर साइंटिफिक, सनीवेल, सीए, यूएसए) का उपयोग करके किया गया था। एक मास स्पेक्ट्रोमीटर के साथ(4000 QTRAP, AB Sciex, Concord, ON, कनाडा), एक इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण स्रोत (ESI) और एक ट्रिपल क्वाड्रुपोल-आयन ट्रैप मास से लैस है। विश्लेषक। क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण एक ग्रेडिएंट रिवर्स-फेज सिस्टम के साथ हासिल किया गया था। इसके अलावा, 100 × 4.6 मिमी क्रोमैटोग्राफिक कॉलम काइनटेक्स 3.5 माइक्रोन एक्सबी-सी 18 100 आइसो-ब्यूटाइल साइड चेन के साथ और टीएमएस एंड-कैपिंग स्थिर चरण के साथ समान संरचना गार्ड कॉलम के साथ फेनोमेनेक्स से खरीदा गया था और 30 डिग्री पर बनाए रखा गया था। . एक बाइनरी सॉल्वेंट सिस्टम जिसमें सॉल्वेंट ए के रूप में 0.1 प्रतिशत (ओ/वी) जलीय फॉर्मिक एसिड और सॉल्वेंट बी के रूप में मेथनॉल का उपयोग रन टाइम के 19.1 मिनट के दौरान ग्रेडिएंट मोड के तहत किया गया था। लागू की गई रेफरेंस शर्तें इस प्रकार थीं: 0. 0-15.0 मिनट 25-100 प्रतिशत बी, 15.0-17.0 मिनट 100 प्रतिशत बी,17.0-17.1 मिनट 100-25 प्रतिशत बी, 17। 1-19 .1 मिनट 25 प्रतिशत बी। मोबाइल चरण की प्रवाह दर 0.6 एमएल / मिनट थी और इंजेक्शन की मात्रा 10 μL थी। नकारात्मक आयन मोड के तहत इलेक्ट्रोस्प्रे आयन मास स्पेक्ट्रोमीटर (ईएसआई-एमएस) द्वारा एलुएंट की निगरानी की गई और m/z 20 से 1000 Da तक स्कैन किया गया। परिमाणीकरण विश्लेषण के लिए, ट्रिपल क्वाड्रुपोल एमएस डिटेक्टर मल्टीपल रिएक्शन मॉनिटरिंग (MRM) स्कैन मोड में काम कर रहा था। इष्टतम द्रव्यमान विश्लेषक की स्थिति और व्यक्तिगत यौगिकों के लिए उत्पाद आयनों का चयन प्रयोगात्मक रूप से निर्धारित किया गया था। इस प्रयोजन के लिए, मोबाइल चरण संरचना में जांच किए गए यौगिकों (1 एनजी/एमएल) के मानक समाधान निरंतर नमूना वितरण में चल रहे एक जलसेक पंप का उपयोग करके पेश किए गए थे। यह सुनिश्चित करने के बाद कि सही अग्रदूत आयन का चयन किया गया था, डिक्लस्टरिंग पोटेंशिअल (DP), एंट्रेंस पोटेंशिअल (EP), कोलिजन सेल एग्जिट पोटेंशिअल (CXP), और कोलिजन एनर्जी (CE) को प्रत्येक MRM ट्रांज़िशन (टेबल S1) के लिए ऑप्टिमाइज़ किया गया था। दो एमआरएम संक्रमणों की निगरानी की गई, एक परिमाणीकरण के लिए और एक पुष्टिकरण के लिए। एमएस पैरामीटर निम्नानुसार निर्धारित किए गए थे: 600 सी का केशिका तापमान, 35 पीएसआई पर कर्टेन गैस, 60 पीएसआई पर नेबुलाइज़र गैस, और 50 पीएसआई पर सुखाने वाली गैस। नकारात्मक आयनीकरण मोड स्रोत वोल्टेज -4500 V को बायोएक्टिव यौगिकों के निर्धारण के लिए लागू किया गया था। नाइट्रोजन का उपयोग पर्दे और टक्कर गैस के रूप में किया जाता था। डेटा विश्लेषण को विश्लेषक 1.5.1 सॉफ्टवेयर के साथ संसाधित किया गया था। चयनित यौगिकों की पहचान आणविक द्रव्यमान और प्रत्येक व्यक्तिगत यौगिक के आयनों प्रविष्टियों के टुकड़े द्वारा की गई थी और MS2 विखंडन द्वारा पुष्टि की गई थी। नौ यौगिकों की पहचान उनके रासायनिक सूत्र, अवक्षेपित आणविक आयनों और प्रत्येक व्यक्तिगत शिखर के लिए विशिष्ट अंश आयनों के साथ निर्धारित की गई थी। विश्लेषणात्मक मानकों के सबसे तीव्र एमआरएम संक्रमण के चरम क्षेत्रों का उपयोग करके उत्पन्न अंशांकन वक्र के आधार पर छह यौगिकों की मात्रा निर्धारित की गई थी। मात्रात्मक यौगिकों के लिए डिटेक्टर प्रतिक्रिया की रैखिकता 0.01 ug/mL से 2ug/mL तक के आठ सांद्रता स्तरों पर अंशांकन मानकों के इंजेक्शन द्वारा प्रदर्शित की गई थी। अंशांकन वक्र 0.99 से अधिक सहसंबंध (R) के गुणांकों के साथ रैखिक थे। यदि नमूने सीएमएस डिटेक्टर की लीनियर रेंज में नहीं आते हैं, तो नमूनों को पतला कर दिया गया था।

क्विनिक एसिड, गैलिक एसिड, कैफिक एसिड, कैफ़ोइलक्विनिक एसिड (CQA, दो आइसोमर्स: 3- और 5-CQA) के विश्लेषणात्मक मानकों और क्वेरसेटिन को सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए से खरीदा गया था। ) उपयोग किए गए सभी मानक विश्लेषणात्मक ग्रेड (99 प्रतिशत शुद्धता से 2 अधिक या बराबर) के थे।

2 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता देने के लिए 10 एमएल एलसी-एमएस ग्रेड मेथनॉल में प्रत्येक मानक के 20 मिलीग्राम को सटीक रूप से वजन और भंग करके मानक स्टॉक समाधान तैयार किए गए थे। 2.{{10}} ug/mL, 1.5 ug/mL,1.0 ug/mL, 0.5ug/mL,0 के सीरियल कमजोर पड़ने .1 ug/mL, 0.05 ug/mL, 0.02 ug/mL, और 0.01 ug/mL तब LC-MS ग्रेड मेथनॉल सॉल्यूशन का उपयोग करके बनाए गए थे। परिमाणीकरण की सीमा (LOQ) को 0.01 ug/ml के रूप में परिभाषित किया गया था।

एलसी-एमएस / एमएस परख तीन प्रतियों में किया गया था। प्राप्त डेटा को ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत किया गया था।

3.3. एंटीऑक्सीडेंट गुणों का निर्धारण

3.3.1.ABTS· प्लस मैला ढोने वाला परख

सबसे पहले, ABTS घोल को 19.5 mg ABTS और 3.3 mg पोटेशियम परसल्फेट को 7mL फॉस्फेट बफर (pH =7.4) के साथ मिलाकर तैयार किया गया और 16 घंटे के लिए अंधेरे में घोल दिया गया। फिर, समाधान को लगभग 1.0 के स्तर पर अवशोषण के लिए पतला किया गया था। अवशोषण तरंगदैर्घ्य =734 एनएम पर मापा गया। इसके बाद, 20 एमएल केटीई, पीजीई, प्री, सीटीई, और जीजीई अर्क (10,100,250,500 यूजी/एमएल) को 980 एमएल पतला एबीटीएसई प्लस घोल के साथ मिलाया गया और फिर अंधेरे में 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया। अगले चरण में, तैयार नमूनों के अवशोषण को यूवी/विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर एक्वामेट हेलियन (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके =734 एनएम पर मापा गया। आसुत जल का उपयोग रिक्त के रूप में किया जाता था। एबीटीएस प्लस मैला ढोने की गणना समीकरण (1) से की गई थी:

कहा पे: के रूप में-नमूने का अवशोषण; एसी - नियंत्रण नमूने का अवशोषण। प्रत्येक निकाले गए नमूने के लिए तीन प्रतियों में माप किए गए। प्रक्रिया का वर्णन गवेल-बेबेन एट अल द्वारा किया गया था। [83]।

3.3.2.DPPH रेडिकल स्कैवेंजिंग परख

ब्रांड-विलियम्स एट अल द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके मुक्त कणों को परिमार्जन करने के लिए अर्क की क्षमता को पूरा किया गया था। [84]. यह 1,1-डाइफिनाइल-2-पिक्रिलहाइड्राजाइल DPPH） रेडिकल के उपयोग पर आधारित है। सबसे पहले, 100ug/mL की सांद्रता पर अर्क के जलीय घोल के 33 μL को DPPH（4 mM） के 167 μL मेथनॉल घोल के साथ मिलाया गया और एक 96-वेल प्लेट में स्थानांतरित किया गया, फिर मिलाते हुए मिलाया गया। बाद में, नमूनों के अवशोषण को 517 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर मापा गया। यूवी-विज़ फ़िल्टर मैक्स (=5 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर-थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) पर 30 मिनट के लिए हर 5 मिनट में माप किए गए। प्रत्येक अर्क के लिए तीन स्वतंत्र प्रतिकृति का प्रदर्शन किया गया। DPPH घोल वाले पानी को नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को समीकरण (2) का उपयोग करके DPPH निषेध के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था:

कहा पे: के रूप में-नमूने का अवशोषण; एसी - नियंत्रण नमूने का अवशोषण। प्रत्येक निकाले गए नमूने के लिए तीन प्रतियों में माप किए गए।

3.3.3. प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के इंट्रासेल्युलर स्तरों का पता लगाना

एचसीएटी और बीजे कोशिकाओं में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के इंट्रासेल्युलर उत्पादन को उत्पन्न करने के लिए विश्लेषण किए गए अर्क की क्षमता का निर्धारण करने के लिए, एक फ्लोरोजेनिक एच, डीसीएफडीए डाई का उपयोग किया गया था। इस यौगिक में निष्क्रिय प्रसार द्वारा कोशिकाओं में प्रवेश करने की क्षमता होती है, जहां यह इंट्रासेल्युलर एस्टरेज़ द्वारा गैर-फ्लोरोसेंट यौगिक में बहरा हो जाता है। यदि कोशिका में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां मौजूद हैं, तो यह यौगिक अत्यधिक फ्लोरोसेंट डीसीएफ में बदल जाता है। HaCaTs और BJ में ROS के इंट्रासेल्युलर स्तर को निर्धारित करने के लिए, कोशिकाओं को 96-वेल प्लेट्स में रखा गया था। फिर, 24 घंटे के लिए एक इनक्यूबेटर में कोशिकाओं को सुसंस्कृत किया गया। DMEM माध्यम को हटा दिया गया और 10 μM H2DCFDA-सिग्मा एल्ड्रिच, सेंट लुइस, MO, USA-से सीरम-मुक्त DMEM माध्यम में भंग कर दिया गया। HaCaT और BJ कोशिकाओं को 45 मिनट के लिए H, DCFDA में इनक्यूबेट किया गया और फिर 100, 250, और 500 ug/mL की सांद्रता∶ में अर्क के साथ इनक्यूबेट किया गया। 1 मिमी हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2) से उपचारित कोशिकाओं को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग किया जाता था। नियंत्रण के नमूने परीक्षण किए गए अर्क के साथ अनुपचारित कोशिकाएं थीं। DCF प्रतिदीप्ति को 485 एनएम के अधिकतम उत्तेजना और 530 एनएम [85] के उत्सर्जन स्पेक्ट्रा पर फ़िल्टरमैक्स F5 माइक्रोप्लेट रीडर (थर्मो फिशर साइंटिफिक) का उपयोग करके हर 90 मिनट में मापा गया।

3.4. मैट्रिक्स मेटालोपेप्टिडेस निषेध का आकलन

3.4.1.एंटी-इलास्टेज गतिविधि का निर्धारण

मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज, न्यूट्रोफिल इलास्टेज (एनई) को बाधित करने की संभावना को निर्धारित करने के लिए, एक फ्लोरोमेट्रिक किट (एबीकैम, एबी 118971) लागू किया गया था। परीक्षण किट से जुड़े निर्देशों के अनुसार और निज़ियोल-लुकास्ज़ेवस्का एट अल द्वारा वर्णित प्रक्रिया के अनुसार किया गया था। [86]. एक स्पष्ट सपाट तल के साथ एक मानक 96-वेल प्लेट में विश्लेषण किए गए थे। विश्लेषण के लिए, 100 और 250 ug/mL की सांद्रता में पौधे के अर्क का उपयोग किया गया था। प्रारंभ में, NE एंजाइम समाधान, एक NE सब्सट्रेट और एक अवरोधक नियंत्रण (SPCK) निर्देशों के अनुसार तैयार किए गए थे। पतला एनई समाधान सभी कुओं में जोड़ा गया था और फिर, परीक्षण के नमूने, अवरोधक नियंत्रण, और एंजाइम नियंत्रण (परख बफर) को बाद के कुओं में जोड़ा गया था। बाद में, नमूनों को मिलाया गया और 5 मिनट के लिए 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया। इस बीच, परख बफर और एनई सब्सट्रेट को मिलाकर एक प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार किया गया था। मिश्रण को प्रत्येक कुएं में डाला गया और अच्छी तरह मिलाया गया। एक माइक्रोप्लेट रीडर (फ़िल्टरमैक्स F5, थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके उत्तेजना तरंग दैर्ध्य =400 एनएम और उत्सर्जन 入 =505 एनएम पर प्रतिदीप्ति को तुरंत मापा गया था। विश्लेषण की एनई गतिविधि को बाधित करने की क्षमता नमूनों की गणना समीकरण (3) से की गई थी:

अंतिम परिणाम तीन स्वतंत्र मापों का अंकगणितीय माध्य था।

3.4.2. कोलेजन विरोधी गतिविधि का निर्धारण

कोलेजनेज़ गतिविधि को बाधित करने के लिए प्राप्त अर्क की क्षमता का आकलन करने के लिए, एक फ्लोरो-मीट्रिक किट (Abcam, कैम्ब्रिज, यूके, ab211108) लागू किया गया था। परीक्षण किट से जुड़े निर्देशों के अनुसार और निज़ियोल-लुकास्ज़ेवस्का एट अल द्वारा वर्णित प्रक्रिया के अनुसार किया गया था। [86]. एक स्पष्ट सपाट तल के साथ एक मानक 96-वेल प्लेट में विश्लेषण किए गए थे। विश्लेषण के लिए, 100 और 250 ug/mL की सांद्रता में पौधे के अर्क का उपयोग किया गया था। सबसे पहले, कोलेजेनेज-सीओएल-को कोलेजेनेज विश्लेषण बफर (सीएबी) में भंग कर दिया गया था। फिर, विश्लेषण किए गए नमूने COL और CAB में जोड़े गए। कोलेजनेज़ इनहिबिटर (1, 10- फेनेंथ्रोलाइन (80 मिमी) को कोलेजेनेज़ और सीएबी बफर के साथ मिलाकर अवरोधक नियंत्रण नमूने तैयार किए गए थे। सीएबी के साथ पतला सीओएल मिलाकर एंजाइम नियंत्रण कुओं को तैयार किया गया था। सीएबी बफर को पृष्ठभूमि नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था फिर, नमूने 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर लगाए गए थे। सीएबी के साथ कोलेजनेज सब्सट्रेट को मिलाकर एक प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार किया गया था। इस तरह से तैयार प्रतिक्रिया मिश्रण को सभी विश्लेषण किए गए नमूनों में जोड़ा गया था और अच्छी तरह मिलाया गया था। बाद में, प्रतिदीप्ति को एक पर मापा गया था 490 एनएम की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य और 520 एनएम का उत्सर्जन। माप 37 डिग्री सेल्सियस पर 60 मिनट के लिए गतिज मोड में किया गया था। प्राप्त अर्क की सीओएल गतिविधि को बाधित करने की क्षमता की गणना समीकरण (4) द्वारा की गई थी:

3.5. विरोधी भड़काऊ गुणों का निर्धारण

3.5.1. प्रोटीन विकृतीकरण का निषेध

PRE, PGE, KTE, CTE, और GGE एक्सट्रैक्ट्स की प्रोटीनेज़ निरोधात्मक गतिविधि सकाट एट अल की विधि के अनुसार की गई थी। [87], जिसे गुनाथिलेक एट अल द्वारा संशोधित किया गया था। [88]। संक्षेप में, प्रतिक्रिया समाधान (2 एमएल) में 2 {{1 0}} मिमी ट्रिस-एचसीएल बफर (पीएच 7.4) और 1 एमएल परीक्षण नमूना ({{17} में 1 प्रतिशत ट्रिप्सिन का 1 एमएल शामिल था। }.02 एमएल 0.980 एमएल पानी निकालें)। समाधान ऊष्मायन किया गया था (5 मिनट के लिए 37 डिग्री), और फिर 0.8 प्रतिशत (w/v) कैसिइन का 1 एमएल जोड़ा गया था और मिश्रण को 20 मिनट के लिए और ऊष्मायन किया गया था। ऊष्मायन के अंत में, प्रतिक्रिया को पूरा करने के लिए 70 प्रतिशत पर्क्लोरिक एसिड का 2 एमएल जोड़ा गया था। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और सतह पर तैरनेवाला के अवशोषण को बफर के खिलाफ 210 एनएम पर रिक्त के रूप में मापा गया था। नियंत्रण के रूप में फॉस्फेट बफर समाधान का उपयोग किया गया था। प्रोटीन विकृतीकरण के प्रतिशत निषेध की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई थी:

जहां A1= नियंत्रण नमूने का अवशोषण, और A2= परीक्षण नमूने का अवशोषण।

3.5.2. Lipoxygenase गतिविधि का निषेध

लिपोक्सिजिनेज गतिविधि को बाधित करने के लिए प्राप्त अर्क की क्षमता को सर्वेश्वरन एट अल द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। 89】. सबसे पहले, अलग-अलग सांद्रता में 10 μL पौधों के अर्क (100, 250, और 500 ug/mL) को एक 96-वेल प्लेट में 100 एमएम पीबीएस के 160 μL और सोयाबीन लिपोक्सीजेनेस सॉल्यूशन के 20 μL के साथ मिलाया गया था। 167 यू/ एमएल）। नमूने 10 मिनट के लिए 25 डिग्री पर ऊष्मायन किए गए थे और इस समय के बाद प्रतिक्रिया शुरू करने के लिए 10 μL सोडियम लिनोलिक एसिड जोड़ा गया था। फिर, फ़िल्टरमैक्स F5microplate रीडर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके प्रत्येक मिनट में 3 मिनट की अवधि में नमूनों के अवशोषण को 234 एनएम पर मापा गया। डाइक्लोफेनाक का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। Lipoxygenase गतिविधि निषेध के प्रतिशत की गणना समीकरण (6) से की गई थी:

जहां: जैसा कि परीक्षण किए गए नमूने का अवशोषण है, एसी नकारात्मक नियंत्रण का अवशोषण है।

अंतिम परिणाम तीन स्वतंत्र मापों का अंकगणितीय माध्य था।

3.6. साइटोटोक्सिसिटी विश्लेषण

3.6.1. कोश पालन

इस अध्ययन में, दो त्वचा कोशिका रेखाओं का उपयोग किया गया था: सामान्य मानव केराटिनोसाइट्स (HaCaT) और फ़ाइब्रोब्लास्ट (BJ)। HaCaTs को CLSCell लाइन्स सर्विस (CLS सेल लाइन्स सर्विस GmbH, एपेलहेम, जर्मनी) और BJs को अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन से प्राप्त किया गया था। मानस, वीए, यूएसए)। डल्बेको के ईगल मीडियम (DMEM, बायोलॉजिकल इंडस्ट्रीज, क्रॉमवेल, सीओ, यूएसए) में सोडियम पाइरूवेट, एल-ग्लूटामाइन और उच्च ग्लूकोज सामग्री (4.5g / L) के साथ कोशिकाओं को विकसित किया गया था। माइक्रोबियल संदूषण को रोकने के लिए माध्यम को 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (गिब्को, वाल्थम, एमए, यूएसए) और 1 प्रतिशत एंटीबायोटिक दवाओं (100 यू / एमएल पेनिसिलिन और 1000 यूजी / एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन, गिब्को) के साथ समृद्ध किया गया था। कोशिकाओं को एक इनक्यूबेटर में 37 डिग्री पर 95 प्रतिशत हवा और 5 प्रतिशत कार्बन डाइऑक्साइड के आर्द्र वातावरण में विकसित किया गया था।

3.6.2.आलमर ब्लू परख

सुसंस्कृत कोशिकाओं (HaCaT और BJ) के वांछित संगम पर पहुंचने के बाद, DMEM माध्यम को कल्चर फ्लास्क में महाप्राणित किया गया था। नीचे से जुड़ी कोशिकाओं को दो बार बाँझ फॉस्फेट-बफर खारा से धोया गया था। कोशिका परत को ट्रिप्सिन से अलग किया गया और फिर कोशिकाओं को एक नए DMEM माध्यम में रखा गया। कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से फ्लैट-तल प्लेटों (वीडब्ल्यूआर, रेडनर, पीई, यूएसए) में चढ़ाया गया था और प्लेटों के नीचे संलग्न करने के बाद, कोशिकाओं को अर्क（ 100, 250, और 500 कुरूप/एमएल） के साथ इलाज किया गया था। कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था।

साइटोटोक्सिसिटी परीक्षण अलमार ब्लू परख (सिग्मा, आर 7017, लाइफ टेक्नोलॉजीज, ब्लिसविज्क, द नीदरलैंड्स) के साथ किया गया था। ऊष्मायन के बाद, कुओं में 60 uM की सांद्रता में एक रेज़ाज़ुरिन समाधान जोड़ा गया, फिर प्लेटों को 2 घंटे के लिए 37 डिग्री पर एक इनक्यूबेटर में रखा गया। इस समय के बाद, प्रतिदीप्ति मापा गया है（入=570nm）। प्रत्येक अर्क एकाग्रता तीन प्रतिकृति में किया गया था।

3.6.3. तटस्थ लाल तेज परख

न्यूट्रल रेड अपटेक परख PRE, PGE, KTE, CTE, और GGE की साइटोटोक्सिसिटी को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला दूसरा परीक्षण है। पहले, 96-अच्छी तरह से सपाट तल वाली प्लेटें पिछले अनुभाग में वर्णित के अनुसार तैयार की गई थीं। अर्क के लिए कोशिकाओं के संपर्क के 24 घंटे के बाद, उन्हें एस्पिरेट किया गया और उन्हें तटस्थ लाल डाई (40 कुरूप / एमएल) से बदल दिया गया और 2 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। इस समय के बाद, कोशिकाओं को फॉस्फेट-बफर खारा से धोया गया। अगले चरण में, कुओं में रंगहीन करने वाला बफर (150 μL) जोड़ा गया। फिर, 540 एनएम पर ऑप्टिकल घनत्व (OD) को मापकर तटस्थ लाल dve का उठाव निर्धारित किया गया था। प्रत्येक अर्क एकाग्रता तीन प्रतिकृति में किया गया था।

3.7. सन प्रोटेक्शन फैक्टर का निर्धारण (इन विट्रो में)

सन प्रोटेक्शन फैक्टर (एसपीएफ़) को 10 कुग/एमएल और 50 कुग/एमएल की सांद्रता में अर्क के एक जलीय घोल के अवशोषण को मापने के द्वारा निर्धारित किया गया था, जो 290 से 320 एनएम तक 5-एनएम अंतराल पर तरंग दैर्ध्य रेंज के भीतर है। प्राप्त परिणामों से, एसपीएफ़ की गणना मंसूर समीकरण [90] से की गई: जहां∶ ईई（λ）-एरिथेमल प्रभाव स्पेक्ट्रम, आई（入）-सौर तीव्रता स्पेक्ट्रम, एबीएस（入）- सनस्क्रीन उत्पाद का अवशोषण, सीएफ- सुधार कारक（=10）, E（N）×I（λ）—सायरे द्वारा निर्धारित मूल्यों का उपयोग किया गया था [91]।

3.8. Transepidermal जल हानि (TEWL) और त्वचा जलयोजन माप

TEWL और त्वचा जलयोजन माप एक TEWAmeter TM 300 जांच और कॉर्नियोमीटर CM 825 जांच का उपयोग करके एक MPA अडैप्टर (साहस प्लस खज़ाका इलेक्ट्रॉनिक, कोल्न, जर्मनी）) से जुड़े थे। अध्ययन में पांच स्वयंसेवकों ने भाग लिया। उनके अग्रभाग पर त्वचा, छह क्षेत्रों (आकार में 2 × 2 सेमी) को चिह्नित किया गया था। परीक्षण किए गए पौधे के अर्क की 0.2 एमएल की मात्रा पांच स्थानों पर लागू की गई थी, छठा स्थान नियंत्रण था (किसी भी नमूने के साथ इलाज नहीं किया गया)। 60 और 360 मिनट के बाद , जलयोजन स्तर और TEWL माप लिया गया। अंतिम परिणाम पांच स्वतंत्र माप (त्वचा जलयोजन) और 20 माप (TEWL) का अंकगणितीय माध्य (प्रत्येक स्वयंसेवक से) था।

3.9. अर्क युक्त मॉडल प्रसाधन सामग्री (मेक-अप रिमूवर) तैयार करना

एक मॉडल कॉस्मेटिक (मेकअप रिमूवर) तैयार किया गया था। उपयोग किए गए सभी घटक EcoCert और COSMOS आवश्यकताओं के अनुरूप थे। सूत्रीकरण तालिका 7 में दिखाया गया है।

एक सजातीय तरल प्राप्त होने तक कमरे के तापमान पर सामग्री (आइटम 1 से आइटम 6 तक) को मिलाकर उत्पाद का उत्पादन किया गया था। अंतिम चरण में, सूत्रीकरण का पीएच समायोजित किया गया था। मेकअप रिमूवर को भागों में विभाजित किया गया था। अर्क के स्टॉक समाधान के 1 प्रतिशत की मात्रा को प्रत्येक भाग में जोड़ा गया और अच्छी तरह मिलाया गया।

3.10. अर्क और सौंदर्य प्रसाधन (मेक-अप रिमूवर) युक्त अर्क के रंग मापदंडों का निर्धारण

अर्क और सौंदर्य प्रसाधनों के नमूनों को तैयार करने के 48 घंटे बाद कमरे के तापमान पर परीक्षण किया गया। एक क्रोमा मीटर सीआर-400(कोनिका मिनोल्टा, सेंसिंग इंक, टोक्यो, जापान) का उपयोग रंग मापदंडों (सीआईईएलएबी निर्देशांक) का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। CIELAB प्रणाली को 1978 में रोशनी पर अंतर्राष्ट्रीय आयोग द्वारा परिभाषित किया गया था। यह तीन रंग विशेषताओं पर आधारित है: L*, a*,b, जहाँ L* एक चमक चर है जो Munsell प्रणाली में मूल्य के समानुपाती है, और a* और b* वर्णिक निर्देशांक हैं। a* और b* निर्देशांक क्रमशः लाल/हरे और पीले/नीले अक्षों पर स्थिति दर्शाते हैं (प्लस a=लाल, -a=हरा; प्लस b=पीला, - बी =नीला)।

प्राप्त आंकड़ों के आधार पर: एल *, ए *, और बी *, निम्नलिखित रंग मापदंडों की गणना की गई: क्रोमा (सी *) और ह्यू (एच)। निम्नलिखित समीकरणों का उपयोग किया गया था:

4। निष्कर्ष

प्राप्त परिणामों के आधार पर, यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि परीक्षण किए गए पौधे के अर्क में कई सकारात्मक विशेषताएं दिखाई देती हैं, जिसकी बदौलत उनका उपयोग सौंदर्य प्रसाधनों के उत्पादन में उनके सुरक्षित और जैव सक्रिय घटक के रूप में किया जा सकता है। यह दिखाया गया है कि ये पौधे पॉलीफेनोल्स का एक समृद्ध स्रोत हैं, जो उन्हें एंटीऑक्सीडेंट गुण देता है। PRE ने मुक्त कणों को परिमार्जन करने की सबसे अच्छी क्षमता दिखाई, जो शायद इसलिए है क्योंकि इसमें अन्य पौधों की तुलना में सबसे अधिक पॉलीफेनोल्स होते हैं। PGE और PRE ने कोशिकाओं में ROS उत्पादन को कम करने की सर्वोत्तम क्षमता दिखाई। इसके अलावा, पौधे कोई साइटोटोक्सिक गतिविधि नहीं दिखाते हैं। सभी परीक्षण किए गए अर्क ने इलास्टेज और कोलेजनेज़ एंजाइमों पर एक निरोधात्मक प्रभाव दिखाया, जिसमें पी। ग्रेनाटम और जीजीई का सबसे बड़ा निरोधात्मक प्रभाव था। यह संकेत दे सकता है कि इन पौधों का उपयोग सौंदर्य प्रसाधनों में ऐसे पदार्थों के रूप में किया जा सकता है जो उम्र बढ़ने की प्रक्रिया को धीमा कर देते हैं। इसके अलावा, प्राप्त परिणामों से संकेत मिलता है कि इन पौधों में विरोधी भड़काऊ गुण हैं। इस मामले में सीटीई और केटीई सबसे बेहतर नजर आए। केटीई और पीजीई ने कम सांद्रता पर भी यूवी विकिरण के खिलाफ सुरक्षात्मक प्रभाव दिखाया। उच्च सांद्रता में, सभी पौधों में यूवी सुरक्षात्मक प्रभाव होता है। इसके अलावा, पौधों का त्वचा के जलयोजन पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है और ट्रान्ससेपिडर्मल पानी की कमी को कम करता है। PRE, KTE, और CTE के अर्क का उपयोग सौंदर्य प्रसाधन उत्पादों में प्रभावी कलरेंट के रूप में किया जा सकता है। मेकअप हटाने के लिए मॉडल तरल जिसमें उपर्युक्त अर्क शामिल थे, समय के साथ एक गहन और स्थिर रंग की विशेषता थी। पीजीई और जीजीई अर्क के साथ सौंदर्य प्रसाधनों का रंग केवल अनुभवी पर्यवेक्षकों द्वारा देखा जा सकता है, और वे निकालने के अतिरिक्त बिना रिक्त कॉस्मेटिक नमूने से काफी भिन्न नहीं हैं। सभी प्राप्त परिणामों को ध्यान में रखते हुए, यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि सौंदर्य प्रसाधनों के उत्पादन में पैपेवर रियास, क्लिटोरिया टर्नेटिया, और कार्थमस टिनक्टरियस को पीले, नारंगी, नीले और बैंगनी रंगों के स्रोतों के रूप में सफलतापूर्वक उपयोग किया जा सकता है जो उपयोग करने के लिए सुरक्षित होंगे, और, क्या अधिक है, त्वचा पर सकारात्मक प्रभाव पड़ेगा।

यह लेख अणु 2022, 27, 922 से निकाला गया है।