हेपसीडिन-मध्यस्थता हाइपोफेरेमिया टीकाकरण और संक्रमण भाग 2 के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को बाधित करता है

बहस

आयरन और इम्यूनोमेटाबोलिज्म

हेपसीडिन-प्रेरित हाइपोफेरेमिया कशेरुकियों में जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का एक अच्छी तरह से संरक्षित घटक है। हम प्रदर्शित करते हैं कि हाइपोफेरेमिया अनुकूली प्रतिरक्षा के कई पहलुओं को ख़राब कर सकता है यदि यह लिम्फोसाइट विस्तार की अवधि के दौरान होता है, जिसके बाद के दीर्घकालिक अवरोध की संभावना होती है। हाइपोफेरेमिया के समाधान के बाद भी टी-सेल मेमोरी। हम दिखाते हैं कि IRP1 / 2 द्वारा नियंत्रित सेलुलर आयरन अपटेक का उचित विनियमन टी सेल प्रभावकार कार्यों के लिए आवश्यक है, और TFRC-मध्यस्थता वाले लोहे का अधिग्रहण विवो में बी और टी सेल प्रतिक्रियाओं के लिए आंतरिक रूप से आवश्यक है।

सक्रिय टी कोशिकाओं द्वारा TFRC की अभिव्यक्ति में उल्लेखनीय वृद्धि, ट्रांसमेम्ब्रेन आयरन आयातकों में वृद्धि के साथ-साथ 24 घंटे के भीतर प्रति सेल प्रोटीन की ~ 1 मिलियन प्रतियों की वृद्धि, बाह्य स्रोतों से आयरन प्राप्त करने के प्रयासों की एक महत्वपूर्ण तीव्रता का संकेत देती है। यद्यपि हमने दिखाया कि ऑक्सीडेटिव चयापचय और डीएनए संश्लेषण अध्ययन दो लोहे पर निर्भर प्रक्रियाएं हैं जो कम लोहे की उपलब्धता से टी कोशिकाओं में बाधित होती हैं, टी सेल जीव विज्ञान में महत्वपूर्ण कई अन्य सेलुलर रास्ते, जिनमें एपिजेनेटिक रिप्रोग्रामिंग और हाइपोक्सिया सेंसिंग शामिल हैं, को भी आयरन की आवश्यकता होती है और इसकी जांच की जानी चाहिए।

इसके अलावा, कम CD25 अभिव्यक्ति और IL -2 को महसूस करने में विफलता लोहे की कमी में देखी गई प्रभावकार / मेमोरी CD8 T कोशिकाओं की खराब गुणवत्ता में योगदान कर सकती है। 27 क्योंकि सक्रिय लिम्फोसाइटों की त्वरित चयापचय गतिविधि विशेष रूप से लोहे की उपलब्धता के प्रति संवेदनशील है, शारीरिक लोहे की सांद्रता में भिन्नताएं प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को दृढ़ता से प्रभावित करती हैं। इसलिए, आयरन को इम्यूनोमेटाबोलिज्म की अवधारणाओं के लिए प्रासंगिक पोषक तत्व माना जा सकता है।28

प्रतिरक्षा बाहरी दुनिया से विभिन्न हानिकारक कारकों के खिलाफ शरीर की रक्षा करने की क्षमता को दर्शाती है। अच्छी प्रतिरक्षा का मानव शरीर पर बहुत प्रभाव पड़ता है, जिसमें शामिल हैं: 1. रोग प्रतिरोधक क्षमता: प्रतिरक्षा रोगजनकों की पहचान कर सकती है और उन्हें खत्म कर सकती है और मानव शरीर को बीमारियों से बचा सकती है। 2. रिकवरी को बढ़ावा देना: यदि मानव शरीर रोगजनकों से संक्रमित हो गया है, तो प्रतिरक्षा रोग की रिकवरी में तेजी ला सकती है और शारीरिक रिकवरी को बढ़ावा दे सकती है। 3. बुढ़ापा रोधी: खराब प्रतिरक्षा कार्य शरीर की उम्र बढ़ने का कारण बनेगा, और अच्छी प्रतिरक्षा शरीर की उम्र बढ़ने में देरी कर सकती है। 4. कैंसर को रोकें: एक अच्छी प्रतिरक्षा प्रणाली कैंसर कोशिकाओं को नष्ट कर सकती है और कैंसर को रोक सकती है। 5. हृदय स्वास्थ्य की रक्षा करें: अच्छी प्रतिरक्षा हृदय रोगों की घटना को कम कर सकती है।

इसलिए हमें दैनिक जीवन में अपनी रोग प्रतिरोधक क्षमता में सुधार करने की आवश्यकता है। अध्ययनों में पाया गया है कि सिस्टांश प्रतिरक्षा में सुधार कर सकता है। Cistanche में कुछ एंटीऑक्सिडेंट पदार्थ भी होते हैं, जैसे कि फ्लेवोनोइड्स, विटामिन सी, आदि जो शरीर में मुक्त कणों को हटाने में मदद कर सकते हैं, कोशिकाओं को ऑक्सीडेटिव क्षति को कम कर सकते हैं और इस प्रकार अप्रत्यक्ष रूप से प्रतिरक्षा में सुधार कर सकते हैं। Cistanche के विभिन्न पोषक घटक और सक्रिय पदार्थ सहक्रियात्मक रूप से कार्य कर सकते हैं, शरीर की प्रतिरोधक क्षमता में सुधार कर सकते हैं और मानव स्वास्थ्य को बढ़ावा देने में सकारात्मक भूमिका निभा सकते हैं।

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हेपसीडिन, हाइपोफेरेमिया और वायरल संक्रमण

हेक्सिडिन-नियंत्रित लौह पुनर्वितरण चूहों में कुछ जीवाणु संक्रमण और मलेरिया से बचाता है। 29,30 मनुष्यों में, प्रायोगिक नोरोवायरस, टाइफाइड, और मलेरिया संक्रमण, 31-33, और एचआईवी में विरेमिया के प्रारंभिक उद्भव के दौरान बढ़ा हुआ हेक्सिडिन और हाइपोफेरेमिया होता है। {5}}संक्रमित रक्त दाता। 34 हालांकि भड़काऊ हाइपोफेरेमिया एकल-कोशिका वाले जीवों के संक्रमण के संदर्भ में फायदेमंद हो सकता है, जिन्हें अपने मेजबान से लोहा प्राप्त करना चाहिए, सबूत है कि कम सीरम लोहा वायरल संक्रमण के संदर्भ में सुरक्षात्मक है, कमी है। वास्तव में, इन्फ्लूएंजा वायरस के साथ हमारे प्रयोगों में, हेक्सिडिन-प्रेरित हाइपोफेरेमिया को लागू करने से एक बिगड़ा हुआ अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, वायरल दृढ़ता और गंभीर फुफ्फुसीय रोग हुआ, यह सुझाव देते हुए कि कम सीरम आयरन कभी-कभी संक्रमण के लिए एक अनुपयोगी प्रतिक्रिया हो सकती है।

हाल की रिपोर्टों से पता चलता है कि गहन देखभाल इकाई (आईसीयू) में भर्ती होने पर कोरोनोवायरस बीमारी 2019 (COVID-19) रोगियों में हाइपोफेरेमिया मौजूद है। 35 कम सीरम आयरन लिम्फोपेनिया से संबंधित है, और बेहद कम सीरम आयरन (~3 mmol/L) ) गंभीर श्वसन हाइपोक्सिमिया वाले COVID-19 रोगियों की पहचान की, जो फुफ्फुसीय क्षति के लिए संभावित द्वितीयक हैं। यह हाइपोफेरेमिया पहले बताए गए गैर-कोविड -19 आईसीयू रोगियों की तुलना में अधिक गहरा है, जिसमें सेप्सिस वाले लोग भी शामिल हैं,36,37 यह दर्शाता है कि अत्यधिक हाइपोफेरेमिया गंभीर COVID -19 रोग की एक विशेष विशेषता हो सकती है। IL -6 हेक्सिडिन अभिव्यक्ति और उच्च IL -6 और अपेक्षाकृत निम्न प्रकार I और प्रकार III IFN की असंतुलित भड़काऊ प्रतिक्रिया को गंभीर COVID -19 और खराब परिणामों से जुड़ा हुआ है। 38,39 IL -6-संचालित और हेक्सिडिन-मध्यस्थता हाइपोफेरेमिया संक्रमण की गंभीरता में योगदान करते हुए, एंटीवायरल अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को ख़राब कर सकता है। Tocilizumab, जो IL-6R को लक्षित करता है, COVID-19 के लिए एक चिकित्सीय के रूप में जांच के अधीन है और हाइपोफेरेमिया का प्रतिकार कर सकता है। COVID -19 रोगियों में सीरम आयरन की निगरानी रोग की गंभीरता और उपचार के प्रभावों का मूल्यांकन करने में उपयोगी हो सकती है।

अनुकूली प्रतिरक्षा और टीकाकरण के लिए आयरन ट्रेड-ऑफ-परिणाम

संक्रमण के संदर्भ में लोहे की भूमिका के पिछले लक्षण वर्णन मेजबान लोहे को अपहृत करने के लिए रोगज़नक़ के प्रयासों का वर्णन करते हैं, जो मेजबान बचाव करता है, जिससे एक विकासवादी हथियारों की दौड़ होती है। हम प्रस्ताव करते हैं कि संक्रमण का हाइपोफ़ेरेमिया भी एक व्यापार-बंद का प्रतिनिधित्व करता है मेजबान, जो लोहे को रोककर हमलावर रोगजनकों की उग्रता को कम करने का प्रयास करता है, लेकिन साथ ही ऐसा करने से अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं से लोहे को रोक दिया जाता है।

इस व्यापार-बंद का परिणाम कारक संक्रमण की प्रकृति, भड़काऊ प्रतिक्रिया की परिमाण और प्रकार, और मेजबान की अंतर्निहित लोहे की स्थिति पर निर्भर करेगा। विश्व स्तर पर, हाइपोफेरेमिया आबादी में आम है जिसमें पोषण संबंधी लोहे की कमी प्रचलित है और जिसमें संक्रमण और सूजन का बोझ भी है जो हेक्सिडिन को बढ़ाता है, एक संयोजन जो संभावित रूप से सैकड़ों लाखों व्यक्तियों को प्रभावित करता है। 4,10 साथ ही साथ प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करता है सीधे संक्रमण, हाइपोफेरेमिया टीकाकरण के प्रति प्रतिक्रियाओं को कम करके संक्रामक बोझ पर अप्रत्यक्ष प्रभाव डाल सकता है। कुछ टीकों की प्रभावकारिता और प्रतिरक्षण क्षमता उन आबादी में कम होती है जिनमें लोहे की कमी स्थानिक होती है,41 और ऐसी आबादी में, टीके से रोके जा सकने वाले संक्रमणों से बचपन की मृत्यु दर अस्वीकार्य रूप से उच्च रहती है। 42 यहां, हम एक पिगलेट मॉडल में प्रदर्शित करते हैं कि लोहा टीकाकरण के प्रति प्रतिक्रियाओं को बढ़ाता है। स्वाभाविक रूप से होने वाली लोहे की कमी के संदर्भ में।

हाल ही में, हमने केन्याई शिशुओं के पूर्वव्यापी विश्लेषण में दिखाया कि एनीमिया कुछ टीकों के लिए बिगड़ा हुआ हास्य प्रतिक्रियाओं से जुड़ा हुआ है और लोहे के पूरक से खसरे के टीके के लिए हास्य प्रतिक्रिया बढ़ सकती है। 43 हालांकि, लोहे कुछ संक्रमणों के जोखिम को भी बढ़ा सकता है और प्रतिकूल रूप से आंत माइक्रोबायोटा को प्रभावित करता है। 4 नतीजतन, यह निर्धारित करने के लिए बीस्पोक परीक्षणों की आवश्यकता होती है कि टीकाकरण के समय दिए गए लक्षित पोषण आयरन से बच्चों और बुजुर्गों सहित आयरन की कमी वाली आबादी में टीकाकरण की प्रभावकारिता में सुधार होता है या नहीं।

TMPRSS6 में म्यूटेशन वाले IRIDA रोगियों में बढ़ा हुआ हेक्सिडिन और हाइपोफेरिमिया, कम से कम कुछ रोगजनकों के खिलाफ बिगड़ा हुआ हास्य प्रतिरक्षा के साथ जुड़ा हो सकता है। लगातार उच्च हेक्सिडिन और हाइपोफेरेमिया भी गैर-संक्रामक जीर्ण भड़काऊ विकारों की विशेषताएं हैं जैसे कि क्रोनिक किडनी रोग, 9 और कैंसर में सूजन और लोहे की कमी देखी जाती है। इन आबादी में अनुकूली प्रतिरक्षा और स्थितियों को हाइपोफेरेमिया से समझौता किया जा सकता है। ध्यान दें, हेक्सिडिन गतिविधि के औषधीय या आनुवंशिक हेरफेर, लोहे से संबंधित विकारों के लिए एक चिकित्सीय हस्तक्षेप के रूप में, अपेक्षाकृत अच्छी तरह से विकसित है। इसलिए, हेक्सिडिन पहले से ही एक संभावित सुलभ लक्ष्य है और कई में प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करने के एक साधन के रूप में जांच की जा सकती है। संदर्भ।

अध्ययन की सीमाएं

जबकि हमारे अध्ययन में पाया गया है कि ऑक्सीजन की खपत और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता द्वारा मूल्यांकन के अनुसार आयरन प्रतिबंध टी सेल एरोबिक चयापचय को बाधित करता है, व्यापक परिकल्पना-मुक्त दृष्टिकोण उस तंत्र की अधिक समग्र प्रशंसा प्रदान कर सकता है जिसके द्वारा लोहे की उपलब्धता को सीमित करने से टी कोशिकाओं के कार्य बाधित होते हैं। विवो में सीरम आयरन की कमी से टी और बी सेल दोनों प्रतिक्रियाएं प्रभावित होती हैं, लेकिन हमने यह पता नहीं लगाया कि अलग-थलग बी कोशिकाओं की फिजियोलॉजी आयरन की कमी से कैसे प्रभावित होती है या टी सेल भेदभाव आयरन से कैसे प्रभावित होता है। इसके अलावा, हमने यह नहीं पूछा है कि लोहे की कमी से सीडी 8 टी सेल मेमोरी की हानि किस हद तक सीडी 4 और बी सेल मेमोरी तक फैली हुई है और ये अवलोकन टीकों की प्रतिक्रिया और संक्रमण से सुरक्षा को कैसे प्रभावित कर सकते हैं।

सारांश

हमने पाया कि हेक्सिडिन-प्रेरित हाइपोफेरेमिया ने टीकाकरण के लिए प्राथमिक और स्मृति प्रतिक्रियाओं को बिगड़ा, और हमने कम से कम IRP1 / 2 और TFRC द्वारा लौह-मध्यस्थता के लिए सक्रिय टी कोशिकाओं की गहन मांग को उजागर किया। उच्च हेक्सिडिन रोगजनकों के लिए अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को रोक सकता है, जबकि कम सीरम आयरन की पृष्ठभूमि के खिलाफ, पूरक आयरन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में सुधार कर सकता है। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि हेक्सिडिन द्वारा नियंत्रित सीरम आयरन प्रतिरक्षा के लिए एक महत्वपूर्ण और संभावित लक्षित नियंत्रण बिंदु है।

स्टार प्लस तरीके

इस पत्र के ऑनलाइन संस्करण में विस्तृत तरीके प्रदान किए गए हैं और इसमें निम्नलिखित शामिल हैं:

आभार

लेखक बायोमेडिकल सर्विसेज विभाग, पशुपालन के लिए ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय, अलिर्ज़ा मोरोवेट (क्लिनिकल बायोकैमिस्ट्री, ऑक्सफोर्ड यूनिवर्सिटी हॉस्पिटल्स एनएचएस फाउंडेशन ट्रस्ट) के कर्मचारियों को जैव रासायनिक माप, डेविड पैटिनसन (जेनर इंस्टीट्यूट, ऑक्सफोर्ड यूनिवर्सिटी) और बायोबेस्ट लेबोरेटरीज के साथ सहायता के लिए धन्यवाद देते हैं। , एडिनबर्ग, ELISAs और वेदरॉल इंस्टीट्यूट ऑफ मॉलिक्यूलर मेडिसिन फ्लो साइटोमेट्री सुविधा और कैंट्रेल लैब, डंडी विश्वविद्यालय के सदस्यों की मदद के लिए, कई उपयोगी चर्चाओं के लिए।

इस काम को यूके मेडिकल रिसर्च काउंसिल (एमआरसी ह्यूमन इम्यूनोलॉजी यूनिट कोर फंडिंग टू एचडी, अवार्ड नंबर एमसी_यूयू_12010/10), और एक क्रिस्टोफर वेल्च स्कॉलरशिप और ईएमबीओ शॉर्ट टर्म फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था। जेएनएफएसजे ड्रेपर जेनर अन्वेषक, लिस्टर इंस्टीट्यूट रिसर्च प्राइज फेलो और वेलकम ट्रस्ट सीनियर फेलो (106917/जेड/15/जेड) हैं।

हम पुनः संयोजक वायरल टीकों के उत्पादन के लिए जेनर इंस्टीट्यूट, ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय और वायरल वेक्टर कोर सुविधा का धन्यवाद करते हैं। i3S में किए गए कार्य को Norte 2020 पुर्तगाल रीजनल ऑपरेशनल प्रोग्राम (अनुदान सं. Norte-01-0145- FEDER-000012) द्वारा समर्थित किया गया था; लेखक i3S साइंटिफिक प्लेटफॉर्म HEMS के समर्थन को भी स्वीकार करते हैं, जो नेशनल इंफ्रास्ट्रक्चर PPBI-पुर्तगाली प्लेटफॉर्म ऑफ बायोइमेजिंग (PPBI-POCI-01-0145-FEDER-022122) ​​का सदस्य है। OB को सर हेनरी वेलकम फैलोशिप (105654/Z/14/Z) द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। TKT को टाउनसेंड-जीनेट चैरिटेबल ट्रस्ट (दान संख्या 1011770) द्वारा वित्त पोषित किया गया था। MS और UG को MRC ह्यूमन इम्यूनोलॉजी यूनिट कोर फंडिंग द्वारा VCBK को ऑक्सफोर्ड बायोमेडिकल रिसर्च सेंटर से NIHR रिसर्च कैपेबिलिटी फंडिंग अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था। एसजे डनाची एक जेनर अन्वेषक है और यूके डिपार्टमेंट ऑफ हेल्थ एंड सोशल केयर में फ्लेमिंग फंड द्वारा वित्त पोषित है। एमडीएफ और डीआरसी को एस. बर्ट वोल्बैक प्रोफेसरशिप, हार्वर्ड मेडिकल स्कूल का समर्थन प्राप्त है। SKW को वेलकम ट्रस्ट इंफेक्शन, इम्यूनोलॉजी एंड ट्रांसलेशनल मेडिसिन डॉक्टरेट प्रोग्राम (अनुदान संख्या 108869/Z/15/Z) द्वारा समर्थित किया गया था। बीजी ने डॉयचे फोर्शचुंग्सगेमेइन्सचाफ्ट (अनुदान संख्या जीए2075/3-1 और जीए2075/5-1) से अनुदान प्राप्त किया। एमए को यूनिवर्सिटी ऑफ रीडिंग इंटरनेशनल रिसर्च स्टूडेंटशिप द्वारा वित्त पोषित किया गया था। AS वर्तमान में एक NIHR डॉक्टोरल रिसर्च फेलोशिप (NIHR-DRF-2017-10-094) द्वारा समर्थित है। यह अध्ययन मारिया डी सूसा और विन्सेंज़ो सेरुंडोलो को समर्पित है।

लेखक का योगदान

काम की अवधारणा और डिजाइन, जेएनएफ, टीकेटी, एमए, टीएलडी, एईए, एआरएमटी, बीजी, एमसीएल, और डेटा का एचडी अधिग्रहण और विश्लेषण, जेएनएफ, टीकेटी, एमए, एएस, एसकेडब्ल्यू, एमबी, एनएस, केडब्ल्यू, बीके, जीएस, DRC, TLD, JML, AEA, JA, PJL, AEP, DA, MT, CN, MS, UG, FRMvdK, ARMT, BG, MDF, MCL, और HD कलेक्शन, फेनोटाइपिंग और आयरन की कमी वाले मरीजों की जीनोटाइपिंग, MDF और डेटा की DRC व्याख्या, JNF, NS, TLD, OB, SCA, SJ Dunachie, MZ, FRMvdK, VC, SJ ड्रेपर, ARMT, BG, MDF, MCL, और HD राइटिंग, JNF और HD

हितों की घोषणा

HD, Kymab के सलाहकार बोर्ड में बैठा है, Pfizer और La Jolla Pharmaceutical Company से शोध निधि प्राप्त की है, और Pharmacosmos और Vifor से मानदेय प्राप्त किया है। अन्य लेखक कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा नहीं करते हैं।

प्रतिक्रिया दें संदर्भ

1. फान, एटी, गोल्डरथ, एडब्ल्यू, और ग्लास, सीके (2017)। टी सेल और मैक्रोफेज इम्युनिटी का मेटाबोलिक और एपिजेनेटिक समन्वय। प्रतिरक्षा 46, 714–729।

2. आंद्रेनी, सी।, पुतिग्नानो, वी।, रोसाटो, ए।, और बंसी, एल। (2018)। मानव लौह-प्रोटीओम। मेटालॉमिक्स 10, 1223–1231।

3. जबारा, एचएच, बॉयडेन, एसई, चाउ, जे।, रमेश, एन।, मसाद, एमजे, बेन्सन, एच।, बैंटर, डब्ल्यू।, फ्राउलिनो, डी।, रहीमोव, एफ।, सीफ, सी।, एट। अल। (2016)। TFRC में एक मिसेंस म्यूटेशन, एन्कोडिंग ट्रांसफरिन रिसेप्टर 1, संयुक्त इम्युनोडेफिशिएंसी का कारण बनता है। नट। जेनेट। 48, 74-78।

4. पसरीचा, एसआर, आर्मिटेज, एई, प्रेंटिस, एएम, और ड्रेकस्मिथ, एच। (2018)। कम आय वाले देशों में खून की कमी को कम करना: संक्रमण पर नियंत्रण जरूरी है। बीएमजे 362, के3165।

5. मैकेंथेलर, एमयू, रिवेला, एस।, हेंत्ज़े, मेगावाट, और गैली, बी (2017)। लौह चयापचय के लिए एक रेड कार्पेट। सेल 168, 344–361।

6. नेमेथ, ई., टटल, एमएस, पॉवेलसन, जे., वॉन, एमबी, डोनोवन, ए., वार्ड, डीएम, गैंज़, टी., और कपलान, जे. (2004)। हेपसीडिन फेरोपोर्टिन से जुड़कर और इसके आंतरिककरण को प्रेरित करके सेलुलर आयरन के प्रवाह को नियंत्रित करता है। विज्ञान 306, 2090– 2093।

7. लिम, पीजे, ड्यूआर्टे, टीएल, अरेजेस, जे., गार्सियासैंटोस, डी., हम्दी, ए., पसरीचा, एसआर, आर्मिटेज, एई, मेहता, एच., वाइडमैन, एस., सैंटोस, एजी, एट अल। (2019)। Nrf2 Bmp6 और हेक्सिडिन के माध्यम से हेमोक्रोमैटोसिस और थैलेसीमिया में आयरन होमियोस्टेसिस को नियंत्रित करता है। नट। मेटाब। 1, 519–531।

8. ड्रेकस्मिथ, एच।, और प्रेंटिस, एएम (2012)। हेपसीडिन और लौह-संक्रमण अक्ष। विज्ञान 338, 768-772।

9. गैंज़, टी। (2019)। सूजन का एनीमिया। एन अंग्रेजी। जे मेड। 381, 1148–1157।

10. आर्मिटेज, एई, एग्ब्ला, एससी, बेट्स, एम।, सीस, ईए, जूलो, मेगावाट, साम्बौ, ई।, डार्बो, बी।, वर्वुई, ए।, वीनस्टॉक, जीएम, एंटोनियो, एम।, एट अल। (2019)। तेजी से विकास गैंबियन शिशुओं में हेक्सिडिन दमन और घटते फेरिटिन का एक प्रमुख भविष्यवक्ता है। हेमेटोलोजिका 104, 1542-1553।

11. प्रेंटिस, एएम, बाह, ए।, जूलो, मेगावाट, जूलो, एटी, सान्यांग, एस।, सीस, ईए, सीसे, के।, डैनसो, ई।, आर्मिटेज, एई, पसरीचा, एस.-आर।, और अन्य। (2019)। श्वसन संबंधी संक्रमण हेक्सिडिन-मध्यस्थता वाले लोहे के अवशोषण को रोकते हैं जिससे अफ्रीकी बच्चों में लोहे की कमी से एनीमिया हो जाता है। विज्ञान। अग्रिम 5, eaav9020।

12. डल्मन, पीआर (1987)। आयरन की कमी और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया। पूर्वाह्न। जे क्लिन। न्यूट्र। 46, 329–334।

13. ओपेनहाइमर, एसजे (2001)। आयरन और इसका प्रतिरक्षा और संक्रामक रोग से संबंध। जे न्यूट्र। 131 (2S-2), 616S–633S, चर्चा 633S–635S।

14. वांग, जेड।, यिन, डब्ल्यू।, झू, एल।, ली, जे।, याओ, वाई।, चेन, एफ।, सन, एम।, झांग, जे।, शेन, एन।, सॉन्ग, वाई। ।, और चांग, ​​​​एक्स। (2018)। आरएनए-बाध्यकारी प्रोटीन PCBP1-मध्यस्थ प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन उत्पादन को बढ़ावा देकर आयरन टी हेल्पर सेल रोगजनकता को बढ़ाता है। प्रतिरक्षण 49, 80–92.e7।

15. जियांग, वाई।, ली, सी।, वू, क्यू।, एएन, पी।, हुआंग, एल।, वांग, जे।, चेन, सी।, चेन, एक्स।, झांग, एफ।, मा, एल। ।, और अन्य। (2019)। आयरन पर निर्भर हिस्टोन 3 लाइसिन 9 डीमिथाइलेशन बी सेल प्रसार और हास्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को नियंत्रित करता है। नट। साम्प्रदायिक। 10, 2935।

16. प्रेजा, जीसी, रुचला, पी., पिनॉन, आर., रामोस, ई., किआओ, बी., पेराल्टा, एमए, शर्मा, एस., वारिंग, ए., गैंज़, टी., और नेमेथ, ई। (2011)। Minihepcidins तर्कसंगत रूप से छोटे पेप्टाइड्स डिज़ाइन किए गए हैं जो चूहों में हेक्सिडिन गतिविधि की नकल करते हैं और लोहे के अधिभार के उपचार के लिए उपयोगी हो सकते हैं। जे क्लिन। निवेश करना। 121, 4880-4888।

17. हाउडेन, एजेएम, हुकेलमैन, जेएल, ब्रेनस, ए., स्पिनेली, एल., सिंक्लेयर, एलवी, लैमोंड, एआई, और कैंट्रेल, डीए (2019)। टी सेल भेदभाव के दौरान टी सेल प्रोटिओम और पर्यावरण सेंसर का मात्रात्मक विश्लेषण। नट। इम्यूनोल।20, 1542–1554. 

18. हेंत्ज़े, मेगावाट, मक्केन्थेलर, एमयू, गैली, बी, और कैमाशेला, सी। (2010)। दो से टैंगो: स्तनधारी लौह चयापचय का विनियमन। सेल 142, 24-38।

19. हुकेलमैन, जेएल, एंडरसन, केई, सिंक्लेयर, एलवी, ग्रेज़, केएम, मुरिलो, एबी, हॉकिन्स, पीटी, स्टीफेंस, एलआर, लैमोंड, एआई, और कैंट्रेल, डीए (2016)। साइटोटॉक्सिक टी सेल प्रोटिओम और इसका किनेज एमटीओआर द्वारा आकार देना। नट। इम्यूनोल। 17, 104–112।

20. नाइट, जेडए, श्मिट, एसएफ, बिरसोय, के।, टैन, के।, और फ्रीडमैन, जेएम (2014)। एरिथ्रोपोइज़िस और एनीमिया में mTORC1 के लिए एक महत्वपूर्ण भूमिका। ईलाइफ 3, ई01913।

21. गेरलाच, सी।, मोसमैन, ईए, लॉफहेड, एसएम, अल्वारेज़, डी।, ज़्वीजनबर्ग, एजे, वांडर्स, एल।, गर्ग, आर।, डे ला टोरे, जेसी, और वॉन एंड्रियन, यूएच (2016)। केमोकाइन रिसेप्टर CX3CR1 प्रतिरक्षा निगरानी और होमियोस्टेसिस में विशिष्ट भूमिकाओं के साथ तीन एंटीजन-अनुभवी सीडी8 टी सेल सबसेट को परिभाषित करता है। प्रतिरक्षा 45, 1270-1284।

22. हिकोनो, एच।, कोलमीयर, जेई, ताकामुरा, एस।, विटमर, एसटी, रॉबर्ट्स, एडी, और वुडलैंड, डीएल (2007)। सक्रियण फेनोटाइप, केंद्रीय-या प्रभावकार-मेमोरी फेनोटाइप के बजाय, मेमोरी सीडी 8 प्लस टी कोशिकाओं की रिकॉल प्रभावकारिता की भविष्यवाणी करता है। जे ऍक्स्प. मेड। 204, 1625-1636।

23. राइटिक, जेएल, एलमोर, एमआर, बर्टन, एमडी, कॉनराड, एमएस, डोनोवन, एसएम, डिल्गर, आरएन, और जॉनसन, आरडब्ल्यू (2012)। प्रारंभिक जीवन में आयरन की कमी से नवजात पिगलों में स्थानिक अनुभूति बाधित होती है। जे न्यूट्र। 142, 2050–2056।

24. मेस, डी., सेगल्स, जे., मेन्स, टी., सिबिला, एम., पीटर्स, एम., और हैसब्रुक, एफ. (2008)। सूअरों में माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया संक्रमण का नियंत्रण। पशु चिकित्सक। माइक्रोबॉयल। 126, 297–309।

25. फ़िनबर्ग, केई, हेनी, एमएम, कैंपगना, डीआर, आयदिनोक, वाई।, पियर्सन, एचए, हार्टमैन, केआर, मेयो, एमएम, सैमुअल, एसएम, स्ट्रॉस, जेजे, मार्कियानोस, के।, एट अल। (2008)। TMPRSS6 में उत्परिवर्तन के कारण आयरन-रिफ्रैक्टरी आयरन डेफिसिएंसी एनीमिया (IRIDA) होता है। नट। जेनेट। 40, 569–571।

26. हार्बो, जेडबी, बेनफील्ड, टीएल, वैलेंटाइनर-ब्रांथ, पी., हजुलर, टी., लैम्बर्टसन, एल., कल्टोफ्ट, एम., क्रोगफेल्ट, के., स्लॉटवेड, एचसी, क्रिस्टेंसेन, जेजे, और कोनराडसन, एचबी ( 2010)। 7 दशकों में आक्रामक न्यूमोकोकल रोग और न्यूमोकोकल सेरोटाइप में अस्थायी रुझान। क्लिन। संक्रमित। दि. 50, 329–337।

27. कालिया, वी., और सरकार, एस. (2018)। IL-2—एक संतुलनकारी अधिनियम द्वारा एफेक्टर और मेमोरी CD8 T सेल विभेदीकरण का विनियमन। सामने। इम्यूनोल। 9, 2987।

28. ली, वाईएस, वोलम, जे., और ओलेफ्स्की, जेएम (2018)। इम्यूनोमेटाबोलिज्म का एक एकीकृत दृश्य। सेल 172, 22-40।

29. एरेज़, जे।, जंग, जी।, गबायन, वी।, वेलोर, ई।, रुचला, पी।, गुलिग, पीए, गैंज़, टी।, नेमेथ, ई।, और बुलट, वाई। (2015)। हेपसीडिन-प्रेरित हाइपोफेरेमिया हाइड्रोफिलिक जीवाणु विब्रियो वुल्निफिशस के खिलाफ एक महत्वपूर्ण मेजबान रक्षा तंत्र है। सेल होस्ट माइक्रोब 17, 47-57।

30. पुर्तगाल, एस., कैरेट, सी., रेकर, एम., आर्मिटेज, एई, गोंको एल्व्स, एलए, एपिफानियो, एस., सुलिवन, डी., रॉय, सी., न्यूबोल्ड, सीआई, ड्रेकस्मिथ, एच। , और ll ओपन एक्सेस 178 मेड 2, 164–179, 12 फरवरी, 2021 क्लीनिकल एंड ट्रांसलेशनल आर्टिकल मोटा, एमएम (2011)। मलेरिया में अतिसंक्रमण का मेजबान-मध्यस्थता विनियमन। नट। मेड। 17, 732–737।

31. डार्टन, टीसी, ब्लोम्के, सीजे, गियान्नौलतौ, ई।, वाडिंगटन, सीएस, जोन्स, सी।, स्टर्गेस, पी।, वेबस्टर, सी।, ड्रेकस्मिथ, एच।, पोलार्ड, ए जे, और आर्मिटेज, एई (2015) . तेजी से बढ़ने वाला हेपसीडिन और संबद्ध सीरम आयरन भुखमरी मानव में टाइफाइड संक्रमण के प्रति तीव्र प्रतिक्रिया की विशेषताएं हैं। प्लस नेगल। ट्रॉप। दि. 9, ई0004029।

32. स्पोटिसवोडे, एन।, आर्मिटेज, एई, विलियम्स, एआर, फ्येफ, ए जे, बिस्वास, एस।, हॉजसन, एसएच, लेवेलिन, डी।, चौधरी, पी।, ड्रेपर, एसजे, डफी, पीई, और ड्रेकस्मिथ, एच। (2017)। मलेरिया के दौरान हेक्सिडिन नियमन में एक्टिविंस की भूमिका। संक्रमित। इम्यून। 85, इ00191-इ17.

33. विलियम्स, एएम, लाडवा, सीएन, लियोन, जेएस, लोपमैन, बीए, टैंगप्रीचा, वी।, व्हाइटहेड, आरडी, आर्मिटेज, एई, रे, के।, मोरोवेट, ए।, पसरीचा, एसआर, एट अल। (2019)। नोरोवायरस मानव चुनौती के बाद सूक्ष्म पोषक तत्व और सूजन सीरम बायोमार्कर सांद्रता में परिवर्तन। पूर्वाह्न। जे क्लिन। न्यूट्र। 110, 1456-1464।

34. आर्मिटेज, एई, स्टेसी, एआर, गियान्नौलतौ, ई।, मार्शल, ई।, स्टर्गेस, पी।, चथा, के।, स्मिथ, एनएम, हुआंग, एक्स।, जू, एक्स।, पसरीचा, एसआर, एट अल। . (2014)। एचआईवी -1, एचबीवी, और एचसीवी संक्रमण के दौरान हेक्सिडिन और लोहे के नियमन के अलग-अलग पैटर्न। प्रक्रिया। नटल। अकाद। विज्ञान। यूएसए 111, 12187–12192।

35. शाह, ए., फ्रॉस्ट, जेएन, आरोन, एल., डोनोवन, के., और ड्रेकस्मिथ, एच.; सहयोगी (2020)। COVID -19 में प्रणालीगत हाइपोफेरेमिया और हाइपोक्सिमिक श्वसन विफलता की गंभीरता। क्रिट। देखभाल 24, 320।

36. लैन, पी।, पैन, केएच, वांग, एसजे, शि, क्यूसी, यू, वाईएक्स, फू, वाई।, चेन, वाई।, जियांग, वाई।, हुआ, एक्सटी, झोउ, जेसी, और यू, वाईएस (2018)। उच्च सीरम आयरन स्तर सेप्सिस के रोगियों में मृत्यु दर में वृद्धि के साथ जुड़ा हुआ है। विज्ञान। प्रतिनिधि 8, 11072।

37. Tacke, F., Nuraldeen, R., Koch, A., Strathmann, K., Hutschenreuter, G., Trautwein, C., and Stranad, P. (2016)। आयरन पैरामीटर्स गंभीर रूप से बीमार मरीजों के पूर्वानुमान का निर्धारण करते हैं। क्रिट। केयर मेड। 44, 1049–1058।

38. ब्लैंको-मेलो, डी., निल्सन-पयंट, बीई, लिउ, डब्ल्यूसी, उहल, एस., होगालैंड, डी., मोलर, आर., जॉर्डन, टीएक्स, ओशी, के., पैनिस, एम., सैक्स, डी।, एट अल। (2020)। SARS-CoV के लिए असंतुलित मेजबान प्रतिक्रिया -2 COVID के विकास को प्रेरित करती है-19। सेल 181, 1036–1045.e9।

39. काओ, एक्स। (2020)। कोविड-19: इम्यूनोपैथोलॉजी और चिकित्सा के लिए इसके निहितार्थ। नट। रेव। इम्यूनोल। 20, 269–270।

40. बार्बर, एमएफ, और एल्डे, एनसी (2014)। ट्रांसफरिन के तेजी से विकास के माध्यम से बैक्टीरियल आयरन पायरेसी से बचना। विज्ञान 346, 1362-1366।

41. ओलोटू, ए., फेगन, जी., वांबुआ, जे., न्यांगवेसो, जी., लीच, ए., लिवेन्स, एम., कास्लो, डीसी, नजुगुना, पी., मार्श, के., और बेजोन, पी (2016)। युवा अफ्रीकी बच्चों के बीच RTS, S/AS01 मलेरिया वैक्सीन की सात साल की प्रभावशीलता। एन अंग्रेजी। जे मेड। 374, 2519–2529।

42. ग्रीनवुड, बी। (2014)। वैश्विक स्वास्थ्य में टीकाकरण का योगदान: अतीत, वर्तमान और भविष्य। फिलोस। ट्रांस। आर सोसा। लंदन। बी बायोल। विज्ञान। 369, 20130433।

43. स्टोफ़ेल, एनयू, उयोगा, एमए, मुटुकु, एफएम, फ़्रॉस्ट, जेएन, मवासी, ई., पगनीनी, डी., वैन डेर क्लिस, एफआरएम, मल्होत्रा, आईजे, लाब्यूड, एडी, रिक्की, सी., एट अल। (2020)। टीकाकरण के समय आयरन की कमी से होने वाला एनीमिया टीके की प्रतिक्रिया में कमी की भविष्यवाणी करता है और टीकाकरण के समय आयरन सप्लीमेंट ह्यूमरल वैक्सीन प्रतिक्रिया बढ़ाता है: केन्याई शिशुओं में एक जन्म समूह अध्ययन और एक यादृच्छिक परीक्षण अनुवर्ती अध्ययन। सामने। इम्यूनोल। 11, 1313।

44. लोपेज़, ए।, कैकूब, पी।, मैकडॉगल, आईसी, और पाइरिन-बिरौलेट, एल। (2016)। लोहे की कमी से एनीमिया। लैंसेट 387, 907–916।

45. कत्सरौ, ए।, और पैंटोपोलोस, के। (2018)। हेपसीडिन थेरेप्यूटिक्स। फार्मास्यूटिकल्स (बेसल) 11, 127।

46. ​​शुलमैन, जेएल, और किलबोर्न, ईडी (1969)। इन्फ्लुएंजा वायरस के हेमाग्लगुटिनिन और न्यूरोमिनिडेस एंटीजन की प्रकृति में स्वतंत्र भिन्नता: हांगकांग -68 वायरस के हेमाग्लगुटिनिन एंटीजन की विशिष्टता। प्रक्रिया। नटल। अकाद। विज्ञान। यूएसए 63, 326–333।

47. पॉवेल, टीजे, सिल्क, जेडी, शार्प्स, जे।, फोडोर, ई।, और टाउनसेंड, एआर (2012)। स्यूडोटाइप्ड इन्फ्लुएंजा ए वायरस हेटरोटाइपिक इम्युनिटी को शामिल करने के लिए एक वैक्सीन के रूप में। जे विरोल। 86, 13397– 13406।

48. वैंग, सी., हार्ट, एम., चुई, सी., अजूओगु, ए., ब्रायन, आईजे, डी कैसन, एससी, एट अल। (2016)। जर्मिनल सेंटर बी सेल और टी कूपिक हेल्पर सेल प्रतिक्रियाएं वायरल वेक्टर और प्रोटीन-इन एडजुवेंट टीकों के लिए। जे इम्यूनोल। 197, 1242–1251।

49. गैली, बी।, फेरिंग, डी।, और हेंत्ज़, मेगावाट (2005)। म्यूरिन आयरन रेगुलेटरी प्रोटीन (IRP) -1 और -2 जीन के सशर्त एलील्स का निर्माण। उत्पत्ति 43, 181-188।

50. बाडिया, टीसी, वांग, वाई।, और नाथन्स, जे। (2003)। माउस में सेल आकृति विज्ञान और क्लोनल संबंधों की कल्पना के लिए एक गैर-इनवेसिव जेनेटिक/फार्माकोलॉजिकल रणनीति। जे न्यूरोस्की। 23, 2314–2322।

51. हेनी, एमएम, गुओ, डी।, डी फाल्को, एल।, कैंपगना, डीआर, ओलबिना, जी।, काओ, पीपी, शमित्ज़-अबे, के।, रहीमोव, एफ।, गुत्शॉ, पी।, वेस्टमैन, के। ।, और अन्य। (2018)। क्रोनिक आयरन की कमी वाले रोगियों में हेक्सिडिन को सामान्य करना TMPRSS6 उत्परिवर्तन स्थिति की भविष्यवाणी करता है। रक्त 132, 448-452।

52. नाइक, एसएच, प्रोइटो, एआई, विल्सन, एनएस, डैकिक, ए., श्नोरर, पी., फुच्सबर्गर, एम., लाहौद, एमएच, ओ'कीफ, एम., शाओ, क्यूएक्स, चेन, डब्ल्यूएफ, एट अल . (2005)। अत्याधुनिक: Fms-like tyrosine kinase 3 ligand बोन मैरो कल्चर में स्प्लेनिक CD8 प्लस और CD 8- डेंड्राइटिक सेल समतुल्य की पीढ़ी। जे इम्यूनोल। 174, 6592–6597।

53. जिओ, बी।, डेंग, एक्स।, झोउ, डब्ल्यू।, और टैन, ईके (2016)। माइटोट्रैकर का उपयोग करके माइटोफैगी का फ्लो साइटोमेट्री-आधारित आकलन। सामने। कक्ष। न्यूरोससी। 10, 76.

54। आर्मिटेज, एई, लिम, पीजे, फ्रॉस्ट, जेएन, पसरीचा, एसआर, सोइलक्स, ईजे, इवांस, ई।, मोरोवेट, ए।, सैंटोस, ए।, डियाज, आर।, बिग्स, डी।, एट अल। (2016)। आयरन-रेगुलेटरी हॉर्मोन हेपसीडिन का प्रेरित विघटन एक्यूट इंफ्लेमेटरी हाइपोफेरेमिया को रोकता है। जे जन्मजात इम्यून। 8, 517–528।

55. बुचविट्ज़, जेपी, करमौस, पीडब्लू, हरकेमा, जेआर, विलियम्स, केजे, और कामिंस्की, एनई (2007)। C57BL/6 चूहों में डेल्टा 9-tetrahydrocannabinol द्वारा इन्फ्लुएंजा A/PR/8/34 के लिए वायुमार्ग प्रतिक्रियाओं का मॉड्यूलेशन। जे। फार्माकोल। ऍक्स्प. वहाँ। 323, 675–683।

56. एफ़स्ट्रेटियौ, ए, और मेपल, पीएसी (1994)। डिप्थीरिया की प्रयोगशाला निदान (यूरोप के लिए विश्व स्वास्थ्य संगठन क्षेत्रीय कार्यालय)।

57. हेफ़ेले, एल., सिफान, एस., ज़ायावोंग, डी., होमसाना, ए., क्लेन, डी., चंथाविल्ले, पी., नोआंथोंग, पी., ज़ायदालासौक, के., फाथम्मावोंग, ओ., बिलामे, एस ।, और अन्य। (2019)। लाओ पीपुल्स डेमोक्रेटिक रिपब्लिक में डिप्थीरिया-टेटनस पर्टुसिस होल सेल-हेपेटाइटिस बी-हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा टाइप बी के साथ नियमित टीकाकरण के बाद हेल्थकेयर सिस्टम के विभिन्न स्तरों पर सीरोप्रोटेक्शन। क्लिन। संक्रमित। दि. 69, 2136–2144।

58. विश्व स्वास्थ्य संगठन (2005)। न्यूमोकोकल कंजुगेट टीकों के उत्पादन और नियंत्रण के लिए सिफारिश। विश्व स्वास्थ्य अंग। टेक। निरसित सर्. 927, 64–98।

59. चेन, आरटी, मार्कोविट्ज़, एलई, अल्ब्रेक्ट, पी।, स्टीवर्ट, जेए, मोफेंसन, एलएम, प्रीबल्ड, एसआर, और ऑरेनस्टीन, डब्ल्यूए (1990)। खसरा एंटीबॉडी: सुरक्षात्मक टाइटर्स का पुनर्मूल्यांकन। जे संक्रमित। दि. 162, 1036–1042।

स्टार प्लस तरीके

प्रमुख संसाधन तालिका

संसाधनों की उपलब्धता

लीड संपर्क

संसाधनों और अभिकर्मकों के लिए और जानकारी और अनुरोधों को लीड संपर्क, हैल ड्रेकस्मिथ (alexander.drakesmith@ imm.ox.ac.UK) को निर्देशित किया जाना चाहिए और इसे पूरा किया जाएगा।

सामग्री की उपलब्धता

इस परियोजना ने नए अनूठे अभिकर्मकों को उत्पन्न नहीं किया।

डेटा और कोड उपलब्धता

इस परियोजना ने कोई नया कोड या नया डेटासेट उत्पन्न नहीं किया।

प्रायोगिक मॉडल और विषय विवरण चूहे

जब तक अन्यथा न कहा जाए, पशु प्रक्रियाओं को यूके होम ऑफिस प्रोजेक्ट के अधिकार और पशु (वैज्ञानिक प्रक्रिया) अधिनियम 1986 द्वारा व्यक्तिगत लाइसेंस के तहत प्रदर्शन किया गया था और ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय की नैतिक समीक्षा समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। चूहे व्यक्तिगत रूप से हवादार पिंजरों में रखे गए थे और 188ppm आयरन (SDS डायटेक्स सर्विसेज, आहार 801161), या विकिरणित कम आयरन आहार (2ppm Fe, TD.99397, Teklad Envigo), या विकिरणित समायोजित लौह आहार युक्त मानक आहार के साथ ऐड-लिबिटम खिलाया गया था। (निम्न लौह आहार के लिए नियंत्रण, 200ppm Fe, TD.07801, टेकलाड एनविगो)। CO2 सांद्रता बढ़ाने में चूहे को इच्छामृत्यु दी गई।

WT C57BL/6JOlaHsd चूहों को Envigo से मंगवाया गया था। डब्ल्यूटी बी 6। SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ (जन्मजात C57BL/6 CD45.1 व्यक्त चूहों) को ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय में इन-हाउस प्रतिबंधित किया गया था। ट्रांसजेनिक्स की तुलना किए जाने से पहले डब्ल्यूटी चूहों को कम से कम 2- हफ्तों के लिए एक मानक 188ppm आयरन आहार पर रखा गया था। सजातीय C57BL/6 पृष्ठभूमि पर TfrcY20H/Y20H चूहों, Raif Geha, बोस्टन चिल्ड्रेन्स हॉस्पिटल, हार्वर्ड मेडिकल स्कूल.3 OT-I CD45.1: ट्रांसजेनिक C57BL/ 6.Tg(TcraTcrb)1100Mjb (OT-I) की ओर से एक प्रकार का उपहार था। चूहों ने BL6 जन्मजात तनाव B6 के साथ संकरण किया। SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ इन-हाउस माइक बोगेटोफ्टे बार्नकोब और विन्सेंज़ो सेरुंडोलो (MRC HIU) की ओर से एक तरह का दान था। OT-II CD45.1/CD45.2 विषमयुग्मजी चूहे।

ट्रांसजेनिक B6.Cg-Tg(TcraTcrb)425Cbn/J (OT-II) चूहे ओलिवर बैनार्ड और मूल रूप से द जैक्सन लेबोरेटरी, बार हार्बर ME से एक उपहार थे, और कॉन्जेनिक होमोज़ीगस B6 को पार कर गए। SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ (CD45.1) Tg(TcrbaTcrb) 425Cbn ट्रांसजीन, Pepc और Pepb एलील्स के लिए विषमयुग्मजी चूहों को उत्पन्न करने के लिए: OT-II CD45.1/CD45.2 विषमयुग्मजी।

व्यक्तिगत प्रयोगों के भीतर सभी चूहों का लिंग-मिलान और आयु-मिलान (2- सप्ताह के भीतर) किया गया। इन विवो टीकाकरण प्रयोगों के लिए चूहों का उपयोग 6-9 सप्ताह की आयु के बीच किया गया था, प्रयोग शुरू करते समय सभी चूहों की आयु 6-12 सप्ताह के बीच थी। प्रत्येक प्रयोग के भीतर, चूहों को बेतरतीब ढंग से उपचार समूहों के लिए आवंटित किया गया था जैसे कि प्रत्येक पिंजरे में समान संख्या में चूहों ने प्रत्येक उपचार प्राप्त किया। आहार प्रयोगों के लिए, चूहों को प्रयोग की शुरुआत में बेतरतीब ढंग से आहार समूहों को सौंपा गया था।

आईआरपी फ़ंक्शन के सशर्त नुकसान के साथ टी कोशिकाओं को जानवरों से प्राप्त किया गया था जो फ़्लॉक्स्ड इरप1 (Aco1) और Irp2 (Ireb2) एलील्स ले जाने वाली माउस लाइनों को पार करके एक टेमोक्सीफेन-इंड्यूसीबल सीआरई रीकॉम्बिनेज़ (CreERT2) अनुक्रम को अनुमेय Rosa26 में प्रभावित करते हैं। locus.50 Aco1flox/flox, Ireb2flox/flox, Rosa26 plus / plus (CREnegative, करार दिया गया IRP1/2flox/flox Cre –ve) और Aco1flox/flox, Ireb2flox/flox, Rosa26 plus /CreERT2 लिटरमेट्स (CRE धनात्मक, करार दिया गया IRP1/ 2flox/flox Cre plus ve) एक सजातीय C57BL/6 पृष्ठभूमि पर थे। DKFZ में चूहों पर किए गए प्रजनन और प्रक्रियाएं संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार की गईं। मुख्य संसाधन तालिका में Aco1 और Ireb2 प्राइमर अनुक्रमों का उपयोग करके चूहे को जीनोटाइप किया गया था।

इंजेक्ट किए गए पदार्थ

मिनीहेप्सिडिन: मिनी-हेपसीडिन PR7329 (da-TH-Dpa-bhProRCR-bhPhe-Ahx-Ida(Hexadecylamine)-NH2) का एक उचित द्रव्यमान 80 प्रतिशत इथेनॉल में घुल गया था और फिर 60mg Purebright SL220/Sunbright DSPE{{13 के साथ मिलाया गया }}सीएन (एनओएफ)। नियंत्रण समाधान प्योरब्राइट SL220 इथेनॉल में भंग था। 50C तक गर्म किए गए निर्वात कक्ष का उपयोग करके इथेनॉल को वाष्पित किया गया। परिणामी जेल को 4C पर 24 घंटे तक संग्रहीत किया गया था और 1mM की mHep सांद्रता देने के लिए पानी की उचित मात्रा में फिर से घोल दिया गया था: 100 एमएल पानी में मिनी-हेपसीडिन के 100nMoles को प्रति माउस प्रति खुराक में इंजेक्ट किया गया था।

फेरिक अमोनियम साइट्रेट (FAC) (F5879 सिग्मा एल्ड्रिच) पीबीएस में 3mg/ml में घुल गया था। 100 एमएल को चूहों में अंतःशिरात्मक रूप से इंजेक्ट किया गया था। आयरन डेक्सट्रान (सिग्मा, डी 8517) को पीबीएस में 20mg / ml पर समायोजित किया गया था और 100 mL को चूहों में अंतःशिरात्मक रूप से इंजेक्ट किया गया था।

टीकाकरण

संशोधित वैक्सीनिया वायरस अंकारा ओवलब्यूमिन व्यक्त करता है: एमवीए-ओवीए वायरल वेक्टर कोर सुविधा, जेनर इंस्टीट्यूट, ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय से एक तरह का उपहार था। पीबीएस में वायरस को 10 ^ 7 पट्टिका बनाने वाली इकाइयों (पीएफयू) / एमएल तक पतला कर दिया गया था, और 100 एमएल को चूहों के गुच्छे में सूक्ष्म रूप से इंजेक्ट किया गया था।

एडेनोवायरस मानव सीरोटाइप 5 ओवलब्यूमिन व्यक्त करता है: AdHu5-ओवीए वायरल वेक्टर कोर सुविधा, जेनर इंस्टीट्यूट, ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय से एक तरह का उपहार था। वायरस को पीबीएस में 10 ^ 10 वायरल कणों (वीपी) / एमएल तक पतला कर दिया गया था, और 100 एमएल को चूहों के गुच्छे में चमड़े के नीचे इंजेक्ट किया गया था।

प्राथमिक OVA प्रोटीन प्रतिरक्षण के लिए चूहों को 200ug (OT-I या OT-II प्रतिक्रियाओं के लिए) या 800ug (अंतर्जात प्रतिक्रियाएँ) OVA (इसके अंत में Ovalbumin vac-pov, Invivogen), MPLA का 25ug (vac-mla, Invivogen) प्राप्त हुआ। 1ug of alpha-galactosylceramide (GS Besra, University of Birmingham, UK या KRN7000 Enzo Life Sciences से उपहार)। द्वितीयक ओवीए प्रोटीन प्रतिरक्षण के लिए चूहों को ओवीए का 200ug और एमपीएलए का 25ug सूक्ष्म रूप से फ्लैंक में प्राप्त हुआ।

दत्तक स्थानान्तरण

OT-I CD8 या OT-II CD4 T कोशिकाओं की प्रतिक्रिया से जुड़े प्रयोगों के लिए, लाल कोशिका lysed तिल्ली के निलंबन प्राप्त किए गए थे और OT-I CD8 T कोशिकाओं या OT-II CD4 T कोशिकाओं की आवृत्ति का प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा मूल्यांकन किया गया था। पूरे प्लीहा निलंबन की एकाग्रता को 50, 000 OT-I CD8 T कोशिकाओं / एमएल या 500, 000 OT-II CD4 T कोशिकाओं / एमएल और पीबीएस में सेल निलंबन के 100ul में समायोजित किया गया था।

मिश्रित अस्थि मज्जा चिमेरस

मिश्रित अस्थि मज्जा काइमेरावाद प्रयोगों के लिए 6 0 प्रतिशत TfrcY20H/Y20H CD45.2 (या WT CD45.2) अस्थि मज्जा का मिश्रण TfrcY20H/Y20H कोशिकाओं की क्षमता का परीक्षण करने के लिए 40 प्रतिशत CD45.1 अस्थि मज्जा के साथ जोड़ा गया था जंगली प्रकार की कोशिकाओं के सापेक्ष प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का पुनर्गठन और योगदान करने के लिए। 8 सप्ताह की आयु में प्राप्त पुरुष CD45.2 प्राप्तकर्ताओं को 300 सेकंड के लिए 4.5 Gy के साथ घातक रूप से विकिरणित किया गया, उसके बाद 3-घंटे का आराम दिया गया, और बाद में 300 सेकंड के लिए 4.5 Gy की खुराक दी गई। प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा पुनर्गठन का विश्लेषण करने के लिए परिधीय रक्त के 9-सप्ताह के आराम के बाद चूहे ने निर्दिष्ट चूहों से कुल 2 मिलियन अस्थि मज्जा कोशिकाएं प्राप्त कीं। बैक्टीरिया के संक्रमण को रोकने के लिए प्राप्तकर्ता चूहों को उनके पीने के पानी (0.16mg/mL Enrofloxacin (Baytril), Bayer Corporation) में एंटीबायोटिक्स मिला।

इन्फ्लुएंजा वायरस का संक्रमण

इन्फ्लुएंजा वायरस (A/X-31 (H3N2) A/Aichi/2/1968)46 को MDCK-SIAT1 कोशिकाओं में प्रचारित किया गया था और पिछले वर्णित के रूप में रक्तगुल्म परख और TCID50 द्वारा इसकी मात्रा निर्धारित की गई थी।47

चूहों को एयरोसोलिज्ड आइसोफ्लुरेन के साथ एनेस्थेटाइज किया गया था और इन्फ्लुएंजा वायरस एक्स -31 के 0.08 हेमाग्लूटिनेशन यूनिट (एचएयू) से संक्रमित किया गया था। वायरस के निलंबन को नाक पर ड्रॉपवाइज पिपेट किया गया था जैसे कि वायरस साँस लेता है।

संक्रमित चूहों के सीरम में इन्फ्लुएंजा-विशिष्ट एंटीबॉडी टाइटर्स को H3N2 (X31) GFP के साथ MDCK-SIAT1 कोशिकाओं के संक्रमण के इन विट्रो माइक्रोन्यूट्रलाइज़ेशन एसेज़ द्वारा मापा गया था, जो छद्मरूपित रिपोर्टर वायरस (S-FLU) को मामूली संशोधनों के साथ वर्णित करता है। संक्षेप में, एकत्र किए गए माउस सीरा को 30 मिनट के लिए 56C पर निष्क्रिय कर दिया गया। संकेतक MDCK-SIAT1 कोशिकाओं के 3e4 को जोड़ने से पहले 37C पर 2 घंटे के लिए सीरा के कमजोर पड़ने (1:40 कमजोर पड़ने से शुरू) को H3N2 (X31) S-FLU के साथ ऊष्मायन किया गया था। 37C पर रातोंरात प्लेटें लगाई गईं। इसके बाद प्लेटों को धोकर 10 प्रतिशत फॉर्मेलिन में फिक्स किया गया। जीएफपी अभिव्यक्ति को क्लेरियोस्टार प्लेट रीडर पर मापा गया था और सीरा के कमजोर पड़ने के परिणामस्वरूप वायरस के संक्रमण में 50 प्रतिशत की कमी आई थी (जीएफपी सिग्नल में 50 प्रतिशत की कमी के माध्यम से निर्धारित) को न्यूट्रलाइजिंग टिटर (ईसी50) के रूप में रिपोर्ट किया गया था।

घेंटा अध्ययन

पिगलेट हाउसिंग और प्रायोगिक प्रक्रियाओं को स्थानीय नैतिक दिशानिर्देशों द्वारा सेंटर फॉर डेयरी रिसर्च (CEDAR), यूनिवर्सिटी ऑफ़ रीडिंग में प्रदर्शित किया गया। सभी प्रयोगों को रीडिंग एनिमल वेलफेयर एंड एथिकल रिव्यू बॉडी (AWERB) द्वारा अनुमोदित किया गया था और यूके होम ऑफिस लाइसेंस के तहत प्रदर्शन किया गया था।

टीकाकरण की प्रतिक्रियाओं पर लोहे की कमी के प्रभाव का आकलन करने के लिए, 6 लिटर से 18 बड़े सफेद एफ1 हाइब्रिड पिगलेट को 1 दिन की उम्र में 2 लिंग-मिलान उपचार समूहों के बीच समान रूप से वितरित किया गया। उपचार थे: समूह 1: गैर-लौह पूरक नियंत्रण, बोवाइन-आधारित शिशु फार्मूला दूध के समान बोया गया दूध प्रतिकृति (SMR); समूह 2: आयरन सप्लीमेंट (150mg/kg BW) SMR खिलाया गया, इस समूह के आधे लोगों को 1 दिन की उम्र में इंट्रामस्क्युलर (IM) आयरन इंजेक्शन (200mg Fe) भी मिला (चित्र S6)। CEDAR में आने से पहले, सूअर के बच्चों को टीकाकरण, एंटीबायोटिक्स, या मानक पशुपालन IM आयरन इंजेक्शन नहीं दिए गए थे। प्रारंभ में, पिगलेट को कटोरे से पीना सीखने के लिए 2 समूहों (ओरल आयरन और नो ओरल आयरन सप्लीमेंट) में रखा गया था और 2 दिन की उम्र में अलग-अलग रखा गया था।

पूरे परीक्षण के दौरान, चूरा और पुआल पर पिगलेट को 30C पर रखा गया था और 12 घंटे के प्रकाश और अंधेरे चक्र के तहत हीट लैंप प्रदान किया गया था और ताजा पीने के पानी तक उनकी मुफ्त पहुंच थी। पिगलेट को शुरू में हर 4 घंटे (5 फीड / दिन) में 10 प्रतिशत एसएमआर एकाग्रता (या तो आयरन पूरक या गैर-पूरक) खिलाया गया था और इसे बढ़ाकर 15 प्रतिशत और अंत में 20 प्रतिशत (4 फीड / दिन, मानक एकाग्रता) चौथे दिन तक किया गया था। खरोंच के जोखिम को कम करने के लिए। सप्ताह में दो बार वजन मापने के बाद, पूरे परीक्षण के दौरान 150mg/kg शरीर के वजन को प्राप्त करने के लिए SRM और फेरस सल्फेट (ओरल आयरन सप्लीमेंट) की मात्रा को तदनुसार बढ़ाया गया था। सभी पिगलेट को 2 सप्ताह की उम्र में Mycoplasma hyopneumoniae (2ml, Suwaxyn MH-One, Zoetis Ltd, लेदरहेड, यूके) के खिलाफ एक IM टीकाकरण प्राप्त हुआ, और 2 सप्ताह (पूर्व-टीकाकरण) में गैर-EDTA वैक्यूटेनर्स का उपयोग करके वेनपंक्चर के माध्यम से रक्त के नमूने एकत्र किए गए। 3 और 4 सप्ताह पुराना (टीकाकरण के बाद)। सीरम प्राप्त करने के लिए सेंट्रीफ्यूज करने से पहले रक्त को तुरंत 3-4 घंटों के लिए प्रशीतित किया गया था, जिसे 80C पर संग्रहीत किया गया था। 28 दिनों में, पेंटोबार्बिटल सोडियम बीपी 20 प्रतिशत (डोलेथल, वीटोक्विनोल लिमिटेड, नॉर्थम्पटनशायर, यूके) के ओवरडोज से पिगलेट मारे गए।

इरिडा रोगी

IRIDA और नियंत्रण रोगियों के संग्रह, जीनोटाइपिंग और हेमेटोलॉजिकल फेनोटाइपिंग को पहले वर्णित किया गया है। 51

कोश पालन

सभी कोशिकाओं को 37C, 20 प्रतिशत O2, और 5 प्रतिशत CO2 पर कल्चर किया गया। मीडिया। पूरा R10। RPMI 10 प्रतिशत FCS (सिग्मा), ग्लूटामाइन (2mM), पेनिसिलिन (100U/ml), स्ट्रेप्टोमाइसिन (0.1mg/ml), और बीटा-मर्कैप्टोएथेनॉल (55mM) के साथ। आयरन-संशोधित संस्कृति माध्यम। Pannexin NTS सीरम स्थानापन्न (P04-95080; Pan Biotech) में आयरन की कमी का आदेश दिया गया था। लौह-मुक्त पैननेक्सिन एनटीएस सीरम स्थानापन्न ग्लूटामाइन (2mM), पेनिसिलिन (100U/ml), स्ट्रेप्टोमाइसिन (0.1mg/ml), और बीटा-मर्कैप्टोएथेनॉल (55mM) के साथ RPMI में 10 प्रतिशत v/v पर जोड़ा गया था ताकि लौह मुक्त पूर्ण बनाया जा सके। मध्यम। लौह-मुक्त पूर्ण माध्यम की लौह सामग्री को संशोधित करने के लिए, निर्दिष्ट एकाग्रता में होलो ट्रांसफ़रिन (T0665 सिग्मा एल्ड्रिच) जोड़ा गया था। Apotransferrin (T1147 सिग्मा एल्ड्रिच) को 1.2mg/ml पर माध्यम की कुल ट्रांसफ़रिन सांद्रता बनाए रखने के लिए लौह-मुक्त पूर्ण माध्यम में भी जोड़ा गया था।

सीडी 8 टी कोशिकाएं। 40 मिमी सेल छलनी के माध्यम से यांत्रिक पृथक्करण द्वारा गर्भाशय ग्रीवा, वंक्षण, अक्षीय और बाहु लिम्फ नोड्स से एकल-कोशिका निलंबन किए गए थे। जब प्रसार का विश्लेषण किया गया था तो लिम्फ नोड निलंबन को 5mM इंविट्रोजन सेल ट्रेस वायलेट (C34557) के साथ पीबीएस के 500 एमएल में फिर से जोड़ा गया था और पूर्ण माध्यम के 12 मिलीलीटर, धोने और टी सेल अलगाव के लिए आगे बढ़ने से पहले 8 मिनट के लिए 37C पर दाग दिया गया था। CD8 T कोशिकाओं को WT C57BL/6, TfrcY20H/Y20H, OT-I CD45.1 के लिम्फ नोड्स से स्टेम सेल टेक्नोलॉजीज CD8 T सेल आइसोलेशन किट (19853, स्टेम सेल टेक्नोलॉजीज) और ईज़ी प्लेट मैग्नेट का उपयोग करके और IRP1 से अलग किया गया था। /2flox/flox Cre -/ plus ve चूहों को Miltenyi Biotech नेगेटिव CD8 T सेल आइसोलेशन किट (130-104-075, Miltenyi Biotech) का उपयोग करते हुए निर्माता के निर्देशों के अनुसार।

फ्लैट बॉटम टिशू कल्चर-उपचारित प्लेटों को 37C पर 2 घंटे के लिए एंटी-माउस CD3 (145-2C11) के 5 मिलीग्राम/मिलीलीटर के साथ लेपित किया गया और फिर पीबीएस से धोया गया। CD8 T कोशिकाओं को 100U/ml माउस IL -2 और 1 mg/ml एंटी-माउस CD28 (37.51) की अंतिम सांद्रता के साथ एक पूर्ण माध्यम में चढ़ाया गया था। TfrcY20H/Y20H, WT C57BL/6 कोशिकाओं या IRP1/2flox/flox Cre -/ plus ve को शामिल करने वाली संस्कृतियों को एक पूर्ण R10 माध्यम में किया गया। C57BL6/या OT -1 CD45.1 चूहों से WT T कोशिकाओं पर कम लोहे की सांद्रता के प्रभाव की जांच करने वाली संस्कृतियों को लौह मुक्त पूर्ण माध्यम में प्रदर्शित किया गया। CD8 T कोशिकाओं को प्रसार विश्लेषण के लिए सक्रियण के 72 घंटे बाद विश्लेषण के लिए 500, 000/ml की अंतिम सांद्रता पर चढ़ाया गया था या सक्रियण विश्लेषण के लिए सक्रियण के 24 घंटे बाद विश्लेषण के लिए 700, 000/ml विश्लेषण किया गया था।

IRP1/2flox/flox Cre -/ plus की संस्कृति के लिए, ve कोशिकाओं को या तो 4-hydroxytamoxifen (4-OHT) (H6278, सिग्मा/मर्क) के साथ 100nM या शुद्ध इथेनॉल की तुलनीय मात्रा में इलाज किया गया था। घुलनशील एंटी-सीडी28, आईएल -2, और प्लेट-बाउंड एंटी-सीडी3 के सक्रियण मिश्रण के साथ समवर्ती। जब सेल प्रसार का विश्लेषण किया जाना था, 24 घंटे के बाद संस्कृति कोशिकाओं को काटा गया, नीचे गिराया गया, और {{19} को हटाने के लिए 100U/ml माउस IL-2 और 1 mg/ml एंटी-माउस CD28 के साथ नए माध्यम में पुन: निलंबित किया गया }OHT या EtOH और विरोधी माउस CD3 के साथ लेपित कुओं में दोहराया गया। अतिरिक्त 48 घंटे के लिए कोशिकाओं को सुसंस्कृत किया गया और प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा प्रसार का मूल्यांकन किया गया।

लोहे के बचाव प्रयोगों के लिए आयरन सल्फेट (FeSO4) (F8633, सिग्मा एल्ड्रिच) या फेरिक अमोनियम साइट्रेट (FAC) (F5879, सिग्मा एल्ड्रिच) को कल्चर की शुरुआत से संकेतित सांद्रता में जोड़ा गया और मामले में फिर से भर दिया गया। IRP1/2flox/flox Cre -/ plus ve प्रयोगों के 24 घंटे बाद जब 4-OHT/EtOH को हटा दिया गया था।

मामूली संशोधनों के साथ वर्णित52 के रूप में बीएमडीसी सुसंस्कृत थे। संक्षेप में, C57BL/6 चूहों से लाल कोशिका लाइस्ड अस्थि मज्जा कोशिकाओं को 100ng/ml FLT3L (550702, Biolegend) के साथ पूर्ण R10 माध्यम में 1 मिलियन कोशिकाओं/मिलीलीटर पर पुन: निलंबित किया गया और उपयोग से पहले 7 दिनों के लिए सुसंस्कृत किया गया।

विधि विवरण

फ़्लो साइटॉमेट्री

40 मिमी सेल छलनी के माध्यम से यांत्रिक पृथक्करण द्वारा लिम्फ नोड्स या प्लीहा के एकल-कोशिका निलंबन किए गए थे। ट्रिस अमोनियम क्लोराइड (एसीटी) रेड सेल लिसिस बफर (2.06 ग्राम/एल ट्रिस बेस और 7.47 ग्राम/एल एनएच4सीएल, 1एल एच20, पीएच 7.2 के लिए समायोजित) का उपयोग करके तिल्ली के निलंबन में लाल कोशिकाओं को लाइस किया गया था।

फेफड़े से लिम्फोसाइटों को अलग करने के लिए, फेफड़ों को कैंची से कीमा बनाया गया था और पाचन माध्यम के 4 मिलीलीटर में 30 मिनट के लिए पचाया गया था: RPMI, 40U/ml DNase I (सिग्मा-एल्ड्रिच, कैटलॉग संख्या: D5025), और 0.4mg/ Collagenase IV (सिग्मा-एल्ड्रिच, कैटलॉग नंबर: C5138) का एमएल। एकल-कोशिका निलंबन को एक 70-सेल छलनी से कुचल कर बनाया गया था। कोशिकाओं को पिलाया गया और लाल कोशिकाओं को एसीटी रेड सेल लिसीज़ बफर के साथ lysed किया गया। एक 40 प्रतिशत /80 प्रतिशत Percoll (GE Healthcare 17-0891-02) लेयर आइसोलेशन का उपयोग तब फेफड़े के निलंबन में लिम्फोसाइटों को समृद्ध करने के लिए किया गया था। समृद्ध लिम्फोसाइटों को तब धोया जाता था और प्रवाह धुंधला होने से पहले गिना जाता था।

मुराइन परिधीय रक्त ल्यूकोसाइट्स के विश्लेषण के लिए, बीडी माइक्रो ट्रेनर ईडीटीए ट्यूब में टेल ब्लीड द्वारा एकत्र किए गए पूरे रक्त के 100 मिलीलीटर को एसीटी रेड सेल लिसीज़ बफर के 1 मिलीलीटर के साथ मिलाया गया और 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर लगाया गया। रक्त समाधान 5 मिनट के लिए 400 ग्राम पर नीचे चला गया था, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था, और ल्यूकोसाइट गोली को प्रवाह साइटोमेट्रिक धुंधला होने के लिए एक गोल तल 96 अच्छी तरह से प्लेट में स्थानांतरित किया गया था।

सक्रियण कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से नीचे की प्लेट में स्थानांतरित करने के बाद उचित समय बिंदुओं पर ऊतक सेल निलंबन या इन विट्रो सक्रिय कोशिकाओं को नीचे की ओर घुमाया जाता है, और पीबीएस के 200 एमएल के साथ धोया जाता है। कोशिकाओं को अंधेरे में 4C पर 20 मिनट के लिए FC रिसेप्टर ब्लॉक, फ्लोरोफोर-संयुग्मित एंटीबॉडी, और पीबीएस के 40 एमएल में एक फिक्स करने योग्य लाइव डेड डाई के उचित सांद्रता के साथ दाग दिया गया था। कोशिकाओं को धोया गया और सीधे एक इंविट्रोजन एट्यून या बीडी एलएसआर फोर्टेसा पर चलाया गया। कुछ प्रयोगों के लिए, कोशिकाओं को धोने से पहले अंधेरे में 4C पर 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड के 100ul में 10 मिनट के लिए तय किया गया था और इंट्रासेल्युलर एंटीजन को दागने के लिए सैपोनिन-आधारित पर्म बफर में विश्लेषण या पुनर्निलंबन किया गया था।

एनआईएच टेट्रामर सुविधा से अभिकर्मकों का उपयोग करके टेट्रामर धुंधला एंटीबॉडी धुंधला होने से पहले एफएसी बफर (2 प्रतिशत एफसीएस और 0.04 प्रतिशत सोडियम एज़ाइड के साथ पीबीएस) में 3 0 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर किया गया था।

माइटोकॉन्ड्रियल विश्लेषण के लिए, कोशिकाओं को मिटोट्रैकर ग्रीन (M7514, थर्मोफिशर साइंटिफिक) और माइटोट्रैकर डीप रेड (M22426, थर्मोफिशर साइंटिफिक) के साथ पूर्ण मीडिया में 100 एनएम पर धोया और दाग दिया गया था (या तो सीरम आयरन की कमी वाले रीकैपिटुलेटिंग कल्चर या R10 के लिए TfrcY20H / के लिए आयरन की कमी वाला माध्यम)। Y20H संस्कृतियों) निर्माता के निर्देशों के अनुसार 30 मिनट के लिए 37C पर। हमने पाया कि एमटीडीआर धुंधला प्रकाशित साहित्य के अनुरूप कार्बोनिल साइनाइड-पी-ट्राइफ्लोरोमेथोक्सीफेनिलहाइड्राज़ोन (एफसीसीपी) के साथ माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता के औषधीय विघटन के प्रति संवेदनशील था। एमटीडीआर से एमटीजी के अनुपात की गणना माइटोकॉन्ड्रिया की मात्रा के लिए सामान्यीकृत झिल्ली क्षमता को इंगित करने के लिए की गई थी .

इंट्रासेल्युलर साइटोकिन्स का पता लगाने के लिए स्प्लेनोसाइट्स को 0.1mg/ml SIINFEKL (OVA 257-264) के साथ राउंड बॉटम 96 वेल प्लेट में पूर्ण मीडिया में 2 मिलियन कोशिकाओं/200मिलीलीटर पर चढ़ाया गया था। Vac-sin Invivogen) ओवीए-विशिष्ट प्रतिक्रियाओं के लिए पेप्टाइड, वैक्सीनिया विशिष्ट प्रतिक्रियाओं के लिए 0.5mg/ml B8R पेप्टाइड (AS-64688, Anaspec) या 1ug/ml OVA (323-339), (Va- है, Invivogen) OT-II साइटोकिन उत्पादन को प्रेरित करने के लिए। 30mins के बाद 5mg / ml Brefeldin A जोड़ा गया और प्रवाह साइटोमेट्री के लिए सतह / इंट्रासेल्युलर धुंधला होने से पहले 4 घंटे के लिए कोशिकाओं को सुसंस्कृत किया गया।

आईसीएस द्वारा एमवीए-विशिष्ट सीडी4 प्रतिक्रियाओं का पता लगाने के लिए, दिन 7 बीएमडीसी को 5 0एनजी/एमएल एफएलटी3एल के साथ एक 96-वेल प्लेट के प्रति कूप 0.3 मिलियन सेल पर चढ़ाया गया। BMDCs को या तो उत्तेजित नहीं किया गया, गैर-विशेष रूप से CpG के 0.5mM (ODN 1826) (Tlrl-1826, Invivogen) से प्रेरित किया गया, या रातोंरात MVA-OVA के 1 के MOI से संक्रमित किया गया। अगले दिन कोशिकाओं को धोया गया और अप्रतिरक्षित या एमवीए-प्रतिरक्षित चूहों से 2 मिलियन स्प्लेनोसाइट्स जोड़े गए। 30 मिनट के बाद ब्रेफेलिन ए को 5 मिलीग्राम / एमएल की अंतिम एकाग्रता में जोड़ा गया था और प्रवाह साइटोमेट्री के लिए सतह / इंट्रासेल्युलर धुंधला होने से पहले 4 घंटे के लिए कोशिकाओं को सुसंस्कृत किया गया था। साइटोकिन-स्रावित सीडी4 टी कोशिकाओं को सीडी154 प्लस साइटोकाइन प्लस के रूप में परिभाषित किया गया था (सीपीजी स्पंदित डीसी या भोले चूहों से सीडी4 पर अस्थिर सीडी4 की तुलना में)।

उपयोग किए गए एंटीबॉडी के लिए मुख्य संसाधन तालिका देखें।

प्रमुख आबादी के लिए उदाहरण गेटिंग योजनाओं को पूरक विधियों के आंकड़े 1-6 में दर्शाया गया है। CD8 प्लस CD44 प्लस टेट्रामर प्लस CD8 T सेल्स (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 1A) और टेट्रामर पॉजिटिव CD8s पर मिनी हेक्सिडिन का प्रभाव (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 1B)। B220 प्लस IgD-CD95 प्लस जर्मिनल सेंटर B सेल्स (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 2A) और जर्मिनल सेंटर B सेल्स पर मिनी हेक्सिडिन का प्रभाव (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 2B)। सीडी4 प्लस सीडी44 प्लस सीएक्ससीआर5 प्लस पीडी -1 प्लस टी फॉलिक्युलर हेल्पर सेल्स (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 3ए) और टी फॉलिक्युलर हेल्पर सेल्स पर मिनी हेक्सिडिन का प्रभाव (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 3बी)। CD138 प्लस IgD- प्लाज्मा कोशिकाएं (अनुपूरक विधियाँ चित्र 4A) और प्लाज्मा पर मिनी हेक्सिडिन का प्रभाव (पूरक विधियाँ चित्र 4B)। CD8 प्लस CD45.1 प्लस OT-I CD8s (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 5A) और OT-I एफेक्टर सेल्स पर मिनी हेक्सिडिन का प्रभाव (सप्लीमेंट्री मेथड्स फिगर 5B)। ओटी-आई आईएफएन-गामा, टीएनएफ-अल्फा या आईएल -2 का गेटिंग आईसीएस द्वारा सीडी8 टी कोशिकाओं का उत्पादन (अनुपूरक तरीके चित्रा 6ए) और साइटोकिन-उत्पादक सीडी8 टी कोशिकाओं पर मिनी हेक्सिडिन का प्रभाव (अनुपूरक तरीके चित्रा 6बी)।

मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (क्यूआरटी-पीसीआर) द्वारा जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण

आरएनए को बाद में आरएनए (AM7020 थर्मोफिशर साइंटिफिक) में काटे गए लिवर एक्सप्लेंट्स या लंग लोब्स से निकाला गया था और आरएनएसी प्लस किट (क्यूआईएजीएन, 74136) के साथ जमे हुए सेल छर्रों को स्नैप किया गया था और एप्लाइड पर मात्रात्मक पीसीआर के लिए सीडीएनए (लाइफ टेक्नोलॉजीज, 4387406) में रिवर्स ट्रांसकोड किया गया था। बायोसिस्टम्स 6500 फास्ट रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम मशीन, जो मुख्य संसाधन तालिका में सूचीबद्ध टाकमैन एसेज़ का उपयोग करती है। निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार। जीन अभिव्यक्ति को 2 ^ ([अंतर्जात नियंत्रण जीन की सीटी] - [रुचि के जीन की सीटी]) के रूप में प्रस्तुत किया गया है। एचपीआरटी ने लिवर और फेफड़े क्यूआरटी-पीसीआर के लिए अंतर्जात नियंत्रण जीन का इस्तेमाल किया है। B2m का उपयोग CD8 T सेल संस्कृतियों के लिए एक नियंत्रण जीन के रूप में किया गया था क्योंकि T सेल सक्रियण के दौरान CT नहीं बदलता है।

ऊतक और सीरम लोहे के माप

टिश्यू को 3 घंटे के लिए 100C पर सुखाया गया और टिश्यू के टुकड़े के सूखे द्रव्यमान को मापा गया। ऊतक के टुकड़ों को 65C पर 20 घंटे के लिए 10 प्रतिशत ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड/30 प्रतिशत हाइड्रोक्लोरिक एसिड में पचाया गया। गैर-हीम लौह सामग्री क्रोमोजेन अभिकर्मक के साथ एसिड-डाइजेस्टेड ऊतक की प्रतिक्रिया द्वारा निर्धारित की गई थी जिसमें 0.1 प्रतिशत (w/v) बाथोफेनेंथ्रोलिनेडिसल्फोनिक एसिड (सिग्मा, 146617) और 0.8 प्रतिशत थियोग्लाइकोलिक एसिड (सिग्मा, 88652) शामिल थे, जो 535nm पर अवशोषण को मापते थे और तुलना करते थे। फेरिक अमोनियम साइट्रेट के एक मानक वक्र के रूप में वर्णित है। 54

कार्डिएक पंचर द्वारा प्राप्त 400 मिलीलीटर तक के म्यूरिन नमूनों के सीरम विश्लेषण के लिए एक बीडी माइक्रो ट्रेनर एसएसटी ट्यूब (बेक्टन डिकिंसन) में रखा गया था। जमे हुए रक्त के नमूने को घुमाकर सीरम प्राप्त किया गया था, जिसे 5 मिनट के लिए 8, 000 ग्राम पर घुमाया गया और 80C पर संग्रहीत किया गया। एबट आर्किटेक्ट c16000 स्वचालित विश्लेषक (एबॉट लेबोरेटरीज) और ऑक्सफोर्ड जॉन रेडक्लिफ अस्पताल, यूके में मल्टीजेंट आयरन किट का उपयोग करके सीरम आयरन की मात्रा निर्धारित की गई थी।

पिगलेट अध्ययन का विश्लेषण

पिग सीरम आयरन को क्लिनिकल बायोकैमिस्ट्री विभाग, OUHNHS में एक एबट आर्किटेक्ट c16000 स्वचालित विश्लेषक (एबट लेबोरेटरीज) पर एक स्वचालित परख का उपयोग करके मापा गया था। Biobest Laboratories Ltd, Edinburgh में निर्माता के निर्देशों के अनुसार एक वाणिज्यिक मोनोक्लोनल ब्लॉकिंग ELISA (M. hyopneumoniae डिटेक्शन किट, थर्मो साइंटिफिक ऑक्सॉइड, UK, K004311) का उपयोग करके सीरम के नमूनों का परीक्षण एम. हाइपोन्यूमोनिया एंटीबॉडी के लिए किया गया; नमूना ऑप्टिकल घनत्व (OD) परिणाम बफर नियंत्रण कुओं के माध्य OD का उपयोग करके ठीक किए गए थे। एंटीबॉडी को बेअसर करने वाले सीरम टाइटर्स (आइसोटाइप के अज्ञेयवादी) की गणना परिभाषित एंटी-एम के बंधन से प्राप्त सिग्नल के प्रतिशत अवरोधन के रूप में की गई थी। हाइपोन्यूमोनिया एचआरपी संयुग्मित एंटीबॉडी परख में शामिल है। वंशानुगत मातृ एंटीबॉडी के ऊपर एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं में सुधार का पता लगाने के लिए परिणाम 14 दिन (टीकाकरण के दिन) के सापेक्ष 28 दिन (टीकाकरण के 14 दिन बाद) में प्रतिशत ब्लॉक में सुधार के रूप में रिपोर्ट किए गए थे। प्रतिशत ब्लॉक=में सुधार (28 दिन पर प्रतिशत ब्लॉक) - (14 दिन पर प्रतिशत ब्लॉक)।

मरीन एंटी-ओवीए आईजीजी टाइटर्स

प्रतिरक्षित चूहों से ओवीए प्रोटीन के खिलाफ एंटीबॉडी टाइटर्स एलिसा द्वारा निर्धारित किए गए थे। संक्षेप में, प्लेटों को रातोंरात ओवीए प्रोटीन (इनविवोजेन एंडोफिट, 5 0 एमएल/अच्छी तरह से 10 मिलीग्राम/एमएल) के साथ लेपित किया गया। परीक्षण सेरा (तीन प्रतियों में) के विलयन को प्लेट में जोड़ा गया। प्लेट्स को पीबीएस-टी (पीबीएस, 0.05 प्रतिशत ट्वीन) से 6 बार धोया गया। ओवीए बाइंडिंग आईजीजी का पता लगाने के लिए, बकरी विरोधी माउस सेकेंडरी एब बाइंडिंग एक क्षारीय-फॉस्फेट-संयुग्मित बकरी एंटी-माउस आईजीजी (सिग्मा एल्ड्रिच ए -3562), इसके बाद आगे की धुलाई। pNPP सब्सट्रेट को जोड़ने के बाद OD405 को ELx800 प्लेट रीडर (बायो-टेक) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। जिस कमजोर पड़ने पर ओडी पहले पृष्ठभूमि के नीचे था और 3 एसडी एयू में एंडपॉइंट टिटर के रूप में दर्ज किया गया था।

इरिडा रोगियों में मानव सीरा एंटीबॉडी मापन

खसरा, कण्ठमाला, रूबेला, वैरिकाला, Ptx, FHA, PRN, Dtxd, Ttx, Hib, और स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया सेरोटाइप 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C के खिलाफ एंटीबॉडी सांद्रता (IgG), 19A, 19F, 23F सेरा में IRIDA रोगियों से उत्परिवर्ती TMPRSS6 एलील और गैर-लौह की कमी वाले जंगली-प्रकार TMPRSS6 नियंत्रणों को नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर पब्लिक हेल्थ एंड द एनवायरनमेंट, बिल्थोवेन, नीदरलैंड में मापा गया था। किसी भी मामले में TMPRSS6 रोगियों में औसत एंटीबॉडी सांद्रता काफी अधिक नहीं थी।

प्रोटोकॉल

वायुमार्ग की सूजन का मूल्यांकन करने के लिए, फेफड़े के नमूने फॉस्फेट बफर में 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ तय किए गए थे और i3S, पुर्तगाल में HEMS कोर सुविधा में पैराफिन में एम्बेडेड थे। अल्कोहल के एक ग्रेड के माध्यम से एक मार्ग द्वारा ज़ाइलीन और हाइड्रेशन के साथ deparaffinization के बाद, 3 मिमी-मोटी वर्गों को हेमेटोक्सिलिन-एओसिन के साथ दाग दिया गया था। पल्मोनरी सूजन के लिए हिस्टोपैथोलॉजी स्कोर को संशोधित मापदंड55 का उपयोग करके निम्नानुसार सौंपा गया था: 0, सामान्य, कोई सूजन नहीं; 1, सूजन का न्यूनतम, दुर्लभ foci; 2, हल्के, भड़काऊ सेल पेरिवास्कुलर / पेरिब्रोनचिओलर डिब्बे में बिना किसी या दुर्लभ वायुकोशीय विस्तार के साथ घुसपैठ करते हैं; 3, वायुकोशीय पैरेन्काइमा में मामूली विस्तार के साथ पेरिवास्कुलर / पेरिब्रोनचिओलर स्पेस की मध्यम, भड़काऊ कोशिका घुसपैठ; और 4, वायुकोशीय पैरेन्काइमा में पाए जाने वाले भड़काऊ foci के अधिक परिमाण के साथ पेरिवास्कुलर / पेरिब्रोनचिओलर स्पेस की गंभीर, भड़काऊ कोशिका घुसपैठ।

न्यूट्रोफिलिक घुसपैठ को 0 के रूप में वर्गीकृत किया गया था, जिसमें पॉलीमॉर्फोन्यूक्लियर ल्यूकोसाइट्स (पीएमएन) का कोई सबूत नहीं था; 1, छितरी हुई पीएमएन की उपस्थिति; 2, फोकल एकत्रीकरण के साथ लगातार पीएमएन; 3, बहुपक्षीय एकत्रीकरण के साथ लगातार पीएमएन। न्यूट्रोफिल घुसपैठ का मूल्यांकन क्लोरोसेटेट एस्टरेज़ (लेडर) दाग के साथ किया गया था, जो सेंट्रो हॉस्पिटलर डी साओ ओ जोआओ, पुर्तगाल में एनाटॉमिक पैथोलॉजी सर्विस में किया गया था। ओर्सिन धुंधला (आईपीएटीआईएमयूपी डायग्नोस्टिक्स, पुर्तगाल में प्रदर्शन किया गया) का उपयोग वायुकोशीय सेप्टा के लोचदार तंतुओं का मूल्यांकन करने और भड़काऊ घुसपैठ की उपस्थिति से जुड़े वायुकोशीय फेफड़े की संरचना के परिवर्तन की डिग्री का आकलन करने के लिए किया गया था। उपचार समूहों के पूर्व ज्ञान के बिना एक प्रशिक्षित रोगविज्ञानी सहित एक अंधे तरीके से दो जांचकर्ताओं द्वारा अनुभाग बनाए गए थे। माध्य स्कोर की गणना की गई और उपचार समूहों के बीच तुलना की गई। प्लीहा वर्गों को समान रूप से संसाधित किया गया था, लेकिन मानक प्रक्रियाओं का उपयोग करके फेरिक आयरन के लिए पर्ल्स की प्रशियाई नीली प्रतिक्रिया के साथ दाग दिया गया था।

सीहॉर्स मेटाबोलिक फ्लक्स विश्लेषण द्वारा एटीपी उत्पादन दर

ATP उत्पादन दर और इसमें माइटोकॉन्ड्रियल और ग्लाइकोलाइटिक चयापचय के सापेक्ष योगदान की गणना Agilent Seahorse XF रीयल-टाइम ATP दर परख किट (103592-100) और एक Aligent XF96 उपकरण का उपयोग करके निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार की गई थी। संक्षेप में CD8 T कोशिकाओं को मीडिया में सक्रियण के 48 घंटों के बाद काटा गया था, निर्दिष्ट ट्रांसफरिन सांद्रता के साथ धोया गया था, और Seahorse परख मीडिया (1mM पाइरूवेट, 2mM L-glutamine और 10mM ग्लूकोज के साथ असंबद्ध RPMI pH 7.4 0) में फिर से जोड़ा गया था। और 150, 000 व्यवहार्य कोशिकाओं/वेल को पॉली-डी-लाइसिन लेपित एक्सएफ96 माइक्रोप्लेट में एलिकोट किया गया था। ऑक्सीजन की खपत दर (OCR) और बाह्य अम्लीकरण दर (ECAR) को 1.5 मिमी ओलिगोमाइसिन और 0.5 मिमी रोटेनोन / एंटीमाइसिन ए के अनुक्रमिक जोड़ पर मापा गया।

ल्यूमिनेसेंस द्वारा एटीपी मात्रा का ठहराव

निर्माता के निर्देशों के अनुसार ATP उत्पादन को सेल टिटर-ग्लो (Promega G7570) का उपयोग करके मापा गया था। संक्षेप में CD8 T कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 'सेल कल्चर' में वर्णित के रूप में सुसंस्कृत किया गया था (और इसलिए कोशिका विभाजन की शुरुआत से पहले विश्लेषण किया गया), नीचे काता गया, और मध्यम के 50 एमएल (लौह की कमी वाली संस्कृतियों के लिए लौह मुक्त, सामान्य RPMI के साथ) में फिर से जोड़ा गया TfrcY20H/Y20H संस्कृतियों के लिए 10 प्रतिशत FCS), एक सफेद-दीवार वाले अपारदर्शी 96-वेल प्लेट में स्थानांतरित किया गया जो ल्यूमिनेसेंस माप के लिए उपयुक्त है और सेल टिटर-ग्लो का 50 एमएल जोड़ा गया था। कुओं को मिश्रित किया गया था और चमक, एटीपी सामग्री के अनुपात में, एक क्रोमेगा ग्लोमैक्स ल्यूमिनोमीटर पर मापा गया था।

परिमाणीकरण और सांख्यिकीय विश्लेषण

एक ही उम्र और लिंग के चूहों के साथ विवो प्रयोगों में मानक यादृच्छिककरण प्रक्रियाओं का उपयोग किया गया था (प्रायोगिक और नियंत्रण चूहों को लिटरमेट्स के बीच से यादृच्छिक रूप से चुना गया था)। प्रयोगों और आकलन के दौरान जांचकर्ताओं को आवंटन के लिए अंधा नहीं किया गया था। प्रत्येक प्रयोग के लिए चूहों की आवश्यक संख्या नस्ल वाले जानवरों की उपलब्धता, शक्ति गणना, चूहों के समान उपभेदों के साथ प्रयोग करने के पूर्व अनुभव और पायलट प्रयोगों के डेटा से निर्धारित की गई थी। प्रिज्म वर्जन 6 (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर) का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए। विशिष्ट सांख्यिकीय परीक्षणों का विवरण फिगर लेजेंड्स में दिया गया है।

TMPRSS6 IRIDA रोगियों की एंटीबॉडी सांद्रता के लिए, हमने SPSS (IBM SPSS सांख्यिकी, संस्करण 22) के साथ सांख्यिकीय विश्लेषण किया। स्मिरनोव-कोल्मोगोरोव परीक्षणों और हिस्टोग्राम भूखंडों के दृश्य निरीक्षण द्वारा सामान्यता के लिए डेटा की जाँच की गई। सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए गैर-सामान्य रूप से वितरित डेटा को लघुगणकीय रूप से रूपांतरित किया गया था। जब प्रतिभागियों में एंटी-डिप्थीरिया सीरम IgG सांद्रता R 0$1IU/ml, 56 एंटी-टेटनस IgG> 0.5IU/ml, 57 एंटी-Hib IgG> 1 था, तो हमने प्रतिरक्षात्मक प्रतिक्रिया को सुरक्षात्मक के रूप में परिभाषित किया। 0mg/ml,57 एंटी-PCV IgG R 0$35 mg/ml58 और एंटी-खसरा IgG R 0$12IU/ml.59।

एंटी-पर्टुसिस IgG.57 के लिए कोई सुरक्षात्मक सीरम सांद्रता स्थापित नहीं की गई है, बीच-समूह प्रभावों के लिए, स्वतंत्र नमूना t-परीक्षण या स्वतंत्र नमूना गैर-पैरामीट्रिक परीक्षण का उपयोग किया गया था। हमने सीरम IgG सांद्रता पर समूह (IRIDA बनाम नियंत्रण) के प्रभाव का आकलन करने के लिए सहप्रसरण (ANCOVA) का विश्लेषण किया। समूह को एक निश्चित प्रभाव के रूप में परिभाषित किया गया था और हमने क्रमिक रूप से टीके की प्रतिक्रिया के ज्ञात भविष्यवक्ताओं को जोड़ा: लिंग, आयु, एचबी, और टीएसएटी मॉडल के कोवरिएट्स के रूप में। हमने IRIDA और नियंत्रण समूहों के बीच सेरोकनवर्जन की तुलना करने के लिए पियर्सन ची-स्क्वायर परीक्षण और फिशर का सटीक परीक्षण किया।

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