सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड मेलानोजेनेसिस को कैसे कम करता है और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करता है?

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सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड मेलानोसाइट्स में मेलानोजेनेसिस को प्रेरित करता है और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करता है

1त्वचाविज्ञान विभाग, तीसरा जियांग्या अस्पताल, सेंट्रल साउथ यूनिवर्सिटी, चांग्शा, चीन

2 यूरोलॉजी विभाग, तीसरा जियांग्या अस्पताल, सेंट्रल साउथ यूनिवर्सिटी, चांग्शा, चीन

3मेडिसिन एक्सपेरिमेंटल सेंटर, तीसरा जियांग्या अस्पताल, सेंट्रल साउथ यूनिवर्सिटी, चांग्शा, चीन

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सार: रंजकता विकारों के मुख्य भाग के रूप में, त्वचा के अपच संबंधी रोग जैसे कि विटिलिगो और एक्रोमिक नेवस बहुत आम हैं और अब अधिक ध्यान आकर्षित करते हैं। अपचयन के रोगजनन में मेलेनोसाइट शिथिलता और हानि शामिल है, जो संभवतः आनुवंशिकता, स्वप्रतिरक्षा और ऑक्सीडेटिव तनाव के कारण होते हैं। उनमें से,ऑक्सीडेटिव तनावएक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है; हालांकि, कुछ नैदानिक ​​उपचार ऑक्सीडेटिव तनाव से निपट सकते हैं। जैसा कि सूचित किया गया,सिस्टांचेडेजर्टिकोला बहुशर्करा(सीडीपी) एक प्रभावी एंटीऑक्सीडेंट है; उसके आधार पर, हमने मेलानोसाइट्स में इसकी भूमिका का मूल्यांकन किया और तंत्र का और खुलासा किया। इस अध्ययन में, हमने पाया कि सीडीपी मानव एपिडर्मल मेलानोसाइट्स (एचईएम) और माउस मेलेनोमा बी16एफ10 कोशिकाओं में मेलेनोजेनेसिस को बढ़ावा दे सकता है, इसने ज़ेब्राफिश में रंजकता को भी प्रेरित किया। इसके अलावा, सीडीपी माइटोजेन-एक्टिवेटेड प्रोटीन किनसे (एमएपीके) सिग्नल पाथवे को सक्रिय कर सकता है, फिर माइक्रोफथाल्मिया-जुड़े ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर (एमआईटीएफ) और डाउनस्ट्रीम जीन टीवाईआर, टीआरपी1, टीआरपी2 और आरएबी27ए की अभिव्यक्ति को विनियमित करता है। अन्यथा, हमने पाया कि सीडीपी मेलानोसाइट्स में H2O 2- प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी और एपोप्टोसिस को शामिल कर सकता है। आगे के सबूतों से पता चला कि सीडीपी एनआरएफ2/एचओ-1 एंटीऑक्सीडेंट मार्ग को बढ़ा सकता है और इंट्रासेल्युलर आरओएस को परिमार्जन कर सकता है। संक्षेप में, सीडीपी मेलानोजेनेसिस को बढ़ावा दे सकता है और मेलानोसाइट्स को ऑक्सीडेटिव तनाव की चोट से रोक सकता है, यह सुझाव देता है कि सीडीपी मेलानोसाइट्स की सामान्य स्थिति को बनाए रखने में मदद करता है। इस प्रकार, सीडीपी अपच संबंधी रोगों के उपचार के लिए एक नई दवा हो सकती है।

कीवर्ड:

सिस्टांचे डेजर्टिकोला बहुशर्करा, अपचयन रोग, मेलानोसाइट, मेलानोजेनेसिस, NRF2,ऑक्सीडेटिव तनाव

1 परिचय

त्वचा अपचयन रोग, जैसे कि विटिलिगो और अक्रोमिक नेवस, को पैची या व्यापक त्वचा अपचयन की विशेषता होती है। हालांकि त्वचा के घाव शायद ही कभी गंभीर शारीरिक चोट का कारण बनते हैं, वे रोगी की उपस्थिति को प्रभावित करते हैं और एक गंभीर मनोवैज्ञानिक बोझ, यहां तक ​​कि मानसिक स्वास्थ्य विकार भी पैदा करते हैं। अपचयन में प्रमुख पैथोलॉजिकल परिवर्तनों में मेलेनोसाइट डिसफंक्शन और हानि शामिल है, जो मेलेनिन संश्लेषण और परिवहन को बहुत प्रभावित करता है, जिससे त्वचा में अपर्याप्त मेलेनिन संचय होता है।

अपचयन में शामिल तंत्र वर्तमान में अज्ञात हैं, लेकिन अध्ययनों ने कुछ संबंधित कारकों की पहचान की है। एक ओर, मेलानोसाइट फ़ंक्शन आंशिक रूप से माइक्रोफ़थाल्मिया-संबंधित ट्रांसक्रिप्शन फ़ैक्टर (MITF) पर निर्भर करता है, जो कि टाइरोसिनेस (TYR), टायरोसिनेस-संबंधित प्रोटीन 1 (TRP1), tyrosinase-संबंधित सहित मेलानोजेनेसिस-संबंधित जीन की अभिव्यक्ति को बढ़ावा देने के लिए जाना जाता है। प्रोटीन 2 (TRP2), रास-संबंधित प्रोटीन रैब-27a (RAB27A) और फ़ासिन एक्टिन-बंडलिंग प्रोटीन 1 (FSCN1)। इन जीनों में, TYR एल-डोपा को ऑक्सीकरण करके मेलेनिन संश्लेषण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। दूसरी ओर, अध्ययन कई कारकों के संयोजन का सुझाव देते हैं जो आनुवंशिकता, पर्यावरण, स्वप्रतिरक्षा और ऑक्सीडेटिव तनाव सहित मेलानोसाइट्स के नुकसान के लिए जिम्मेदार हो सकते हैं। 6-9 इन कारकों में से, ऑक्सीडेटिव तनाव को सबसे महत्वपूर्ण माना जाता है। .

के तंत्रऑक्सीडेटिव तनावअपचयन का कारण आंशिक रूप से प्रकट हुआ है; प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) अधिभार एक प्रमुख कारक है। 10 डीपिग्मेंटेशन में आरओएस अधिभार में प्रो-और एंटीऑक्सिडेंट सिस्टम के बीच एक असंतुलन शामिल है। 11 इस असंतुलन में भाग लेने वाले तत्वों में से एक परमाणु कारक एरिथ्रोइड है 2-संबंधित फ़ैक्टर 2/एंटीऑक्सीडेंट प्रतिक्रिया तत्व (NRF2/ARE) एंटी-ऑक्सीडेंट पाथवे इम्पेयरमेंट। 12 पाथवे में NRF2 और हीम ऑक्सीजनेज़ जैसे एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम होते हैं -1 (HMOX-1, HO-1) , कैटेलेज (CAT), ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज 1 (GPX1), और NAD (P) H क्विनोन डिहाइड्रोजनेज 1 (NQO1)। 13 जब मेलानोसाइट्स अत्यधिक ROS के संपर्क में आते हैं, तो NRF2 नाभिक में स्थानांतरित हो सकता है और संरक्षित ARE से जुड़ सकता है, फिर बढ़ावा देता है एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों की अभिव्यक्ति। हालांकि, कुछ अपचयन रोगों में, जैसे कि विटिलिगो, एक बिगड़ा हुआ NRF2 / ARE एंटीऑक्सिडेंट मार्ग प्रभावी रूप से ROS को परिमार्जन नहीं कर सकता है। आमतौर पर अपचयन में उपयोग किए जाने वाले नैदानिक ​​​​उपचारों में सामयिक या प्रणालीगत कॉर्टिकोस्टेरॉइड्स, कैल्सीनुरिन अवरोधक, संकीर्ण-बैंड पराबैंगनी बी (NBUVB; 311 एनएम) शामिल हैं। , 308-एनएम एक्सीमर लाइट, ऑटोलॉगस एपिडर्मल ट्रांसप्लांटेशन, और पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) थेरेपी। कॉर्टिकोस्टेरॉइड्स और कैल्सीनुरिन इनहिबिटर असामान्य प्रतिरक्षा सक्रियण को कम कर सकते हैं, जबकि फोटोथेरेपी का उपयोग प्रथम-पंक्ति उपचार के रूप में किया जाता है; विशेष रूप से, NBUVB मेलानोसाइट प्रसार और टी-सेल विनाश को उत्तेजित करता है, 16 जबकि 308- एनएम एक्सीमर लाइट टी कोशिकाओं एपोप्टोसिस को प्रेरित करता है। इसके अलावा, टीसीएम उपचारों के प्रभाव मेलेनोजेनेसिस को बढ़ावा देने से संबंधित हैं। 18 कुछ हद तक, ये विधियां अपच में सुधार के लिए सहायक हैं, लेकिन रोग की प्रगति को नियंत्रित करना चुनौतीपूर्ण बना हुआ है। विशेष रूप से ऑक्सीडेटिव तनाव के लिए नए उपचार विकसित करना आवश्यक है, जिसे पहले उपेक्षित किया गया था।

सिस्टांचे डेजर्टिकोला'रेगिस्तान जिनसेंग' के रूप में जाना जाता है। 19 इसके घटक इथेनॉल से प्रेरित जिगर की चोट और आंतों की सूजन हाइपरप्लासिया में उपयोगी होते हैं; यह एक विरोधी थकान, विरोधी भड़काऊ, और एंटी-ट्यूमर अभिकर्मक के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है। 20-22 हाल ही में, गुओ एट अल ने बताया किसिस्टांचे डेजर्टिकोला बहुशर्करा(सीडीपी), इसके मुख्य घटकों में से एक, एंटीऑक्सीडेंट और हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि 20; अन्य दो अध्ययनों ने कोशिकाओं को ऑक्सीजन-ग्लूकोज की कमी/रीपरफ्यूजन और ऑस्टियोपोरोसिस की स्थिति में चोट से बचाने में इसकी भूमिका की पहचान की। 23,24 हालांकि, अपचयन रोगों में सीडीपी की भूमिका को स्पष्ट नहीं किया गया है। यहां, हमने यह पुष्टि करने का लक्ष्य रखा है कि क्या सीडीपी cऑक्सीडेटिव तनावमेलानोजेनेसिस को प्रभावित कर सकता है और मेलानोसाइट्स को ऑक्सीडेटिव तनाव से बचा सकता है।

2.|सामग्री और विधियां

2.1|रसायन और एंटीबॉडी

सिस्टांचे डेजर्टिकोलाबहुशर्करा(CDP) और l-dopa को Yuanye Biotec (शुद्धता 98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर; शंघाई, चीन) से खरीदा गया था। हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2), डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO), NaOH, ट्राइटन X-100, 4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-yl-2,5-डिपेनहिलटेट्राज़ोलियम ब्रोमाइड ( MTT), और एक एनेक्सिन V-FITC एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदी गई थी। बायोशर्प (हेफ़ेई, चीन) से 4 प्रतिशत तटस्थ पैराफॉर्मलडिहाइड खरीदा गया था; और एक इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग किट (एलेक्सा फ्लोर 488) और 2, 7-डाइक्लोरोफ्लोरेसिन-डायसेटेट (डीसीएफएच-डीए) बायोटाइम बायोटेक (शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे। एक फोंटाना-मैसन स्टेन किट और एक न्यूक्लियोप्लाज्मिक प्रोटीन एक्सट्रैक्शन किट स्लोअरबियो (बीजिंग, चीन) से खरीदी गई थी। ह्यूमन मेलानोसाइट ग्रोथ सप्लीमेंट (HMGS), Dulbecco का संशोधित ईगल मीडियम (DMEM), और मीडियम 254 गिब्को से खरीदा गया था। भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) BI (किबुत्ज़ बीट-हैमेक, इज़राइल) से खरीदा गया था। -actin, TYR, TRP2, RAB27A, FSCN1, ERK, p-ERK, JNK, p-JNK, के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी

p38, p-p38, NRF2, और HO -1 सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी से खरीदे गए थे, MITF के लिए एक प्राथमिक एंटीबॉडी सेंट जॉन्स लेबोरेटरी से खरीदा गया था, p-MITF के लिए एक प्राथमिक एंटीबॉडी एफ़िनिटी बायोसाइंसेस से खरीदा गया था, जो एक प्राथमिक एंटीबॉडी है। GAPDH के लिए Bioworld से खरीदा गया था, और TRP1 के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी EMD Millipore से खरीदा गया था।

2.2| सेल संस्कृति और उपचार

माउस मेलेनोमा B16F10 कोशिकाओं को मध्यम DMEM में 10 प्रतिशत FBS और 1 प्रतिशत पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन एंटीबायोटिक मिश्रण के साथ सुसंस्कृत किया गया था। मानव एपिडर्मल मेलानोसाइट्स (एचईएम) को मानव चमड़ी से अलग किया गया था (हमारे पिछले अध्ययन को देखें) और एचएमजीएस, 5 प्रतिशत एफबीएस, और 1 प्रतिशत पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन एंटीबायोटिक मिश्रण के साथ पूरक मध्यम 254 में सुसंस्कृत किया गया था। सभी कोशिकाओं को 5 प्रतिशत CO2 के साथ 37 डिग्री पर एक गीले इनक्यूबेटर में सुसंस्कृत किया गया था। सीडीपी को डीएमएसओ में भंग कर दिया गया और पतला कर दिया गया

उपयोग से पहले माध्यम के साथ, डीएमएसओ की अंतिम सांद्रता 0.1 प्रतिशत से कम थी। H2O2 उपयोग करने से पहले माध्यम से पतला था।

2.3|Zebrafish संवर्धन और उपचार

zebrafish भ्रूण और माध्यम EzeRinka Biotech से खरीदे गए थे। प्रायोगिक प्रोटोकॉल को सेंट्रल साउथ यूनिवर्सिटी की एथिक्स कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया था। जेब्राफिश को प्रकाश से 37 डिग्री दूर 12-वेल प्लेट्स में सुसंस्कृत किया गया और सीडीपी के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया। एक उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग प्रतिदिन जेब्राफिश के सिर और पूंछ में मेलेनिन को देखने और रिकॉर्ड करने के लिए किया गया था। अवलोकन के बाद, हमने माध्यम बदल दिया और सीडीपी को फिर से जोड़ा। जेब्राफिश की पूंछ में मेलेनिन घनत्व को इमेज जे के साथ मापा गया था, और मूल्यों को एकीकृत ऑप्टिकल घनत्व (आईओडी) के रूप में प्रस्तुत किया गया है।

2.4| सेल व्यवहार्यता

सेल व्यवहार्यता को एमटीटी परख का उपयोग करके मापा गया था। CDP की साइटोटोक्सिसिटी की जांच करने के लिए, HEMs और B16F1 0 कोशिकाओं को 2 × 1 {{3 0}} के घनत्व पर 96-वेल प्लेट्स में प्रत्यारोपित किया गया। कोशिकाओं को प्लेटों से जोड़ा गया था। कोशिकाओं को 24, 48 या 72 घंटों के लिए सीडीपी के विभिन्न सांद्रता (0, 2.5, 5, 10, 20, 40, 80, 160 और 320 कुरूप / एमएल) के साथ इलाज किया गया था। माप से पहले, प्रत्येक कुएं में 20 μL MTT जोड़ा गया था और प्लेटों को 4 घंटे के लिए 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। उसके बाद, हमने सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया और फॉर्मेज़ान क्रिस्टल को भंग करने के लिए प्रत्येक कुएं में 160 μL DMSO जोड़ा। 490 एनएम पर अवशोषण मान एक मल्टीमोड प्लेट रीडर (पर्किनएल्मर) द्वारा मापा गया था। H2O 2- प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी स्थिति में CDP के प्रभाव की जांच करने के लिए, HEMs, और B16F10 कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में 4 × 103 कोशिकाओं / कुएं के घनत्व पर चढ़ाया गया था। कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए सीडीपी (0, 20, 40, या 80 कुरूप / एमएल) के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था, जिस बिंदु पर हमने एच 2 ओ 2 (अंतिम सांद्रता: एचईएम के लिए 500 माइक्रोन और बी 16 एफ 10 कोशिकाओं के लिए 1.0 मिमी) को प्रत्येक कुएं में जोड़ा। और 24 घंटे के लिए कोशिकाओं को इनक्यूबेट किया। हमने सीडीपी-उपचारित और नकारात्मक नियंत्रण (एनसी) समूह स्थापित किए। पता लगाने के चरण पहले वर्णित के समान थे।

2.5|मेलेनिन सामग्री का NaOH परख

कोशिकाओं को {{0}} मिमी पेट्री डिश में सुसंस्कृत किया गया और 48 घंटों के लिए अलग-अलग सांद्रता (0, 20, 40, और 80 कुरूप / एमएल) पर सीडीपी के साथ इलाज किया गया, फिर ट्रिप्सिन के साथ पच गया और 1 में एकत्र किया गया। 5-एमएल ट्यूब। हमने कोशिकाओं को दो बार दोहरे आसुत जल से धोया, उन्हें 1 एमएल इथेनॉल में फिर से निलंबित कर दिया, और मेलेनिन को छोड़ने के लिए उन्हें भंवर में डाल दिया। फिर हमने मिश्रण (200 ग्राम, 5 मिनट) को सेंट्रीफ्यूज किया और सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया, प्रत्येक ट्यूब में 10 प्रतिशत डीएमएसओ (1 मिमी NaOH समाधान के साथ पतला) का 1 एमएल जोड़ा, और तलछट को निलंबित कर दिया। हमने मेलेनिन को भंग करने के लिए 1 घंटे के लिए 80 डिग्री पर पानी के स्नान में निलंबन को ऊष्मायन किया। अंत में, हमने तरल के 200 μL को एक 96-वेल प्लेट में स्थानांतरित कर दिया और 470 एनएम पर अवशोषण मान को मापने के लिए एक मल्टीमोड प्लेट रीडर का उपयोग किया।

2.6|टायरोसिनेस गतिविधि माप

कोशिकाओं को {0}} मिमी पेट्री डिश में सुसंस्कृत किया गया और माप से पहले सीडीपी के साथ इलाज किया गया, ट्रिप्सिन के साथ पचाया गया और 1.5-एमएल ट्यूबों में एकत्र किया गया, और फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) के साथ दो बार धोया गया। ) हमने प्रत्येक नमूने से 106 कोशिकाओं को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित किया और सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया, फिर सेल गोली में 1 मिली 0.5 प्रतिशत ट्राइटन एक्स -100 जोड़ा और संग्रहीत किया 15 मिनट के लिए 0 डिग्री पर मिश्रण। इसके बाद, हमने सब्सट्रेट के रूप में 1 एमएल एल-डोपा (1 मिमी, 0.1 एम फॉस्फेट बफर के साथ पतला) जोड़ा और समाधान मिलाया, मिश्रण के 200 μL को एक 96-वेल प्लेट में ले जाया गया। तुरंत, और 10 मिनट (A10) पर माप को दोहराते हुए, मल्टीमोड प्लेट रीडर का उपयोग करके 475 एनएम पर अवशोषक मान (A0) को मापा। टायरोसिनेस गतिविधि की गणना (ए 10- ए 0) / 105 द्वारा की गई थी, और परिणाम प्रतिशत (प्रतिशत) बनाम नकारात्मक नियंत्रण के रूप में व्यक्त किए जाते हैं।

2.7| फोंटाना-मेसन मेलेनिन धुंधला हो जाना

कोशिकाओं को 50 प्रतिशत घनत्व प्राप्त करने तक 12-वेल प्लेट्स में सुसंस्कृत किया गया था। उपचार के बाद, कोशिकाओं को 30 मिनट के लिए 4 प्रतिशत तटस्थ पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ तय किया गया और आसुत जल से धोया गया। फिर हमने प्रत्येक कुएं में 500 μL फोंटाना अमोनिया-चांदी का घोल मिलाया और मेलेनिन को डाई करने के लिए प्लेटों को 16 घंटे के लिए अंधेरे में संग्रहीत किया। इसके बाद, हमने कोशिकाओं को आसुत जल से पांच बार (प्रत्येक बार 1 मिनट) धोया और उन्हें 500 μL हाइपोसल्फाइट में 5 मिनट के लिए भिगो दिया; अंत में, हमने हाइपोसल्फाइट को हटा दिया और 1 मिनट के लिए आसुत जल से कोशिकाओं को फिर से धो दिया। फिर हमने मेलेनिन को देखने और रिकॉर्ड करने के लिए एक उल्टे माइक्रोस्कोप का इस्तेमाल किया।

2.8|आरएनए निष्कर्षण और मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन

कोशिकाओं को 6-वेल प्लेट्स में सुसंस्कृत किया गया था। उपचार के बाद, कोशिकाओं को ट्रिप्सिन के साथ पचाया गया और 1.5-एमएल ट्यूबों में एकत्र किया गया। हमने पीबीएस के साथ कोशिकाओं को दो बार धोया, फिर 1 एमएल लिसिस बफर में जोड़ा, मिश्रण को भंवर में डाल दिया, और कोशिकाओं को पूरी तरह से लाइस करने के लिए 5 मिनट के लिए ट्यूबों को बर्फ पर रखा। RNA को कुल RNA किट (ओमेगा बायो-टेक) और रिवर्स-ट्रांसकोड (RT) का उपयोग करके ReverTra Ace qPCR RT मास्टर मिक्स (TOYOBO) का उपयोग करके निकाला गया था। KODSYBR qPCR मिक्स (TOYOBO) का उपयोग करके मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (PCR) किया गया था। RT मिश्रण की प्रतिक्रिया मात्रा 20 μL थी, जबकि PCR मिश्रण की प्रतिक्रिया मात्रा 20 μL (cDNA 1-8 μL, MIX 10 μL, प्राइमर F 1 μL, प्राइमर R 1 μL, DEPC H2O को 20 μL में जोड़ें। ) प्रयोग प्रोटोकॉल के अनुसार किए गए थे। प्राइमरों के अनुक्रम तालिका S1 में सूचीबद्ध हैं।

2.9|प्रोटीन निष्कर्षण और पश्चिमी सोख्ता / इम्यूनोफ्लोरेसेंस

कोशिकाओं को 100-मिमी पेट्री डिश में सुसंस्कृत किया गया था। उपचार के बाद, कोशिकाओं को ट्रिप्सिन के साथ पचाया गया और 1.5-एमएल ट्यूबों में एकत्र किया गया। हमने पीबीएस के साथ कोशिकाओं को दो बार धोया, फिर RIPA lysis बफर (थर्मो फिशर) के 500 μL में 1 मिमी फेनिलमिथाइलसल्फोनील फ्लोराइड (थर्मो फिशर) और 1: 100 पतला फॉस्फेट अवरोधक कॉकटेल (Roche) के साथ पूरक। निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार न्यूक्लियोप्लाज्मिक प्रोटीन एक्सट्रैक्शन किट का उपयोग करके परमाणु और साइटोप्लाज्म प्रोटीन को निकाला गया था। हमने ट्यूबों को 30 मिनट के लिए बर्फ पर रखा और कोशिकाओं को पूरी तरह से नष्ट करने के लिए हर 5 मिनट में उन्हें भंवर में डाल दिया। हमने कोशिकाओं (200 ग्राम, 4 डिग्री, 15 मिनट) को सेंट्रीफ्यूज किया, सतह पर तैरनेवाला को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित कर दिया, और बीसीए प्रोटीन परख किट (कीजेन बायोटेक) का उपयोग करके कुल प्रोटीन की एकाग्रता को मापा। हमने प्रोटीन को 10 मिनट के लिए 100 डिग्री पर 5× लोडिंग बफर (बायोटाइम बायोटेक, चीन) के साथ उबाला, फिर उन्हें −80 डिग्री पर संग्रहीत किया। Polyacrylamide gel वैद्युतकणसंचलन (PAGE) विधि का उपयोग पश्चिमी सोख्ता में किया गया था, और प्रत्येक समूह के 20 कुरूप प्रोटीन को अलग किया गया था और एक पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड झिल्ली में स्थानांतरित किया गया था। प्रतिजन अवरोधन के बाद, हमने झिल्ली को 1:100 पतला प्राथमिक एंटीबॉडी में 16 घंटे के लिए 4 डिग्री पर इनक्यूबेट किया, फिर झिल्ली को PBST से धोया और इसे 1:10 000 पतला फ्लोरोसेंट सेकेंडरी एंटीबॉडी में 1 घंटे के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया। . ओडिसी CLx इमेजिंग सिस्टम (LI-COR) का उपयोग करके प्रतिदीप्ति तीव्रता का पता लगाया गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग किट (एलेक्सा फ्लोर) का उपयोग करके इम्यूनोफ्लोरेसेंस किया गया था

488) प्राथमिक एंटीबॉडी के 1:100 कमजोर पड़ने के साथ।

2.10|सेल एपोप्टोसिस माप

कोशिकाओं को {{0}} मिमी पेट्री डिश में सुसंस्कृत किया गया था और 24 घंटे के लिए सीडीपी के विभिन्न सांद्रता (0, 20, 40, और 80 कुरूप/एमएल) के साथ इलाज किया गया था, और H2O2 जोड़ा गया था ( अंतिम सांद्रता: एचईएम के लिए 500 माइक्रोन, बी16एफ10 कोशिकाओं के लिए 1.0 मिमी) प्रत्येक कुएं के लिए और एक और 24 घंटे के लिए ऊष्मायन। हमने सीडीपी-उपचारित और एनसी समूह भी स्थापित किए। उपचार के बाद, हमने EDTA मुक्त ट्रिप्सिन के साथ कोशिकाओं को पचा लिया और उन्हें ट्यूबों में एकत्र किया, फिर कोशिकाओं को दो बार पीबीएस से धोया और उन्हें पीबीएस के 100 μL में फिर से निलंबित कर दिया। कोशिकाओं को प्रोटोकॉल के अनुसार एनेक्सिन वी-एफआईटीसी एपोप्टोसिस डिटेक्शन किट के साथ दाग दिया गया था और फ्लो साइटोमेट्री (एफसीएम) द्वारा पता लगाया गया था। फ्लोजो सॉफ्टवेयर का उपयोग एपोप्टोसिस दर का विश्लेषण करने के लिए किया गया था।

2.11| इंट्रासेल्युलर आरओएस माप

कोशिकाओं को अच्छी तरह से प्लेटों में सुसंस्कृत किया गया था और 24 घंटे के लिए सीडीपी के विभिन्न सांद्रता (0, 20, 40, और 80 कुग/एमएल) के साथ इलाज किया गया था, जिसमें हमने एच2ओ2 (अंतिम सांद्रता: 500) जोड़ा था। एचईएम के लिए माइक्रोन,

1.0 मिमी B16F10 कोशिकाओं के लिए) प्रत्येक कुएं के लिए, उन्हें दूसरे के लिए इनक्यूबेट किया

24 घंटे और सीडीपी-उपचारित और एनसी समूह स्थापित करें। उपचार के बाद, हमने सभी माध्यम और एफबीएस को हटाने के लिए पीबीएस के साथ कोशिकाओं को दो बार धोया, फिर डीसीएफएच-डीए जांच को मध्यम के साथ 1:1000 तक पतला किया और इसे प्रत्येक कुएं में जोड़ा। हमने कोशिकाओं को 37 डिग्री पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया और उन्हें सीरम-मुक्त माध्यम से तीन बार धोया। हमने एक का इस्तेमाल किया

प्रतिदीप्ति का निरीक्षण और रिकॉर्ड करने के लिए उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप, फिर प्रतिदीप्ति तीव्रता को मापने के लिए ImageJ का उपयोग किया।

2.12|सांख्यिकी और विश्लेषण

इस कार्य में डेटा को माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में प्रस्तुत किया गया है, और सांख्यिकीय विश्लेषण ग्राफपैड प्रिज्म (संस्करण 7.0) या एसपीएसएस (संस्करण 22.0), और छात्र के उपयोग से किया गया था। कई समूह तुलनाओं के लिए टी-टेस्ट या एकतरफा विश्लेषण (एनोवा) का उपयोग किया गया था। WB प्रोटीन बैंड के ग्रे वैल्यू को GAPDH या -actin के साथ मानकीकृत किया गया था। P <.05 का="" मान="" महत्वपूर्ण="" माना="" गया।="" सभी="" प्रयोग="" को="" कम="" से="" कम="" तीन="" बार="" दोहराया="" गया="">

3|परिणाम

3.1|HEMs और B16F10 कोशिकाओं में CDP प्रेरित मेलानोजेनेसिस

शुरू करने से पहले, हमने HEMs और माउस मेलेनोमा B16F1 0 कोशिकाओं पर CDP की संभावित साइटोटोक्सिसिटी की जांच के लिए MTT परख का उपयोग किया। कोशिकाओं को 24, 48 या 72 घंटों के लिए अलग-अलग सांद्रता में सीडीपी के साथ इलाज किया गया था। एचईएम व्यवहार्यता परीक्षण ने प्रदर्शित किया कि जब सांद्रता 320 ug/mL से कम थी, तो सेल व्यवहार्यता पर CDP का कोई प्रभाव नहीं था; हालांकि, व्यवहार्यता में काफी कमी आई क्योंकि एकाग्रता 24, 48, और 72 घंटे (पी <.05; चित्रा="" 1="" ए)="" पर="" 320="" कुरूप/एमएल="" तक="" पहुंच="" गई।="" बी16एफ10="" कोशिकाओं="" की="" व्यवहार्यता="" भी="" 48="" और="" 72="" घंटों="" में="" कम="" हो="" गई="" जब="" सीडीपी="" 320="" कुरूप/एमएल="" (पी=""><.01) तक="" पहुंच="" गया="" लेकिन="" कम="" सांद्रता="" (चित्रा="" 1बी)="" में="" कोई="" परिवर्तन="" नहीं="" देखा="" गया।="" हमने="" तब="" प्राथमिक="" रूप="" से="" मेलानोजेनेसिस="" में="" सीडीपी="" की="" भूमिका="" की="" खोज="" की="" और="" एचईएम="" में="" -मेलानोसाइट-उत्तेजक="" हार्मोन="" (-एमएसएच;="" सांद्रता:="" 20,="" 100,="" और="" 400="" एनएम)="" और="" डीएमएसओ="" (0.1="" प्रतिशत)="" के="" प्रभावों="" की="" तुलना="" की।="" मेलेनिन="" धुंधला,="" टायरोसिनेस="" गतिविधि,="" और="" मेलेनिन="" सामग्री="" परख="" के="" परिणामों="" ने="" सुझाव="" दिया="" कि="" सीडीपी="" मेलानोजेनेसिस="" को="" बढ़ावा="" देने="" के="" लिए="" -एमएसएच="" के="" साथ="" तुलनीय="" था,="" जबकि="" 0.1="" प्रतिशत="" डीएमएसओ="" उपचार="" से="" कोई="" फर्क="" नहीं="" पड़ा="" (चित्रा="" एस="">

हमने उसी के अनुसार अपनी खोज को और परिष्कृत किया। एचईएम को सीडीपी के साथ 48 घंटों के लिए विभिन्न सांद्रता (20, 40, और 80 कुग/एमएल) पर उपचारित किया गया; मेलेनिन धुंधला, मेलेनिन सामग्री, और टायरोसिनेस गतिविधि परख आयोजित किए गए थे, और सभी ने सीडीपी उपचार के बाद एकाग्रता-निर्भर तरीके से महत्वपूर्ण वृद्धि दिखाई जो कि 80 कुरूप/एमएल समूह (पी <.05, चित्रा="" 2ए-सी)="" में="" चरम="" पर="" थी।="" .="" हमने="" तब="" मेलानोजेनेसिस-संबंधित="" जीन="" (mitf,="" tyr,="" trp1,="" trp2,="" rab27a,="" और="" fscn1)="" के="" mrna="" और="" प्रोटीन="" स्तर="" को="" मापा।="" सीडीपी="" ने="" एचईएम="" (पी=""><.05; चित्रा="" एस2ए)="" में="" उन="" जीनों="" के="" एमआरएनए="" स्तर="" में="" काफी="" वृद्धि="" की।="" इसके="" अलावा,="" mitf,="" tyr,="" trp1="" और="" rab27a="" प्रोटीन="" के="" स्तर="" में="" वृद्धि="" हुई,="" जैसा="" कि="" कुल="" mitf="" (p=""><.05) में="" फॉस्फोराइलेटेड="" mitf="" का="" अनुपात="" था,="" जबकि="" trp2="" और="" fscn1="" ने="" कोई="" अंतर="" नहीं="" दिखाया="" (चित्र="" 2d,="" e)।="" परिणामों="" ने="" संकेत="" दिया="" कि="" सीडीपी="" मेलानोजेनेसिस="" को="" बढ़ावा="" दे="" सकता="" है="" और="" मानव="" मेलानोसाइट्स="" में="" मेलेनोजेनेसिस-संबंधित="" जीन="" की="" अभिव्यक्ति="" को="" नियंत्रित="" कर="" सकता="">

इसके अलावा, हमने B16F10 कोशिकाओं के साथ CDP के प्रभावों को फिर से सत्यापित किया और पाया कि B16F10 कोशिकाओं की मेलेनिन सामग्री में काफी वृद्धि हुई है (P <.01; चित्र="" s2b)।="" इसके="" अलावा,="" सीडीपी="" महत्वपूर्ण="" रूप="">

3.2|सीडीपी ने ज़ेब्राफिश में मेलानोजेनेसिस को बढ़ावा दिया

यह जांच करने के लिए कि क्या सीडीपी को बढ़ावा मिल सकता हैमेलानोजेनेसिसविवो में , हमने जेब्राफिश भ्रूण का इस्तेमाल किया। zebrafish भ्रूणों को चार समूहों में विभाजित किया गया था और लगातार अलग-अलग सांद्रता (20, 40 और 80 ug/mL) पर अकेले माध्यम (NC) या CDP के साथ इलाज किया गया था; मेलेनिन कणिकाओं का घनत्व और वितरण हर दिन देखा और दर्ज किया गया। जैसे-जैसे जेब्राफिश भ्रूण बढ़े, हमने पाया कि सिर और पूंछ में मेलेनिन घनत्व धीरे-धीरे बढ़ता गया। तीसरे दिन, इंटरग्रुप अंतर अलग-अलग थे, और अंतर तब तक बढ़ता रहा जब तक कि हम 6 वें दिन (चित्रा 3ए) पर प्रयोग समाप्त नहीं कर देते। हमने जेब्राफिश की पूंछ में मेलेनिन घनत्व को मापने के लिए इमेज जे का इस्तेमाल किया; सीडीपी-उपचारित समूहों में मेलेनिन घनत्व नियंत्रण समूह (पी <.05; चित्रा="" 3बी)="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="">

3.3|CDP ने HEM और B16F10 कोशिकाओं में MAPK सिग्नल पाथवे को सक्रिय किया

उन तंत्रों को प्रकट करने के लिए जिनके द्वारा सीडीपी को बढ़ावा दिया गयामेलानोजेनेसिस, हमने अलग-अलग सांद्रता (20, 40 और ) पर सीडीपी के साथ एचईएम का इलाज किया

80 ug/mL) 48 घंटों के लिए और फिर MAPK सिग्नलिंग मार्ग में ईआरके, जेएनके, और p38 प्रोटीन के फॉस्फोराइलेटेड और कुल स्तरों की जांच की। जैसा कि वेस्टर्न ब्लॉटिंग द्वारा मापा गया, सीडीपी उपचार (पी <.05) के="" बाद="" पी-ईआरके,="" पी-जेएनके,="" और="" पी-पी38="" के="" स्तर="" में="" वृद्धि="" हुई,="" जबकि="" उनका="" कुल="" स्तर="" नहीं="" बदला="" (चित्र="" 4ए,="" बी)।="" प्रयोगों="" को="" b16f10="" कोशिकाओं="" के="" साथ="" दोहराया="" गया="" और="" erk,="" jnk,="" और="" p38="" प्रोटीन="" के="" फॉस्फोराइलेटेड="" स्तर="" में="" वृद्धि="" की="" गई="" (p=""><.05), लेकिन="" कुल="" mapk="" स्तर="" नहीं="" बदले="" (चित्र="" 4c,="" d),="" hems="" में="" परिणामों="" के="" अनुरूप="">

3.4|CDP ने H2O को क्षीण किया2-प्रेरित

HEMs और B16F10 कोशिकाओं में साइटोटोक्सिसिटी और एपोप्टोसिस

हम अनुकरण करने के लिए H2O2 का उपयोग करते हैंऑक्सीडेटिव तनावपर्यावरण और इसके तहत मेलानोसाइट्स में सीडीपी की भूमिका का पता लगायाऑक्सीडेटिव तनाव. HEMs में प्रयुक्त H2O2 की अंतिम सांद्रता 5 0 0 सुक्ष्ममापी थी, जबकि B16F10 कोशिकाओं में 1.0 मिमी थी। H2O 2- प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी पर CDP के प्रभाव की जांच करने के लिए, हमने 24 घंटे के लिए अलग-अलग सांद्रता (20, 40, और 80 ug/mL) पर CDP के साथ HEMs और B16F10 कोशिकाओं का ढोंग किया, फिर H2O2 को जोड़ा और उनका इलाज जारी रखा। अवलोकन और एमटीटी परख करने से पहले 24 घंटे के लिए।

एच 2 ओ 2 ने एचईएम में स्पष्ट झिल्ली की सूजन और सेल संकोचन का कारण बना, सीडीपी-प्रीट्रीटेड समूहों में, स्थिति कम हो गई थी। अकेले सीडीपी के साथ उपचार का कोई प्रभाव नहीं पड़ा (चित्र 5ए)। MTT परख ने एक समान परिणाम दिखाया कि H2O2 उपचार ने HEM व्यवहार्यता को कम कर दिया, जबकि CDP ने इस हानिकारक प्रभाव को काफी हद तक कम कर दिया।

3.5|CDP ने H2O 2- को HEMs और B16F10 कोशिकाओं में प्रेरित इंट्रासेल्युलर ROS को परिमार्जन किया

H2O 2- प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी और एपोप्टोसिस को कम करने के लिए CDP के तंत्र की जांच करने के लिए, हमने DCFH-DA प्रतिदीप्ति का उपयोग करके HEMs और B16F10 कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर ROS का पता लगाया।

4|विचार विमर्श और निष्कर्ष

इस अध्ययन में, हमने एचईएम और बी16एफ10 कोशिकाओं में सीडीपी की भूमिका की जांच की। पहली बार, हमने पाया कि सीडीपी प्रचार कर सकता हैमेलानोजेनेसिसमेलानोसाइट्स में और जेब्राफिश में रंजकता को बढ़ावा देता है। बाद के एक प्रयोग से पता चला कि सीडीपी उपचार के तहत एमएपीके सिग्नलिंग मार्ग सक्रिय था। हमने आगे इसकी भूमिका की जांच कीऑक्सीडेटिव तनावऔर पाया कि सीडीपी मेलानोसाइट्स में H2O2- प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी और एपोप्टोसिस को क्षीण कर सकता है; इस बीच, सीडीपी एनआरएफ2/एचओ-1 एंटीऑक्सीडेंट मार्ग को सक्रिय कर सकता है और इंट्रासेल्युलर आरओएस को परिमार्जन कर सकता है।ऑक्सीडेटिव तनावस्थितियाँ।

मिटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेज MITF के नियमन में शामिल एक महत्वपूर्ण मार्ग है, एक प्रमुख प्रतिलेखन कारक जो की अभिव्यक्ति को बढ़ावा देता हैमेलानोजेनेसिस-संबंधित जीन और बाद में मेलेनिन संश्लेषण और परिवहन को प्रभावित करता है। हमारे अध्ययन में, सीडीपी उपचार के बाद मेलानोसाइट्स में ईआरके, जेएनके और पी 38 की सक्रियता काफी बढ़ गई थी; इस बीच, MITF/p-MITF और MITF द्वारा संचालित TYR, TRP1, TRP2 और RAB27A के भाव

तदनुसार विनियमित किया गया। इस प्रकार, हम सुझाव देते हैं कि सीडीपी कर सकते हैं

को बढ़ावा देनामेलानोजेनेसिसMAPK मार्ग को सक्रिय करने के माध्यम से, लेकिन CDP MAPK को कैसे सक्रिय करता है यह अज्ञात रहता है। हाल के अध्ययनों के अनुसार, टोल-जैसे रिसेप्टर 4 (TLR4) मेलानोसाइट्स में अत्यधिक व्यक्त किया जाता है और मेलानोजेनेसिस में शामिल होता है। 28,29 TLR4 एक महत्वपूर्ण ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन है जो विशेष रूप से लिपोपॉलेसेकेराइड (LPS) 30 को बांध सकता है; अध्ययनों ने बताया कि एलपीएस मेलानोजेनेसिस को प्रेरित कर सकता है। 29 दिलचस्प बात यह है कि कईपॉलीसैकराइडकथित तौर पर सक्रिय टीएलआर और डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग मार्ग जैसे एमएपीके और न्यूक्लियर फैक्टर कप्पा बीटा (एनएफ-κबी) 31,32 इसलिए, हमें संदेह है कि सीडीपी को टीएलआर द्वारा पहचाना और बाध्य किया जा सकता है, फिर डाउनस्ट्रीम एमएपीके सिग्नल को सक्रिय करता है- लिंग मार्ग और बढ़ावा देता हैमेलानोजेनेसिस. इसके अलावा, न्यूक्लियोटाइड-बाइंडिंग ओलिगोमेराइजेशन डोमेन-जैसे रिसेप्टर्स (एनएलआर) इंट्रासेल्युलर लिगैंड्स को पहचानने और एमएपीके और एनएफ-κबी सिग्नलिंग पाथवे की सक्रियता को चलाने के लिए जाने जाते हैं। जैसा कि रिपोर्ट किया गया है, गैनोडर्मा ल्यूसिडम और एस्ट्रैगलस से निकाले गए पॉलीसेकेराइड कोशिकाओं में प्रवेश कर सकते हैं। और एनएलआर को प्रभावित करते हैं। 35,36 इस प्रकार, यह संभव है कि सीडीपी मेलानोसाइट्स में प्रवेश कर सकता है और एनएलआर के माध्यम से एमएपीके सिग्नलिंग मार्ग को नियंत्रित कर सकता है। हालांकि, इस परिकल्पना को सत्यापित करने के लिए आगे के अध्ययन की आवश्यकता है।

कुछ अध्ययनों ने आज तक हर्बल के आवेदन की सूचना दी हैपॉलीसैकराइडमेलेनोजेनेसिस में मेलेनिन उत्पादन को बाधित करने के लिए। 37,38 हालांकि, इस अध्ययन में, सीडीपी ने मेलेनोजेनेसिस को बढ़ावा दिया

मेलानोसाइट्स, और -MSH के साथ तुलना के बाद इस प्रभाव की और पुष्टि की गई। सीडीपी भी एक तरह काबहुशर्कराजड़ी-बूटियों से निकाले गए, हमें संदेह है कि सीडीपी का विपरीत प्रभाव सीडीपी और अन्य के बीच संरचनात्मक अंतर से संबंधित हो सकता हैपॉलीसैकराइड. पॉलीसेकेराइड मोनोसेकेराइड के पोलीमराइजेशन द्वारा बनते हैं लेकिन मोनोसैकराइड प्रकार, मोनो-सैकराइड संरचना, ग्लाइकोसिडिक बॉन्ड, साइड-चेन संरचना और आणविक भार में परिवर्तनशील होते हैं;39,40; इन कारकों को उनके जैविक कार्यों को निर्धारित करने के लिए माना जाता है। 41 मौजूदा अध्ययनों ने सीडीपी की संरचना का प्रस्ताव दिया है और सुझाव दिया है कि सीडीपी संरचना बाद में इसके कार्य को प्रभावित करती है। 42 इस प्रकार, सीडीपी को पूरी तरह से समझने और हमारी परिकल्पना की पुष्टि करने के लिए अधिक प्रमाण की आवश्यकता है।

मेलानोजेनेसिस प्रतिरोध करने का एक महत्वपूर्ण सुरक्षात्मक तंत्र है

पराबैंगनी क्षति और शरीर के होमोस्टैसिस को बनाए रखना43; उसी में

समय, मेलानोसाइट्स आसानी से प्रतिकूल वातावरण जैसे कि आरओएस अधिभार के संपर्क में आते हैं। 11 यह ज्ञात है कि आरओएस बढ़ावा देने में भाग लेते हैंमेलानोजेनेसिस, एक तंत्र MAPK को सक्रिय कर रहा है। 44 लेकिन अध्ययनों से यह भी पता चला है कि यह प्रभाव केवल एक निश्चित ROS स्तर के भीतर मौजूद है, जबकि ROS अधिभार मेलेनोजेनेसिस को महत्वपूर्ण रूप से बाधित करता है। 45 ROS, MAPK और मेलानोजेनेसिस के बीच संबंध विभिन्न परिस्थितियों में परिवर्तनशील है, इस प्रकार, प्रो-और एंटी-ऑक्सीडेंट सिस्टम के बीच संतुलन स्पष्ट रूप से महत्वपूर्ण है। विटिलिगो जैसे अपचयन रोगों में, एक असंतुलित एंटीऑक्सिडेंट प्रणाली और अनियंत्रित आरओएस अधिभार मेलानोसाइट्स को नुकसान पहुंचाएगा और सेल व्यवहार्यता को कम करेगा। इस अध्ययन में, हमने कोशिकाओं में आरओएस अधिभार को अनुकरण करने के लिए एच 2 ओ 2 के विभिन्न सांद्रता का उपयोग किया, और एचईएम ने खराब सहनशीलता दिखाई। B16F10 कोशिकाओं की तुलना में H2O2। जब मेलानोसाइट्स को H2O2 उपचार के अधीन किया गया, तो उनकी व्यवहार्यता और एपोप्टोसिस दर खराब हो गई, लेकिन

सीडीपी दिखावा आंशिक रूप से प्रवृत्ति को उलट सकता है। उसी समय, आरओएस की सफाई की गई। जैसा कि बताया गया है, NRF2/ARE एंटीऑक्सीडेशन पाथवे सक्रियण त्वचा कोशिकाओं में ROS मैला ढोने का एक प्रमुख तरीका है। 14 हमारे प्रयोगों में, मेलानोसाइट्स में NRF2 और HO -1 के प्रोटीन स्तर को CDP के बिना H2O2 उपचार के बाद विनियमित किया गया था; इसका मतलब है कि H2O2-प्रेरितऑक्सीडेटिव तनावNRF2/HO-1 मार्ग को सक्रिय कर सकता है, लेकिन यह रेडॉक्स संतुलन बनाए रखने और सेल को चोट से बचाने के लिए अपर्याप्त है। हालाँकि, CDP दिखावा ने NRF2/HO -1 एंटीऑक्सीडेशन मार्ग को बढ़ाया और संतुलन को बहाल किया। इस प्रकार, हम सुझाव देते हैं कि सीडीपी एनआरएफ2/एचओ -1 एंटीऑक्सीडेशन मार्ग को सक्रिय करके और आरओएस को साफ करके मेलानोसाइट्स को ऑक्सीडेटिव तनाव की चोट से बचा सकता है।

हमने पाया कि अकेले CDP उपचार का मेलानोसाइट्स में ROS या NRF2/HO-1 पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है। यह परिणाम बताता है कि सीडीपी ऑक्सीडेटिव तनाव के तहत रेडॉक्स संतुलन को प्रभावित कर सकता है, लेकिन सामान्य परिस्थितियों में नहीं। इसके अलावा, NRF2/HO-1 एंटीऑक्सीडेशन मार्ग को कथित तौर पर PI3K, NF-κB, और MAPK सिग्नलिंग मार्ग द्वारा नियंत्रित किया जाता है। हमारे अध्ययन में, CDP MAPK सिग्नलिंग मार्ग को सक्रिय करने में सक्षम था। यह संभव है कि सीडीपी अप-विनियमन MAPK के माध्यम से NRF2/HO -1 मार्ग को सक्रिय कर सके। जैसा कि स्लोमिंस्की ने बताया, मेलानोसाइट्स एक नियामक नेटवर्क में शामिल तनाव सेंसर हैं, और पर्यावरण के जवाब में उनके कार्य तेजी से बदल सकते हैं। 49 हम सुझाव देते हैं कि सीडीपी की भूमिका मेलानोसाइट्स की स्थिति से प्रभावित होती है, यह एंटीऑक्सिडेंट को प्रभावित किए बिना मेलानोजेनेसिस को बढ़ावा दे सकती है। सामान्य परिस्थितियों में सिस्टम लेकिन रेडॉक्स बैलेंस को बहाल करेंऑक्सीडेटिव तनावस्थितियाँ। इसलिए, सीडीपी द्वारा मेलानोसाइट फ़ंक्शन और उत्तरजीविता को दो अलग-अलग तरीकों से बनाए रखा जा सकता है। सीडीपी मेलानोसाइट्स को होमोस्टैसिस बनाए रखने में मदद करता है, जो मेलेनोजेनेसिस का एक महत्वपूर्ण कार्य भी है। 50,51

अंत में, सीडीपी को बढ़ावा दे सकता हैमेलानोजेनेसिसमेलानोसाइट्स के

MAPK सिग्नलिंग मार्ग को सक्रिय करके। सीडीपी एनआरएफ2/एचओ-1 एंटीऑक्सीडेंट मार्ग को सक्रिय करके और ऑक्सीडेटिव तनाव स्थितियों के तहत इंट्रासेल्युलर आरओएस को साफ करके मेलानोसाइट अस्तित्व में सुधार कर सकता है। हमारे निष्कर्ष सार्थक हैं क्योंकि वे प्रदर्शित करते हैं कि सीडीपी दोनों को बढ़ावा दे सकता हैमेलानोजेनेसिसऔर मेलानोसाइट्स की रक्षा करेंऑक्सीडेटिव तनावचोट, जो संभवतः मेलानोसाइट शिथिलता और हानि के लिए जिम्मेदार है। इस अध्ययन के निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि सीडीपी अपचयन रोगों के उपचार में एक नई दवा हो सकती है।

आभार

इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (नंबर 81703101), सेंट्रल साउथ यूनिवर्सिटी के तीसरे जियांग्या अस्पताल के न्यू जियांग्या टैलेंट प्रोजेक्ट्स (नंबर जेवाई201623 और नंबर 20170301), हुनान प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था ( संख्या 2018JJ3788 और संख्या 2018JJ3793) और हुनान स्वास्थ्य आयोग की परियोजना (संख्या C2019173)। डॉ. यिबो हू ने अध्ययन के मुख्य भाग का प्रदर्शन किया और पांडुलिपि लिखी; प्रोफेसर जिंग चेन और किंघई ज़ेंग ने अध्ययन की रूपरेखा तैयार की और पांडुलिपि लेखन का मार्गदर्शन किया; प्रोफेसर जिंहुआ हुआंग, लिहुआ हुआंग और होंग जियांग ने तकनीकी सहायता प्रदान की और डेटा का विश्लेषण किया; डॉ. यिक्सियाओ ली, लिंग जियांग, युजी ओयुयांग, युमेंग ली, लुन यांग और जिआओजियाओ झाओ ने प्रयोगों के हिस्से में योगदान दिया।

एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो

लेखक पुष्टि करते हैं कि हितों का कोई टकराव नहीं है।

डेटा उपलब्धता विवरण:

इस अध्ययन के निष्कर्षों का समर्थन करने वाले डेटा उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक से उपलब्ध हैं।

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