एचपीटीएलसी-डेंसिटोमेट्री स्क्रीनिंग और अनाज के आटे में फ्लोरोसेंट व्हाइटनिंग एजेंटों के संदूषण की बड़े पैमाने पर पहचान

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यिशेंग चेन1,2 और कैहोंग हुआंग1,2 और ज़ूमिंग ज़ू

सार

हाल के वर्षों में, खाद्य सुरक्षा से जुड़े मुद्दों पर चिंता बढ़ रही थीफ्लोरोसेंट व्हाइटनिंग एजेंटपैकिंग सामग्री से। यहां, हमने उच्च-थ्रूपुट मात्रा का ठहराव और अनाज उत्पादों (गेहूं और चावल के आटे) में दो सामान्य फ्लोरोसेंट वाइटनिंग एजेंटों (एफडब्ल्यूए 184 और एफडब्ल्यूए 367) की पहचान के लिए उपयुक्त एक आसान और विश्वसनीय विधि के विकास की सूचना दी, जो उच्च प्रदर्शन वाले पतले- परत क्रोमैटोग्राफी। सबसे पहले, एक अनुकूलित ठोस-तरल निष्कर्षण के माध्यम से नमूना तैयार करना और सफाई तेजी से पूरी की गई। मोबाइल चरण के रूप में टोल्यूनि और एथिल एसीटेट (1 0 / 0.3, वी / वी) के मिश्रण का उपयोग करके अर्क और संदर्भ मानक को एक साथ सिलिका जेल प्लेटों पर अलग किया गया था। फिर, फ्लोरोसेंट मोड (365 .) में डेंसिटोमेट्री के साथ तेजी से मात्रा का ठहराव किया गयाएचपीटीएलसीएक बहुमुखी विश्लेषणात्मक मंच के रूप में, थ्रूपुट, सादगी और पता लगाने की क्षमता के बीच एक आदर्श संतुलन प्राप्त कर सकता है, इसलिए, विशेष रूप से स्क्रीन-उन्मुख खाद्य विश्लेषण के लिए उपयुक्त है।

कीवर्ड एचपीटीएलसी. डेंसिटोमेट्री।फ्लोरोसेंट सफेद करने वाले एजेंट

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परिचय

हाल के वर्षों में खाद्य पैकेज सामग्री में उछाल देखा गया था। दूसरी ओर, पैकेज सामग्री से जुड़े खाद्य सुरक्षा मुद्दों ने भी दुनिया भर का ध्यान आकर्षित किया। इन सामग्रियों से संभावित रूप से उत्पन्न होने वाले खतरनाक रसायनों में,फ्लोरोसेंट व्हाइटनिंग एजेंट(एफडब्ल्यूए) ने विशेष रूप से उच्च ब्याज प्राप्त किया। एफडब्ल्यूए के अणु विकिरण को अवशोषित करने और साथ ही दृश्यमान रोशनी उत्सर्जित करने में सक्षम थे। इस तरह के परिवर्तन पदार्थों के पीले रंग को ऑफसेट कर सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप तीव्र सफेद प्रभाव हो सकता है। जैसे, खाद्य पैकेजों के लिए एफडब्ल्यूए के साथ शामिल सामग्री पर गहनता से विचार किया गया। विशेष रूप से अनाज उत्पादों के लिए, इस तरह के पैकेज का उपभोक्ताओं के आकर्षण और स्वीकृति को बढ़ाने के लिए अनुकूल रूप से उपयोग किया जाता था। उदाहरण के लिए, असामान्य रूप से उच्च स्तरएफडब्ल्यूएपॉपकॉर्न और इंस्टेंटनूडल्स के पेपर बोर्ड में पाया गया था (जियांग एट अल। 2015)। नतीजतन, एफडब्ल्यूए अनाज के भोजन में चले गए और इसके परिणामस्वरूप प्रदूषण हुआ, जो सार्वजनिक स्वास्थ्य के लिए एक उभरती हुई चुनौती बन गया।

दशकों पहले, उल्लेखनीय रूप से उच्च स्थिरताएफडब्ल्यूएउनकी संभावित विषाक्तता के बारे में गहन चिंताओं को उकसाया था। हालांकि मानव स्वास्थ्य पर एफडब्ल्यूए का वास्तविक प्रभाव अभी भी निर्णायक नहीं था, उनकी विकासात्मक विषाक्तता और मॉडल जानवरों में जीन अभिव्यक्ति के परिवर्तन प्रभाव को प्रयोगात्मक रूप से प्रमाणित किया गया था (बेलीव्यू एट अल। 1990; जंग एट अल। 2012) .इन संभावित जोखिमों के संबंध में, दुनिया भर के खाद्य सुरक्षा अधिकारियों ने खाद्य संपर्क सामग्री में प्रतिबंधित एफडब्ल्यूए के लिए प्रतिबंध और सीमाएं निर्धारित की थीं।

इन विधायी मानकों को लागू करने के उद्देश्य से, विश्लेषणात्मक तरीकों की एक विस्तृत श्रृंखला, प्रमुख रूप से यूवी प्रतिदीप्ति निरीक्षण या स्तंभ क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी और केशिका वैद्युतकणसंचलन) पर आधारित एफडब्ल्यूए (जियांग एट अल। 2015; वू एट अल। 2018) का पता लगाने के लिए प्रस्तावित किया गया था। . लेकिन अभ्यास की दृष्टि से, इन सभी मौजूदा तरीकों को लागत प्रभावी और विश्वसनीय स्क्रीनिंग के सिद्धांत के अनुकूल नहीं बनाया गया था। उदाहरण के लिए, यूवी-प्रतिदीप्ति निरीक्षण पद्धति खराब चयनात्मकता से ग्रस्त है। इस बीच, कॉलम क्रोमैटोग्राफिक सिस्टम पर आधारित विश्लेषण ने सादगी और लागत-दक्षता में उल्लेखनीय कमी प्रदर्शित की। इसके विपरीत, हाई-परफॉर्मेंस थिन-लेयर क्रोमैटोग्राफी (HPTLC) फूड स्क्रीनिंग मेथडोलॉजी का एक नया क्षितिज खोल रहा था। स्क्रीनिंग-ओरिएंटेड तरीकों के आधार पर बहुत सारेएचपीटीएलसीविभिन्न खाद्य घटकों के विश्लेषण में विकसित और लागू किया गया था, जो सादगी, विशिष्टता और विश्वसनीयता के पहलू के बीच की खाई को आदर्श रूप से भरते हुए अद्वितीय लचीलापन दिखाते हुए (गैलार्स-बस्टोस एट अल। 2019; ली एट अल। 2018; मिक्रोपोलू एट अल। 2019) ; पेडन एट अल। 2018; प्रेमराथनीत अल। 2018; स्टेनक एट अल। 2019; सन एट अल। 2018)। इस तरह, लगभग असीमित मैट्रिक्स सहिष्णुता के साथ कई नमूनों (40 तक) का एक साथ विश्लेषण किया जा सकता है, क्योंकि प्रत्येक प्लेट डिस्पोजेबल थी (ली एट अल। 2019)। इसका तात्पर्य यह है कि नमूना सफाई और उपकरण रखरखाव की मांग को उल्लेखनीय रूप से बचाया जा सकता है। दृश्य निरीक्षण के प्रवर्तन के रूप में, डेंसिटोमेट्री ने एचपीटीएलसी प्लेट (लेबोट एट अल। 2020) पर पृथक्करण परिणामों की सटीक और सटीक माप को सक्षम किया। हाइफ़नेशन प्रौद्योगिकियों के तेजी से विकास के साथ, एचपीटीएलसी की सबसे विशेषता यह थी कि इसे सतह-संवर्धित रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी (कांग एट अल। 2019; क्यू एट अल। 2018; वांग) जैसे शक्तिशाली विश्लेषणात्मक उपकरणों की उपयोगिता को कुशलतापूर्वक एक मंच के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। एट अल। 2018ए, बी), बायोसेंसर (एगटोनोविक कस्ट्रिन एट अल। 2020; चेन एट अल। 2020ए, बी; चोमा और ग्रेज़ेलक2011; गैलार्स-बस्टोस एट अल। 2019), छवि / केमोमेट्रिक्स विश्लेषण (रेजेक एट अल। 2016; जू और लियू 2021; जू एट अल। 2019), और मास डिटेक्शन (वांग एट अल। 2018ए, बी)। जैसे, एचपीटीएलसी एक बहुमुखी टूलबॉक्स रहा है जो विशेष रूप से स्क्रीनिंग कार्यों के लिए उपयुक्त है।

इन पृष्ठभूमियों के खिलाफ, इस कार्य का उद्देश्य विभिन्न अनाज के आटे के नमूनों के संयोजन के आधार पर एफडब्ल्यूए के लिए एक आसान और संवेदनशील जांच पद्धति विकसित करना था।एचपीटीएलसीफ्लोरोसेंट डेंसिटोमेट्री (एफएलडी), और मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस)। विधि के विकास के बाद, इसके प्रदर्शन को मात्रात्मक और गुणात्मक दोनों रूप से मान्य किया गया, जो स्क्रीनिंग के लिए एक आसान उपकरण के रूप में इसकी वास्तविक श्रेष्ठता को काफी हद तक प्रमाणित करता है।

सामग्री और तरीके

सामग्री

Standards of FWA184 (2,5-bis(5′-tert-butyl-2-benzoxazolyl) thiophene, CAS 7128-64-5, > 99% purity) and FWA367 (1,4-bis(2-benzoxazolyl) napthalene, CAS 5089-22-5, >98 प्रतिशत शुद्धता) अलादीन (शंघाई, चीन) से खरीदी गई थी। विश्लेषणात्मक ग्रेड के कार्बनिक सॉल्वैंट्स और रसायन सिग्मा एल्ड्रिच (शंघाई, चीन) से थे। सिलिका जेल प्लेट्स6 0 F254 (विश्लेषणात्मक ग्रेड, परत की मोटाई 0.1 मिमी, 10 × 20 सेमी आकार, क्रमांक 1.05729.0001) मर्क (डार्मस्टाड, जर्मनी) से थे। तीन गेहूं के आटे और तीन चावल के आटे के नमूनों सहित छह खाली अनाज के नमूने स्थानीय सुपरमार्केट में खरीदे गए थे। इसके अलावा, शेन्ज़ेन कस्टम्स फूड सेंटर द्वारा पुष्टि किए गए एफडब्ल्यूए संदूषण के साथ गेहूं और चावल के आटे के नमूने प्रदान किए गए थे।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा अर्क

मानक समाधान

एफडब्ल्यूए 184 और एफडब्ल्यूए 367 के स्टॉक समाधान ({0}}.01 मिलीग्राम/एमएल) एथिल एसीटेट में अलग से या मिश्रण में तैयार किए गए थे, और एक रेफ्रिजरेटर (4 डिग्री) में संग्रहीत किए गए थे। es tablishing अंशांकन वक्रों के लिए कार्य समाधान 0.0001 mg/mL के आगे dilutingstock समाधान द्वारा तैयार किए गए थे।

नमूना तैयार करना

अनाज के नमूने, एथिल एसीटेट, एसीटोन, और उनके मिश्रण से विश्लेषण निकालने के लिए (मिश्रण अनुपात, वी/वी, 10/0, 6/4, 4/6, और 0 /10) का निष्कर्षण विलायक के रूप में परीक्षण किया गया। संक्षेप में, 5 ग्राम अनाज के आटे के नमूने को 20 एमएल निष्कर्षण विलायक के साथ मिलाया गया था; यदि आवश्यक हो, तो एफडब्ल्यूए मानकों के 100 या 50 μL स्टॉक समाधान (0.01 मिलीग्राम/एमएल) को खाली नमूनों के निष्कर्षण मिश्रण में मिलाया गया, जिसके परिणामस्वरूप 200 या 100 कुरूप/किग्रा कृत्रिम दूषण। 5 मिनट के लिए 30 डिग्री अल्ट्रासोनिक स्नान के उपचार के बाद, निलंबन को 4 डिग्री पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग किया गया था। उसके बाद, 1 एमएल सतह पर तैरनेवाला 5 एमएल सिरिंज में सावधानी से पिपेट किया गया था और सुई ब्लॉकेज से बचने के लिए ठोस कणों को हटाने के लिए 0. 45- सुक्ष्ममापी झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था।

एचपीटीएलसी चरण

नमूना अर्क और संदर्भ मानकों को 6-मिमी बैंड के रूप में छिड़काव किया गयाएचपीटीएलसी100 nL/s और 0.2 μL पर डिलीवरी गति पर 100-μL सिरिंज से लैस एक Linomat 5 सेमीआटोमैटिक सैंपलर (CAMAG, स्विट्जरलैंड) द्वारा प्लेट पूर्व-खुराक। बैंड सरणी शुरू में बाएं किनारे से 15 मिमी और नीचे से 10 मिमी थी, एक दूसरे से स्वचालित रूप से गणना किए गए अंतराल के साथ। आवेदन मात्रा 10 μL रिक्त और नुकीला नमूना अर्क थे; अंशांकन वक्र की स्थापना के लिए, 1, 5, 10, 15, या 20 μL कार्य समाधान (0.0001 मिलीग्राम/एमएल) लागू किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप क्रमशः 100, 500, 1000, 1500, और 2000 पीजी/बैंड पर ढाल सांद्रता थी। प्रत्येक के बीच नमूना, सिरिंज को मैन्युअल रूप से शुद्ध एथिल एसीटेट के साथ प्रत्येक आवेदन के बीच दो बार क्रॉस-संदूषण को रोकने के लिए धोया गया था। आवेदन के बाद, प्लेटेड को एक TLC-हीटर III (CAMAG, स्विटजरलैंड) द्वारा 60 डिग्री पर 2 मिनट के लिए अनुप्रयोग बैंड में विलायक अवशेषों को हटाने के लिए गर्म किया गया था। क्रोमैटोग्राफी स्वचालित रूप से ADC -2 (CAMAG, स्विट्जरलैंड) के साथ की गई थी, ताकि प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य अलगाव का एहसास। सबसे पहले, विकासशील कक्ष के दोनों खाइयों को 10 एमएल टोल्यूनि और 0.3 एमएल एथिल एसीटेट से युक्त स्थिर चरण से भर दिया गया था। मोबाइल चरण में प्लेट के नीचे डुबकी लगाने से पहले, 33 प्रतिशत, 10 मिनट टैंक संतृप्ति, और 10 मिनट प्लेट पूर्व शर्त पर अंतिम सापेक्ष आर्द्रता के लिए संतृप्त MgCl2 जलीय घोल के माध्यम से बुदबुदाहट द्वारा 5 मिनट का सूखापन नियंत्रण था। सॉल्वेंट फ्रंट लाइन की माइग्रेशन दूरी 50 मिमी तय की गई थी।

प्लेट प्रलेखन और डेंसिटोमेट्री

विकास के बाद, विकसित प्लेट के डिजिटल चित्रों को डीडी70 इमेजिंग सिस्टम (बायोस्टेप, जर्मनी) द्वारा प्रलेखित किया गया था, जो सोनी ईओएस700डी डिजिटल कैमरा के साथ एकीकृत है, जो 366 एनएम यूवी लैंप द्वारा प्रकाशित है। फिर, पृथक्करण परिणामों का एक टीएलसी स्कैनर 3 (CAMAG, स्विट्जरलैंड) द्वारा घनत्वमितीय मूल्यांकन किया गया। डेंसिटोमेट्री की कार्यशील तरंग दैर्ध्य का पता लगाने के लिए, थीसिलिका जेल प्लेट पर जमा किए गए विश्लेषण के उत्तेजना स्पेक्ट्रा को K400 ऑप्टिकल फिल्टर के साथ D2 और W लैंप का उपयोग करते हुए 220-400 एनएम से लगातार प्रोफाइल किया गया था। मात्रात्मक स्कैनिंग सामान्य सेटिंग्स के साथ की गई थी: फ्लोरोसेंट मोड, पारा लैंप, उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 365 एनएम, K400 ऑप्टिकल फिल्टर, 3.00 × 0.30 मिमी माइक्रो-स्लिट आयाम, स्कैनिंग गति 100 माइक्रोन / एस, और डेटा रिज़ॉल्यूशन 100 माइक्रोन / चरण। इंस्ट्रुमेंटल ऑपरेशन और डेटा प्रोसेसिंग को thewinCATS सॉफ्टवेयर संस्करण 1.4.4 द्वारा नियंत्रित किया गया था।

के लाभसिस्टैंच ट्यूबुलोसा अर्क

एचपीटीएलसी-एमएस

FLD मापों के बाद, सकारात्मक बैंडों को उनके MS फ़िंगरप्रिंट द्वारा पहचाना गया, जो TLC-MS इंटरफ़ेस (CAMAG) द्वारा मध्यस्थता है। एक चतुर्धातुक पंप द्वारा संचालित, 366 एनएम रोशनी के तहत देखे गए लक्षित बैंडों को 60 के लिए 0 .2 एमएल/मिनट की दर से एसिटोनिट्राइल युक्त आईएनजी 0.1 प्रतिशत फॉर्मिक एसिड के प्रवाह के साथ सुसंस्कृत किया गया था। सीधे, एलुएंट को एक इलेक्ट्रोस्प्रेयोनिज़ेशन स्रोत में इंजेक्ट किया गया था और साथ ही एक ट्रिपल क्वाड्रुपोल मास स्पेक्ट्रोमीटर (क्वाट्रो प्रीमियर एक्सई, वाटर्स) द्वारा विश्लेषण किया गया था। निम्नलिखित सेटिंग्स के साथ ईएसआई प्लस मोड में पूर्ण-स्कैन एमएस डेटा अधिग्रहण किया गया था: केशिका वोल्टेज 3.5 केवी हैं, शंकु वोल्टेज 50 वी हैं, आयन स्रोत तापमान 100 डिग्री, विलुप्त होने का तापमान 400 डिग्री, विलुप्त होने वाली गैस प्रवाह दर 700 एल / एच, और शंकु गैस प्रवाह 50 एल / एच। स्पेक्ट्रा को 50-1000 मीटर/जेड की सीमा में दर्ज किया गया था।

परिणाम और चर्चा

क्रोमैटोग्राफी अनुकूलन

लक्षित यौगिकों की कम ध्रुवता के संबंध में, विभिन्न हाइड्रोफोबिक सॉल्वैंट्स (एसीटोन, टोल्यूनि, हेक्सेन और पेट्रोलियम ईथर सहित) और उनके मिश्रण के साथ परीक्षण परीक्षणों के साथ मोबाइल चरण का अनुकूलन शुरू किया गया था। प्रारंभिक जांच से, टोल्यूनि अकेले लक्षित यौगिकों का पर्याप्त समाधान देने के लिए पाया गया था जो नमूना मैट्रिक्स में हस्तक्षेप कर रहे थे जो ज्यादातर ट्रैक के निचले हिस्से में बने रहे। एनालिटिक्स के रिज़ॉल्यूशन को और बढ़ाने के लिए, एथिल एसीटेट की अलग-अलग मात्रा (1-10 प्रतिशत) जोड़ी गई। तुलना से, मोबाइल चरण (तरल), कक्ष वातावरण (गैस), और स्थिर चरण (ठोस) के बीच नाजुक संतुलन के लिए जिम्मेदार है। दूसरे शब्दों में, जब प्लेट को हाथ से हिलाया जाता है, तो चरण संतुलन तुरंत टूट जाता है। इसने की पुनरावृत्ति के लिए इंस्ट्रूमेंटेशन के महत्व को दृढ़ता से प्रमाणित कियाएचपीटीएलसीविश्लेषण। इसके अलावा, अनुकूलित पृथक्करण स्थितियों की प्रयोज्यता का आकलन कृत्रिम रूप से दूषित अनाज के नमूनों का विश्लेषण करके किया गया था, अंजीर से 1 ए, यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि नमूना मैट्रिक्स की उपस्थिति से क्रोमैटोग्राफिक परिणामों में महत्वपूर्ण भिन्नता नहीं हुई। इसलिए, इस पूरे कार्य के दौरान टोल्यूनि/एथिल एसीटेट (10/0.3, v/v) को मोबाइल चरण के रूप में तय किया गया था।

दृश्य स्क्रीनिंग और FLD मात्रा का ठहराव

संपूर्ण प्लेट का छवि अधिग्रहण के विशिष्ट लाभों में से एक थाएचपीटीएलसी, जिसके साथ दृश्य निरीक्षण द्वारा पृथक्करण की अर्ध-मात्रात्मक प्रोफ़ाइल आसानी से प्राप्त की जा सकती है। यहां, एनालिटिक्स के गहन देशी प्रतिदीप्ति ने 366 एनएम विकिरण के तहत क्रोमैटोग्राफिक परिणामों को सीधे पढ़ने की अनुमति दी, संवेदनशीलता 100 पीजी/बैंड तक नीचे। इसके बाद, पटरियों के बीच केवल क्षैतिज तुलना से नमूना संदूषण की डिग्री का सीधा अनुमान लगाया जा सकता है, जो स्क्रीनिंग कार्यों में अत्यधिक पसंदीदा था। इसके अलावा, फ्लोरेसेंस मोड में डेंसिटोमेट्री को स्कैनिंगऑफ ट्रैक्स करने के लिए नियोजित किया गया था। यह चरण भी बहुत कुशल था, जिसे 2-3 मिनट में पूरा किया जा सकता है। डेंसिटोमेट्री के लिए इष्टतम उत्तेजना तरंग दैर्ध्य की पहचान करने के इरादे से, सिलिका जेल परत पर जमा किए गए विश्लेषण के उत्तेजना स्पेक्ट्रम (220-400 एनएम) की जांच की गई थी। जैसा कि अंजीर में प्रस्तुत किया गया है। 1 बी, विभिन्न स्थितियों में विश्लेषण के स्पेक्ट्रा प्रोफाइल ने उच्च समानता दिखाई, 365 एनएम उत्तेजना पर सबसे गहन उत्सर्जन का प्रदर्शन किया। इसलिए, एक 400-nmedge फ़िल्टर (K400) के संयोजन में 365 एनएम पर पारा लैंप की रोशनी का उपयोग किया गया था। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 1d, इन ऑप्टिकल मापदंडों की प्रयोज्यता को सह-निकाले गए नमूना मैट्रिक्स की उपस्थिति में भी विश्लेषण बैंड के स्पष्ट संकेत चोटियों द्वारा दर्शाया गया है।

परिमाणीकरण का अनुकूलन और सत्यापन

रैखिकता और संवेदनशीलता

स्थापित डेंसिटोमेट्रिक डिटेक्शन की मात्रात्मक क्षमता को पहले रैखिकता और संवेदनशीलता के संदर्भ में मान्य किया गया था। ऐसा करने के लिए, 100 से 2000 पीजी/बैंड की सांद्रता के भीतर 5 स्तरों पर आधारित एक अंशांकन ग्राफ स्थापित किया गया था। तालिका 1 में संक्षेपित, से प्राप्त परिणामएचपीटीएलसी-FLD ने सहसंबंध के संतोषजनक गुणांक के साथ अच्छी रैखिकता दिखाई (R2=0.9999)। अंशांकन वक्र के आधार पर, पता लगाने की सीमा (एलओडी) और मात्रा (एलओक्यू) सहित विधि संवेदनशीलता की गणना डीआईएन 32645 पद्धति के अनुसार 95 प्रतिशत सांख्यिकीय विश्वास (ड्यूश इंस्टीट्यूट फर नॉर्मुंग 2013) के अनुसार की गई थी। गणना से, एलओडी व्यक्त एएसपीजी/बैंड एफडब्ल्यूए 184 और एफडब्ल्यूए 367 के लिए क्रमशः 45 और 52 था। 10 μL पर एप्लिकेशन वॉल्यूम तय करना, ऐसी डिटेक्टेबिलिटी क्रमशः 18 और 21 ug/kg के बराबर थी, जो EU (यूरोपीय संघ 2002) द्वारा निर्धारित विधायी सहिष्णुता सीमा (600ug/kg) से लगभग 30- गुना कम थी।

रिकवरी और प्रेसिजन

विकसित की सटीकता का आकलन करने से पहलेएचपीटीएलसी-FLD अनाज के नमूनों में नुकीले विश्लेषणों की वसूली दर निर्धारित करके, एक उचित निष्कर्षण विधि को अनुकूलित किया जाना चाहिए। अनाज के आटे में ForFWA निष्कर्षण, वू एट अल। डाइक्लोरोमेथेन और एसीटोन (3/2, वी/वी) (वू एट अल। 2018) के मिश्रण का उपयोग करने का सुझाव दें। डाइक्लोरोमेथेन के पर्यावरण और कैंसरजन्य विषाक्तता के संबंध में, एथिल एसीटेट और एसीटोन के मिश्रण को वैकल्पिक रूप से निष्कर्षण विलायक के रूप में परीक्षण किया गया था। जैसा कि चित्र 2 में प्रस्तुत किया गया है, यह स्पष्ट था कि शुद्ध एथिल एसीटेट दोनों अनाज के नमूनों से लक्षित यौगिक निकालने के लिए सबसे अच्छा विकल्प था, जो वू एट अल। (2018) की विधि द्वारा तुलनीय था। इसकी प्रयोज्यता की गारंटी के लिए, अनुकूलित निष्कर्षण विधि को 3 गेहूं के आटे सहित 6 अनाज के नमूनों तक बढ़ाया गया था और स्पाइक-रिकवरी प्रयोग के लिए 3 चावल के आटे का और परीक्षण किया गया था। जैसा कि तालिका 2 में संक्षेप में बताया गया है, गणना की गई वसूली दर 88.7-108.4 प्रतिशत की सीमा के भीतर थी। इस बीच, तीन प्रतियों के सापेक्ष मानक विचलन (प्रतिशत आरएसडी) के संदर्भ में मात्रा की पुनरुत्पादकता 10.5 प्रतिशत से कम पाई गई। इसके अलावा, यह उल्लेखनीय था कि प्राप्त डेटा उपयोग किए गए नमूनों और स्पाइकिंग स्तरों पर महत्वहीन रूप से निर्भर था, यह दर्शाता है कि विकसित मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक कुशल स्क्रीनिंग उपकरण हो सकता हैएफडब्ल्यूएअनाज के नमूनों में, स्वीकार्य सटीकता और सटीकता के साथ।

डिब्बाबंद अनाज के नमूनों में एफडब्ल्यूए का निर्धारण

अनुकूलित निष्कर्षण स्थितियों की उपयुक्तता का और मूल्यांकन करने के लिए औरएचपीटीएलसी-एफएलडी का पता लगाने के लिए, दो अनाज के नमूनों की मात्रा निर्धारित करने के लिए विधि का उपयोग किया गया था, जिनमें से पैकेज में एफडब्ल्यूए शामिल हैं। चित्र 3ए में दिखाए गए प्लेट छवि पर दृश्य निरीक्षण से, इस निष्कर्ष पर पहुंचना बहुत आसान था कि दोनों अनाज के नमूने एफडब्ल्यूए अवशेषों से दूषित हो गए थे। फिर, FLDscanning द्वारा परिमाणीकरण किया गया। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 3 बी, प्राप्त डेंड्रोग्राम में पता लगाने की अच्छी चयनात्मकता देखी जा सकती है। जैसा कि तालिका 3 में संक्षेप में बताया गया है, दोनों अनाज उत्पादों में विश्लेषण के अवशेष कुरूप/किलोग्राम स्तर (अधिकतम 262.8 कुरूप/किलोग्राम) के भीतर थे, जो उनकी विशिष्ट प्रवासन सीमा (600ug/kg) से काफी नीचे थे। फिर भी, इस तरह के संदूषण के संभावित नकारात्मक प्रभाव भी खतरनाक बने रहे, क्योंकि पुराने जोखिम के कारण होने वाले प्रतिकूल प्रभाव अभी तक पर्याप्त नहीं थे।

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एमएस फ़िंगरप्रिंट द्वारा आणविक पहचान

से उत्पन्न बैंड की रासायनिक पहचान प्राप्त करने के लिएएचपीटीएलसीविकास, सीटू एमएस डिटेक्शन को स्क्रीनिंग दृष्टिकोण में एक पुष्टिकरण उपकरण के रूप में शामिल किया गया था, जो एक रेफरेंस-हेड-आधारित टीएलसी-एमएस इंटरफ़ेस द्वारा सुगम था। ब्याज के बैंड के भीतर के यौगिकों को सिलिका जेल परत से धोया गया और सीधे इलेक्ट्रोस्प्रे एमएस द्वारा मापा गया। तालिका 4 ने सिलिका जेल परत से दर्ज किए गए विश्लेषणों के निदान संकेत को संक्षेप में प्रस्तुत किया है। यह स्पष्ट था कि एफडब्ल्यूए 184 के लिए 363.1 एम/जेड सबसे प्रचुर मात्रा में आयन संकेत थे, जबकि एफडब्ल्यूए 367 के लिए 431.2 एम/जेड। प्रोटोनेटेड रूप में सैद्धांतिक आणविक आयनों के साथ अच्छी तरह से सहमत, ये विशिष्ट संकेत सीधे स्वयं स्पष्ट थे और इसलिए इसका उपयोग किया जा सकता है पुष्टि के लिए फिंगरप्रिंट सबूत। इसके अलावा, इस पद्धति की प्रयोज्यता को वास्तविक नमूनों में सकारात्मक पाए जाने के साथ अनुकरणीय रूप से मान्य किया गया था। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 4, प्राप्त संकेतों ने विश्लेषण के फिंगरप्रिंट के लिए अच्छी समानता प्रदर्शित की, यह दर्शाता है कि संदिग्ध बैंड को स्पष्ट रूप से लक्षित यौगिकों को सौंपा जा सकता है।

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निष्कर्ष

इस काम में,एचपीटीएलसीअनाज के नमूनों में एफडब्ल्यूए संदूषण की सुगम मात्रा का ठहराव और पुष्टि के लिए, पृथक्करण और स्पेक्ट्रोस्कोपिक विश्लेषण को कुशलता से एक लचीले प्लेटफॉर्म के रूप में सफलतापूर्वक नियोजित किया गया था। एक अनुकूलित निष्कर्षण विधि के साथ, गेहूं और चावल के आटे के नमूनों में विश्लेषणों को एचपीटीएलसी-एफएलडी द्वारा चुनिंदा और सटीक मात्रा में निर्धारित किया गया था, जिसमें सहिष्णुता सीमा से काफी नीचे अच्छी रैखिकता और एलओडी थे। इसके अलावा, प्लेटिंग परत पर रहने वाले अलग-अलग परिणाम सीटू एमएस विश्लेषण से जुड़े हुए थे, अलग-अलग ट्रैक में सकारात्मक बैंड की तेजी से अणु पहचान को सक्षम करते हुए, स्क्रीनिंग परिणामों की विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए स्पष्ट रूप से सुनिश्चित करते हैं। खाद्य स्क्रीनिंग विश्लेषण की वास्तविकता द्वारा उठाए गए चुनौतियों का सामना करना, का महत्व एचपीटीएलसी को तेजी से स्वीकार किया गया था। काम ने प्रदर्शित किया कि एचपीटीएलसी एक बहुमुखी मंच के रूप में मात्रात्मक और गुणात्मक पहचान को एक बेहतर लागत-कुशल तरीके से एकीकृत करता है जो खाद्य विश्लेषणात्मक रसायन शास्त्र में एक शक्तिशाली उपकरण हो सकता है।

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