पार्श्वभूमि.तीव्रगुर्दे की चोट(AKI) बढ़ी हुई मृत्यु दर के साथ विघटित सिरोसिस की लगातार जटिलता है। सीरम क्रिएटिनिन जैसे पारंपरिक बायोमार्कर कार्यात्मक परिवर्तन के बिना चोट का पता लगाने के लिए संवेदनशील नहीं होते हैं। हम अनुमान लगाते हैं कि मूत्र एक्सोसोम संभावित रूप से मार्करों को ले जाते हैं जो कि के प्रकार को अलग करते हैंगुर्दे की चोटसिरोसिस के रोगियों में।

तरीकों.यह सिरोसिस वाले वयस्क रोगियों का एक संभावित, एकल-केंद्र और अवलोकन संबंधी अध्ययन है। रोगी समूहों में स्वस्थ सामान्य नियंत्रण शामिल थे, सिरोसिस को सामान्य के साथ मुआवजा दिया गया थागुर्दा कार्य, सामान्य के साथ विघटित सिरोसिसगुर्दा कार्य, और एकेआई के साथ विघटित सिरोसिस। डेटा को इलेक्ट्रॉनिक स्वास्थ्य रिकॉर्ड से निकाला गया था जिसमें जिगर की बीमारी के एटियलजि, एमईएलडी स्कोर, विघटन का इतिहास, चाइल्ड-टरकोट-पुग स्कोर, एकेआई का इतिहास और दवा एक्सपोजर शामिल हैं। सहमति के समय मूत्र के नमूने एकत्र किए गए थे। मूत्र एक्सोसोम प्रोटीन सामग्री का विश्लेषण किया गया था, और प्रोटिओमिक डेटा को इम्युनोब्लॉटिंग द्वारा मान्य किया गया था। सांख्यिकीय विश्लेषण में आंशिक रूप से कम से कम वर्ग-विभेदक विश्लेषण शामिल थे जो प्रक्षेपण पहचान में परिवर्तनशील महत्व के साथ युग्मित थे।

परिणाम.अठारह सिरोसिस विषयों को नामांकित किया गया था, और छह स्वस्थ नियंत्रण विषयों को हमारे बायोरेपोजिटरी से निकाला गया था। मूत्र एक्सोसोम को अलग किया गया, और 1572 प्रोटीन की पहचान की गई। माल्टेज़-ग्लूकोएमाइलेज़ पश्चिमी सोख्ता द्वारा पुष्टि की गई शीर्ष विभेदक प्रोटीन थी।

निष्कर्ष. सिरोसिस और एकेआई के मरीजों में यूरिनरी एक्सोसोम में रीनल ब्रश बॉर्डर डिसैकराइडेस, एमजीएएम का अपग्रेडेशन होता है, जो इसके प्रकार को अलग कर सकता है।गुर्दे की चोटसिरोसिस में; हालाँकि, इसके नैदानिक ​​​​महत्व के लिए और सत्यापन की आवश्यकता है।

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तीक्ष्ण गुर्दे की चोटद्वारा इलाज किया जानासिस्टैंचे

1 परिचय

तीव्रगुर्दे की चोट(AKI) सिरोसिस [1, 2] के अस्पताल में भर्ती लगभग 20 प्रतिशत रोगियों में होता है। अस्पताल में भर्ती सिरोसिस के रोगियों में AKI अक्सर प्रगतिशील, गंभीर और मृत्यु दर का एक स्वतंत्र नकारात्मक भविष्यवक्ता होता है [3]। *ई सिरोसिस में एकेआई का सबसे आम कारण हेमोडायनामिक है, जो 70 प्रतिशत मामलों में होता है। 30 प्रतिशत मामलों में एक्यूट ट्यूबलर नेक्रोसिस (एटीएन) होता है, और 1 प्रतिशत से कम मामलों में पोस्टरेनल कारण दुर्लभ होते हैं। हेपेटोरेनल सिंड्रोम (एचआरएस) बिना किसी पहचान के हेमोडायनामिक हैगुर्दे की चोटया बीमारी और सिरोसिस के लगभग 20 प्रतिशत रोगियों [4, 5] में होती है।

सीरम क्रिएटिनिन (स्क्रैच) आकलन करने के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला बायोमार्कर हैगुर्दा कार्यऔर पहचानोगुर्दे की चोट. हालांकि, हिंदवी क्रिटिकल केयर रिसर्च एंड प्रैक्टिस वॉल्यूम 2019 के लिए सिरोसिस के रोगियों में एससीआर उप-इष्टतम है, यकृत उत्पादन में कमी, कम भंडार के साथ मांसपेशियों की बर्बादी, वितरण की मात्रा में वृद्धि और प्रोटीन-कैलोरी कुपोषण सहित कई कारण हैं। सामान्य आबादी की तुलना में सिरोसिस के रोगियों में औसत स्कोर मान कम होता है, जिसके परिणामस्वरूप AKI [6] की वर्तमान परिभाषा के आधार पर AKI के निदान में देरी होती है। इसके अतिरिक्त, Scr का बायोमार्कर हैगुर्दा कार्यऔर एक संवेदनशील चोट मार्कर नहीं है। गुर्दे की चोट के नए बायोमार्कर AKI का पता लगाने और AKI के एटियलजि को अलग करने में सहायता करने के लिए उभरे हैं।गुर्दे खराबबायोमार्कर सहितगुर्दे की चोटअणु-1 (KIM-1), न्यूट्रोफिल जिलेटिनस-एसोसिएटेड लिपोकेलिन (NGAL), इंटरल्यूकिन-18, लिवर फैटी एसिड-बाइंडिंग प्रोटीन (L-FABP), इंसुलिन जैसा ग्रोथ फैक्टर बाइंडिंग प्रोटीन -7 (IGFBP-7), और मेटालोप्रोटीनस के ऊतक अवरोधक-2 (TIMP-2) को Scr बढ़ाने से पहले बढ़ाया जा सकता है।गुर्दे खराबकार्यात्मक परिवर्तन के बिना [7]। अध्ययनों से पता चला है कि ये बायोमार्कर AKI [8, 9] के एटियलजि को अलग कर सकते हैं। AKI का पता लगाने और उसमें अंतर करने के लिए बेहतर बायोमार्कर सिरोसिस के रोगियों में महत्वपूर्ण अपूर्ण नैदानिक ​​​​आवश्यकताओं का प्रतिनिधित्व करते हैं।

एक्सोसोम नैनोवेसिकल्स होते हैं जो जीवित कोशिकाओं से अंतरकोशिकीय संचार के एक तंत्र के रूप में निकलते हैं [10]। * एक्सोसोम की ई प्रोटीन सामग्री को पैथोलॉजिकल या तनाव की स्थिति [11-13] के तहत उल्लेखनीय रूप से संशोधित दिखाया गया है। मेंगुर्दा,एक्सोसोम को सभी प्रकार की कोशिकाओं [14, 15] से मूत्र में पहुंचाया जाता है, और मूत्र एक्सोसोम को संभावित रूप से विषय के जैव रासायनिक हस्ताक्षर के रूप में माना जा सकता है। चूंकि यूरिनरी एक्सोसोम की नियमित रूप से जांच नहीं की जाती है, वे सिरोसिस के रोगियों में एकेआई के प्रोटीन बायोमार्कर पर अतिरिक्त अपरिचित जानकारी प्रदान कर सकते हैं।

इस अध्ययन का उद्देश्य स्वस्थ विषयों की तुलना में सिरोसिस और एकेआई वाले रोगियों में मूत्र संबंधी एक्सोसोम प्रोटिओमिक्स का मूल्यांकन करना था। हमने अनुमान लगाया कि सामान्य स्वस्थ नियंत्रण विषयों की तुलना में एकेआई का अनुभव करने वाले मुआवजे या विघटित सिरोसिस वाले रोगियों में मूत्र एक्सोसोम प्रोटीन सामग्री भिन्न होती है। इसके अलावा, हमने पोस्ट किया कि विभेदक मूत्र एक्सोसोमल प्रोटीन सामग्री के तंत्र में अंतर्दृष्टि प्रदान करेगीगुर्दे की चोटसिरोसिस में।

2। सामग्री और प्रणालियां

यह सिरोसिस वाले वयस्क रोगियों का एक संभावित, एकल-केंद्र और अवलोकन संबंधी अध्ययन है। अध्ययन के लिए सभी रोगियों को 1 जुलाई 2013 और 1 जून 2014 के बीच यूसी सैन डिएगो स्वास्थ्य प्रणाली से भर्ती किया गया था, और सूचित सहमति प्रदान की गई थी। यदि सिरोसिस का निदान किया गया था और मूत्र का नमूना प्रदान करने में सक्षम थे, तो रोगी शामिल किए जाने के योग्य थे। सिरोसिस का निर्धारण लीवर बायोप्सी, क्रॉस-सेक्शनल इमेजिंग या चिकित्सकीय रूप से (एक हेपेटोलॉजिस्ट द्वारा निर्धारित एक अपघटन घटना की पहचान के माध्यम से) किया गया था। जनसांख्यिकी, एंथ्रोपोमेट्रिक्स, महत्वपूर्ण संकेत, कॉमरेड चिकित्सा समस्याएं, सिरोसिस के एटियलजि, सिरोसिस की जटिलताओं (जलोदर, वैरिस, यकृत एन्सेफैलोपैथी, और हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा), एकेआई या इतिहास सहित इलेक्ट्रॉनिक स्वास्थ्य रिकॉर्ड से डेटा निकाला गया था।गुर्दे की पुरानी बीमारी, और नामांकन के 30 दिनों के भीतर दवा एक्सपोजर। नामांकन के 30 दिनों के भीतर केवल पूर्ण नैदानिक ​​डेटा और प्रयोगशाला परीक्षण वाले मरीज़ ही इस अध्ययन में शामिल होने के पात्र थे। मरीजों को निम्नानुसार समूहों में वर्गीकृत किया गया था:

(1) समूह 0: सामान्य स्वस्थ नियंत्रण

(2) समूह 1: मुआवजा सिरोसिस (बाल-टरकोट- पुघ वर्ग ए, एमईएलडी 10) जिसमें एकेआई का कोई इतिहास नहीं है और सामान्य हैगुर्दा कार्य

(3) समूह 2: विघटित सिरोसिस (बाल-टरकोट-पुघ वर्ग बी या सी) जिसमें AKI और सामान्य का कोई इतिहास नहीं हैगुर्दा कार्य

(4) समूह 3: विघटित सिरोसिस (बाल-टरकोट- पुघ वर्ग बी या सी) और एकेआई

सामान्यगुर्दा कार्यअनुमानित GFR> 60 ml/min/1.73 m2 (MDRD फॉर्मूला), कोई एल्बुमिनुरिया नहीं, और AKI का कोई इतिहास नहीं के रूप में परिभाषित किया गया था। AKI को AKIN मानदंड के अनुसार परिभाषित किया गया था: 48 घंटे में 0.3 mg/dl की वृद्धि या बेसलाइन से Scr में 50 प्रतिशत की वृद्धि [16]। एकेआई के रोगियों को एकेआई के एपिसोड के दौरान रक्त और मूत्र के नमूने प्राप्त होने पर इनपेशेंट हेपेटोलॉजी सेवा से प्रवेश और परामर्श के दौरान भर्ती किया गया था। स्वस्थ नियंत्रण के चौथे समूह को यूसी सैन डिएगो स्कूल ऑफ मेडिसिन में यूसीएसडी ओ'ब्रायन सेंटर फॉर एकेआई रिसर्च में एक स्वस्थ सामान्य बायोरेपोजिटरी से निकाला गया था। *कार्य को कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, सैन डिएगो के संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया था।

2.1. एक्सोसोम अलगाव के लिए मूत्र नमूनाकरण और प्रसंस्करण।

30 मिनट के लिए मूत्र को 3 000 × g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला पीएच 7 से समायोजित किया गया था, और −80 डिग्री सेल्सियस पर जमे हुए थे। पॉलीइथाइलीन ग्लाइकॉल- (पीईजी-) प्रेरित वर्षा [17] का उपयोग करके एक्सोसोम तैयार किए गए थे। *ई खूंटी-मिश्रित मूत्र के नमूनों को 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर रखा गया और 30 मिनट के लिए 10, 000 × ग्राम पर काता गया। * ई पेलेट को 10 मिमी ट्रिस में 1 मिमी EDTA-Na नमक के साथ फिर से जोड़ा गया। *अशुद्धियों को दूर करने के लिए चरण दो बार दोहराया गया है। एक्सोसोम प्रोटीन का एक आयामी एसडीएस पृष्ठ इन-जेल ट्रिप्सिनाइजेशन से पहले आयोजित किया गया था ताकि भ्रमित होने से बचा जा सके [18]।

2.2. प्रोटीन विश्लेषण।

जेल को 1 मिमी × 1 मिमी तक काटा गया और 15 मिनट के लिए 1 0 0 100 मिमी अमोनियम बाइकार्बोनेट के µ एल का उपयोग करके 3 बार नष्ट कर दिया गया, इसके बाद 15 मिनट के लिए 100 µ एल एसीटोनिट्राइल (एसीएन) का उपयोग किया गया [19] ]. * ई सतह पर तैरनेवाला lyophilized था, और परिणामी गोली 100 मिमी अमोनियम बाइकार्बोनेट -10 मिमी डीटीटी के 200 µ एल के साथ कम हो गई थी और 30 मिनट के लिए 56 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। तरल निकालने के बाद, जेल के टुकड़ों को 100 मिमी अमोनियम बाइकार्बोनेट -55 मिमी आयोडोएसेटामाइड के 200 µ एल में जोड़ा गया। *अँधेरे में 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट किया गया था। * ई सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था और 15 मिनट के लिए 100 मिमी अमोनियम बाइकार्बोनेट से धोया गया था। * en, जेल के टुकड़ों को निर्जलित करने के लिए ACN के 100 µ l को जोड़ा गया, और घोल को lyophilized किया गया। 50 मिमी अमोनियम बाइकार्बोनेट समाधान में आइस-कोल्ड ट्रिप्सिन (0.01 माइक्रोग्राम / μL) को फिर पाचन प्रक्रिया के लिए जेल के टुकड़ों को कवर करने के लिए जोड़ा गया और 30 मिनट के लिए बर्फ पर सेट किया गया। एक बार पुनर्जलीकरण पूरा हो जाने के बाद, अतिरिक्त को बदलने के लिए ताजा 50 मिमी अमोनियम बाइकार्बोनेट जोड़ा गया। ट्रिप्सिन और 37 डिग्री पर रात भर छोड़ दिया। पेप्टाइड्स का निष्कर्षण दो बार 0.2 प्रतिशत फॉर्मिक एसिड और 5 प्रतिशत एसीएन के 50 μl के अलावा कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए भंवर में किया गया था। सतह पर तैरनेवाला हटाने के बाद, 50 प्रतिशत एसीएन के 50 μl -0 .2 प्रतिशत फॉर्मिक एसिड को नमूने में जोड़ा गया, कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए फिर से भंवर में डाल दिया गया। * क्या सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था और पहले निष्कर्षण से पिछले सतह पर तैरनेवाला के साथ जोड़ा गया था। QExactive मास स्पेक्ट्रोमीटर (थर्मो फिशर) का उपयोग करके टेंडेम मास स्पेक्ट्रोस्कोपी के साथ संयोजन में ट्रैप-एल्यूट मोड में cHiPLC-नैनो फ्लेक्स सिस्टम (Eksigent, AB SCIEX Dublin, CA, USA) के साथ Eksigent नैनो-LC-Ultra® 2D का उपयोग करके नमूनों का विश्लेषण किया गया। वैज्ञानिक, सैन जोस, सीए, यूएसए) इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण के साथ [17]।

2.3. डाटा प्रबंधन।

विश्लेषण में SEQUEST सर्च इंजन (थर्मो साइंटिफिक प्रोटिओम डिस्कवर सॉफ्टवेयर, संस्करण 1.4) का उपयोग किया गया था। * राष्ट्रीय जैव प्रौद्योगिकी सूचना केंद्र (एनसीबीआई) से होमो सेपियन्स के लिए ट्राइप्टिक पेप्टाइड अनुक्रमों के लिए ई प्रोटीन डेटाबेस का उपयोग हमारे प्रयोगात्मक एमएस / एमएस स्पेक्ट्रा की तुलना करने के लिए किया गया था। पेप्टाइड अनुक्रमों और संबंधित प्रोटीनों की पहचान करने के लिए, हमने पहले प्रकाशित मानदंड [17] का उपयोग किया। सांख्यिकीय महत्व का आकलन करने के लिए, अलग-अलग लक्ष्य और नकली खोजों और शास्त्रीय स्कोर-आधारित झूठी खोज दरों (एफडीआर) की गणना का उपयोग किया गया था। अंत में, हमने प्रोटीन को अंतिम स्कोर प्रदान करने के लिए SEQUESToutput डेटा को फ़िल्टर किया। 1.5, 2.0, 2.25, और 2.5 के सहसंबंध स्कोर (Xcorr) के न्यूनतम मूल्यों को क्रमशः सिंगल-, डबल-, ट्रिपल- और क्वाड्रुपोल-चार्ज आयनों के लिए चुना गया था। पहले प्रकाशित मापदंडों का उपयोग उच्च कठोरता [20] की गारंटी के लिए किया गया था, और झूठी-सकारात्मक पेप्टाइड अनुपात 3 प्रतिशत से कम था।

2.4. सांख्यिकीय विश्लेषण।

सामान्यीकृत वर्णक्रमीय बहुतायत कारक (NSAF) का उपयोग पॉलीपेप्टाइड्स [21] के सापेक्ष बहुतायत की गणना के लिए किया गया था। सांख्यिकीय विश्लेषण से पहले पेप्टाइड गणनाओं का लॉग परिवर्तन और स्केलिंग किया गया था। MetaboAnalyst 2.0 वेब पोर्टल का उपयोग छात्र के t-परीक्षण, आंशिक न्यूनतम वर्ग विभेदक विश्लेषण (PLS-DA), और एक प्राथमिक p < 0="" के="" साथ="" प्रक्षेपण="" (vip)="" में="" परिवर्तनशील="" महत्व="" को="" करने="" के="" लिए="" किया="" गया="" था।="" 05="" [22]।="" *="" प्रत्येक="" समूह="" के="" लिए="" युग्मित="" छात्र="" के="" t="" -est="" का="" उपयोग="" करके="" व्यक्तिगत="" प्रोटीन="" के="" कुल="" सांद्रता="" के="" अनुपात="" का="" मूल्यांकन="" किया="" गया="" था।="" पीएलएस-डीए="" और="" वीआईपी="" का="" इस्तेमाल="" भेदभावपूर्ण="" प्रोटीन="" [23]="" की="" पहचान="" के="" लिए="" किया="" गया="" था।="" हमने="" पश्चिमी="" सोख्ता="" का="" उपयोग="" करके="" मान्य="" करने="" के="" लिए="" 10="" प्रतिशत="" से="" कम="" या="" उसके="" बराबर="" की="" झूठी="" खोज="" दर="" (fdr)="" वाले="" प्रोटीन="" का="" चयन="">

2.5. पश्चिमी इम्युनोब्लॉटिंग और मात्रा का ठहराव।

MGAM के खिलाफ एंटीबॉडी को प्रोटीनटेक ग्रुप, इंक।, (शिकागो, आईएल, यूएसए) से खरीदा गया था और इसका उपयोग प्रत्येक विषय के मूत्र एक्सोसोम से 100 कुरूप प्रोटीन को हल करने के लिए किया गया था। अलग होने के बाद, प्रोटीन को नाइट्रोसेल्यूलोज पेपर में स्थानांतरित कर दिया गया, अवरुद्ध कर दिया गया, ट्रिस-बफर खारा के साथ धोने से पहले रात भर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया, एचआरपी-माध्यमिक एंटीबॉडी संयुग्म के साथ 1 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया, और हमारी प्रयोगशाला से पिछले प्रकाशनों में वर्णित के रूप में विकसित करके कल्पना की गई। 24, 25]। ImageJ सॉफ्टवेयर (NIH) का उपयोग पश्चिमी इम्युनोब्लॉट बैंड [24] की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया गया था और प्लॉट किया गया था (ग्राफपैड प्रिज्म, सैन डिएगो, सीए, यूएसए)।

3। परिणाम

3.1. सिरोसिस और स्वस्थ नियंत्रण विषयों के नैदानिक ​​​​लक्षण।

पूर्ण नैदानिक ​​​​डेटा वाले प्रत्येक समूह में छह रोगियों का विश्लेषण किया गया और छह स्वस्थ नियंत्रणों की तुलना में। जिगर की बीमारी की जनसांख्यिकी और एटियलजि को तालिका 1 में संक्षेपित किया गया है। जैसा कि अध्ययन के डिजाइन के अनुसार अनुमान लगाया गया था, चाइल्ड टरकोट-पुघ और एमईएलडी स्कोर रोगी समूहों के बीच काफी भिन्न थे।

3.2. सिरोसिस के मरीजों और स्वस्थ नियंत्रण से मूत्र एक्सोसोम का प्रोटीन विश्लेषण।

कुल मिलाकर, सभी 4 समूहों में, 1572 अद्वितीय प्रोटीनों की पहचान की गई। 360 प्रोटीन थे जो सभी समूहों के लिए सामान्य थे। हमने समूह 0 (नियंत्रण) के लिए 83 अद्वितीय एक्सोसोमल प्रोटीन, समूह 1 के लिए 250, समूह 2 के लिए 84, और समूह 3 के लिए 212 (चित्र 1) पाया। हमने आगे प्रोटीन पर बहुभिन्नरूपी पीएलएस-डीए का संचालन किया, जिसमें स्वस्थ नियंत्रण समूह और सिरोथिक विषयों के विभिन्न उपसमूहों के बीच एक स्पष्ट अलगाव दिखाया गया था, जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है। बिना मुआवजा और विघटित सिरोथिक विषयगुर्दे की चोट(समूह 1 और 2) ने काफी ओवरलैप दिखाया, जबकि एकेआई (समूह 3) के साथ सिरोथिक विषयों ने अन्य सिरोथिक विषयों और स्वस्थ नियंत्रण विषयों से स्पष्ट अलगाव दिखाया। चार समूहों के बीच प्रोटीन के एक अलग एनोवा ने दिखाया कि 126 प्रोटीनों में काफी बदलाव किया गया था (पी <{4}}.05), जिनमें="" से="" 13="" प्रोटीन="" की="" झूठी="" खोज="" दर="" (एफडीआर)="" कटऑफ="" तक="" पहुंच="" गए=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. माल्टेज-ग्लूकोमाइलेज प्रोटीन विघटित सिरोथिक मूत्र एक्सोसोम में बढ़ जाता है।

प्रोटिओमिक डेटा ने विघटित सिरोथिक रोगियों के मूत्र एक्सोसोम में एमजीएएम की उच्च सांद्रता दिखाई, साथ और बिनागुर्दे की चोट(समूह 2 और 3)। यह सभी चार समूहों में सबसे अधिक भेदभाव करने वाला प्रोटीन था, जिसका वीआईपी स्कोर 4.35 था (चित्र 3)। इन एक्सोसोम के पुष्टिकारक पश्चिमी सोख्ता ने केवल सिरोसिस वाले रोगियों में पता लगाने योग्य प्रोटीन का प्रदर्शन कियागुर्दे की चोट(समूह 3) (चित्र 4)।

4। चर्चा

हमने मुआवजा सिरोसिस, विघटित सिरोसिस, और एकेआई के साथ विघटित सिरोसिस वाले रोगियों से मूत्र एक्सोसोम सामग्री का एक प्रोटिओमिक विश्लेषण किया और उनकी तुलना स्वस्थ नियंत्रण से की। सिरोसिस के रोगियों में मूत्र एक्सोसोम के प्रोटिओमिक विश्लेषण ने कई संभावित महत्वपूर्ण बायोमार्करों की पहचान कीगुर्दे की चोट, विशेष रूप से एमजीएएम, एक द्वि-कार्यात्मक एंजाइम। हमने सिरोसिस और एकेआई के रोगियों के मूत्र एक्सोसोम में एमजीएएम की उच्चतम सांद्रता पाई। इसके अलावा, सिरोसिस के रोगियों में एमजीएएम में वृद्धि हुई थी, लेकिन एकेआई वाले लोगों की तरह नहीं। एमजीएएम स्वस्थ नियंत्रण समूह में अनुपस्थित था, गंभीर बीमारी के बायोमार्कर के रूप में इसकी संभावित भूमिका पर प्रकाश डाला।

इस अध्ययन में कई अन्य महत्वपूर्ण निष्कर्ष हैं। सबसे पहले, हमारे ज्ञान के लिए, यह अच्छी तरह से चित्रित सिरोथिक विषयों में मूत्र एक्सोसोम प्रोटीन सामग्री के वर्णनात्मक विश्लेषण पर पहली रिपोर्ट है। दूसरा, यह पहला अध्ययन है जिसमें में बढ़े हुए ट्यूबलर एपिथेलियल डिसैकराइडेस की रिपोर्ट की गई हैसिरोथिक-गुर्दे की चोटआदर्श। 4 अलग-अलग समूहों के मूत्र एक्सोसोम प्रोटिओमिक डेटा ने सिरोसिस एकेआई समूह में एमजीएएम अपग्रेडेशन को मजबूत और सुसंगत दिखाया। माल्टेज़ रीनल ब्रश बॉर्डर मेम्ब्रेन [26, 27] में प्रमुख डिसैकराइडेज़ है, लेकिन इस एंजाइम का सटीक कार्य स्पष्ट रूप से स्पष्ट नहीं है; हालांकि, चीनी परिवहन में संबंधित डिसैकराइडेस, सुक्रेज़-आइसोमाल्टेज़ और ट्रेहलेज़ के लिए एक संभावित भूमिका का अनुमान लगाया गया है [28]। दस स्तनधारी प्रजातियों में, MGAM से संबंधित डिसैक्राइड वृक्क ब्रश सीमा [27] में पाए गए हैं। फ़ारक़ुहर और उनके सहयोगियों ने प्रदर्शित किया है कि माल्टेज़ समीपस्थ घुमावदार नलिका के माइक्रोविली में मौजूद है, शायद ग्लूकोज पुन:अवशोषण और परिवहन में कार्य कर रहा है; और यह अवशोषण क्षमता नेफ्रॉन के अधिक दूरस्थ भागों की ओर घट जाती है [29]। एमजीएएम को गैर-मादक स्टीटोहेपेटाइटिस (एनएएसएच) [30] के एक माउस मॉडल में एक्सोसोम और माइक्रोपार्टिकल्स में मौजूद दिखाया गया था, जो सिरोसिस का एक सामान्य कारण है। चूंकि सिरोसिस के रोगियों में कई अंतर्निहित स्थितियां होती हैं जो Scr में कमी में योगदान करती हैं, AKI का पता लगाना समस्याग्रस्त है। इसके अतिरिक्त, चोट का एटियलजि अक्सर अज्ञात होता है, और हेपेटोरेनल सिंड्रोम और एकेआई के अन्य एटियलजि के बीच अंतर करना मुश्किल होता है। इसके अलावा, AKI के साथ विघटित सिरोसिस का पैथोफिज़ियोलॉजी स्पष्ट नहीं है क्योंकि यह जीर्ण जिगर की विफलता [31] पर तीव्र के मामले में हेमोडायनामिक परिवर्तन या भड़काऊ मध्यस्थों को प्रतिबिंबित कर सकता है। हमने तर्क दिया कि सिरोसिस और पोर्टल उच्च रक्तचाप के कारण संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तन होते हैंगुर्दा कार्यसिरोसिस की गंभीरता के अनुसार गंभीरता में भिन्नता है। क्षतिपूर्ति और विघटित यकृत रोग के बीच ये अंतरगुर्दे की चोटके डाउनस्ट्रीम उत्पादों का अध्ययन करके समझा जा सकता हैगुर्दा, जैसे मूत्र। यूरिनरी एक्सोसोम के नेफ्रॉन सेल-स्टेट-स्पेसिफिक कार्गो को देखते हुए, हमने अनुमान लगाया कि यूरिन एक्सोसोम विश्लेषण में महत्वपूर्ण जानकारी है जो सिरोसिस में एकेआई के भेदभाव के लिए प्रासंगिक है। यह रिपोर्ट इस परिकल्पना के परीक्षण की दिशा में पहला कदम है।

इस अध्ययन डिजाइन की कई सीमाएँ थीं। सबसे पहले, प्रति समूह विश्लेषण किए गए विषयों की संख्या कम है। बड़ा नमूना आकार इन आंकड़ों की मजबूती को और बढ़ा सकता है, और अतिरिक्त प्रोटीन एक स्वीकार्य एफडीआर की दहलीज तक पहुंच सकते हैं।<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

सारांश में, हमने स्वस्थ नियंत्रण में मूत्र एक्सोसोम प्रोटीन अंतर की विशेषता बताई है और प्रोटिओमिक विधियों द्वारा एकेआई के साथ और उसके बिना मुआवजा और विघटित सिरोथिक विषयों की विशेषता है। नेपर समूह के कार्य से पता चलता है कि कई महत्वपूर्ण वृक्क प्रोटीन (जैसे, एक्वापोरिन, पॉलीसिस्टिन, और पॉडोसिन) मूत्र के एक्सोसोम [32, 33] में बहाए जाते हैं। हमारी वर्तमान रिपोर्ट MGAM को मूत्र एक्सोसोम में पहचाने जाने वाले कार्यात्मक रूप से महत्वपूर्ण वृक्क प्रोटीन के इस समूह में जोड़ती है। हमारे निष्कर्ष बताते हैं कि एमजीएएम सिरोसिस के रोगियों में अन्य प्रकार के एकेआई से समीपस्थ ट्यूबलर चोट को अलग कर सकता है। हालांकि, एकेआई के साथ सिरोसिस विषयों में एमजीएएम अपग्रेडेशन के नैदानिक ​​​​महत्व को भविष्य के अध्ययनों में स्थापित करने की आवश्यकता है।

डेटा उपलब्धता

इस अध्ययन के निष्कर्षों का समर्थन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले नैदानिक ​​​​और प्रोटिओमिक डेटा यूसीएसडी संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा रोगी की गोपनीयता की रक्षा के लिए प्रतिबंधित हैं। * ई डेटा डॉ लिंडा अवदिशु (lawdishu@ucsd.edu) से उन शोधकर्ताओं के लिए उपलब्ध हैं जो मिलते हैं गोपनीय डेटा तक पहुंच के लिए मानदंड।

हितों का टकराव

लेखक घोषणा करते हैं कि उनके हितों का कोई टकराव नहीं है।

स्वीकृतियाँ

एनआईएच एनआईडीडीके यूएबी/यूसीएसडी ओ'ब्रायन सेंटर ग्रांट डीके0793337 के माध्यम से समर्थित अनुसंधान।

लेखक

लिंडा अवदिशु,^1,2 शर्ली सूनोदा,¹ मिशेल पर्लमैन,³ चैंथेल कोकोय-मोंड्रैगन,²माजिद घासेमियान,⁴रॉबर्ट के. नवियाक्स,⁵हीथर एम. पैटन,³रवींद्र एल मेहता,²भव्य विजय,⁶और सतीशो P.रामचंद्र राव ^2,6,7

1UC सैन डिएगो स्केग्स स्कूल ऑफ फार्मेसी एंड फार्मास्युटिकल साइंसेज, सैन डिएगो, यूएसए

2बायोमार्कर प्रयोगशाला, ओ'ब्रायन सेंटर फॉरतीक्ष्ण गुर्दे की चोटअनुसंधान, नेफ्रोलॉजी-उच्च रक्तचाप, यूसी सैन डिएगो, चिकित्सा विभाग, सैन डिएगो, यूएसए

3UC सैन डिएगो, मेडिसिन विभाग, गैस्ट्रोएंटरोलॉजी विभाग, सैन डिएगो, यूएसए

4UC सैन डिएगो, रसायन विज्ञान और जैव रसायन विभाग, बायोमोलेक्युलर और प्रोटिओमिक्स स्पेक्ट्रोमेट्री सुविधा, सैन डिएगो, यूएसए

5UC सैन डिएगो, मेडिसिन विभाग, बाल रोग और पैथोलॉजी, सैन डिएगो, यूएसए

6आई-एआईएम बायोमार्कर प्रयोगशाला, ट्रांस अनुशासनिक स्वास्थ्य विज्ञान और प्रौद्योगिकी विश्वविद्यालय (टीडीयू), बैंगलोर, भारत

7UC सैन डिएगो, चिकित्सा विभाग, संक्रामक रोगों का विभाग, सैन डिएगो, यूएसए

पत्राचार सतीश पी. रामचंद्र राव को संबोधित किया जाना चाहिए; 30 अक्टूबर 2018 को प्राप्त हुआ; संशोधित 31 दिसंबर 2018; 19 फरवरी 2019 को स्वीकृत; प्रकाशित 16 अप्रैल 2019 अकादमिक संपादक: एंटोनियो आर्टिगास

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