इन विट्रो और सिलिको में टायरोसिनेस अवरोधकों में अंतर्दृष्टि

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ही जिन जंग ए, बी, सी, सांग ग्युन नोह ए, बी, सी, युजिन पार्क ए, डोंगवान कांग ए, पुसून चुन डी, हे यंग चुंग ए, बी, सी, ⇑, ह्युंग रयोंग मून ए

सार

टायरोसिनेस मेलेनिन बायोसिंथेसिस के लिए जिम्मेदार एक प्रमुख एंजाइम है और पराबैंगनी विकिरण के कारण त्वचा की क्षति से बचाने में प्रभावी है। शक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधकों की खोज के लिए चल रहे प्रयासों के हिस्से के रूप में, हमने तेरह (ई) -बेंजाइलिडीन-1-इंडैनोन डेरिवेटिव्स (बीआईडी1-13) को व्यवस्थित रूप से डिजाइन और संश्लेषित किया और टायरोसिनेस के खिलाफ उनकी निरोधात्मक गतिविधियों को निर्धारित किया। मूल्यांकन किए गए यौगिकों में, BID3 मशरूम टायरोसिनेस (IC 50=0.034 mM, माइकोफेनोलेट गतिविधि; IC 50=1.39 mM, diphenols गतिविधि) का सबसे प्रबल अवरोधक था। काइनेटिक अध्ययनों से पता चला है कि BID3 ने सब्सट्रेट के रूप में L-DOPA का उपयोग करते हुए 2.4 mM के Ki मान के साथ मिश्रित प्रकार के टायरोसिनेस निषेध का प्रदर्शन किया। सिलिको आणविक डॉकिंग सिमुलेशन में प्रदर्शित किया गया कि BID3 एंजाइम गतिविधि को बाधित करने के लिए टायरोसिनेस के उत्प्रेरक और एलोस्टेरिक साइटों से जुड़ सकता है, जिसकी पुष्टि BID3 और टायरोसिनेस के बीच इन विट्रो प्रयोगात्मक अध्ययनों में हुई है। इसके अलावा, मेलेनिन सामग्री में कमी आई और BID3 उपचार के बाद सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि को रोक दिया गया। इन अवलोकनों से पता चला कि BID3 एक शक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधक है और संभावित रूप से रंजकता संबंधी विकारों के उपचार के लिए एक श्वेत एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

Cistanche: त्वचा को गोरा करने वाली जड़ी बूटी

1 परिचय

मेलेनिन को एपिडर्मिस की जागीरदार परत में मेलानोसाइट्स द्वारा संश्लेषित किया जाता है, आमतौर पर पिगमेंट के परिवार को संदर्भित करता है जो आमतौर पर स्तनधारी त्वचा को मुक्त कणों को परिमार्जन करके या आने वाले यूवी प्रकाश को फैलाने से हानिकारक यूवी विकिरण से होने वाले नुकसान से बचाने के लिए जाना जाता है। हालांकि, मेलेनिन की प्रचुर मात्रा में उत्पन्न होने से एपिडर्मिस के दृश्य हाइपरपिग्मेंटेशन का कारण बनता है, जो कि मेलास्मा, झाई, उम्र के धब्बे, या सेनील लेंटिगिन [2] के रूप में स्पष्ट हो सकता है।

टायरोसिनेस (ईसी 1.14.18.1), एक तांबा युक्त मेटालोएंजाइम, मेलेनोजेनिक प्रक्रियाओं में शामिल एक प्रमुख एंजाइम है। Tyrosinase मेलानोजेनेसिस में दो दर-सीमित चरणों को उत्प्रेरित करता है; टाइरोसिन (क्रेसोलेज़ या माइकोफेनोलेट गतिविधि) का हाइड्रॉक्सिलेशन 3, 4- डाइहाइड्रॉक्सीफेनिलएलनिन (एल-डीओपीए) और एल-डीओपीए (कैटेकोलेज़ या डिफेनोल्स गतिविधि) के बाद के ऑक्सीकरण को संबंधित डीओपीए-क्विनोन में उत्पन्न करता है। जब एल-टायरोसिन सब्सट्रेट होता है, तो टायरोसिनेस उत्प्रेरित प्रतिक्रिया का उत्पाद डीओपीए-क्विनोन होता है, जिसे बाद में मेलेनिन [3] में बदल दिया जाता है। यूवी क्षति के खिलाफ त्वचा की सुरक्षा के लिए ये कदम महत्वपूर्ण हैं। मशरूम एगारिकस का उपयोग इसके व्यावसायिक रूप से उपलब्ध और उच्च समरूपता के लिए स्तनधारी टायरोसिनेस एंजाइम के साथ किया जाता है जो इसे मेलानोजेनेसिस [4] पर अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में अच्छी तरह से अनुकूल बनाता है। मनुष्यों में, मेलेनिन त्वचा को यूवी [5] से होने वाले नुकसान से बचाने में मदद करता है। हालांकि, मेलेनिन का अतिरिक्त स्तर हाइपरपिग्मेंटेशन, मेलास्मा, झाई और उम्र के धब्बे [6] सहित विभिन्न त्वचा संबंधी विकारों का कारण बनता है। इसलिए, अत्यधिक त्वचा रंजकता को रोकने के लिए दवा जैसी और त्वचा को गोरा करने वाले गुणों को प्रदर्शित करने वाले न्यूटायरोसिनेस अवरोधकों की आवश्यकता होती है।

1-इंडानोन, एक बेंज़ॉयल-साइक्लोपेंटेनोन कंकाल के साथ, चाल्कोन के कठोर चचेरे भाई के रूप में माना जाता है, जिसमें चक्रीय 5 सदस्यीय रिंग बनाने वाले चाकोनों की असंतृप्त कीटोन प्रणाली शामिल होती है, जो एक प्राकृतिक रूप से पाया जाने वाला घटक है जो विभिन्न खाद्य पौधों के स्रोतों में मौजूद है [7 ]. कई अध्ययनों से पता चला है कि 1-इंडानोन की मात्रा वाले यौगिकों का औषधीय महत्व है, क्योंकि वे विभिन्न लाभकारी जैविक गतिविधियों को प्रदर्शित करते हैं, जिनमें विरोधी भड़काऊ [8-10], कैंसर विरोधी [11,12], एंटीऑक्सिडेंट [13], एंटी-पार्किंसंस शामिल हैं। रोग [14], एंटी-अल्जाइमर रोग [15-17], रोगाणुरोधी [18], प्रतिरक्षा-विरोधी दमनकारी [19], और एंटी-टायरोसिनेस [20] गुण।

चेल्कोन (1,3-डायरी-2-उचित-1-वाले) सुगंधित कीटोन होते हैं, जिसमें केंद्रीय कोर के रूप में तीन-कार्बन a,b-असंतृप्त कार्बोनिल प्रणाली से जुड़े दो सुगंधित वलय होते हैं [21, 22]। ये विभिन्न खाद्य प्राकृतिक पौधों में पाए जाने वाले प्राकृतिक रूप से पाए जाने वाले घटक हैं और फ्लेवोनोइड्स और आइसोफ्लेवोनोइड्स जैसे पाइराज़ोलिन, पाइरीमिडीन, फ़्लेवनॉल, फ्लेवोन, फ़्लेवनोन, आइसोफ्लेवोन्स, ऑरोन्स, एंथोसायनिडिन, डायहाइड्रोफ़्लेवनॉल और डायहाइड्रोक्लोन के सिंथेटिक मार्ग के लिए अग्रदूत यौगिकों के रूप में माने जाते हैं। [23-25]। ए, बी असंतृप्त कार्बोनिल प्रणाली जैविक गतिविधि के प्रकार के लिए सर्वोपरि है, क्योंकि इन प्रणालियों को कई प्राकृतिक उत्पादों जैसे चाकोन के साथ-साथ इंडेनोन में वितरित किया जाता है, जहां आणविक अपेक्षाकृत अधिक प्लानर होते हैं, और एरिल प्रतिस्थापन के इलेक्ट्रॉनिक प्रभावों के संचरण को निर्देशित किया जाता है। कार्बोनिल समूह [7] के लिए। पिछले कई शोधकर्ताओं ने बताया कि कई प्रकाशनों [26-29] में टायरोसिनेस इनहिबिटर के एक नए वर्ग के रूप में चाकोन को हाइलाइट किया गया था। हाल ही में, किम और सहकर्मियों [30,31] ने चेल्कोन डेरिवेटिव के एसरीज को डिजाइन और संश्लेषित किया और उनके इन विट्रो एंटी- टायरोसिनेस और मुराइन मेलानोसाइट्स के खिलाफ एंटी-मेलेनोजेनिक गतिविधियां।

हमारे पहले बताए गए आंकड़ों के अनुसार, एक (ई) -बी-फिनाइल-ए, बी-असंतृप्त कार्बोनिल मचान के साथ डेरिवेटिव ने पोटेंटायरोसिनेस निषेध [32-34] दिखाया। (ई) -बेंजाइलिडीन -1-इंडोनोन एक आकर्षक एंटी-मेलेनोजेनिक एजेंट हो सकता है क्योंकि यौगिकों की रासायनिक संरचना में (ई) -बी-फिनाइल-ए, बी-असंतृप्त कार्बोनिल पाड़ होता है। विशेष रूप से, राधाकृष्णन एट अल। (2015) [20] ने बेंजाइलिडीन की एक श्रृंखला को डिज़ाइन और संश्लेषित किया है -1- एक (जेड) -कॉन्फ़िगरेशन को प्रभावित करने वाले इन्डोनेडरिवेटिव्स और एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि के लिए उनका मूल्यांकन किया। हालांकि इन (Z) -बेंजाइलिडीन -1-इंडैनोन डेरिवेटिव्स की जांच की गई है (ई) -बेंजाइलिडीन -1- की एंटी-टाइरोसिनेज और एंटी-मेलेनोजेनिक गतिविधियों की अभी तक जांच नहीं की गई है।

इसलिए, हमने 1-इंडानोन कंकाल के तेरह यौगिकों (BID1–13) को डिज़ाइन और संश्लेषित किया है, जिसमें एक (E) -फॉर्म बेंजाइलिडीन होता है। इन सिंथेटिक यौगिकों के बीच, 1-इंडानोन के बी रिंग पर एक 2,4-डायहाइड्रॉक्सीग्रुप ने सबसे बड़ा टायरोसिनेसिनहिबिशन दिखाया (लगभग 400-कोजिक एसिड, सकारात्मक नियंत्रण से अधिक प्रभावी)। इसके अलावा, हम आगे BID3 tyrosinaseinhibitory गतिविधि के साथ-साथ B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं का उपयोग करके मेलेनिन संश्लेषण में इसकी नियामक भूमिका को चिह्नित करने के लिए मूल्यांकन करते हैं। विस्तारित प्रयोगों में, हमने BID3 की मेलेनोजेनिक क्षमता का मूल्यांकन किया और एंजाइम कैनेटीक्स और आणविक डॉकिंग अध्ययनों की पहचान करने की मांग की। क्रमिक प्रयोगों में, A-MSH और IBMX-प्रेरित B16F10मेलेनोमा कोशिकाओं में BID3 सेलुलर टायरोसिनेस क्षमता और मेलेनिन उत्पादन का भी पता लगाया गया।

एंटी-ऑक्सीडेशन और स्किन वाइटनिंग: सिस्टैंच एक्सट्रैक्ट

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. अभिकर्मकों

मशरूम टायरोसिनेस (ईसी 1.14.18.1), अल्फा-मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (ए-एमएसएच), 3-आइसोबुटिल-1-मिथाइलक्सैन्थिन (आईबीएमएक्स), एल-टायरोसिन, एल-3,{{ 11}}डायहाइड्रोक्सीफेनिलएलनिन (L-DOPA), डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO), कोजिक एसिड, फ़ेथलिक एसिड, और ट्रांस-सिनामिक एसिड को सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदा गया था। Dulbecco का संशोधित ईगल माध्यम (DMEM), भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), स्ट्रेप्टोमाइसिन और एम्फोटेरिसिन WELGENE Inc. (Gyeongsan-si, South Korea) से खरीदे गए थे। अन्य सभी अभिकर्मकों को सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदा गया था।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा अर्क

2.2. रसायन शास्त्र

2.2.1. सामान्य तरीके

सभी अभिकर्मकों को व्यावसायिक रूप से प्राप्त किया गया और आगे शुद्धिकरण के बिना उपयोग किया गया। थिन-लेयर क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी) और कॉलमक्रोमैटोग्राफी क्रमशः मर्क प्रीकोटेड 60एफ245प्लेट्स और एमपी सिलिका 40-63, 60 पर आयोजित की गई थी। उच्च विभेदन (एचआर) मास स्पेक्ट्रोस्कोपी डेटा ईएसआई पॉजिटिव मोड में एगिलेंट एक्यूरेट मास क्वाड्रपल-टाइम ऑफ फ्लाइट (क्यू-टीओएफ) लिक्विड क्रोमैटोग्राफी (एलसी) मास स्पेक्ट्रोमीटर (एगिलेंट, सांता क्लारा, सीए, यूएसए) पर प्राप्त किया गया था। परमाणु चुंबकीय अनुनाद (NMR) स्पेक्ट्रा को क्रमशः 1H NMR (400 और 500 MHz) और 13C NMR (100 MHz) के लिए वैरियन यूनिटी INOVA 400 स्पेक्ट्रोमीटर या वेरियन यूनिटीAS500 स्पेक्ट्रोमीटर (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) पर रिकॉर्ड किया गया था। . DMSO d6, CD3OD, और CDCl3 को NMR नमूनों के लिए NMR सॉल्वैंट्स के रूप में उपयोग किया गया था। युग्मन स्थिरांक (J) और रासायनिक शिफ्टवैल्यू को क्रमशः हर्ट्ज़ (Hz) और भागों प्रति मिलियन (पीपीएम) में मापा गया। 1H NMR डेटा के विश्लेषण में उपयोग किए जाने वाले संक्षिप्ताक्षर इस प्रकार हैं: s (सिंगलेट), bs (ब्रॉड सिंगलेट), d (डबल), dd (डबल का डबल), t (ट्रिपलेट), TD (डबल का ट्रिपल), q ( चौकड़ी), और एम (एकाधिक)।

2.2.2. BID1–13 . के संश्लेषण की प्रक्रिया

एचसीएल एसिटिक एसिड (0.4 एमएल) में 1 एम में बेंजाल्डिहाइड (1.1-1.2 इक्विव।) और 1-इंडानोन (100 मिलीग्राम, 0.76 मिमीोल) का घोल कमरे के तापमान पर उभारा गया था। 4-48 घंटे के लिए। पानी मिलाने के बाद, अवक्षेपों को फ़िल्टर किया गया और पानी और हेक्सेन से धोया गया: एथिलसेटेट (1:1), हेक्सेन: डाइक्लोरोमीथेन (4:1–1:1), या डाइक्लोरोमीथेन और मेथनॉल का मिश्रण, शेष बेंजाल्डिहाइड के गुणों पर निर्भर करता है। 32.8-99.1 प्रतिशत की पैदावार में (ई)-बेंजाइलिडीन-1-इंडानोन्स (बीआईडी1-13) देने के लिए। पूरक सूचना में संश्लेषित यौगिकों का संरचनात्मक लक्षण वर्णन (1H और 13C NMR और सभी BIDs का द्रव्यमान डेटा) प्रदान किया गया है।

2.2.2.1. (ई)-2-(4-हाइड्रोक्सीबेंजाइलिडीन)-2,3-डायहाइड्रो-1एच-इंडेन-1-एक(BID1)।

पीला ठोस; उपज, 93.4 प्रतिशत; प्रतिक्रिया समय, 6 घंटे; आणविक सूत्र, C16H12O2; एमपी, 224.7-225.9 सी; 1H NMR (400 MHz,DMSO d6) d 10.10 (s, 1H, OH), 7.72 (d, 1H, J=7.6 Hz, 7- एच), 7.64–7.58 (एम, 4एच, 4-एच, 5-एच, 20-एच, 60-एच), 7.43 (एस, 1एच, विनाइलिक एच), 7.39 (टी,1एच, जे=7.2 हर्ट्ज, 6-एच), 6.87 (डी, 2एच, जे=8.0 हर्ट्ज, 30-एच, {{46 }}एच), 3.99 (एस, 2एच,सीएच2); 13सी एनएमआर (100 मेगाहर्ट्ज, डीएमएसओ डी6) डी 193.9, 160.1, 150.4, 138.3,135.1, 134.0, 133.6, 132.2, 128.2, 127.2, 126.7, 124.1, 116.7, 32.6;एचआरएमएस (ईएसआई प्लस) एम/जेड सी16एच13ओ2 (एम प्लस) एच) प्लस कैल्कड 237.0910, obsd 237.0911।

2.2.2.2. (ई)-2-(3,4-डायहाइड्रोक्सीबेंजाइलिडीन)-2,3-डायहाइड्रो-1एच-इंडेन-1-एक (बीआईडी2)।

पीला ठोस; उपज, {{0}}.6 प्रतिशत; प्रतिक्रिया समय, 5 घंटे; अणु लार सूत्र, C16H12O3; एमपी, 251.2-252.4 सी; 1H NMR (400 MHz,DMSO d6) d 9.65 (s, 1H, OH), 9.24 (s, 1H, OH), 7.72 (d, 1H,J=7 .6 हर्ट्ज, 7-एच), 7.66–7.61 (एम, 2एच, {{30}}एच, 5-एच), 7.42 (टी, 1एच,जे {{35 }}.2 हर्ट्ज, 6-एच), 7.35 (एस, 1एच, विनाइलिक एच), 7.19 (एस, 1एच, 20-एच), 7.08 (डी,1एच) , जे=8.0 हर्ट्ज, 60-एच), 6.83 (डी, 1एच, जे=8.0 हर्ट्ज, 50-एच), 3.98 (एस, 2H,CH2 ); 13सी एनएमआर (100 मेगाहर्ट्ज, डीएमएसओ डी6) डी 193.8, 150.4, 148.7, 146.3,138.3, 135.1, 134.5, 132.0, 128.2, 127.3, 127.1, 125.0, 124.0,118.2, 116.7, 32.7; एचआरएमएस (ईएसआई प्लस) एम/जेड सी16एच13ओ3 (एम प्लस एच) प्लस कैल्कड253.0859, ओब्सड 253.0857।

2.2.2.3. (ई)-2-(2,4-डायहाइड्रॉक्सीबेंजाइलिडीन)-2,3-डायहाइड्रो-1एच-इंडेन-1-एक (बीआईडी3)।

पीला ठोस; उपज, 5{{20}}.9 प्रतिशत; प्रतिक्रिया समय, 10 घंटे; आणविक सूत्र, C16H12O3; एमपी, 198.5-199.9 सी (दिसंबर); 1H NMR(500 MHz, CD3OD) d 8.17 (s, 1H, vinylic H), 7.82 (d, 1H, J=8.0 Hz,60-H), 7.67–7.63 (m, 3H) , 4-एच, 5-एच, 7-एच), 7.45 (टी, 1एच, जे=7.0 हर्ट्ज, 6-एच), 6.45 (डी) , 1H, J=8.5 हर्ट्ज, 50-H), 6.39 (s, 1H, 30-H), 4.01 (s, 2H,CH2); 13सी एनएमआर (100 मेगाहर्ट्ज, डीएमएसओ डी6) डी 193.9, 161.6, 160.4, 150.3,138.6, 134.8, 131.7, 130.3, 128.7, 128.1, 127.2, 123.9, 114.3,108.6, 103.1, 32.7; एचआरएमएस (ईएसआई प्लस) एम/जेड सी16एच13ओ3 (एम प्लस एच) प्लस कैल्कडी253.0859, ओब्सड 253.0858।

2.2.2.4. (ई)-2-(4-हाइड्रॉक्सी-3-मेथॉक्सीबेंजाइलिडीन)-2,3-डायहाइड्रो-1हिंडन-1-एक (बीआईडी4)।

पीला ठोस; उपज, 52.0 प्रतिशत ; प्रतिक्रिया समय, 4 घंटे;आणविक सूत्र, C17H14O3; एमपी, 186.9-187.4 सी; 1एच एनएमआर(400 मेगाहर्ट्ज, डीएमएसओ डी6) डी 9.71 (एस, 1एच, ओएच), 7.73 (डी, 1एच, जे=7.6 हर्ट्ज, 7- एच), 7.67–7.62 (एम, 2एच, 4-एच, 5-एच), 7.45 (डी, 1एच, जे=2।{{50}} हर्ट्ज , 20-H), 7.43(t, 1H, J=7.2 Hz, 6-H), 7.31 (s, 1H, vinylic H), 7.24 (dd, 1H, J)=8.0,2.0 हर्ट्ज, 60-एच), 6.87 (डी, 1एच, जे=8.0 हर्ट्ज, 50-एच), 4.05 (एस, 2एच, सीएच2 ), 3.84 (एस, 3 एच, ओसीएच 3); 13सी एनएमआर (100 मेगाहर्ट्ज, डीएमएसओ डी6) डी 193.9, 150.5,149.7, 148.5, 138.3, 135.2, 134.4, 132.3, 128.2, 127.3, 127.1,125.7, 124.1, 116.6, 115.4, 56.3, 32.5; एचआरएमएस (ईएसआई प्लस) एम/जेड सी17एच15ओ3(एम प्लस एच) प्लस कैल्क 267.1016, ओब्सड 267.1016।

2.3. जैविक मूल्यांकन

2.3.1. मशरूम टायरोसिनेस निरोधात्मक परख

टायरोसिनेस निरोधात्मक गतिविधि परख मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग करके किया गया था जैसा कि पहले बताया गया था, मामूली संशोधन के साथ [35,36]। संक्षेप में, प्रत्येक यौगिक (0.0005-50 मिमी) की एक निर्दिष्ट एकाग्रता के 1 0 एमएल और 50 मिमी फॉस्फेट बफर (पीएच 6.5) में 20 एमएल मशरूम टायरोसिनेज (1000 इकाइयों / एमएल) को 170 एमएल प्रतिक्रिया में जोड़ा गया था। एक 96-अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट (कॉर्निंग, यूएसए) में मिश्रण। 1 मिमी एल-टायरोसिन या एल-डीओपीए समाधान, 50 मिमी पोटेशियमफॉस्फेट बफर (पीएच 6.5), और आसुत जल का अनुपात 10:10:9 था। प्रतिक्रिया मिश्रण 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। उसके बाद, प्रत्येक कुएं में उत्पादित डोपाक्रोम की मात्रा को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विश्लेषण द्वारा 492 एनएम (ओडी492) पर एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। tyrosinase अवरोध दर (प्रतिशत) की गणना (1 Abssample/Abscontrol) 100 प्रतिशत के रूप में की गई थी। नमूना निषेध की डिग्री को 50 प्रतिशत निषेध (IC50) के लिए आवश्यक एकाग्रता के रूप में व्यक्त किया गया था।

2.3.2. टायरोसिनेस के साथ एंजाइम काइनेटिक विश्लेषण

निषेध के गतिज तंत्र को निर्धारित करने के लिए, दो पूरक कैनेटीक्स विधियों का उपयोग किया गया था: लाइनविवर-बर्क और डिक्सनप्लॉट्स [37-39]। Lineweaver-Burk भूखंडों (डबल पारस्परिक भूखंडों) का उपयोग करते हुए, BID3 का निषेध प्रकार L-DOPA (0.125, 0.25, 0.5, और 1 के विभिन्न सांद्रता का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। एमएम), सबस्ट्रेट्स के रूप में, बीआईडी3 (1, 2, और 4 एलएम) की विभिन्न सांद्रता की अनुपस्थिति और उपस्थिति में। L-DOPA (0.125, 0.25, 0.5, और 1 mM की विभिन्न सांद्रता की उपस्थिति में एक डिक्सन प्लॉट (एकल पारस्परिक भूखंड) फोर्टीरोसिनेस निषेध प्राप्त किया गया था। ) BID3 की सांद्रता 1, 2, और 4 मिमी थी। पहले वर्णित टायरोसिनेस परख विधियों से युक्त एंजाइमेटिक प्रक्रियाएं। निषेध स्थिरांक (की) डिक्सन भूखंडों की व्याख्या से निर्धारित किया गया था।

2.3.3. टायरोसिनेस आणविक डॉकिंग सिमुलेशन

एंजाइम-अवरोधक परिसर की संरचना का निर्धारण करने के लिए और डॉकिंग परिणामों की सटीकता, दोहराव और विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए, हमने AutoDock4.2 सॉफ़्टवेयर को नियोजित किया। डिकिंग अध्ययन के लिए, मशरूम टायरोसिनेस प्रोटीन लक्ष्य की क्रिस्टल संरचनाएं प्रोटीन अनुक्रम संरेखण (प्रोटीन डेटा बैंक (पीडीबी आईडी: 2Y9X) (http://www.rcsb.org/adb) [40] से प्राप्त की गईं। स्वचालित डॉकिंग सिमुलेशन का प्रदर्शन किया गया। tyrosinase और kojic एसिड, phthalic एसिड, सिनामिक एसिड, या BID3 के बीच। डॉकिंग प्रक्रिया के लिए: केमऑफिस प्रोग्राम (http://www.cam Bridgesoft.com) का उपयोग करके 2D को 3D संरचनाओं, परिकलित शुल्क, और अतिरिक्त हाइड्रोजन परमाणुओं में परिवर्तित किया गया। [41 LigandScout 4.1.5 का उपयोग लिगैंड्स और टायरोसिनेस के बीच संभावित अंतःक्रियाओं की भविष्यवाणी और फार्माकोफोर्स की पहचान के लिए किया गया था।

2.3.4. सेल संस्कृति और सेल व्यवहार्यता परख

मरीन मेलेनोमा B16F10 कोशिकाओं को कोरियाई सेल लाइन बैंक (KCLB, सियोल, कोरिया) से खरीदा गया था और DMEM में 10 प्रतिशत FBS और 1 प्रतिशत स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ सुसंस्कृत किया गया था, और फिर 37 C पर ऊष्मायन किया गया, 5 प्रतिशत वायुमंडलीय CO2 के साथ आर्द्र किया गया। सेल व्यवहार्यता विश्लेषण पहले वर्णित [42] के रूप में किए गए थे। संक्षेप में, कोशिकाओं को 1 104 कोशिकाओं के घनत्व पर/एक 96-अच्छी तरह से 24 घंटे के लिए अच्छी तरह से प्लेट में रखा गया है। अगले दिन, कोशिकाओं को BID3 की विभिन्न सांद्रता से अवगत कराया गया और क्रमशः 24 या 48 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। फिर, प्रत्येक कुएं में 10 एमएल ईज़ी-साइटॉक्स समाधान जोड़ा गया और कोशिकाओं को 2-4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। 450 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर एलिसा का उपयोग करके अवशोषण निर्धारित किया गया था। प्रत्येक परख को तीन प्रतियों में किया गया था।

2.3.5. मेलेनिन सामग्री परख

मेलेनिन सामग्री को पहले वर्णित के रूप में निर्धारित किया गया था [43]। बी 16 एफ 10 मेलेनोमा कोशिकाओं (2 105 कोशिकाओं / कुएं) को 6- अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों में रखा गया था। BID3 ऑनमेलानोजेनेसिस के निरोधात्मक प्रभाव को निर्धारित करने के लिए, ताजा माध्यम को 1hr के लिए सकारात्मक नियंत्रण के रूप में BID3 (1, 5, और 10 lM) या kojic एसिड (10 मिमी) युक्त माध्यम से बदल दिया गया था, और फिर a-MSH (5 lM) से प्रेरित किया गया था। ) और IBMX (200 मिमी) 48 घंटे के लिए। पीबीएस के साथ दो बार धोए जाने के बाद, कोशिकाओं को ट्रिप्सिन / ईडीटीए में ऊष्मायन द्वारा अलग किया गया था, और छर्रों को 1 एन NaOH के 100 एमएल में भंग कर दिया गया था, और फिर मेलेनिन को घोलने के लिए मिश्रित 1 हाथ के लिए 60 सी पर ऊष्मायन किया गया था। मेलेनिन सामग्री को एलिसा रीडर (TECAN, सनराइज, ऑस्ट्रिया) का उपयोग करके 405 एनएम पर अवशोषण को मापकर निर्धारित किया गया था। निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके मेलेनिन सामग्री की गणना की गई थी: (नमूना / नियंत्रण) - 100 प्रतिशत। सभी निर्धारण तीन प्रतियों में किए गए थे।

2.3.6. सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि

सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि का मूल्यांकन पहले वर्णित के रूप में किया गया था, जिसमें मामूली संशोधन [44,45] थे। संक्षेप में, 2 105/कोशिकाओं को 6-अच्छी तरह से व्यंजन में चढ़ाया गया और रात भर इनक्यूबेट किया गया। कोशिकाओं को 1 घंटे के लिए BID3 (1, 5, और 10 मिमी) ऑर्कोजिक एसिड (10 मिमी) के विभिन्न सांद्रता के संपर्क में लाया गया था, और बाद में 48 घंटे के लिए ए-एमएसएच (5 मिमी) और आईबीएमएक्स (200 मिमी) से प्रेरित किया गया था। पीबीएस के साथ दो बार रिंस किए जाने के बाद, कोशिकाओं को 100 एमएल लसीका समाधान के साथ 50 मिमी फॉस्फेट बफर (पीएच 6.5), 0.1 मिमी फेनिलमेथाइलसल्फोनीलफ्लोराइड (पीएमएसएफ), और 1 प्रतिशत ट्राइटन एक्स -100 के साथ lysed किया गया था और 80 Cfor 30 मिनट पर जमे हुए थे। Lysates को 4 सी पर 30 मिनट के लिए 12, 000 आरपीएम पर पिघलाया और सेंट्रीफ्यूज किया गया। फिर, सतह पर तैरनेवाला (80 एमएल) को 2 मिलीग्राम/एमएल एल-डोपा (20 एमएल) के साथ एक 96- अच्छी तरह से प्लेट में जोड़ा गया। . 30 मिनट के लिए 37 सी ऊष्मायन के बाद, 492 एनएम पर ऑप्टिकल घनत्व को एलिसा रीडर (TECAN, साल्ज़बर्ग, ऑस्ट्रिया) का उपयोग करके मापा गया था। एक मानक (थर्मो साइंटिफिक, रॉकफोर्ड, आईएल, यूएसए) के रूप में बीसीए का उपयोग करके बीसीए प्रोटीन परख अभिकर्मक का उपयोग करके प्रोटीन एकाग्रता का निर्धारण किया गया था।

सिस्टैन्च निकालने का लाभ: टायरोसिनेस को रोकता है।

2.3.7. सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी डेटा को माध्य (SEM) के माध्य ± मानक त्रुटि के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। उपचार के बीच अंतर को निर्धारित करने के लिए डेटा का विश्लेषण एकतरफा विश्लेषण (एनोवा) द्वारा किया गया था, इसके बाद बोनफेरोनी पोस्टहॉक परीक्षण किया गया था। p < 0.05="" का="" मान="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" माना="" जाता="">

3) परिणाम और चर्चा

3.1. रसायन शास्त्र

(E)-बेंजाइलिडीन-1-इंडानोन डेरिवेटिव्स (BID1–13) को सामान्य योजना 1 के अनुसार संश्लेषित किया गया था। इस प्रस्तुत अध्ययन में, तेरह (E)-2-बेंजाइलिडीन-1-इंडानोन डेरिवेटिव्स को संश्लेषित किया गया था और उनके टायरोसिनेस निरोधात्मक गुणों की जांच की गई। टारगेट (ई)-2-बेंजाइलिडीन-1-इंडैनोन डेरिवेटिव्स को अम्लीय (एसिटिक एसिड में 1 एम एचसीएल) स्थितियों को नियोजित करके संश्लेषित किया गया था। इन प्रतिक्रियाओं ने लक्ष्य (ई) -2-बेंजाइलिडीन-1- उत्पन्न किया। 32.8-99.1 प्रतिशत की पैदावार में इंडेनोन डेरिवेटिव। ऐसा प्रतीत होता है कि केवल 2-बेंजाइलिडीन-1-इंडोनोन के ई-आइसोमर्स ए-स्ट्रेन के कारण उत्पन्न हुए थे जिन्हें 1,3-एलिलिक स्ट्रेन के रूप में जाना जाता है। Z-आइसोमर में फिनाइल रिंग और कार्बोनिल समूह के बीच A-स्ट्रेन (sterichindrance) स्पष्ट रूप से E-isomer में फिनाइल रिंग और मिथाइलीन समूह के बीच की तुलना में बड़ा है। सिंथेटिक यौगिकों की संरचनाओं को 1H और 13C NMR और मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा सत्यापित किया गया था जैसा कि प्रायोगिक खंड (अंजीर। S1-S38) में वर्णित है। विशेष रूप से, ओलेफिनिक प्रोटॉन के रासायनिक बदलाव को 2- के ई-आइसोमर में परिरक्षित किया जाता है। बेंजाइलिडीन कार्बोनिल समूह के अनिसोट्रोपिक प्रभाव के कारण और Z आइसोमर की तुलना में डाउनफील्ड (7 पीपीएम से ऊपर) दिखाई देता है (<7 ppm)="" [46].="" the="" chemical="" shifts="" of="" olefinic="" protons="" in="" the="" benzylidene-1-indanones="" appeared="" in="" the="" range="" of="" 7.31–8.17="" ppm.="" therefore,="" the="" benzylidene-1-indanone="" derivatives="" were="" determined="" to="" be="" (e)-stereoisomers.="" we="" found="" that="" the="" presence="" of="" hydroxyl="" or="" methoxyl="" group="" at="" the="" 2-position="" of="" the="" phenyl="" ring="" moves="" the="" chemical="" shift="" of="" the="" olefinic="" proton="" to="" 0.5–0.8="" ppm="">

योजना 1. (ई)-2-बेंजाइलिडीन-1-इंडोनोन का संश्लेषण।

3.2. यौगिकों के टायरोसिनेस निरोधात्मक गुण

(ई)-बेंजाइलिडीन-1-इंडोनोन डेरिवेटिव की टायरोसिनेस अवरोधक क्षमता की जांच मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग करके की गई थी। इन प्रयोगों के लिए माइकोफेनोलेट (एल-टायरोसिन) और डिफेनोल्स (एल-डीओपीए) को सब्सट्रेट के रूप में इस्तेमाल किया गया था [35]। एंजाइम प्रतिक्रियाएं टायरोसिनेस, सब्सट्रेट और परीक्षण अवरोधकों के साथ की गईं। सभी परीक्षण किए गए यौगिकों ने एकाग्रता-निर्भर अवरोध का प्रदर्शन किया। (ई)-बेंजाइलिडीन-1-इंडानोनेसडेरिवेटिव के IC50 मान तालिका 1 में दिखाए गए हैं।

L-tyrosine और L-DOPA दोनों सबस्ट्रेट्स में, BID3 ने IC5 0 0 के मूल्यों के साथ मजबूत निरोधात्मक गतिविधि का प्रदर्शन किया। {{1 0}} 34 ± 0। {{ 27}}224 मिमी और 1.39 ± 0। 0 0004 मिमी, क्रमशः सकारात्मक नियंत्रण कोजिक एसिड की तुलना में, जिसमें 13.77 ± 0.20 मिमी और 33.14 ± 0.93 मिमी के आईसी 50 मान थे, क्रमशः (अंजीर। 1 ए)। इसके अलावा, BID6 ने क्रमशः 5.00 ± 0.91 मिमी और 53.11 ± 2.79 मिमी के IC50 मानों के साथ L-tyrosine और L-DOPA की ओर शक्तिशाली गतिविधि दिखाई। BID1 ने क्रमशः 39.74 ± 3.71 मिमी और 130.0 ± 5.39 मिमी के IC50 मानों के साथ L-tyrosine और L-DOPApathways के माध्यम से tyrosinase के खिलाफ महत्वपूर्ण अवरोध दिखाया। BID4 और BID11 ने मॉडरेटाइरोसिनेस निरोधात्मक गतिविधि प्रदर्शित की। अन्य डेरिवेटिव निष्क्रिय थे। इसी तरह, BID2 ने L-tyrosine और L-DOPA की ओर महत्वपूर्ण गतिविधि दिखाई, जिसमें IC50 मान 41.27 ± 3.03 mM और 52.93 ± 2.62 mM है। 200 मिमी [47] की सांद्रता पर प्रभाव।

संरचना-गतिविधि संबंध (एसएआर) अध्ययनों के निष्कर्षों के अनुरूप, फिनाइल रिंग पर डेरिवेटिव युक्त (ई) -बेंजाइलिडीन-1-इंडानोन पदार्थ ने संभावित टायरोसिनेस निषेध को स्पष्ट रूप से प्रभावित किया। BID3, जिसने उच्चतम शक्ति के साथ tyrosinase को बाधित किया, एक 4-हाइड्रॉक्सी समूह की उपस्थिति में एक 2-हाइड्रॉक्सी समूह को सहन करता है और बहुत अधिक tyrosinase गतिविधि (BID1 vsBID3) को रोकता है। इन परिणामों ने सुझाव दिया कि फिनाइल रिंग संरचना में 2,4-डाइहाइड्रॉक्सी समूह (रेसोरसिनॉल की मात्रा) टायरोसिनेस के बढ़े हुए निषेध के लिए जिम्मेदार हो सकता है। दिलचस्प बात यह है कि संभावित सिंथेटिक टायरोसिनेस इनहिबिटर पर पिछले अध्ययन में, हमने दिखाया कि 2, 4- डाइहाइड्रॉक्सी प्रतिस्थापन संभावित रूप से टायरोसिनेस गतिविधि को रोकता है [48,49]। इसके अलावा, हमारे एसएआर डेटा ने यह भी संकेत दिया कि 3-हाइड्रॉक्सी समूह की उपस्थिति में 4-हाइड्रॉक्सीग्रुप का परिचय टायरोसिनेस अवरोध को प्रभावित करता है। इन घटनाओं को इस खोज के द्वारा प्रदर्शित किया गया था कि एक 4-मेथॉक्सी-3-हाइड्रॉक्सी फिनाइल रिंग ने टायरोसिनेस के खिलाफ निरोधात्मक गतिविधि को बढ़ाया, जबकि एक 3,4-डायहाइड्रॉक्सी समूह (कैटेकोल की मात्रा) की शुरूआत से टायरोसिनेस निरोधात्मक गतिविधि में कमी आई। BID2 बनाम BID6) [35]। ये परिणाम बताते हैं कि 3-हाइड्रॉक्सी-4-मेथॉक्सी समूह भी फोर्टीरोसिनेज निरोधात्मक गतिविधि के लिए जिम्मेदार है। फिर भी, हमारे वर्तमान अध्ययन में, BID9 और BID11, जिसमें 2, 4-डाइमेथॉक्सी फिनाइल या 3,5-डाइमेथॉक्सी फिनाइल समूह शामिल हैं, ने मध्यम टायरोसिनेस निरोधात्मकता दिखाई। L-tyrosine और L-DOPA मार्ग के माध्यम से IC50 मूल्यों के आधार पर, BID3 ने सबसे शक्तिशाली टायरोसिनेस निरोधात्मक गतिविधि का प्रदर्शन किया, इसलिए हमने इस निरोधात्मक प्रभाव के अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन किया। राधाकृष्णन एट अल। (2015) [20] ने बताया कि हाइड्रॉक्सिल प्रतिस्थापित (जेड) -बेंजाइलिडीन-1-इंडानोन यौगिकशक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधक। हालांकि पिछले अध्ययनों से पता चला है कि हाइड्रॉक्सिल-प्रतिस्थापित (जेड) -बेंजाइलिडीन -1-इंडानोन डेरिवेटिव में एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि होती है, हमारे सर्वोत्तम ज्ञान के लिए, (ई) -बेंजाइलिडीन -1- द्वारा टायरोसिनेस निषेध की कोई रिपोर्ट नहीं मिली है। सेल-आधारित प्रयोगों का उपयोग करते हुए इंडेनोन डेरिवेटिव।

तालिका 1. प्रतिस्थापित 2,3-डायहाइड्रो-1एच-इंडेन-1-एक (1-इंडानोन) चाल्कोन-जैसे मशरूम टायरोसिनेस निरोधात्मक क्षमता

डेरिवेटिव (BID1–13)।

अंजीर। 1. BID3 और कोजिक एसिड (सकारात्मक नियंत्रण) (n=3) द्वारा मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि का एकाग्रता-निर्भर निषेध।

3.3. टायरोसिनेस निषेध का एंजाइम गतिज विश्लेषण

चूँकि BID3 सबसे शक्तिशाली अवरोधक था, इसलिए हमने इसके निरोधात्मक प्रभाव के अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन किया। एंजाइम निषेध के तरीके की व्याख्या करने के प्रयास में, एल-डीओपीए और विभिन्न बीआईडी ​​3 सांद्रता के विभिन्न सांद्रता में गतिज विश्लेषण किए गए थे। डिक्सन और लाइनवीवर-बर्क भूखंडों को गतिज अध्ययनों से प्राप्त आंकड़ों का उपयोग करके तैयार किया गया था ताकि निषेध पैटर्न की पुष्टि की जा सके और अवरोध स्थिरांक (की) को डिक्सन भूखंडों (छवि 2 ए और बी) की व्याख्या द्वारा निर्धारित किया गया था। एल-डोपा की एकाग्रता को निम्नानुसार दर्शाया गया है: 1, 2, 4 मिमी। चौराहा बाईं ओर स्थित है, जो कि टायरोसिनेस के खिलाफ मिश्रित प्रकार के अवरोध को दर्शाता है, जिसका कि मान 2.4 एमएम (चित्र 2बी) है। Ki मान एंजाइम-अवरोधक परिसर बनाने के लिए आवश्यक सांद्रता का प्रतिनिधित्व करता है, इसलिए कम Ki मान वाला अवरोधक अधिक टायरोसिनेस अवरोध गतिविधि को इंगित करता है।

आणविक डॉकिंग ने कई वर्षों में दवा की खोज में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि का योगदान दिया है। हालांकि, डॉकिंग प्रक्रियाओं का उद्देश्य प्रोटीन की बाध्यकारी जेब में लिगैंड की सही स्थिति की पहचान करना और लिगैंड और प्रोटीन के बीच संबंध की भविष्यवाणी करना है। दूसरे शब्दों में, डॉकिंग एक ऐसी प्रक्रिया का वर्णन करता है जिसके माध्यम से दो अणु एक त्रि-आयामी अंतरिक्ष में एक साथ फिट होते हैं। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या BID3 tyrosinase की सक्रिय साइट से जुड़ता है, मशरूम टायरोसिनेस (PDB ID: 2Y9X) (चित्र 3A) की क्रिस्टल संरचना में BID3 की संभावित बाध्यकारी स्थिति की पहचान करने के लिए आणविक डॉकिंग विश्लेषण किया गया था। इन परिणामों की गणना AutoDock4.2 का उपयोग करके की गई थी। कार्यक्रम। सबसे स्थिर बाध्यकारी स्थिति सबसे कम स्कोर [50] के साथ थी। हाल ही में, हसनी एट अल। [47] ने बताया कि सिनामिक एसिड और फ़ेथलिक एसिड मिश्रित-मोड टायरोसिनेसिनहिबिटर थे। इस प्रकार, डॉकिंग परिणामों को मान्य करने के लिए सहायता, सिनामिक एसिड और फ़ेथलिक एसिड का उपयोग किया गया था [51]। टाइरोसिनेस की उत्प्रेरक साइट में BID3 और कोजिक एसिड (प्रसिद्ध प्रतिस्पर्धी प्रकार के अवरोधक) के आणविक डॉकिंग मॉडल को अंजीर में चित्रित किया गया है। 3बी [52] ]. tyrosinase-BID3 अवरोध करनेवाला परिसर ने 6.28 kcal/mol बाध्यकारी ऊर्जा प्रस्तुत की, जिसमें ASN260 और tyrosinase के MET280 अवशेषों के साथ दो हाइड्रोजन बांड शामिल हैं, और BID3 और tyrosinase अवशेषों VAL248, PHE264, और VAL283 के बीच हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन देखे गए, जिसने उत्प्रेरक साइट में बातचीत को और स्थिर कर दिया। मशरूमटायरोसिनेज (तालिका 2, और अंजीर। 3ई और एच)। इसके अलावा, दो एलोस्टेरिक साइटों में BID3, phthalic एसिड (एलोस्टेरिक इनहिबिटर 1), और सिनामिक एसिड (एलोस्टेरिक इनहिबिटर 2) के आणविक डॉकिंग मॉडल को चित्र 3C और 3D में चित्रित किया गया है। Phthalic एसिड और सिनामिक एसिड को क्रमशः एलोस्टेरिक साइट 1 और 2 पर संदर्भ लिगैंड के रूप में लिया गया था [47,51]। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 3F और I, BID3 और phthalic एसिड ने tyrosinase के TRY140 अवशेषों के साथ एक हाइड्रोजन बंधन का प्रदर्शन किया, और LEU24, PHE147, और ILE148 के साथ तीन हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन अवशेषों को एलोस्टेरिक साइट पर प्रदर्शित किया। tyrosinase के allosteric साइट2 में ASP312 और tyrosinase के LYS376 के बीच हाइड्रोजन बांड शामिल थे, जबकि THR308 ने हाइड्रोफोबिक रूप से allosteric साइट 2 (छवि 3G और J) पर बातचीत की। इसके अलावा, बीआईडी ​​3-टायरोसिनेज बाइंडिंग को टायरोसिनेज (क्रमशः 4.38 और 5.68 किलो कैलोरी/मोल) के एलोस्टेरिक साइटों में बाध्यकारी ऊर्जा को बढ़ाने के लिए पाया गया था, जो दोनों एलोस्टेरिक साइटों के साथ उच्च बाध्यकारी आत्मीयता को दर्शाता है। एंजाइमकिनेटिक अध्ययनों के आधार पर, BID3 ने एक मिश्रित प्रकार का निषेध किया, BID3 की उत्प्रेरक साइट और दो एलोस्टेरिक साइटों दोनों के साथ बाध्यकारीता ने टायरोसिनेस के मिश्रित-प्रकार के निषेध की पुष्टि की।

अंजीर। 2. लाइनविवर-बर्क (ए) और डिक्सन प्लॉट्स (बी) बीआईडी3 द्वारा सब्सट्रेट के रूप में एल-डोपा का उपयोग करके मशरूम टायरोसिनेस के निषेध के लिए।

3.4. जैविक गतिविधि

सेल कल्चरमॉडल में BID3 के एंटी-टायरोसिनेस प्रभावों का फायदा उठाने के लिए, हमने B16F10 कोशिकाओं पर इसके साइटोटोक्सिक प्रभावों की जांच की। कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए BID3 (1–20 मिमी) के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया और ईज़ी-साइटॉक्स परख का उपयोग करके मूल्यांकन किया गया। परिणामों ने संकेत दिया कि BID3 का B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं में 20 mM (चित्र 4A और B) तक कोई महत्वपूर्ण साइटोटोक्सिक प्रभाव नहीं था। इसलिए, 20 मिमी तक BID3 का उपयोग करके बाद के प्रयोग किए गए।

तालिका 2 AutoDock4.2 प्रोग्राम का उपयोग करके निर्धारित मशरूम टायरोसिनेस (PDB ID: 2Y9X) में BID3 के बाइंडिंग साइट और डॉकिंग स्कोर।

मेलानोजेनेसिस को टायरोसिनेस एंजाइमेटिक कैस्केड द्वारा नियंत्रित किया जाता है। इस कारण से, टायरोसिनेस गतिविधि को कम करने के लिए कई त्वचा-सफेद करने वाले यौगिकों का विकास किया गया है। कोजिक एसिड, एक टायरोसिनेसिनहिबिटर, एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था [53]। इस प्रकार, सीएमपी उन्नयन प्रेरित हाइपरपिग्मेंटेशन पर BID3 के प्रभावों की जांच करने के लिए, B16F1 0 कोशिकाओं को BID3 (1, 5, और 2 {{2 0}} की उपस्थिति में a-MSH और IBMX से उपचारित किया गया। mM) 48 घंटे के लिए, और मेलेनिन सामग्री, और सेल्युलरटायरोसिनेस गतिविधियों का निर्धारण किया गया (चित्र 4सी और डी)। ए-एमएसएच और आईबीएमएक्स के साथ उपचार ने अनुपचारित नियंत्रण की तुलना में बी16एफ10 कोशिकाओं में मेलेनिन सामग्री (छवि 4सी) और सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि (छवि 4डी) में उल्लेखनीय वृद्धि (पी <0.001#) को="" प्रेरित="" किया।="" हालांकि,="" बीआईडी3="" उपचार="" महत्वपूर्ण="" रूप="" से="" (पी=""><0.01**; p=""><0.001***) और="" a-msh="" oribmx="" उपचारित="" कोशिकाओं="" की="" तुलना="" में="" b16f10="" कोशिकाओं="" की="" एकाग्रता-निर्भरता="" से="" मेलेनिन="" सामग्री="" और="" सेलुलर="" टायरोसिनेस="" गतिविधि="" में="" कमी="" आई="" है,="" यह="" दर्शाता="" है="" कि="" सेलुलर="" मेलेनिन="" में="" कमी="" टायरोसिनेस="" गतिविधि="" के="" निषेध="" के="" कारण="" हो="" सकती="" है।="" .="" इस="" प्रकार,="" इन="" निष्कर्षों="" से="" स्पष्ट="" रूप="" से="" पता="" चलता="" है="" कि="" bid3="" साइटोटोक्सिसिटी="" को="" प्रेरित="" किए="" बिना="" b16f10="" कोशिकाओं="" में="" टायरोसिनेस="" गतिविधि="" और="" मेलेनिन="" संश्लेषण="" को="" बाधित="" करने="" वाले="" एंटी-मेलेनोजेनिक="" प्रभाव="" डालता="">

Indanone औषधीय रसायन विज्ञान के विशेषाधिकार प्राप्त संरचनाओं में से एक है और आम तौर पर विभिन्न प्रकार के औषधीय रूप से सक्रिय यौगिकों से जुड़ा होता है [54]। शारीरिक रूप से सक्रिय प्राकृतिक उत्पादों की एक किस्म में इंडेनोन की मात्रा मौजूद है। इसे देखते हुए, ओकपेकोनेट अल।, [55] ने एक उपन्यास 1-इंडानोन यौगिक की सूचना दी, जो उवेरिया जड़ों से अलग है। यह यौगिक पौधों से पृथक किया गया पहला 1-इंडानोन व्युत्पन्न है। नागले एट अल।, [56] ने बताया कि एक नए मिथाइलेटेड इंडेन-एल्डिहाइड को ट्यूमर एंजियोजेनेसिस रेगुलेटर के रूप में मरीनसायनोबैक्टीरियम से अलग किया गया था। इसी तरह, इंडेनोन कोर के जैविक महत्व के बाद से, पिछले कई वर्षों से शोधकर्ताओं ने चिकित्सीय एजेंटों के रूप में औषधीय रूप से सक्रिय इंडेनोन एनालॉग्स को विकसित करने पर ध्यान केंद्रित किया है। 1-इंडानोन की संरचनात्मक विविधता का तात्पर्य विभिन्न प्रकार की जैविक प्रतिक्रियाओं से है और इन यौगिकों को कृषि और चिकित्सा में लागू किया जा सकता है। विभिन्न इंडेनोन-आधारित यौगिकों को एंटी-अल्जाइमर रोग [16,57-59], एंटीकैंसर [60- के रूप में विकसित किया गया है। 62], रोगाणुरोधी [63,64], और एंटीवायरल एजेंट [65,66]। व्यापक अनुप्रयोग क्षमता के कारण, 1-इंडोनोन आगे के शोध के लिए दिलचस्प वस्तु थे और उनके संश्लेषण के लिए नई कक्षाओं को डिजाइन करना वांछनीय है।

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा: एंटी-एजिंग

4। निष्कर्ष

नए शक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधकों की पहचान करने के लिए, हमने तेरह (ई)-बेंजाइलिडीन-1-इंडैनोन डेरिवेटिव्स को डिज़ाइन और संश्लेषित किया है। इन यौगिकों में, (ई)-2-(2,4-डायहाइड्रॉक्सी-बेंजाइलिडीन){ {6}}, 3-डायहाइड्रो-1एच-इन-1-एक (बीआईडी3) एल-टायरोसिन के लिए संभावित रूप से बाधित टायरोसिनेस गतिविधि (आईसी 50=0.034 और 1.39 मिमी, और L-DOPA, क्रमशः), जो संदर्भ यौगिक, kojic acid (IC50=13.77 mM और 33.14 mM, क्रमशः) से बेहतर था। संरचना-गतिविधि संबंध से पता चला कि डायहाइड्रॉक्सिल समूह की उपस्थिति 2 और 4- (ई) -बेंजाइलिडीन की स्थिति -1-इंडैनोन कंकाल ने टायरोसिनेस के खिलाफ गतिविधि में सुधार किया। लाइनविवर-बर्क और डिक्सन प्लॉट्स द्वारा निर्धारित एंजाइम के एंजाइमैटिक निषेध के तरीके ने संकेत दिया कि BID3 एक मिश्रित प्रकार का अवरोधक है। आणविक डॉकिंग अध्ययनों से पता चलता है कि सक्रिय साइट पर और एलोस्टेरिक साइटों पर बाध्यकारी टायरोसिनेस अवरोधक गतिविधि की दिशा में महत्वपूर्ण तंत्र हैं। इन परिणामों के आधार पर, BID3 हाइपरपिग्मेंटेशन जैसे त्वचा विकारों के उपचार के लिए एक शक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधक प्रतीत होता है।

डेजर्ट सिस्टैन्च लाभ: मेलेनिन के गठन को रोकता है