त्वचा के अनुप्रयोगों के लिए गुलाबी रामबूटन (नेफेलियम लैपेसियम लिनन) से इथेनॉलिक अर्क की इन विट्रो एंटी-एजिंग गतिविधियाँ भाग 1

अमूर्त

त्वचा की उम्र बढ़ने की विशेषता झुर्रियाँ, लोच में कमी, ढीलापन, खुरदुरी बनावट, मेलास्मा और झाइयां जैसी विशेषताएं हैं। कई प्रकार के शोधों ने कई प्राकृतिक अवयवों के साथ त्वचा की उम्र बढ़ने को रोकने और इलाज करने पर ध्यान केंद्रित किया है। इस अध्ययन का उद्देश्य पत्तियों (एल), शाखाओं (बी), बीजों (एस) और छिलकों से गुलाबी रामबूटन (पीआर) (नेफेलियम लैपेसियम लिनन) के इथेनॉलिक अर्क की त्वचा की उम्र बढ़ने की रोकथाम के लिए एंटी-एजिंग गतिविधियों का आकलन करना है। पके (आर) और युवा (वाई) फल। विलायक के रूप में 95 प्रतिशत इथेनॉल का उपयोग करके मैक्रेशन (एम) और सोक्स्लेट निष्कर्षण (सॉक्स) द्वारा निकाले गए सभी गुलाबी रामबूटन (पीआर) की निष्कर्षण पैदावार 1 0.62 प्रतिशत से 3 0 तक थी। .63 प्रतिशत . लगभग सभी पीआर अर्क में फ्लेवोनोइड्स मुख्य फाइटोकेमिकल्स के रूप में पाए गए। पीआर-वाईएम और पीआर-वाई-सॉक्स अर्क ने फोलिन-सियोकाल्टेउ परख द्वारा 67.60 ± 4.38 मिलीग्रामजीएई/जी की उच्चतम कुल फेनोलिक सामग्री दी, और संशोधित एल्यूमीनियम क्लोराइड वर्णमिति परख द्वारा कुल फ्लेवोनोइड सामग्री 678.72 ± दी। क्रमशः 23.59 mgQE/g। पीआर-एलएम अर्क ने उच्चतम तीन एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां दिखाईं; फ्री रेडिकल स्केवेंजिंग (SC50 का {{34%).320 ± 0.{{40}}70 mg/mL) , लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध (LC5{56%) का 0.274 ± 0.029 mg/mL), और धातु केलेशन गतिविधि (MC50 का 0.203 ± 0.021 mg/mL)। 0.01 और 0.1 मिलीग्राम/एमएल पर सभी पीआर अर्क ने क्रमशः बी16एफ10 कोशिकाओं और मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर कोई साइटोटॉक्सिसिटी नहीं दिखाई। इसी तरह, पीआर-आर-सॉक्स अर्क ने बी16एफ10 कोशिकाओं (52.7 ± 0.9 प्रतिशत) पर उच्चतम एंटी-मेलानोजेनेसिस प्रदर्शित किया, और, मशरूम टायरोसिनेस निषेध गतिविधि (0.04 ± 0.02 मिलीग्राम/एमएल की आईसी50), जो काफी हद तक तुलनीय थी। कोजिक एसिड (पी <0.05)। पीआर-वाई-सॉक्स अर्क ने सीरियस रेड विधि द्वारा कोलेजन जैवसंश्लेषण दिखाया, और आरटी-पीसीआर विधि द्वारा मानव त्वचा फाइब्रोब्लास्ट पर एंटी-एजिंग जीन (Sirt1 और फॉक्सो1) की उत्तेजना दिखाई, जो मानकों ʟ-एस्कॉर्बिक एसिड के समान थी और रेस्वेराट्रोल, क्रमशः। इस अध्ययन से पता चलता है कि पीआर-आर-सॉक्स और पीआर-वाई-सॉक्स अर्क को सौंदर्य प्रसाधन, कॉस्मीस्यूटिकल और फार्मास्युटिकल उद्योगों में सफेदी और झुर्रियों को रोकने के लिए प्राकृतिक एंटी-एजिंग एजेंटों के रूप में विकसित किया जा सकता है। 2023 लेखक। किंग सऊद विश्वविद्यालय की ओर से एल्सेवियर बी.वी. द्वारा प्रकाशित।

सिस्टैंच का ग्लाइकोसाइड हृदय और यकृत के ऊतकों में एसओडी की गतिविधि को भी बढ़ा सकता है, और प्रत्येक ऊतक में लिपोफसिन और एमडीए की सामग्री को काफी कम कर सकता है, विभिन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन रेडिकल्स (ओएच-, एच₂ओ₂, आदि) को प्रभावी ढंग से हटा सकता है और डीएनए क्षति से बचा सकता है। ओएच-रेडिकल्स द्वारा। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में मुक्त कणों की एक मजबूत सफाई क्षमता होती है, विटामिन सी की तुलना में उच्च कम करने की क्षमता होती है, शुक्राणु निलंबन में एसओडी की गतिविधि में सुधार होता है, एमडीए की सामग्री कम होती है, और शुक्राणु झिल्ली समारोह पर एक निश्चित सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड डी-गैलेक्टोज के कारण प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों के एरिथ्रोसाइट्स और फेफड़ों के ऊतकों में एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, साथ ही फेफड़ों और प्लाज्मा में एमडीए और कोलेजन की सामग्री को कम कर सकते हैं और इलास्टिन की सामग्री को बढ़ा सकते हैं। डीपीपीएच पर एक अच्छा सफाई प्रभाव, वृद्ध चूहों में हाइपोक्सिया का समय बढ़ाना, सीरम में एसओडी की गतिविधि में सुधार करना, और प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों में फेफड़ों के शारीरिक अध: पतन में देरी करना, सेलुलर रूपात्मक अध: पतन के साथ, प्रयोगों से पता चला है कि सिस्टैंच में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है और त्वचा की उम्र बढ़ने वाली बीमारियों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए एक दवा बनने की क्षमता रखती है। साथ ही, सिस्टैंच में इचिनाकोसाइड में डीपीपीएच मुक्त कणों को साफ़ करने की एक महत्वपूर्ण क्षमता है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को साफ़ करने और मुक्त कट्टरपंथी-प्रेरित कोलेजन गिरावट को रोकने की क्षमता है, और थाइमिन मुक्त कट्टरपंथी आयन क्षति पर भी अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ता है।

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1 परिचय

विश्व स्तर पर, दुनिया में वृद्धों की आबादी अन्य सभी आयु समूहों की तुलना में तेजी से बढ़ रही है। विश्व स्वास्थ्य संगठन का अनुमान है कि 2050 में दुनिया की 60 वर्ष और उससे अधिक उम्र की आबादी 2.1 बिलियन हो जाएगी, और उन्हें ऑस्टियोआर्थराइटिस, मधुमेह, सुनने की हानि, अल्जाइमर रोग, क्रॉनिक ऑब्सट्रक्टिव पल्मोनरी डिजीज (सीओपीडी), अवसाद और मनोभ्रंश सहित सामान्य स्थितियों का सामना करना पड़ेगा। , कैंसर, और न्यूरोलॉजिकल और हृदय संबंधी रोग (दारौशा एट अल., 2021, डब्ल्यूएचओ, 2021)। उम्र बढ़ने की प्रक्रिया के दौरान त्वचा सबसे अधिक दिखाई देने वाले अंगों में से एक है। त्वचा की उम्र बढ़ना सामाजिक संचार से संबंधित है क्योंकि अच्छी उपस्थिति एक अनुकूल प्रभाव डालती है और आत्मविश्वास में सुधार करती है। त्वचा की उम्र बढ़ना पर्यावरणीय या बाहरी कारकों जैसे वायु प्रदूषक, ज़ेनोबायोटिक्स, यूवी विकिरण और धूम्रपान, और आनुवंशिकी, सेलुलर चयापचय, हार्मोन और चयापचय प्रक्रियाओं जैसे आंतरिक कारकों से प्रभावित होती है (दारौशा एट अल।, 2021)। हाल के कई शोधों ने त्वचा को उम्र बढ़ने से बचाने के लिए प्राकृतिक शारीरिक प्रक्रियाओं को पुनर्जीवित और उत्तेजित करके त्वचा की उपस्थिति में सुधार करने के लिए उम्र बढ़ने को स्थगित करने, रोकने और इलाज करके स्वस्थ त्वचा बनाए रखने पर ध्यान केंद्रित किया है।

सेलुलर ऑक्सीडेटिव तनाव से प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) सूजन प्रक्रियाओं और उनके सिग्नलिंग मार्गों की सक्रियता, मेटालोप्रोटीनिस (एमएमपी) के स्तर में वृद्धि, असंतृप्त लिपिड के क्षरण और फाइब्रिलर की संरचनाओं को बदलकर एपोप्टोटिक कोशिका मृत्यु का कारण बन सकती हैं। कोलेजन और इलास्टिन सहित प्रोटीन जो त्वचा की उम्र बढ़ने के कारण होते हैं (मियास्टकोव्स्का और सिकोरा, 2018, दारावशा एट अल।, 2021)। मेलानोजेनेसिस के बाद, मेलेनिन एक पॉलीफेनोलिक वर्णक है जो मेलानोसाइट्स के मेलानोसोम में उत्पन्न होता है जो जानवरों की आंखों, बालों और त्वचा में स्थित होता है, और पराबैंगनी विकिरण (अली और नाज़, 2018) से क्षतिग्रस्त त्वचा की रक्षा कर सकता है। टायरोसिनेस कॉपर युक्त एंजाइम है, जो हाइड्रॉक्सिलेशन और ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं द्वारा एल-टायरोसिन को एल-डोपा और एल-डोपा को ओडोपाक्विनोन-एच प्लस में बदल सकता है, और फिर मध्यवर्ती से होकर अंततः मेलेनिन में बदल सकता है (सोलानो, 2018)। आरओएस मेलानोसाइट्स में सेलुलर ऑक्सीडेटिव तनाव के नियमन में भी महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जो डेंड्राइटिक कोशिकाएं हैं जो त्वचा में एपिडर्मिस की बेसल परत में स्थानीयकृत होती हैं। त्वचा में सूजन मध्यस्थ जैसे इंटरल्यूकिन (आईएल), प्रोस्टाग्लैंडीन ई2, ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर और इंटरफेरॉन-गामा जो मुख्य रूप से Th कोशिकाओं, लिम्फोसाइट्स, डेंड्राइटिक कोशिकाओं और मोनोसाइट्स द्वारा स्रावित होते हैं, उत्तेजक टायरोसिनेस गतिविधि को नियंत्रित करते हैं और TYRP को बढ़ाते हैं। }} और TYRP-2 अभिव्यक्ति और मेलानोसाइट प्रसार को बढ़ावा देना जो मेलेनिन उत्पादन से संबंधित है (फू एट अल., 2020)। हालांकि, मेलेनिन का अधिक उत्पादन और उच्च संचय त्वचा की उम्र बढ़ने का कारण बनता है जैसे कि मेलास्मा, झाइयां, काले धब्बे, लेंटिगो और हाइपरपिग्मेंटेशन विकार, जो सौंदर्य की दृष्टि से अवांछनीय हो सकते हैं (अली और नाज़, 2018)।

सिर्टुइन्स परमाणु निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (एनएडी प्लस) -निर्भर वर्ग III हिस्टोन डीएसेटाइलेज़ हैं जो सेल सेनेसेंस और एपोप्टोसिस को नियंत्रित करते हैं, और पी53, फोर्कहेड ट्रांसक्रिप्शन कारकों (एफओएक्सओ), और पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़ेरेटर-सक्रिय रिसेप्टर गामा (पीपीएआर-सी) को नियंत्रित करके सेल विकास को नियंत्रित करते हैं। चयापचय, कोशिका विभेदन, अस्तित्व और उम्र बढ़ने के नियम। (बेटा एट अल., 2021)। सिर्टुइन परिवार में SIRT1, SIRT6 और शायद ही कभी SIRT7 को त्वचा संबंधी समस्याओं के लिए विनियमित किया गया है, जिसमें त्वचा की सूजन, त्वचीय संक्रमण, कैंसर, ऑटोइम्यून रोग, वंशानुगत त्वचा संबंधी रोग, विशेष रूप से त्वचा की उम्र बढ़ना (सोन एट अल।, 2021) शामिल हैं। साथ ही, FOXO1 एक प्रतिलेखन कारक है जो साइटोप्लाज्म में स्थित होता है। SIRT1 FOXO1 को डीएसिटाइलेट करता है और MAPK (माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन काइनेज), प्रोटीन काइनेज (AKT), और अग्न्याशय और ग्रहणी होमोबॉक्स (Pdx1) मार्ग (सिन एट अल, 2015) जैसे कई मार्गों में फॉक्सओ 1 प्रतिलेखन को सक्रिय करता है। . Sirt1 और फॉक्सो1 mRNA अभिव्यक्ति की वृद्धि ग्लूकोज चयापचय, डीएनए मरम्मत, न्यूरोप्रोटेक्शन, विभेदन, संवहनी सुरक्षा और इंसुलिन स्राव को नियंत्रित करती है; और उम्र बढ़ने और उम्र से संबंधित बीमारियों जैसे ऑक्सीडेटिव तनाव, सेलुलर बुढ़ापा, न्यूरोडीजेनेरेशन, सूजन, इंसुलिन प्रतिरोध, हृदय रोग, वसा, और यकृत स्टीटोसिस के साथ-साथ त्वचा की उम्र बढ़ने (सोन एट अल।, 2021) को कम करता है।

1940 का फार्मास्यूटिकल्स (ड्रग्स) और कॉस्मेटिक्स अधिनियम एक दवा को ''मनुष्यों या जानवरों द्वारा आंतरिक या बाहरी उपयोग के लिए सभी दवाएं, और निदान, उपचार, शमन या रोकथाम के लिए उपयोग किए जाने वाले सभी पदार्थों के रूप में परिभाषित करता है। मनुष्यों या जानवरों में कोई भी बीमारी या विकार।" कॉस्मेटिक कोई भी वस्तु है जिसका उद्देश्य मानव शरीर के किसी भी हिस्से को साफ करने, सौंदर्यीकरण करने, आकर्षण को बढ़ावा देने या बदलने के लिए रगड़ना, डालना, छिड़कना या छिड़कना, पेश करना या लागू करना है। उपस्थिति, और कॉस्मेटिक के एक घटक के रूप में उपयोग के लिए इच्छित कोई भी लेख शामिल है। कॉस्मीस्यूटिकल्स कॉस्मेटिक-फार्मास्युटिकल संकर हैं जिनका उद्देश्य त्वचा के जैविक बनावट और कार्यों को प्रभावित करने वाले अवयवों के माध्यम से स्वास्थ्य और सुंदरता को बढ़ाना है (जोशी और पवार, 2015)। वर्तमान में, एंटी-एजिंग सौंदर्य प्रसाधन, कॉस्मीस्यूटिकल्स और फार्मास्यूटिकल्स में सक्रिय यौगिक होते हैं जो विटामिन ई, विटामिन सी, ग्लूटाथियोन और कोएंजाइम क्यू 10 जैसे मुक्त कणों को बेअसर करते हैं; और न्यूक्लिक एसिड, प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स, शैवाल के अर्क, पौधों के तेल, फाइटोहोर्मोन जैसे झुर्रियों और मेलास्मा से त्वचा की उम्र बढ़ने में देरी करते हैं। , साइटोकिन्स, और न्यूरोपेप्टाइड्स (किम एट अल।, 2015, मियास्टकोव्स्का और सिकोरा, 2018), साथ ही विभिन्न प्राकृतिक पौधों के अर्क से पॉलीफेनॉल और फ्लेवोनोइड जैसे कि विग्ना सबट्रेनियन, स्टिचोपस जैपोनिकस, साइट्रस ऑरेंटिफोलिया, एनानस कोमोसस और मैनिहोट के अर्क। एस्कुलेंटा (चुटोप्रपत एट अल., 2020; डिंग एट अल., 2020 बूनपिसुटिनेंट एट अल., 2022, जम्पा एट अल., 2022)।

गुलाबी रामबूटन या न्गो सी चोम पु (नेफेलियम लैपेसियम एल.) सैपिन्डेसी परिवार का एक पौधा है, जो थाईलैंड के पूर्वी भाग में चंथाबुरी प्रांत के क्लुंग जिले का स्वदेशी पौधा है। गुलाबी रामबूटन (पीआर) फल मीठे होते हैं और इनका स्वाद अच्छा होता है। उनके पास पीले-गुलाबी छिलके के साथ एक पतला छिलका और हल्के हरे रंग की नोक के साथ हल्के गुलाबी रंग की रीढ़ होती है, जो अन्य प्रजातियों जैसे कि न्गो रोंग्रिएन और न्गो नसारन से अलग होती है, जिनमें हल्के लाल छिलके और कांटे होते हैं। रामबूटन पौधों में पाए जाने वाले मुख्य फाइटोकेमिकल्स एलाजिक एसिड, कोरिलगिन, गेरानिन, क्वेरसेटिन और रुटिन (फुओंग एट अल., 2019, फुओंग एट अल., 2020) हैं। यह पहले बताया गया है कि अन्य प्रजातियों के रामबूटन के छिलकों में उच्च स्तर के फेनोलिक यौगिक पाए गए हैं और इसमें कई जैविक गतिविधियां हैं जैसे कि डीपीपीएच रेडिकल स्केवेंजिंग, एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटीवायरल, एंटीकैंसर और एंटीबैक्टीरियल (चिंग्सुवानरोटे एट अल)। ., 2016; हर्नांडेज़-हर्नांडेज़ एट अल., 2019; रोहमन, 2017; सुकमंडारी एट अल., 2017; थिटिलर्टडेचा और रकारियाथम, 2011)। हालाँकि, पिंक रामबूटन के अर्क की जैविक गतिविधियों, विशेष रूप से त्वचा के स्वास्थ्य और सौंदर्य प्रयोजनों के लिए एंटी-एजिंग गतिविधि के लिए कोई वैज्ञानिक रिपोर्ट नहीं है। इसलिए, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य सौंदर्य प्रसाधन, कॉस्मीस्यूटिकल्स और फार्मास्यूटिकल्स में त्वचा अनुप्रयोगों में पीआर अर्क की क्षमता का आकलन और मूल्यांकन करना है। इन विट्रो एंटी-एजिंग जैविक गतिविधियों की जांच जिसमें टायरोसिनेस निषेध और एंटीमेलानोजेनेसिस, कोलेजन बायोसिंथेसिस, और Sirt1 और फॉक्सो1 mRNA अभिव्यक्तियों की उत्तेजना, और तीन एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधियां और साथ ही मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट पर साइटोटॉक्सिसिटी शामिल हैं, दक्षता का संकेत देती हैं। और पीआर अर्क की सुरक्षा जिसे आगे चलकर प्राकृतिक त्वचा देखभाल उत्पादों में विकसित किया जा सकता है।

2। सामग्री और विधि

2.1. तैयारी और निष्कर्षण

गुलाबी रामबूटन (पीआर) के पांच भाग जिनमें पत्तियां (एल), शाखाएं (बी), बीज (एस), और पके (आर) और युवा (वाई) फलों के छिलके शामिल हैं, जून से जून तक थाईलैंड के चांटाबुरी, क्लुंग जिले से एकत्र किए गए थे। अगस्त 2017. वाउचर नमूनों की पहचान थाईलैंड के वन हर्बेरियम में एक वनस्पतिशास्त्री द्वारा की गई थी और थाई विजडम रिसर्च यूनिट, इंटीग्रेटिव मेडिसिन संकाय, आरएमयूटीटी से इनोवेटिव नेचुरल प्रोडक्ट्स के हर्बेरियम (कोड: आरएसपीजी-आरएमयूटीटी-0102) में पंजीकृत किया गया था। , पथुम थानी, थाईलैंड। गुलाबी रामबूटन के सभी हिस्सों को काटा गया, नल के पानी से धोया गया, गर्म हवा वाले ओवन में 60 डिग्री पर सुखाया गया और ग्राइंडर का उपयोग करके पाउडर बनाया गया। गुलाबी रामबूटन के सभी हिस्सों को विलायक के रूप में 95 प्रतिशत इथेनॉल का उपयोग करके मैक्रेशन और सॉक्सलेट निष्कर्षण द्वारा निकाला गया था, जो औषधीय पौधों के निष्कर्षण के लिए सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है क्योंकि यह सुरक्षित और किफायती है। संक्षेप में, प्रत्येक पीआर पाउडर के 10 ग्राम को (1) द्वारा निकाला गया: कमरे के तापमान पर 200 आरपीएम पर झटकों के साथ 95 प्रतिशत (वी/वी) इथेनॉल (बैंकॉक अल्कोहल इंडस्ट्रियल, थाईलैंड) के 100 एमएल में मैक्रेशन (एम)। (25 ± 2 डिग्री ) 48 घंटे के लिए; और (2): 24 घंटे के लिए 80 ± 5 डिग्री सेल्सियस पर 95 प्रतिशत (वी/वी) इथेनॉल के 100 एमएल के साथ सॉक्सलेट निष्कर्षण (सॉक्स)। उसके बाद, अर्क को पहले रूई के माध्यम से फ़िल्टर किया गया और फिर एक वैक्यूम पंप से जुड़े फिल्टर पेपर के माध्यम से पारित किया गया। निस्पंदों को एकत्र किया गया, जमा किया गया और एक रोटरी बाष्पीकरणकर्ता द्वारा सुखाया गया। पीआर क्रूड अर्क को कांच की बोतलों में रखा गया और उपयोग होने तक रेफ्रिजरेटर में 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया। निष्कर्षण पैदावार शुष्क वजन के आधार पर की गई। प्रयोगों से पहले पीआर अर्क को घोलने के लिए 95 प्रतिशत इथेनॉल का उपयोग विलायक के रूप में किया गया था।

2.2. फाइटोकेमिकल्स, कुल फेनोलिक्स और फ्लफ्लेवोनोइड्स, और क्वेरसेटिन सामग्री

पीआर अर्क के एंथ्राक्विनोन, एल्कलॉइड, कैरोटीनॉयड, ग्लाइकोसाइड, फ्लेवोनोइड, टैनिन और ज़ैंथोन जैसे फाइटोकेमिकल्स की जांच पहले बताए अनुसार की गई थी (बूनपिसुटिनेंट एट अल।, 2022)। गुणात्मक परिणाम उपस्थिति के लिए (प्लस) और फाइटोकेमिकल्स की अनुपस्थिति के लिए (-) के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। जैसा कि पहले बताया गया है, कुल फेनोलिक सामग्री (टीपीसी) की जांच फोलिन-सियोकाल्टु परख द्वारा की गई थी (बूनपिसुटिनेंट एट अल., 2022)। संक्षेप में, पीआर अर्क का 50 एलएल, फोलिन-सियोकाल्टेउ अभिकर्मक (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) का 75 एलएल, और 7.5 प्रतिशत (डब्ल्यू/वी) Na2CO3 (लोबा केमी, भारत) का 75 एलएल एक {{13} में जोड़ा गया था। }अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट, धीरे से मिश्रित, और फिर 90 मिनट के लिए एक अंधेरी जगह में कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया। फिर, 725 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को एक माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा मापा गया। फेनोलिक सामग्री की गणना गैलिक एसिड के मानक वक्र (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) से की गई थी। परिणाम एमजी गैलिक एसिड समकक्ष (जीएई)/जी अर्क के रूप में निकाले गए।

श्रैम एट अल के बाद संशोधित एल्यूमीनियम क्लोराइड विधि द्वारा कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी) की जांच की गई। (2021)। संक्षेप में, पीआर अर्क का 50 एलएल, 10 प्रतिशत एसीएल3 (बीडीएच प्रोलैबो केमिकल्स, बेल्जियम) का 25 एलएल, और 5 प्रतिशत NaNO2 (लोबा केमी, भारत) का 100 एलएल एक 96-वेल माइक्रोप्लेट में जोड़ा गया था। 5 मिनट के ऊष्मायन के बाद, प्लेटों में 1 एम NaOH (बीडीएच प्रोलैबो केमिकल्स, बेल्जियम) का 25 एलएल जोड़ा गया। प्रतिक्रिया को 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन द्वारा अनुमति दी गई थी। फिर, 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को एक माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा मापा गया। फ्लेवोनोइड सामग्री की गणना क्वेरसेटिन के मानक वक्र (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) से की गई थी। परिणाम मिलीग्राम क्वेरसेटिन समकक्ष (क्यूई)/जी अर्क के रूप में निकाले गए।

पीआर अर्क में क्वेरसेटिन सामग्री की जांच एचपीएलसी विधि द्वारा की गई (शेख और जैन, 2018)। संक्षेप में, मानक क्वेरसेटिन की सटीक रूप से तौली गई मात्रा को 1,{3}} एलजी/एमएल का स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए, 1,33,000 एमएल के वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में मेथनॉल में घोल दिया गया था। बाद में मानक समाधानों को क्रमिक रूप से 2- गुना पतला करके 3.125 मिलीग्राम/एमएल कर दिया गया। नमूना तैयार करने के लिए, 2.5 ग्राम अर्क को 25 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 25 एमएल मेथनॉल में घोलकर 1,{12}} मिलीग्राम/एमएल प्राप्त किया गया। सभी विश्लेषण एक फोटोडायोड सरणी डिटेक्टर से सुसज्जित एगिलेंट 1260 इन्फिनिटी एचपीएलसी सिस्टम (वाटर्स, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) पर किया गया था। इस्तेमाल किया गया विश्लेषणात्मक कॉलम मेथनॉल के एक मोबाइल चरण के साथ एक एगिलेंट ज़ोरबैक्स विस्तारित कॉलम सी 18 (5 एल × 100 मिमी × 4.6 मिमी) था: 0.6 एमएल / मिनट की प्रवाह दर पर 0.1 प्रतिशत ऑर्थोफोस्फोरिक एसिड (75:25)। स्तंभ का तापमान 25 डिग्री पर बनाए रखा गया था और डिटेक्शन तरंग दैर्ध्य 370 एनएम पर सेट किया गया था। सभी समाधानों और सॉल्वैंट्स को 0.22 एलएम फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया और डीगैस किया गया। नमूना इंजेक्शन की मात्रा 10 एलएल थी, और चलने का समय 8 मिनट था।

2.3. प्रतिउपचारक गतिविधि

2.3.1. मुक्त कट्टरपंथी सफाई गतिविधि

पीआर अर्क की मुक्त कण सफाई गतिविधि को बूनपिसुटिनेंट एट अल द्वारा 2, 2-डिफेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राजाइल (डीपीपीएच) विधि द्वारा जांचा गया था। (2019). सकारात्मक नियंत्रण के रूप में पीआर अर्क या 'एस्कॉर्बिक एसिड (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) की 100 एलएल की मात्रा और पूर्ण इथेनॉल में डीपीपीएच (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) समाधान के 0.1 मिलीग्राम/एमएल की 100 एलएल को एक में जोड़ा गया था। 96 वेल माइक्रोप्लेट. 30 मिनट के लिए एक अंधेरी जगह में कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के बाद, एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके 515 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को मापा गया। डीपीपीएच कट्टरपंथी सफाई गतिविधि के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई थी:

प्रतिशत डीपीपीएच रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि {{0}}[ए0 -ए1/ए0]×100 (1)

जहां A0 नियंत्रण का अवशोषण है और A1 नमूनों का अवशोषण है। 50 प्रतिशत स्केवेंजिंग (एससी50) प्रदान करने वाली सांद्रता की गणना तब प्रतिशत मुक्त रेडिकल स्केवेंजिंग और नमूना सांद्रता के बीच प्लॉट किए गए ग्राफ से की गई थी।

2.3.2. लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध

पीआर अर्क के लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध को फेरिक-थियोसाइनेट विधि बूनपिसुटिनेंट एट अल द्वारा जांचा गया था। (2019)। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में पीआर अर्क या ए-टोकोफ़ेरॉल (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) की 50 एलएल की मात्रा और 50 प्रतिशत (वी/वी) डीएमएसओ (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) में 50 एलएल लिनोलिक एसिड को एक में जोड़ा गया था। 96 वेल माइक्रोप्लेट. प्रतिक्रिया 5 mM NH4- SCN के 50 lL और 2 mM FeCl2 के 50 lL को जोड़कर शुरू की गई थी। 60 मिनट के लिए एक अंधेरी जगह में 37 डिग्री पर ऊष्मायन के बाद, 490 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई:

जहां A0 नियंत्रण का अवशोषण है और A1 नमूनों का अवशोषण है। 50 प्रतिशत लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध (एलसी50) प्रदान करने वाली सांद्रता की गणना प्रतिशत लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध और नमूना सांद्रता के बीच प्लॉट किए गए ग्राफ से की गई थी।

2.3.3. धातु केलेशन

पीआर अर्क के धातु केलेशन की जांच बूनपिसुटिनेंट एट अल द्वारा फेरस आयन चेलेटिंग (एफआईसी) विधि द्वारा की गई थी। (2019)। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में पीआर अर्क या ईडीटीए (लोबा केमी, भारत) की 50 एलएल की मात्रा, 1 मिलीग्राम/एमएल FeCl2, और 1 प्रतिशत एचसीएल (टीसीआई, यूएसए) में 1 मिलीग्राम/एमएल फेरोज़ीन की 50 एलएल को इसमें जोड़ा गया था। एक 96 वेल माइक्रोप्लेट। 60 मिनट के लिए एक अंधेरी जगह में कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के बाद, 570 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। धातु केलेशन के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई:

जहां A0 नियंत्रण का अवशोषण है और A1 नमूनों का अवशोषण है। 50 प्रतिशत मेटल केलेशन (एमसी50) प्रदान करने वाली सांद्रता की गणना प्रतिशत मेटल केलेशन और नमूना सांद्रता के बीच प्लॉट किए गए ग्राफ से की गई थी।

2.4. मशरूम टायरोसिनेस निषेध

पीआर अर्क की मशरूम टायरोसिनेस निषेध गतिविधि को संशोधित डोपाक्रोम विधि (बूनपिसुटिनेंट एट अल., 2022) द्वारा जांचा गया था। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में पीआर अर्क या कोजिक एसिड (सिस्को रिसर्च लेबोरेटरीज (एसआरएल), भारत) की 50 एलएल की मात्रा, 0.1 मिलीग्राम/एमएल एल-टायरोसिन (सिग्मा- एल्ड्रिच, यूएसए), 0.1 एमएम फॉस्फेट बफर का 50 एलएल, और 0.1 मिलीग्राम/एमएल मशरूम टायरोसिनेज (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) का 50 एलएल एक अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट में जोड़ा गया था। 60 मिनट के लिए एक अंधेरी जगह में 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन से पहले और बाद में, 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। मशरूम टायरोसिनेस निषेध के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई थी:

प्रतिशत मशरूम टायरोसिनेस निषेध=[(ए - बी)-(सी - डी)]/=(ए - बी)×100 (4)

जहां ए ऊष्मायन के बाद रिक्त स्थान का अवशोषण है, बी ऊष्मायन से पहले रिक्त स्थान का अवशोषण है, सी ऊष्मायन के बाद नमूनों का अवशोषण है, और डी ऊष्मायन से पहले नमूनों का अवशोषण है। 50 प्रतिशत टायरोसिनेस निषेध (आईसी50 मिलीग्राम/एमएल) प्रदान करने वाली सांद्रता की गणना प्रतिशत टायरोसिनेस निषेध और नमूना सांद्रता के बीच प्लॉट किए गए ग्राफ से की गई थी।

2.5. सेल संस्कृतियों पर इन विट्रो एंटी-एजिंग गतिविधियाँ

2.5.1. कोशिका संवर्धन

म्यूरिन मेलानोमास (बी16एफ10) और मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट का उपयोग क्रमशः एंटी-मेलानोजेनेसिस, कोलेजन बायोसिंथेसिस और सिर्ट1 और फॉक्सो1 एमआरएनए अभिव्यक्ति की एंटी-एजिंग की जांच के लिए किया गया था। ये दोनों कोशिकाएँ अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (एटीसीसी), वर्जीनिया, यूएसए से प्राप्त की गईं। कोशिकाओं को डुल्बेको के संशोधित ईगल मीडियम (डीएमईएम) (सिग्मा-एल्ड्रिच बायोटेक्नोलॉजी, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) में 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस) (सिग्मा-एल्ड्रिच कॉर्पोरेशन, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) के साथ संवर्धित किया गया था। ), प्रयोगों से पहले 5 प्रतिशत सीओ2 इनक्यूबेटर के तहत 37 सी पर मानक परिस्थितियों में पेनिसिलिन के 100 आईयू/एमएल और स्ट्रेप्टोमाइसिन (गिब्को बीआरएल, गेथर्सबर्ग, यूएसए) के 100 मिलीग्राम/एमएल।

2.5.2. मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर साइटोटोक्सिसिटी परीक्षण

पीआर अर्क की विभिन्न सांद्रता की जांच मुरीन मेलानोमा (बी16एफ10) और मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर साइटोटॉक्सिसिटी के लिए 3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-वाईएल) द्वारा की गई थी। )-2,5-डिफेनिल टेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी) परख जैसा कि पहले वर्णित बूनपिसुटिनेंट एट अल। (2022)। प्रति कुएं 1 × 104 कोशिकाओं के घनत्व पर मानव त्वचा के फ़ाइब्रोब्लास्ट को 96- अच्छी प्लेटों में चढ़ाया गया, डीएमईएम के साथ मात्रा को 180 एलएल तक समायोजित किया गया, और 24 घंटे के लिए 5 प्रतिशत सीओ 2 वातावरण के तहत 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया। फिर विभिन्न सांद्रता में अर्क मिलाया गया। कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के तहत 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। उसके बाद, कोशिकाओं को 3 बार पीएच 6.8 पर 10 एमएम पीबीएस से धोया गया और 0.5 मिलीग्राम/एमएल एमटीटी समाधान (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) का 1 एमएल जोड़ा गया। 3 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के बाद, एमटीटी समाधान हटा दिया गया था, और प्रत्येक कुएं में 100 एलएल डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (डीएमएसओ) जोड़ा गया था। प्लेटों को 15 मिनट के लिए 200 आरपीएम पर धीरे से हिलाया गया। समाधानों की 570 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। सेल व्यवहार्यता के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई:

जहां Acontrol नियंत्रण का अवशोषण है और A नमूना नमूनों का अवशोषण है।

2.5.3. B16F10 कोशिकाओं पर एंटी-मेलानोजेनेसिस

पीआर अर्क की बी16एफ10 कोशिकाओं पर एंटी-मेलानोजेनेसिस की जांच बूनपिसुटिनेंट एट अल द्वारा पहले वर्णित विधि का उपयोग करके की गई थी। (2022)। B16F10 कोशिकाओं को 2.5×105 कोशिकाओं प्रति कुएं के घनत्व पर 6- अच्छी प्लेटों में बोया गया और रात भर 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के तहत 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया। फिर 0.01 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता पर अर्क मिलाया गया। कोजिक एसिड का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। कोशिकाओं को 72 घंटों के लिए 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के तहत 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। उसके बाद, सतह पर तैरनेवाला साफ माइक्रोफ्यूज ट्यूबों में एकत्र किया गया था, जबकि कोशिकाओं को 3 बार पीएच 6.8 पर 10 मिमी फॉस्फेट बफर सलाइन (पीबीएस) से धोया गया था, 10 प्रतिशत NaOH के 200 एलएल में भंग कर दिया गया था, और 60 डिग्री 1 घंटे पर ऊष्मायन किया गया था। . सतह पर तैरनेवाला और सेल लाइसेट्स के 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। मेलेनिन सामग्री के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई:

2.5.4. मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर कोलेजन जैवसंश्लेषण

पीआर अर्क के कोलेजन जैवसंश्लेषण की जांच बूनपिसुटिनेंट एट अल द्वारा पहले वर्णित विधि के रूप में की गई थी। (2022). मानव त्वचा के फ़ाइब्रोब्लास्ट्स को 5× 105 कोशिकाओं प्रति कुएं के घनत्व पर 6-वेल प्लेटों में डाला गया और रात भर में 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के तहत 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया। फिर 0.1 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता पर अर्क मिलाया गया। ʟ-एस्कॉर्बिक एसिड का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के तहत 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। उसके बाद, कोशिकाओं को पीएच 6.8 पर 10 एमएम पीबीएस से 3 बार धोया गया, संतृप्त पिक्रिक एसिड (सिस्को रिसर्च लेबोरेटरीज (एसआरएल)) में 1 एमएल 0.1 प्रतिशत (डब्ल्यू/वी) सीरियस रेड सॉल्यूशन (सिग्मा-एल्ड्रिच, यूएसए) मिलाया गया। ), भारत), और फिर 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया। डाई हटा दी गई, और प्लेटों को 1 एमएल 10 एमएम एचसीएल (मर्क मिलिपोर, जर्मनी) से 5 बार धोया गया। फिर, कोशिकाओं को 0.1 एम NaOH का 1 एमएल जोड़कर भंग कर दिया गया। सतह पर तैरनेवाला और सेल लाइसेट्स के 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। कोलेजन मात्रा के प्रतिशत की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई:

जहां, Csample नमूनों की कोलेजन सामग्री थी, और Ccontrol नियंत्रण की कोलेजन सामग्री थी।

2.5.5. मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर एंटी-एजिंग जीन की उत्तेजना

पीआर अर्क के एंटी-एजिंग जीन (फॉक्सो1 और सिर्ट1) की उत्तेजना आरटी-पीसीआर द्वारा निर्धारित की गई थी जैसा कि पहले पोलोलियाख एट अल द्वारा वर्णित किया गया था। (2020)। प्रति कुएं 5 ×105 कोशिकाओं के घनत्व पर मानव त्वचा के फ़ाइब्रोब्लास्ट को रात भर में 5 प्रतिशत सीओ2 वातावरण के तहत 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन करके 6- अच्छी प्लेटों में डाला गया। फिर 0.01 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता पर अर्क मिलाया गया। 24 घंटे तक ऊष्मायन के बाद, निर्माता के निर्देशों के अनुसार कुल आरएनए को न्यूक्लियोस्पिन आरएनए प्लस (माचेरी नागेल, ड्यूरेन, जर्मनी) के साथ निकाला गया। कुल आरएनए की मात्रा क्यूबिट 2.0 फ्लोरोमीटर (इन्विट्रोजन, मैसाचुसेट्स, यूएसए) द्वारा निर्धारित की गई थी। फॉक्सो1, सिर्ट1 और बी-एक्टिन सहित आरटी-पीसीआर के लिए विशिष्ट प्राइमर मैक्रोजेन ओशिनिया, ऑस्ट्रेलिया से खरीदे गए थे। विशिष्ट प्राइमरों के अनुक्रम का पालन किया गया; फॉक्सो1: 5′ -जीएसी जीसीसी जीटीजी सीटीए सीटीसी जीटीटी-3′(आगे) और 5′-सीजीजी टीटीसी एटीए सीसीसी जीएजी जीटीजी-3′(रिवर्स); Sirt1: 5′ -TAG CCT TGT CAG ATA AGG AAG GA-3′(आगे), 5′ -ACA GCT TCA CAG TCA ACT TTG T-3′ (रिवर्स); और बी-एक्टिन: 5′ टीसीए टीजीसी एजीटी जीटीजी एसीजी टीटीजी एसीए टीसीसी जीटी-3′ (फॉरवर्ड), 5′ -सीसीटी एजीए एजीसी एटीटी टीजीसी जीजीटी जीसीए सीजीए टीजी -3′(रिवर्स)। पीसीआर मिश्रण में प्लैटिनम टीएम टैक डीएनए पॉलीमरेज़ सुपरमिक्स (इनविट्रोजन, मैसाचुसेट्स, यूएसए) के साथ 1x सुपरस्क्रिप्टTM III वन-स्टेप आरटी-पीसीआर सिस्टम, 250 एनएम विशिष्ट प्राइमर और 2 एलजी आरएनए शामिल थे। सभी आरटी-पीसीआर प्रतिक्रियाएं टीप्रोफेशनल बेसिक ग्रेडिएंट 070-601 (बायोमेट्रा जीएमबीएच, गोटिंगेन, जर्मनी) पर प्रवर्धन शर्तों के तहत की गईं: रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए 60 डिग्री सेल्सियस 30 मिनट; फिर विकृतीकरण के 15 सेकंड के लिए 94 डिग्री पर 40 चक्र, एनीलिंग के 30 सेकंड के लिए 55 डिग्री सेल्सियस, और 30 सेकंड के विस्तार के लिए 68 डिग्री; और अंत में 5 मिनट के लिए 68 डिग्री सेल्सियस पर। आरटी-पीसीआर प्रक्रियाओं के बाद, पीसीआर उत्पादों को नोवेल जूस 6x डीएनए लोडिंग बफर (जीनडायरएक्सटीएम, चीन) के साथ मिश्रित 1.5 प्रतिशत एगरोज़ जेल पर अलग किया गया, एक ट्रांसिल्यूमिनेटर के साथ देखा गया, और फिर क्वांटिटी वन 4.6.8 (बेसिक) का उपयोग करके फोटो खींचा गया। (बायो-रेड लेबोरेटरीज, इंक., कैलिफोर्निया)। इसके बाद, बैंड घनत्व को इमेज जे (संस्करण 1.47, नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ, बेथेस्डा, एमडी, यूएसए) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, और हाउसकीपिंग जीन, बी-एक्टिन के लिए सामान्यीकृत किया गया था।

2.6. सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी प्रयोगों को स्वतंत्र प्रयोगों के माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त किया गया था (एन {{0}})। एनोवा द्वारा तुकी परीक्षण (पी <0.05) के साथ सांख्यिकीय अंतरों का विश्लेषण किया गया। बायोएक्टिविटीज़ के बीच संबंधों का परीक्षण पियर्सन के सहसंबंध गुणांक द्वारा किया गया था।

3। परिणाम

3.1. पीआर अर्क की निष्कर्षण उपज, भौतिक विशेषताएं और फाइटोकेमिकल सामग्री

पीआर अर्क की निष्कर्षण उपज, भौतिक विशेषताएं और फाइटोकेमिकल सामग्री तालिका 1 में प्रदर्शित की गई थी। पीआर अर्क की निष्कर्षण उपज 10.62 प्रतिशत से 30.63 प्रतिशत तक थी। पीआर अर्क के मुख्य फाइटोकेमिकल घटक फ्लेवोनोइड थे। असाधारण, बीजों से निकले गुलाबी रामबूटन के अर्क (पीआर-एसएम और पीआर-एस-सॉक्स) में फ्लेवोनोइड्स नहीं थे, लेकिन उनके फाइटोकेमिकल्स के रूप में केवल ग्लाइकोसाइड्स पाए गए। केवल, मैक्रेशन (एम) द्वारा पके और युवा छिलकों से निकले पीआर अर्क में ज़ैंथोन की उपस्थिति देखी गई, जो एक ताप-प्रयोगशाला पॉलीफेनोल है। इसके अलावा, सॉक्सलेट निष्कर्षण (सॉक्स) द्वारा पीआर अर्क की निष्कर्षण पैदावार मैक्रेशन (एम) से अधिक प्रतीत होती है।

3.2. पीआर अर्क की कुल फेनोलिक (टीपीसी), फ्लेवोनोइड (टीएफसी), और क्वेरसेटिन सामग्री

मैक्रेशन (पीआरवाई-एम) द्वारा युवा फलों के छिलकों से निकाले गए पीआर अर्क ने फोलिनसिओकाल्टेयू परख द्वारा 67.60 ± 4.38 mgGAE/g की उच्चतम कुल फेनोलिक सामग्री दी, जबकि युवा फलों के छिलकों से निकले पीआर अर्क ने सॉक्सलेट निष्कर्षण (पीआर-वाई-सॉक्स) ने 678.72 ± 23.59 एमजीक्यूई/जी (चित्र 1) (पी <{24}}.05) के संशोधित एल्यूमीनियम क्लोराइड वर्णमिति परख द्वारा उच्चतम कुल फ्लेवोनोइड सामग्री दी। हालाँकि, पीआर-बीएम, पीआर-एसएम और पीआर-एस-सॉक्स अर्क में कोई फेनोलिक सामग्री नहीं दिखी। यह पता चला कि सभी पीआर अर्क ने एचपीएलसी विश्लेषण द्वारा निर्धारित क्वेरसेटिन सामग्री का प्रदर्शन किया। इसके अलावा, मैक्रेशन (पीआर-आरएम) द्वारा पके फलों के छिलकों से निकले पीआर अर्क ने 190.10 ± 0.28 एलजी/एमएल की उच्चतम क्वेरसेटिन सामग्री दी। (अंक 2)।

3.3. पीआर अर्क की एंटीऑक्सीडेंट और मशरूम टायरोसिनेस निषेध गतिविधियाँ

तालिका 2 ने तीन एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधियों का प्रदर्शन किया, जिसमें डीपीपीएच विधि द्वारा मुक्त कण सफाई गतिविधि, फेरिक-थियोसाइनेट विधि द्वारा लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध शामिल है; एफआईसी विधि द्वारा धातु केलेशन; और पीआर अर्क का मशरूम टायरोसिनेस निषेध। पीआर-एलएम, पीआर-बीएम और पीआर-एस-सॉक्स अर्क को छोड़कर अधिकांश पीआर अर्क ने SC5{{10}} रेंज 0 के साथ बेहतर फ्री रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि दिखाई। {18}}23 – {{20}}.045 मिलीग्राम/एमएल, जो मानक ʟ-एस्कॉर्बिक एसिड (एससी5{{29%) के 0 से तुलनीय था। 036 ± 0.{{40}}03 मिलीग्राम/एमएल) पी पर < 0.05. इसके अलावा, पीआर-एलएम अर्क ने LC50 के साथ उच्चतम लिपिड पेरोक्सीडेशन अवरोध दिखाया है। 0.203 ± 0.021 मिलीग्राम/एमएल, जो क्रमशः मानक ए-टोकोफ़ेरॉल (0.122 ± 0.015 मिलीग्राम/एमएल का एलसी50) और ईडीटीए (0.518 ± 0.034 मिलीग्राम/एमएल का एमसी50) के बराबर था (पी <0.05)। सभी पीआर अर्क ने मशरूम टायरोसिनेस निषेध गतिविधि का प्रदर्शन किया, जबकि पीआर-आर-सॉक्स अर्क ने 0.04 ± 0.02 मिलीग्राम/एमएल के आईसी50 के साथ उच्चतम गतिविधि दिखाई, जो मानक कोजिक एसिड (0.02 ± 0.01 मिलीग्राम के आईसी50) के बराबर थी। /एमएल) (पी <0.05)।

3.4. पीआर अर्क की साइटोटोक्सिसिटी

Fig. 3 showed the cytotoxicity on the B16F10 cells (A) human skin fibroblasts by the MTT assay of the PR extracts. All of the PR  extracts at the concentrations of 0.01 and 0.1 mg/mL had no cytotoxicity on the B16F10 cells and human skin fibroblasts, respectively since they gave>अनुपचारित समूह की तुलना में 80 प्रतिशत सापेक्ष व्यवहार्यता। इसके बावजूद, उन कोशिकाओं पर सभी पीआर अर्क की उच्च सांद्रता को साइटोटोक्सिक माना गया। 1 मिलीग्राम/मिलीलीटर से अधिक सांद्रता का परीक्षण नहीं किया गया क्योंकि यह विलायक में पूरी तरह से नहीं घुल सका।

3.5. पीआर अर्क का एंटी-मेलानोजेनेसिस

In this study, there is a screening method from many samples,  therefore we highlight only the highest concentration that had no cytotoxicity on both cells and might have the highest anti-melanogenesis activity. This concentration is the highest concentration that showed no cytotoxicity on the B16F10 cells after being treated with the PR extracts and kojic acid (>80 प्रतिशत सेल व्यवहार्यता) (डेटा नहीं दिखाया गया)। चित्र 4 में 0.01 मिलीग्राम/मिलीलीटर की सांद्रता पर पीआर अर्क की म्यूरिन मेलानोमा (बी16एफ10) कोशिकाओं पर एंटी-मेलानोजेनेसिस प्रदर्शित किया गया है। सभी पीआर अर्क ने बी16एफ10 कोशिकाओं पर एंटीमेलानोजेनेसिस प्रदर्शित किया। सॉक्सलेट निष्कर्षण (पीआर-एल-सॉक्स, पीआर-बी-सॉक्स, पीआर-एस-सॉक्स, पीआर-आर-सॉक्स, और पीआर-वाई-सॉक्स) द्वारा पत्तियों, शाखाओं, बीजों और पके और युवा फलों से पीआर अर्क निकाला जाता है। ) ने 50.6-54.1 प्रतिशत का उच्चतम एंटी-मेलानोजेनेसिस दिखाया, जो नाटकीय रूप से मानक कोजिक एसिड (37.9 ± 3.9 प्रतिशत) से लगभग 1.5 गुना बेहतर था, जबकि आरबी-एम और पीआर-वाईएम अर्क की गतिविधि तुलनीय थी। मानक कोजिक एसिड (पी <0.05)।

3.6. पीआर अर्क के कोलेजन जैवसंश्लेषण की उत्तेजना

सभी पीआर अर्क ने {0}}.1 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता पर सिरियस रेड विधि द्वारा निर्धारित मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर कोलेजन जैवसंश्लेषण की उत्तेजना दिखाई। पीआर अर्क और ʟ-एस्कॉर्बिक एसिड की 0.1 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता उच्चतम सांद्रता है जिसने मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर कोई साइटोटॉक्सिसिटी नहीं दिखाई। सोक्स्लेट निष्कर्षण (पीआर-एलएम और पीआर-बीएम अर्क) द्वारा पत्तियों और शाखाओं से पीआर अर्क ने उच्चतम कोलेजन जैवसंश्लेषण (16.46 ± {{15%) प्रदर्शित किया। क्रमशः 14.66 ± 0.09 प्रतिशत), जो मानक ʟ-एस्कॉर्बिक एसिड (34.07 ± 0.03 प्रतिशत) से लगभग 2 गुना कम था (पी <0.05) (चित्र 5)।

3.7. बुढ़ापा रोधी जीन की उत्तेजना

चित्र 6 में पीआर अर्क के मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट पर Sirt1 और फ़ॉक्सो1 जीन सहित एंटी-एजिंग जीन की उत्तेजना दिखाई गई। 01 मिलीग्राम/एमएल आरटी-पीसीआर तकनीक द्वारा निर्धारित किया गया था। पीआर अर्क और रेस्वेराट्रॉल की {{20}}.{35}}1 मिलीग्राम/मिलीलीटर की सांद्रता उच्चतम सांद्रता है जिसने मानव त्वचा के फ़ाइब्रोब्लास्ट पर कोई साइटोटॉक्सिसिटी नहीं दिखाई। दिलचस्प बात यह है कि 0.01 मिलीग्राम/एमएल पर पीआर-एल-सॉक्स, पीआर-एस-सॉक्स, पीआरआर-एम, पीआर-आर-सॉक्स, पीआर-वाईएम और पीआर-वाई-सॉक्स अर्क ने फॉक्सो1 एंटी-एजिंग की उच्चतम उत्तेजना प्रदर्शित की। एमआरएनए एक्सप्रेशन (495 बीपी), जो नाटकीय रूप से मानक रेस्वेराट्रोल से लगभग 2 गुना (पी <0.05) बेहतर था। दूसरी ओर, पीआर-एस-सॉक्स और पीआर-वाई-सॉक्स अर्क ने Sirt1 एंटी-एजिंग एमआरएनए एक्सप्रेशन (160 बीपी) की उच्चतम उत्तेजना प्रदर्शित की, जो रेस्वेराट्रॉल (पी <0.05) से कम थी। यद्यपि लगभग सभी पीआर अर्क ने एंटी-एजिंग जीन अभिव्यक्ति की उत्तेजना का प्रदर्शन किया, पीआर-आर-सॉक्स और पीआर-बीएम अर्क ने क्रमशः Sirt1 और फॉक्सो1 अभिव्यक्ति को उत्तेजित नहीं किया।

4। चर्चा

दवा, भोजन की खुराक और कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों के लिए नए आशाजनक प्राकृतिक अवयवों को खोजने के लिए कई प्राकृतिक पौधों की आमतौर पर उनके फाइटोकेमिकल्स, बायोएक्टिव यौगिकों और जैविक गुणों की जांच की गई है। गुलाबी रामबूटन थाईलैंड के चंथाबुरी प्रांत के क्लुंग जिले में स्थानीय फलों में से एक है। इसकी जैविक और फार्मास्युटिकल गतिविधियों, विशेष रूप से इसकी उम्र-विरोधी गतिविधि पर कुछ वैज्ञानिक रिपोर्टें हैं। इस अध्ययन में, गुलाबी रामबूटन के पांच भागों, जिनमें पत्तियां, शाखाएं, बीज और पके और युवा फलों के छिलके शामिल हैं, को विलायक के रूप में 95 प्रतिशत इथेनॉल का उपयोग करके मैक्रेशन और सॉक्सलेट निष्कर्षण द्वारा निकाला गया था। क्वेरसेटिन सहित कई नए खोजे गए फाइटोकेमिकल्स, जो पौधों के द्वितीयक मेटाबोलाइट्स हैं, का कोशिकाओं, जानवरों और मनुष्यों में एंटी-एजिंग प्रभावों के लिए अध्ययन किया गया है (फुओंग एट अल।, 2 0 2 0)। इस अध्ययन के निष्कर्षों से, फ्लेवोनोइड्स पीआर अर्क के मुख्य फाइटोकेमिकल्स थे। यह पहले बताया गया है कि रामबूटन की अन्य प्रजातियों के अर्क में फ्लेवोनोइड्स, टैनिन और कैरोटीनॉयड सहित फाइटोकेमिकल्स शामिल थे, जो उनके एंटीऑक्सीडेंट गुणों से संबंधित थे (रोहमान, 2 0 17)। सॉक्सलेट निष्कर्षण द्वारा ज़ैंथोन की अनुपस्थिति उच्च तापमान (युवनाटेमिया एट अल. 2022, संकेश्वरी एट अल., 2018) के कारण हो सकती है। क्वेरसेटिन सबसे प्रचुर मात्रा में फेनोलिक और फ्लेवोनोइड यौगिकों में से एक है जो कई फलों और सब्जियों के साथ-साथ रामबूटन (फुओंग एट अल., 2020) में पाया जाता है। इस अध्ययन में, सॉक्सलेट प्रक्रिया का उच्च तापमान (80 डिग्री सेल्सियस) ठंडी प्रक्रिया की तुलना में क्वेरसेटिन सहित एक गैर-गर्मी योग्य पदार्थ निकाल सकता है। एचपीएलसी विश्लेषण द्वारा निर्धारित क्वेरसेटिन मात्रा का उपयोग उत्पादन पैमाने पर पीआर अर्क की गुणवत्ता नियंत्रण के लिए एक मार्कर के रूप में किया जा सकता है। टीएफसी और पीआर अर्क के टीपीसी के बीच पियर्सन का सहसंबंध गुणांक (आर2) 0.825 था जो एक बहुत मजबूत संबंध को वर्गीकृत करता है (आर2=± 0.80 से ± 1.00) (पी <0.01) जिसका अर्थ है यदि टीएफसी बढ़ाया जाता है, तो टीपीसी भी नाटकीय रूप से बढ़ जाएगी। इसके अलावा, टीपीसी और पीआर अर्क की क्वेरसेटिन सामग्री के बीच आर2 गुणांक 0.650 था जो एक मजबूत संबंध को वर्गीकृत करता है (आर2=± 0.60 से ± 0.79) (पी <0.05)। पीआर अर्क की निष्कर्षण पैदावार, फाइटोकेमिकल्स, साथ ही टीपीसी, टीएफसी और क्वेरसेटिन में अंतर सॉल्वैंट्स, निष्कर्षण प्रक्रियाओं और तापमान (चुटोप्रापट एट अल।, 2020) से प्रभावित हो सकता है। कई अध्ययनों में पाया गया है कि फ्लेवोनोइड और फेनोलिक यौगिकों, साथ ही क्वेरसेटिन में जैविक और फार्मास्युटिकल गतिविधियों की एक विस्तृत श्रृंखला है, जिसमें एंटी-माइक्रोबियल, एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-सूजन और एंटी-एजिंग गतिविधि शामिल हैं (पंचे एट अल।, 2016, शाहिदी) और येओ, 2018, मुसिका एट अल., 2021, वांग एट अल., 2022)।

जैसा कि पहले कहा गया है, रेडिकल ऑक्सीजन प्रजातियां, या आरओएस, कोशिका और ऊतक के स्तर पर उम्र से संबंधित क्षति का कारण बन सकती हैं, जिससे कालानुक्रमिक और पर्यावरणीय उम्र बढ़ने में तेजी आती है, जिसमें झुर्रियां और असामान्य रंजकता होती है (पापैकियो एट अल., 2022)। प्राकृतिक एंटीऑक्सीडेंट मुक्त कणों को खत्म कर सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप सूजन-रोधी प्रभाव कम हो जाता है, कैंसर, मधुमेह और मस्तिष्क विकारों की रोकथाम होती है, रक्तचाप और एथेरोस्क्लेरोसिस में कमी आती है, और त्वचा की उम्र बढ़ने की गति धीमी हो जाती है (मिरेकल उवा, 2{{20} }17). प्राकृतिक उत्पादों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि की जांच करने के लिए सिस्टम के रूप में फ्री रेडिकल स्केवेंजिंग, लिपिड पेरोक्सीडेशन का निषेध और मेटल केलेशन की व्यापक रूप से जांच की गई है। डीपीपीएच मुक्त कण सफाई के लिए, डीपीपीएच अणुओं में विषम इलेक्ट्रॉनों को एंटीऑक्सिडेंट से हाइड्रोजन परमाणु प्राप्त करके हाइड्राज़िन अणु (आयनिटा, 2021) में बदल दिया जाता है। लिपिड पेरोक्सीडेशन विधि लिनोलिक एसिड इमल्शन (बाकिर एट अल., 2017) द्वारा पारित कॉपर (II) से कॉपर (III) आयनों के ऑक्सीकरण पर आधारित है, जबकि धातु केलेशन विधि कॉपर (II) के ऑक्सीकरण पर आधारित है। फेरिक-फेरोज़िन कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए (वोंग एट अल।, 2014)। इस अध्ययन से प्राप्त पीआर अर्क में फ्लेवोनोइड और फेनोलिक सामग्री की उपस्थिति ने तीन एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों में योगदान दिया हो सकता है। यह पाया गया कि रामबूटन के अर्क से फेनोलिक यौगिक (उदाहरण के लिए, कोरिलगिन, एलाजिक एसिड, गेरानिन और क्वेरसेटिन) डीपीपीएच रेडिकल स्केवेंजिंग और लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध (हर्नांडेज़-हर्नांडेज़ एट अल।, 2019, फुओंग एट अल।) द्वारा एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि प्रदर्शित करते हैं। 2019, मोनरोय एट अल., 2020, अरुजो एट अल., 2021)। यह पिछली रिपोर्टों के समान है कि रामबूटन की अन्य प्रजातियों के छिलके का अर्क उच्च टीपीसी और टीएफसी प्रदर्शित करता है, साथ ही साथ एबीटीएस, डीपीपीएच, ओ 2- स्केवेंजिंग, फेरिक कम करने वाली परख शक्ति (एफआरएपी) जैसी मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां दिखाता है। ), चेलेटिंग एजेंट, और लिपिड पेरोक्सीडेशन (लॉरीथ एट अल., 2017, रोहमन, 2017, मोनरोय एट अल., 2020)। दिलचस्प बात यह है कि धातु केलेशन और पीआर अर्क के लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध के बीच आर2 गुणांक ने 0.953 का एक बहुत मजबूत सकारात्मक सहसंबंध दिखाया, जो पी <0.01 के महत्वपूर्ण स्तर पर एक मजबूत संबंध को वर्गीकृत करता है।

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