क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के उपचार में सिस्टैंच-आधारित जियान फैंग हुओ मिंग पेय का यंत्रवत अध्ययन: एकीकृत नेटवर्क फार्माकोलॉजी और पीआई3के/एक्ट/एनएफ-κबी मार्ग को लक्षित करने वाला प्रायोगिक सत्यापन
Oct 27, 2025
2. तरीके
2.1 नेटवर्क फार्माकोलॉजी और आणविक डॉकिंग विश्लेषण
2.1.1 सक्रिय घटकों और रोग लक्ष्यों की पहचान
टीसीएमएसपी डेटाबेस का उपयोग करते हुए, सिस्टैंच-आधारित जियान फैंग हुओ मिंग ड्रिंक (एक्सएफएचवाई) में सक्रिय यौगिकों को एडीएमई मानदंड के साथ जांचा गया: मौखिक जैवउपलब्धता (ओबी) 30% से अधिक या उसके बराबर और दवा-समानता (डीएल) 0.18 से अधिक या उसके बराबर। इन यौगिकों के संभावित लक्ष्यों की पहचान स्विसटार्गेटप्रेडिक्शन (संभावना 0.1 से अधिक या उसके बराबर) का उपयोग करके की गई थी। साइटोस्केप 3.9.1 का उपयोग करके एक "जड़ी-यौगिक-लक्ष्य" नेटवर्क का निर्माण किया गया था, और डिग्री केंद्रीयता के आधार पर शीर्ष पांच यौगिकों की पहचान की गई थी। इसके साथ ही, "क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस" और "प्रोस्टेटाइटिस" जैसे कीवर्ड का उपयोग करके सीपी/सीपीपीएस-संबंधित रोग लक्ष्य जीनकार्ड्स, ओएमआईएम और डिसजीनेट से एकत्र किए गए थे।
प्रोस्टेट और किडनी स्वास्थ्य PhGs75% Ech 30% अधिनियम 12% के लिए सिस्टैंच अर्क की खुराक
2.1.2 प्रतिच्छेदन लक्ष्यों की पहचान
प्रमुख संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करते हुए, वेन आरेख उत्पन्न करने के लिए वेनी 2.1 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके एक्सएफएचवाई यौगिक लक्ष्यों और सीपी/सीपीपीएस रोग लक्ष्यों के बीच प्रतिच्छेदन निर्धारित किया गया था।
2.1.3 पीपीआई नेटवर्क निर्माण
इंटरसेक्शन लक्ष्य STRING डेटाबेस में आयात किए गए थे (प्रजाति: होमो सेपियन्स; इंटरेक्शन स्कोर> 0.9)। परिणामी प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन (पीपीआई) नेटवर्क को साइटोस्केप में आयात किया गया था, और डिग्री, बीचनेस और निकटता जैसे नेटवर्क टोपोलॉजी मापदंडों के आधार पर साइटोहब्बा का उपयोग करके मुख्य लक्ष्यों की पहचान की गई थी।
2.1.4 "हर्ब-कंपाउंड-टारगेट-पाथवे" नेटवर्क का निर्माण
साइटोस्केप 3.9.1 का उपयोग करते हुए, XFHY, इसके सक्रिय यौगिकों, लक्ष्यों और सिग्नलिंग मार्गों के बीच संबंधों की कल्पना करने के लिए एक नेटवर्क मॉडल बनाया गया था। प्रमुख नोड्स निर्धारित करने के लिए नेटवर्क मापदंडों का विश्लेषण किया गया।
2.1.5 जीओ और केईजीजी संवर्धन विश्लेषण
जीन ओन्टोलॉजी (जीओ) और क्योटो इनसाइक्लोपीडिया ऑफ जीन्स एंड जीनोम्स (केईजीजी) पाथवे संवर्धन विश्लेषण (पी <0.05) के लिए डीएवीआईडी डेटाबेस पर इंटरसेक्शन लक्ष्य अपलोड किए गए थे। परिणामों को जैव सूचना विज्ञान उपकरणों के माध्यम से देखा गया।
2.1.6 आणविक डॉकिंग
शीर्ष पांच यौगिकों (उदाहरण के लिए, क्वेरसेटिन, काएम्फेरोल) का उपयोग लिगैंड के रूप में किया गया था, और पीपीआई नेटवर्क से शीर्ष दस मुख्य लक्ष्य रिसेप्टर्स के रूप में उपयोग किए गए थे। प्रोटीन संरचनाएं प्रोटीन डेटा बैंक (पीडीबी) से प्राप्त की गईं, जिन्हें ऑटोडॉकटूल्स 1.5.6 (निर्जलीकरण, हाइड्रोजनीकरण और चार्ज जोड़ सहित) का उपयोग करके पूर्व-संसाधित किया गया और पीडीबीक्यूटी प्रारूप में परिवर्तित किया गया। MOL2 प्रारूप में लिगैंड संरचनाएं TCMSP से प्राप्त की गईं और इसी तरह परिवर्तित की गईं। ऑटोडॉक का उपयोग करके आणविक डॉकिंग आयोजित की गई थी, और ग्राफपैड प्रिज्म 8 का उपयोग करके बाइंडिंग समानताएं देखी गईं थीं।
2.2 पशु प्रयोग
2.2.1 मॉडल स्थापना
सीपी/सीपीपीएस को मॉडल करने के लिए एक रासायनिक प्रेरण विधि का उपयोग किया गया था। चूहों को 3% पेंटोबार्बिटल सोडियम (50 मिलीग्राम/किग्रा) से बेहोश किया गया। निचले पेट में एक मध्य रेखा चीरा लगाया गया था, और प्रोस्टेट के प्रत्येक पार्श्व लोब में 3% λ-कैरेजेनन का 80 μL इंजेक्ट किया गया था (कुल 160 μL)। शम-संचालित चूहों को खारा इंजेक्शन प्राप्त हुआ। पश्चात की देखभाल में सामयिक एंटीबायोटिक अनुप्रयोग शामिल था। 7वें दिन, प्रोस्टेट की सकल और हिस्टोलॉजिकल परीक्षा (एडिमा, कंजेशन, उपकला अध: पतन और सूजन घुसपैठ) के माध्यम से मॉडलिंग की सफलता की पुष्टि की गई।
2.2.2 समूहीकरण एवं उपचार
सत्तर नर एसडी चूहों को यादृच्छिक रूप से सात समूहों में विभाजित किया गया था (एन=10):
सामान्य नियंत्रण
दिखावटी ऑपरेशन
मॉडल नियंत्रण
निम्न-, मध्यम- और उच्च खुराक वाले XFHY समूह
तमसुलोसिन समूह
खुराक की गणना मानव समकक्ष खुराक (7.29 ग्राम/किग्रा/दिन) के आधार पर की गई थी। एक्सएफएचवाई को मौखिक गैवेज के माध्यम से 0.3645 ग्राम/एमएल (कम) और 1.458 ग्राम/एमएल (उच्च) पर प्रशासित किया गया था। तमसुलोसिन को 0.0018 मिलीग्राम/किलोग्राम पर प्रशासित किया गया था। मॉडलिंग के 8 दिन बाद से शुरू होकर सभी उपचार 28 दिनों तक चले।
2.2.3 हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन
बाएं प्रोस्टेट लोब को 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया था, पैराफिन में एम्बेडेड किया गया था, खंडित किया गया था, और हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन के साथ दाग दिया गया था। प्रकाश माइक्रोस्कोपी के तहत हिस्टोलॉजिकल परिवर्तनों का मूल्यांकन किया गया।
2.2.4 सूजन मार्करों के लिए एलिसा
उदर महाधमनी के माध्यम से एकत्र किए गए रक्त को सेंट्रीफ्यूज किया गया, और निर्माता के निर्देशों के अनुसार एलिसा किट का उपयोग करके टीएनएफ-, IL-1, और COX-2 के सीरम स्तर को मापा गया।
जीन अभिव्यक्ति के लिए 2.2.5 क्यूआरटी-पीसीआर
कुल आरएनए को प्रोस्टेट ऊतक से निकाला गया और सीडीएनए में रिवर्स-ट्रांसक्राइब किया गया। वास्तविक समय पीसीआर PI3K, Akt और NF-κB p65 के लिए विशिष्ट प्राइमरों का उपयोग करके आयोजित किया गया था। जीएपीडीएच को एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। सापेक्ष अभिव्यक्ति की गणना 2^-ΔΔCt विधि का उपयोग करके की गई थी।
2.2.6 प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए वेस्टर्न ब्लॉट
RIPA बफर का उपयोग करके जमे हुए प्रोस्टेट ऊतक से प्रोटीन निकाला गया। परिमाणीकरण के बाद, प्रोटीन को SDS-PAGE द्वारा अलग किया गया, PVDF झिल्ली में स्थानांतरित किया गया, और PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65, और p-NF-κB p65 के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ जांच की गई। एचआरपी-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी और ईसीएल का पता लगाने का उपयोग किया गया। ImageJ का उपयोग करके बैंड की तीव्रता निर्धारित की गई।
2.2.7 सांख्यिकीय विश्लेषण
सभी प्रयोग तीन प्रतियों में प्रदर्शित किए गए थे। ग्राफपैड प्रिज्म 8 का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया और माध्य ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किया गया। एकाधिक समूह तुलनाओं के लिए एलएसडी या डननेट परीक्षण के बाद एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। पी <0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।
3. परिणाम
3.1 नेटवर्क फार्माकोलॉजी और आणविक डॉकिंग
यौगिक-लक्ष्य प्रतिच्छेदन:912 यौगिक लक्ष्य और 2,197 रोग लक्ष्य से 374 अतिव्यापी लक्ष्य प्राप्त हुए।
शीर्ष यौगिकों की पहचान:क्वेरसेटिन, काएम्फेरोल, पेलार्गोनिडिन, नैरिंगेनिन, और बयाकेंजेलिकोल-सभी ज्ञात सूजनरोधी और एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव वाले हैं।
पीपीआई विश्लेषण:मुख्य लक्ष्यों में TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1 और NFKB1 शामिल हैं।
GO और KEGG संवर्धन:समृद्ध मार्गों में PI3K/Akt, MAPK, RAS और सूजन संबंधी जैविक प्रक्रियाएं शामिल हैं।
आणविक डॉकिंग:मुख्य लक्ष्यों और प्रमुख यौगिकों (बाध्यकारी ऊर्जा -5.0 किलो कैलोरी/मोल से कम या उसके बराबर) के बीच मजबूत बंधन समानताएं देखी गईं, जो उच्च जैव सक्रियता का संकेत देती हैं।
3.2 प्रायोगिक सत्यापन
3.2.1 वह धुंधला हो जाना
मॉडल समूह के चूहों ने ग्रंथि संबंधी उपकला अध:पतन, स्ट्रोमल एडिमा और व्यापक सूजन घुसपैठ को दिखाया। एक्सएफएचवाई-उपचारित समूहों में सूजन कम देखी गई, विशेष रूप से मध्यम और उच्च खुराक वाले समूहों में।
3.2.2 सूजन मार्कर स्तर
मॉडल समूह की तुलना में, एक्सएफएचवाई ने सीरम टीएनएफ-, IL-1, और COX-2 स्तर (पी <0.01) को काफी कम कर दिया, जो सूजन-रोधी प्रभावकारिता को दर्शाता है।
3.2.3 जीन अभिव्यक्ति (क्यूपीसीआर)
XFHY ने खुराक पर निर्भर तरीके से PI3K, Akt और NF-κB p65 के mRNA स्तर को काफी कम कर दिया। केवल कम खुराक वाली Akt और p65; मध्यम और उच्च खुराक वाले समूहों ने व्यापक दमन दिखाया।
3.2.4 प्रोटीन अभिव्यक्ति (पश्चिमी धब्बा)
PI3K, Akt (Ser473, Th308), और NF-κB p65 का फॉस्फोराइलेशन स्तर मॉडल समूह में काफी बढ़ा हुआ था और XFHY- उपचारित चूहों में कम हो गया था, खासकर मध्यम और उच्च खुराक पर।
4. चर्चा
नैदानिक अनुभव के आधार पर यह अध्ययन इसकी पुष्टि करता हैसिस्टैंच-आधारित XFHYसीपी/सीपीपीएस पर उल्लेखनीय सूजनरोधी प्रभाव पड़ता है। नेटवर्क फार्माकोलॉजी ने विशेष रूप से प्रमुख सक्रिय यौगिकों की पहचान कीक्वेरसेटिन, सिद्ध सूजनरोधी और एंटीऑक्सीडेंट गुणों के साथ। पीपीआई विश्लेषण ने जैसे लक्ष्यों पर प्रकाश डालाटीएनएफ, आईएल6, औरAKT1, जो प्रोस्टेटाइटिस में सूजन के लिए केंद्रीय हैं।
KEGG विश्लेषण में शामिल होने का सुझाव दिया गयाPI3K/Akt/NF-κBसिग्नलिंग मार्ग-सूजन और प्रतिरक्षा विनियमन में व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त है। एक्सएफएचवाई इस मार्ग को बाधित करके चिकित्सीय प्रभाव डाल सकता है, इस प्रकार प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन अभिव्यक्ति को कम कर सकता है।
इसके अलावा, Akt (Ser473 और Th308) का दोहरा फॉस्फोराइलेशन NF-κB सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण प्रतीत होता है। एक्सएफएचवाई ने दोनों साइटों पर फॉस्फोराइलेशन को रोक दिया, जो अपस्ट्रीम एक्ट दमन के माध्यम से एनएफ-κबी सिग्नलिंग को रोकने का सुझाव देता है।
निष्कर्ष
XFHY PI3K/Akt/NF-κB मार्ग को अवरुद्ध करके, अभिव्यक्ति को कम करके CP/CPPS को कम कर सकता हैIL-1 , टीएनएफ-, औरCOX-2, और प्रोस्टेट ऊतक में सूजन प्रतिक्रियाओं को कम करना। मार्ग की भागीदारी, विशेष रूप से Ser473 और Th308 पर Akt का फॉस्फोराइलेशन, XFHY की प्रभावकारिता के लिए एक संभावित यंत्रवत स्पष्टीकरण प्रदान करता है। यह पुष्टि करने के लिए आगे के शोध की आवश्यकता है कि क्या PI3K/Akt/NF-κB निश्चित मार्ग है जिसके माध्यम से XFHY अपनी चिकित्सीय कार्रवाई करता है।
एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो:
लेखक किसी प्रकार के हित संघर्ष की घोषणा नहीं करते।
यदि आप चाहें तो मुझे बताएंचित्रमय सार, सार तालिका, यापावरप्वाइंट प्रस्तुतिइस अध्ययन के आधार पर!
