ग्लूकोकॉर्टीकॉइड-प्रेरित चूहा मॉडल में सिस्टैंच डेजर्टिकोला और इसके चावल वाइन स्टीमिंग उत्पादों का न्यूरोएंडोक्राइन-प्रतिरक्षा कार्य-Ⅰ

1 परिचय

सिस्टैंच डेजर्टिकोला, जिसे "डेजर्ट जिनसेंग" कहा जाता है, एक पारंपरिक चीनी दवा है जिसका उपयोग सदियों से यांग-टॉनिक जड़ी बूटी के रूप में किया जाता रहा है।गुर्दे को सक्रिय करना और यांग को मजबूत करना[1]. आठ प्रजातियाँ और एक विविधतासिस्टैंच हर्बा केवल और केवल चीन में ही रिकार्ड किये गये हैंसिस्टैंच डेजर्टिकोलावाईसी मा औरसिस्टैंच ट्यूबुलोसा(शेंक) वाइट चीनी फार्माकोपिया [2] में दर्ज हैं। फार्माकोलॉजिकल अध्ययनों ने यह प्रदर्शित किया हैसिस्टैंच हर्बाप्रदर्शित न्यूरोप्रोटेक्टिव [3], इम्यूनोमॉड्यूलेटरी [4], कार्डियोप्रोटेक्टिव [5], एंटीथैटिग [6], एंटी-इंफ्लेमेटरी [7], हेपेटोप्रोटेक्टिव [8], एंटीऑक्सीडेंट [9], जीवाणुरोधी [10], रेचक [11], और एंटीट्यूमर प्रभाव [12]. इस जीनस की रिपोर्ट की गई जैविक गतिविधियों के व्यापक स्पेक्ट्रम को इसकी जटिल और विविध फाइटोकेमिकल संरचना के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है।सिस्टैंच डेजर्टिकोलाइसमें फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड्स, इरिडोइड्स, पॉलीसेकेराइड्स [13] आदि शामिल हैं। फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की सामग्री मूल औषधीय सामग्रियों में सबसे अधिक है [14]।

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चीनी मटेरिया मेडिका (सीएमएम) का प्रसंस्करण पारंपरिक चीनी चिकित्सा सिद्धांत के अनुसार उपचार, वितरण और तैयारी की विभिन्न आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए एक पारंपरिक दवा तकनीक है। उन प्रसंस्कृत उत्पादों को काढ़े के टुकड़े का नाम दिया गया है, जिनका उपयोग क्लीनिकों में किया जाता है। प्रसंस्करण का उद्देश्य कच्ची दवाओं की विषाक्तता को कम करने के लिए प्रभावकारिता को बढ़ाना है। 2015 चीनी फार्माकोपिया ने दर्ज किया कि सिस्टैंच मोटी स्लाइस (सीडी) और चावल वाइन-स्टीम्ड सिस्टैंच (डब्ल्यूसीडी) को क्लिनिक में काढ़े के टुकड़ों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। हमारे शोध समूह ने दिखाया कि रेचक प्रभाव से राहत मिली थी, और चावल की वाइन के साथ सिस्टैंच को उबालने के बाद बुढ़ापारोधी और किडनी-यांग स्फूर्तिदायक प्रभाव बढ़ गए थे [15]।

हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-अधिवृक्क ग्रंथि-थाइमस ग्रंथि (एचपीएटी) अक्ष का कार्य किडनी-यांग कमी सिंड्रोम में अव्यवस्थित है [16]। किडनी-यांग की कमी वाले मरीजों में भी व्यापक प्रतिरक्षा शिथिलता होती है। एचपीए अक्ष की शिथिलता का इम्युनोडेफिशिएंसी से गहरा संबंध है। न्यूरोएंडोक्राइन-इम्यून नेटवर्क (एनईआई) सिद्धांत से पता चलता है कि प्रतिरक्षा और न्यूरोएंडोक्राइन सिस्टम कई लिगैंड और रिसेप्टर्स को साझा करते हैं [17], और हाइपोथैलेमस को न्यूरोएंडोक्राइन को प्रतिरक्षा प्रणाली से जोड़ने के लिए धुरी माना जाता है।

इस अध्ययन में, हमने बहिर्जात कॉर्टिकोस्टेरॉइड इंजेक्शन के साथ मॉडल चूहों में किडनी-यांग की कमी को दोहराया और अंतःस्रावी-प्रतिरक्षा समारोह के परिप्रेक्ष्य से सिस्टैंच डेजर्टिकोला के विभिन्न संसाधित उत्पादों के जवाब में किडनी-यांग की कमी के तंत्र का पता लगाया।

2। सामग्री और विधि

2.1. सामग्री और अभिकर्मक

सिस्टैंच डेजर्टिकोला को 2019.5 में अलाशान नीमेंगगु से एकत्र किया गया था और प्रोफेसर यानजुन झाई (स्कूल ऑफ फार्मेसी, लियाओनिंग यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन, चीन) द्वारा सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा के सूखे मांसल तनों के रूप में पहचाना गया था। वाउचर नमूने लिओनिंग प्रोसेसिंग इंजीनियरिंग टेक्नोलॉजी सेंटर में संरक्षित किए गए थे।

अजुगोल के मानक यौगिक चेंगदू प्योर केम-स्टैंडर्ड कंपनी लिमिटेड (चेंगदू, चीन) से खरीदे गए थे; सिस्टानोसाइड एफ,इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, और आइसोएक्टियोसाइडमस्ट कंपनी (सिचुआन चीन) से खरीदे गए थे; एक्टियोसाइड को डालियान मीलुन बायो से खरीदा गया था। कंपनी लिमिटेड (डालियान, चीन)। एमएस-ग्रेड एसीटोनिट्राइल और मेथनॉल मर्क केजीएए (डार्मस्टेड, जर्मनी) से खरीदे गए थे। एचपीएलसी-ग्रेड फॉर्मिक एसिड मर्क केजीएए (डार्मस्टेड, जर्मनी) से खरीदा गया था। राइस वाइन झेजियांग ब्रांड टॉवर शाओक्सिंग वाइन कंपनी लिमिटेड (झेजियांग, चीन) से खरीदी गई थी।

कॉर्टिकोस्टेरोन (सीएएस: {{0%), शुद्धता > 98%, टीसीआई शंघाई डेवलपमेंट लिमिटेड कंपनी), चिंकुई शिन च्युवन पिल्स (बीजिंग टोंगरेंटांग टेक्नोलॉजी डेवलपमेंट कंपनी लिमिटेड), चूहा एसीटीएच, सीआरएच, टी, आईएल{{ 2}}, आईएफएन-सी, टीएनएफ-, आईएल -2, और आईएल -10 एलिसा डिटेक्शन किट नानजिंग जियानचेंग कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे। रैट कोर्टिसोल एलिसा किट बीओएसके कंपनी द्वारा प्रदान की गई थी। चूहा CD4 एंटीबॉडी, CD8a एंटीबॉडी (नंबर 561833 और 559976), RBC लाइसेट (Solarbio, R1010), PBS बफर सॉल्यूशन (Solarbio, P1020-500), TRIzol (MAN0001271), CaM, और -एक्टिन अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमर गुआंगज़ौ इनविट्रोजन कंपनी द्वारा प्रदान किए गए थे। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट (नंबर आरआर037ए) और सीडीएनए सिंथेसिस किट (नंबर 10000068167) बोले लाइफ मेडिसिन प्रोडक्ट्स (शंघाई) कंपनी लिमिटेड द्वारा प्रदान किए गए थे। क्लोरोफॉर्म, आइसोप्रोपेनॉल, 75% इथेनॉल और यूरेथेन सभी समाधान विश्लेषणात्मक रूप से शुद्ध थे और सिनोफार्म केमिकल रिएजेंट कंपनी लिमिटेड द्वारा उत्पादित किए गए थे। अल्ट्राप्योर पानी का उत्पादन मिल्ली-क्यू प्रणाली (18.2 एमΩ, मिलिपोर, एमए, यूएसए) द्वारा किया गया था।

2.2. प्रायोगिक उपकरण

एक एंजाइम मार्कर (थर्मो, मॉडल 3530911931), स्वचालित प्लेट वॉशर (मॉडल एचबीएस - 4009), डिजिटल डिस्प्ले पुश-पुल फोर्स मीटर (मॉडल विक्टर - 50 एन), हाई-स्पीड फ्रीजिंग सेंट्रीफ्यूज (मॉडल सिग्मा 3k15) ), अल्ट्रामाइक्रो स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (मॉडल बी-50क्यू), जीन एम्पलीफायर (मॉडल एल96जी), वास्तविक समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर (मॉडल स्टेपवन), फ्लो साइटोमीटर (मॉडल एसी66051710132), पैराफिन माइक्रोटोम (मॉडल लाइका), माइक्रोस्कोप (ओलंपस) , मॉडल बीएस-53), और एक शुद्ध जल उपकरण (मॉडल F7JA36507) का उपयोग किया गया।

2.3. यूपीएलसी-क्यू-टीओएफ-एमएस और फार्माकोलॉजिकल प्रयोगों के लिए नमूने तैयार करना

WCD को उसी बैच से संसाधित किया गया थासिस्टैंच डेजर्टिकोलाहमारी प्रयोगशाला में. डब्ल्यूसीडी की तैयारी के लिए, सूखे सीडी के टुकड़े (5 मिमी मोटे) (100 ग्राम) को चावल की वाइन (30 एमएल) के साथ डाला गया, 4 घंटे के लिए उच्च दबाव (1.25 केपीए) पर पकाया गया, और फिर 55 डिग्री पर सुखाया गया।

सीडी और डब्ल्यूसीडी के मोटे पाउडर को 0.5 घंटे के लिए 95% इथेनॉल के 1 0 गुना में भिगोया गया, 1 घंटे के लिए हर बार 3 बार रिफ्लक्स निकाला गया, और फ़िल्टर किया गया, और फ़िल्ट्रेट को 3 बार मिलाया गया। इथेनॉल को कम दबाव में पुनर्प्राप्त किया गया था, और प्रशासन के लिए अर्क प्राप्त किया गया था। अर्क (1 एमएल) को 50% मेथनॉल में जोड़ा गया, जिससे कुल मात्रा 20 एमएल हो गई, और सामग्री विश्लेषण के लिए 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

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2.4. सीडी और डब्ल्यूसीडी अर्क के विश्लेषण के लिए यूपीएलसी-क्यूक्यूक्यू-एमएस शर्तें

2.4.1. एलसीटीएचएमएस विश्लेषणात्मक स्थितियाँ

डेटा अधिग्रहण और प्रसंस्करण करने के लिए MassLynx 4.1 विश्लेषक सॉफ़्टवेयर के साथ UPLC-MSThMS प्रणाली का उपयोग किया गया था। विश्लेषणात्मक स्तंभ 4{56}} डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक एक्विटी यूपीएलसी बीईएच सी18 (1{{10}}0 मिमी × 2.1 मिमी, 1.7 माइक्रोन) था। मोबाइल चरण {{59%) था।1% फॉर्मिक एसिड जलीय घोल (ए) और एसीटोनिट्राइल जिसमें 0.1% फॉर्मिक एसिड (बी) था। निक्षालन प्रवणता 0.00–1.00 मिनट 3% बी के साथ, 1.01–2.00 मिनट 3%–11.5% बी, 2.01–3 के साथ थी।{{29 12% बी के साथ 17 मिनट, 3.01-4. % बी, 25% बी के साथ 6.01-8।

इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण (ईएसआई) स्रोत से सुसज्जित वाटर्स ट्रिपल क्वाड्रपल मास स्पेक्ट्रोमीटर (ज़ेवो टीक्यूडी, वाटर्स कॉर्प, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) का उपयोग नकारात्मक आयन मोड में किया गया था। घुलनशील गैस 250 डिग्री के तापमान पर 500 एलटीएचएच की प्रवाह दर के साथ नाइट्रोजन थी। सभी पाए गए यौगिकों को एकाधिक प्रतिक्रिया निगरानी (एमआरएम) मोड में मापा गया था; तालिका 1 ऊर्जा मापदंडों को दिखाती है, और तालिका 2 विश्लेषण किए गए घटकों के लिए अंशांकन वक्र दिखाती है।

2.4.2. संदर्भ पदार्थों की तैयारी

ट्यूबुलोसाइड ए (3.02 मिलीग्राम), इचिनाकोसाइड (3.00 मिलीग्राम), 2′-एसिटाइलेक्टियोसाइड (2.34 मिलीग्राम), एक्टियोसाइड (2.45 मिलीग्राम), आइसोएक्टियोसाइड (0.61 मिलीग्राम), सिस्टानोसाइड एफ ( स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए 2.14 मिलीग्राम), सैलिड्रोसाइड (3.39 मिलीग्राम), जीनिपोसिडिक एसिड (2.84 मिलीग्राम), एजुगोल (1.58 मिलीग्राम), और कैटलपोल (2.39 मिलीग्राम) को मेथनॉल में भंग कर दिया गया था। कार्यशील मानक समाधानों के लिए उचित सांद्रता प्राप्त करने के लिए स्टॉक समाधान को मेथनॉल से पतला किया गया था। उपयोग से पहले सभी तैयार समाधानों को 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

2.5. पशु मॉडलों की तैयारी और समूहन

एसडी नर चूहों (180-220 ग्राम) को लियाओनिंग चांगशेंग बायोटेक्नोलॉजिकल कंपनी, पशु परमिट संख्या: एससीएक्सके (लियाओ) 2015-0001 से खरीदा गया था। सभी चूहों को 25 डिग्री तापमान और 30-50% की सापेक्ष आर्द्रता पर भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच प्रदान की गई। प्रयोगों से पहले जानवरों को 7 दिनों के लिए रखा गया था।

एक सौ चूहों को बेतरतीब ढंग से 1 0 समूहों में विभाजित किया गया: रिक्त नियंत्रण (बीसी) समूह, मॉडल नियंत्रण (एमसी) समूह, सकारात्मक नियंत्रण (पीसी) समूह, चावल वाइन नियंत्रण (डब्ल्यूसी) समूह, सीडी उच्च खुराक (सीडी) -एचडी) समूह, सीडी मध्य-खुराक (सीडी-एमडी) समूह, सीडी कम खुराक (सीडी-एलडी) समूह, डब्ल्यूसीडी उच्च खुराक (डब्ल्यूसीडी-एचडी) समूह, डब्ल्यूसीडी मध्य-खुराक (डब्ल्यूसीडी-एमडी) समूह, और डब्ल्यूसीडी कम खुराक (डब्ल्यूसीडी-एलडी) समूह। CD-HDThWCD-HD, CD-MDTh WCD-MD, और CD-LDThWCD-LD की खुराक क्रमशः 5.48 gTh(kg ∙ d), 2.74 gTh (kg ∙ d), और 1.37 gTh (kg ∙ d) थी। पीसी समूह के लिए खुराक 1.646 gTh (किलो ∙ d) थी, और WC समूह के लिए, 40 दिनों के लिए 1 mLTh100 ग्राम थी। प्रशासन के 6वें दिन, चूहों को चमड़े के नीचे कॉर्टिकोस्टेरोन वॉटर सस्पेंशन (कॉर्टिकोस्टेरोन + 0.1% डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड + 0.1% ट्वीन-80 + 0.9% सोडियम क्लोराइड) का इंजेक्शन लगाया गया, सिवाय इसके कि बीसी समूह के लिए [18]। कॉर्टिकोस्टेरोन की सांद्रता 5 gThL थी, और खुराक 0.1 mLTh100 g थी। बीसी समूह के चूहों को समान खुराक पर इंजेक्शन द्वारा सामान्य सेलाइन + 0.1% डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड + 0.1% ट्वीन- 80 + 0.9% सोडियम क्लोराइड दिया गया।

2.6. एचपीए अक्ष कार्यों का निर्धारण

2.6.1. वजन, तापमान और धारण शक्ति परीक्षण

हर 3 दिन में वजन परीक्षण किया जाता था और हर 6 दिन में तापमान लिया जाता था। प्रयोग के दौरान. 39वें दिन, ग्रिप मीटर द्वारा पिछले अंग की अधिकतम शक्ति मापी गई। चूहों को चिकने प्लेटफार्मों पर रखा गया था, जिससे उनका पिछला अंग खंभे को पकड़ लेता था। जब पूंछ खींची जाती है तो चूहे पीछे की ओर जाने से रोकने के लिए किसी भी वस्तु को सहज रूप से पकड़ लेते हैं, जब तक कि खींचने वाला बल पकड़ से अधिक न हो जाए। जब चूहा अपनी पकड़ खो देता है, तो प्रीएम्प्लीफायर स्वचालित रूप से अधिकतम पकड़ बल को रिकॉर्ड कर सकता है।

2.6.2. सीरम में टी, सीआरएच, एसीटीएच, सीओआरटी और कोर्टिसोल के स्तर का निर्धारण

अंतिम प्रशासन के एक घंटे बाद, चूहों को यूरेथेन समाधान (20 gTh100 एमएल) के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया गया। फिर, रक्त के नमूने एकत्र किए गए, सीरम प्राप्त करने के लिए 15 मिनट के लिए 3500 आर पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, और -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया। निर्माता के निर्देशों के अनुसार T, CRH, ACTH, CORT और कोर्टिसोल की सांद्रता को चूहे एलिसा किट से मापा गया।

2.6.3. सूक्ष्मदर्शी अवलोकन

एचई स्टेनिंग द्वारा अधिवृक्क ग्रंथि ऊतक की रूपात्मक संरचना देखी गई। अधिवृक्क ऊतक को 10% पैराफॉर्मलडिहाइड में स्थिर किया गया, इथेनॉल में निर्जलित किया गया, जाइलीन समाधान द्वारा पारदर्शी बनाया गया, पारंपरिक तरीकों से एम्बेडेड किया गया, 4 माइक्रोन मोटी स्लाइस में काटा गया, जाइलीन समाधान के साथ डीवैक्स किया गया, इथेनॉल ग्रेडिएंट के साथ हाइड्रेटेड किया गया, और फिर हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन के साथ दाग दिया गया। धुंधला समाधान. जाइलीन से पारदर्शी बनाने के बाद, प्लेट को तटस्थ गोंद से सील कर दिया गया और माइक्रोस्कोप के नीचे देखा गया।

2.6.4. अधिवृक्क ग्रंथि में बैक्स, बीसीएल -2, कैस्पेज़ -3, फास, और एफएएसएल प्रोटीन अभिव्यक्ति का इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधलापन

फॉर्मेलिन-फिक्स्ड, पैराफिन-एम्बेडेड चूहे अधिवृक्क अनुभागों को 4 माइक्रोन की मोटाई में काटने के बाद डीपराफिनाइज़ किया गया और पुनर्जलीकरण किया गया। अंतर्जात पेरोक्सीडेज गतिविधि को अवरुद्ध करने के लिए, अनुभागों को 1 0 मिनट के लिए हाइड्रोजन पेरोक्साइड ब्लॉक में पूर्व-इन्क्यूबेट किया गया था। अनुभागों को 0.01 एम साइट्रेट (पीएच 6.0) में डुबोया गया और उबलने तक गर्म किया गया। प्रक्रिया 5-10 मिनट के बाद दोहराई गई। ठंडा होने के बाद, वर्गों को पीबीएस (पीएच 7.2-7.6) से 1-2 बार धोया गया, लगभग 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दिया गया, और पीबीएस (पीएच 7.2-7.6) से 2-3 बार धोया गया। 5% बीएसए अवरोधक समाधान कमरे के तापमान पर जोड़ा गया था, और अनुभाग पर अतिरिक्त तरल 20 मिनट बाद हटा दिया गया था। FasTh FasL, Bcl-2ThBax, और caspase-3 (1:100 पीबीएस के साथ पतला) के लिए विशिष्ट पतला प्राथमिक एंटीबॉडी को जोड़ा गया और रात भर 1 घंटे या 4 डिग्री के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। अनुभागों को पीबीएस (पीएच 7.2-7.6) के साथ 2-3 बार धोया गया। फिर, बायोटिनाइलेटेड बकरी एंटी-माउस आईजीजी जोड़ा गया, और वर्गों को 20 मिनट के लिए 20-37 डिग्री पर सुखाया गया और 5 मिनट के लिए पीबीएस (पीएच 7.2-7.6) से 4 बार धोया गया। पीबीएस में पूरी तरह से धोने के बाद, अनुभागों को 30 मिनट के लिए अभिकर्मकों ए और बी के मिश्रण के साथ इनक्यूबेट किया गया, 45 मिनट के लिए पीबीएस के साथ इनक्यूबेट किया गया, और अंत में हेमेटोक्सिलिन, निर्जलित, के साथ थोड़ा सा प्रतिरंजित होने से पहले 30 मिनट के लिए डीएबी सब्सट्रेट (डीएकेओ) के साथ विकसित किया गया। और स्थापित किया गया।

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2.7. प्रतिरक्षा कार्यों का निर्धारण

2.7.1. प्रतिरक्षा अंग सूचकांक की गणना

अंतिम प्रशासन के एक घंटे बाद, चूहों को यूरेथेन समाधान (20 gTh100 एमएल) के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया गया था, और फिर प्लीहा और थाइमस ग्रंथि को हटा दिया गया था और तुरंत एक बाँझ हुड में वजन किया गया था। प्लीहा या थाइमस का वजन गुणांक (%) - प्लीहा या थाइमस वजन (मिलीग्राम) शरीर का वजन (जी)।

2.7.2. परिधीय रक्त में टी लिम्फोसाइट सबसेट का पता लगाना

स्प्लेनोसाइट्स और हेमोसाइट्स को अंधेरे में 30 मिनट के लिए मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज एंटी-सीडी 4 (पीई) और एंटी-सीडी 8 (एफआईटीसी) के साथ ऊष्मायन किया गया था। 2 एमएल एरिथ्रोसाइट लाइसेट मिलाया गया, और घोल को भंवर द्वारा मिलाया गया। घोल को 10 मिनट के लिए अंधेरे में छोड़ दिया गया और 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला को हटा दिया गया था, और फिर समाधान को बर्फ-ठंडे पीबीएस के साथ 3 बार धोया गया था और पीबीएस पारगम्य समाधान में फिर से निलंबित कर दिया गया था। प्रत्येक मैब धुंधला होने के 1 घंटे के भीतर फ्लो साइटोमेट्री द्वारा कम से कम 10, 000 कोशिकाओं का विश्लेषण किया गया।

2.7.3. सीरम में आईएल -10, आईएल -6, आईएल -2, टीएनएफ-, और आईएफएन-सी के स्तर का निर्धारण

अंतिम प्रशासन के एक घंटे बाद, चूहों को यूरेथेन समाधान (20 gTh100 एमएल) के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया गया, और पेट की महाधमनी से रक्त लिया गया। सीरम प्राप्त करने के लिए रक्त को 15 मिनट के लिए 3500 आर पर सेंट्रीफ्यूज किया गया और -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया। निर्माता के निर्देशों के अनुसार चूहे एलिसा किट के साथ आईएल -10, आईएल -6, आईएल -2, टीएनएफ-, और आईएफएन-सी की सांद्रता का पता लगाया गया।

2.8. हाइपोथैलेमस और हाइपोफिसिस ऊतकों में सीएएम की अभिव्यक्ति

ट्राइज़ोल द्वारा हाइपोथैलेमस और हाइपोफिसिस ऊतकों से कुल आरएनए निकाला गया था। निर्माता के निर्देशों के अनुसार कुल आरएनए के 10 μL पर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया था। प्रारंभिक सक्रियण की शर्तों के तहत विभिन्न जीनों को देखने के लिए डीएसडीएनए-बाइंडिंग डाई (पेमरेगा, यूएसए) और सीएफएक्स 96 रीयल-टाइम पीसीआर सिस्टम (बायो-रेड, यूएसए) की उपस्थिति में क्यूपीसीआर के माध्यम से सीडीएनए की समान मात्रा का विश्लेषण किया गया था। 10 मिनट के लिए 95 डिग्री, 15 सेकंड के लिए 95 डिग्री पर विकृतीकरण के 40 चक्र, और 1 मिनट के लिए 60 डिग्री पर एनीलिंग विस्तार।

सीएएम और -एक्टिन के लिए प्राइमर तालिका 1 में दिए गए हैं, और -एक्टिन का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था। प्रत्येक नमूने को लक्ष्य जीन और -एक्टिन के बीच महत्वपूर्ण थ्रेसहोल्ड (सीटी) में अंतर का उपयोग करके सामान्यीकृत किया गया था। परिणाम का वर्णन करने के लिए निम्नलिखित समीकरण का उपयोग किया गया था: ΔΔCt - (सीटी लक्ष्य जीन - सीटी -एक्टिन जीन) प्रयोगात्मक समूह - (सीटी लक्ष्य जीन - सीटी -एक्टिन जीन) नियंत्रण समूह। फिर प्रत्येक नमूने के एमआरएनए स्तर की तुलना अभिव्यक्ति 2- ΔΔCt लक्ष्य जीन का उपयोग करके की गई। प्रत्येक समूह के परिणाम औसत थे (तालिका 3)।

2.9. सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी डेटा का विश्लेषण एसपीएसएस सॉफ्टवेयर (संस्करण 19.0, एसपीएसएस इंस्टीट्यूट इंक., शिकागो, आईएल) का उपयोग करके किया गया था। समूहों के बीच अंतर का विश्लेषण विचरण (एनोवा) के एक-तरफ़ा दोहराया-माप विश्लेषण के साथ किया गया। परिणाम ग्राफपैड प्रिज्म सॉफ़्टवेयर (संस्करण 6.0, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त किए गए थे। 0.05 से कम पी मान वाले अंतर को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

3. प्रायोगिक परिणाम

3.1. यूपीएलसी-क्यूक्यूक्यू-एमएसएनालिसिस

सर्वोत्तम पृथक्करण, शिखर आकार और लघु विश्लेषण समय प्राप्त करने के लिए, हमारे प्रारंभिक प्रयोग में कॉलम, मोबाइल चरण और ग्रेडिएंट प्रोग्राम सहित क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियों का अध्ययन किया गया था। एमआरएम मोड वाले विशिष्ट क्रोमैटोग्राम चित्र 1 में प्रस्तुत किए गए हैं।

तालिका 4 से, हम देख सकते हैं कि डब्ल्यूसीडी में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड की सामग्री सीडी की तुलना में बढ़ी है, विशेष रूप से इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड के लिए, जबकि डब्ल्यूसीडी में इरिडोइड की सामग्री कम हो गई थी।

3.2. एचपीए एक्सिस फ़ंक्शन के लिए विनियमन

3.2.1. वजन, तापमान और धारण शक्ति परीक्षण

एमसी समूह और प्रायोगिक समूहों के चूहों में कॉर्टिकोस्टेरोन दिए जाने के बाद धीरे-धीरे किडनी-यांग की कमी के लक्षण दिखाई दिए। वजन में कमी, हाइपोथर्मिया, बालों की चमक में कमी, बालों का गिरना, प्रतिक्रिया में देरी और पानी की खपत और गतिविधि में उल्लेखनीय कमी जैसे लक्षणों में सीडी और डब्ल्यूसीडी समूहों में काफी सुधार हुआ। चित्र 2(ए) वजन में परिवर्तन दिखाता है। प्रत्येक दवा समूह का वजन बढ़ गया, विशेषकर सीडीएचडी और डब्ल्यूसीडी-एचडी समूहों में। एमसी समूह में वजन बढ़ना सबसे कम था। चित्र 2(बी) तापमान परिवर्तन दिखाता है, जो एमसी समूह में सबसे कम था, और डब्ल्यूसीडी-एचडी, डब्ल्यूसीडी-एमडी और डब्ल्यूसीडी-एलडी समूहों में तापमान में वृद्धि हुई।

चित्रा 2 (सी) से पता चलता है कि बीसी समूह और प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह के लिए धारण शक्ति में वृद्धि हुई है, और डब्ल्यूसीडी-एमडी समूह उच्चतम था, जिसने दर्शाया कि प्रशासन के बाद किडनी-यांग की कमी से प्रेरित कमजोरी के लक्षणों में सुधार हुआ है।

3.2.2. टी, सीआरएच, एसीटीएच, सीओआरटी और कोर्टिसोल का स्तर

चित्र 3 से पता चलता है कि बीसी समूह की तुलना में, चूहे के सीरम में टी, सीआरएच, एसीटीएच और सीओआरटी का स्तर कम हो गया (पी <0.01) और कोर्टिसोल का स्तर कम हो गया (पी) < 0.05) एमसी समूह में। एमसी समूह की तुलना में, डब्लूसीडी-एचडी और डब्लूसीडी-एमडी समूहों में टी का स्तर बढ़ गया (पी <{16}}.01), डब्लूसीडी-एलडी में सीआरएच का स्तर, डब्ल्यूसीडी-एमडी, और डब्ल्यूसी समूहों में सुधार हुआ (पी <{24}}.01), सीडी-एचडी, डब्ल्यूसीडी-एमडी, और डब्ल्यूसीडी-एचडी समूहों में एसीटीएच की सामग्री में वृद्धि हुई (पी <0.01), सीओआरटी स्तर उन्नत हुआ। सीडी-एमडी, डब्ल्यूसीडी-एमडी, और डब्ल्यूसीडी-एचडी समूह (पी <0.01) और सीडीएचडी और डब्ल्यूसीडी-एलडी समूह (पी <0.05) में वृद्धि हुई, और प्रत्येक दवा समूह में कोर्टिसोल का स्तर बढ़ गया।

3.2.3. सूक्ष्मदर्शी अवलोकन के परिणाम

अधिवृक्क ग्रंथि ऊतक को कॉर्टिकल परत और मेडुला परत में विभाजित किया जा सकता है। कॉर्टिकल परतों में गोलाकार, बंडल और जालीदार परतें शामिल हैं। कोशिकाओं में अधिक लिपिड होते हैं, और मज्जा परत में ज्यादातर फियोक्रोमोसाइटोमा कोशिकाएं और थोड़ी मात्रा में रेशेदार ऊतक होते हैं। जैसा कि चित्र 4 में दिखाया गया है, हमने पाया कि बीसी समूह में सब कुछ सामान्य था, जबकि एमसी समूह में, अधिवृक्क प्रांतस्था में स्पष्ट हाइपरप्लासिया, सेलुलर शोष और बढ़ता घनत्व था। बल्बनुमा पट्टी मोटी हो गई, और पारभासी प्रावरणी क्षेत्र, संकीर्ण ज़ोना रेटिकुलरिस और छोटी कोशिकाओं में असमान रंग और केशिका जमाव दिखाई दिया। पीसी समूह में, कॉर्टिकल और मेडुलर सीमाएँ दिखाई दे रही थीं। गोलाकार और बंडल बैंड की कोशिकाओं को समान रूप से व्यवस्थित किया गया था, और रूपात्मक संरचना को बहाल किया गया था। डब्ल्यूसीडी समूहों में वही बेहतर बहाली देखी गई, और डब्ल्यूसीडी-एमडी समूह में प्रभाव डब्ल्यूसीडी-एचडी और डब्ल्यूसीडी-एलडी समूहों की तुलना में बेहतर थे। सीडी समूहों में अधिवृक्क ग्रंथि की आकृति विज्ञान डब्ल्यूसीडी समूहों जितना अच्छा नहीं था।

यौन क्रिया में सुधार के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%