संवर्धित न्यूरोनल कोशिकाओं में H2O2 / ग्लूटामेट-प्रेरित विषाक्तता के खिलाफ ग्लोचिडियन ज़ेलेनिकम लीफ एक्सट्रैक्ट के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव और कैनोर्हाडाइटिस एलिगेंस में ए-प्रेरित विषाक्तता

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सरल सारांश:एंटीऑक्सिडेंट जो ऑक्सीडेटिव-तनाव-प्रेरित विषाक्तता और न्यूराइट-आउटग्रोथ-उत्प्रेरण गतिविधि पर काबू पाने की प्रक्रिया में परस्पर जुड़े हुए हैं, न्यूरोप्रोटेक्टिव थेरेपी का मुख्य लक्ष्य बन गए हैं। Gloclidion zeylanicum (GZM) का मेथनॉल अर्क न्यूरोप्रोटेक्टिव गुणों को प्रदर्शित करता है जो न केवल H2O2 / ग्लूटामेट / A अपमान के खिलाफ सीमित हैं, बल्कि न्यूराइट की वृद्धि गतिविधि को भी बढ़ावा देते हैं। GZM अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभावों की पुष्टि सुसंस्कृत न्यूरोनल (HT -22 और न्यूरो -2 a) कोशिकाओं और C. एलिगेंस मॉडल में की गई थी। हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, यह अध्ययन GZ M अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभावों के लिए रिपोर्ट करने वाला पहला है, यह सुझाव देता है कि G.zeylanicum अल्जाइमर रोग सहित ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों की रोकथाम और रोकथाम के लिए एक न्यूरोप्रोटेक्टेंट आवेदक हो सकता है। हालांकि, न्यूरोप्रोटेक्शन में शामिल यंत्रवत मार्गों की पहचान करने और अधिक जटिल मॉडल जीवों में अर्क की प्रभावकारिता की पुष्टि करने के लिए अतिरिक्त अध्ययन की आवश्यकता है।

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सार: ऑक्सीडेटिव तनाव उम्र से संबंधित न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के विकास में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। पहले, Glochidion zeylanicum मेथनॉल (GZM) के अर्क में एंटीऑक्सिडेंट और एंटी-एजिंग गुण होने की सूचना मिली है। हालाँकि, न्यूरोप्रोटेक्शन पर GZM के प्रभाव की अभी तक रिपोर्ट नहीं की गई है; इसके अलावा, इसके एंटीऑक्सीडेंट गुणों में शामिल तंत्र अनसुलझा रहता है। अध्ययन का उद्देश्य सुसंस्कृत न्यूरोनल (HT-22 और न्यूरो-2a) कोशिकाओं और Caenorhabditis एलिगेंस मॉडल में GZM अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव गुणों और उनके अंतर्निहित तंत्र को प्रदर्शित करना है। GZM अर्क ने इंट्रासेल्युलर प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) पीढ़ी को दबाने और अंतर्जात एंटीऑक्सिडेंट एंजाइम (एसओडी, जीपीएक्स, और जीएसटी) की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर सुसंस्कृत न्यूरोनल कोशिकाओं में ग्लूटामेट / एच 2 ओ 2- के खिलाफ सुरक्षात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया। GZM अर्क ने SIRT1 / Nrf2 प्रोटीन की अभिव्यक्ति और एंटीऑक्सिडेंट जीन (NQO1, GCLM, और EAAT3) के mRNA प्रतिलेखन को भी ट्रिगर किया, जो ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ सेलुलर रक्षा के मास्टर नियामक हैं।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के फायदे और साइड इफेक्टइसके अतिरिक्त, GZM अर्क ने सी. एलिगेंस में -एमाइलॉइड (ए) -प्रेरित विषाक्तता का प्रतिकार करने के लिए सुरक्षात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया और न्यूरो-2एक कोशिकाओं में न्यूरिटोजेनेसिस गुणों को बढ़ावा दिया।सिस्टैंच स्टेमहमारी टिप्पणियों से पता चलता है कि जीजेडएम लीफ एक्सट्रैक्ट में दिलचस्प न्यूरिटोजेनेसिस और न्यूरोप्रोटेक्टिव क्षमता है और संभवतः ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित अल्जाइमर रोग (एडी) और संबंधित न्यूरोडीजेनेरेटिव स्थितियों के उपचार के लिए संभावित दावेदार के रूप में कार्य कर सकता है; हालाँकि, इसे विवो सिस्टम में अन्य में और अध्ययन करने की आवश्यकता है।

कीवर्ड:ग्लोचिडियन ज़ेलेनिकम; ग्लूटामेट; एनलॉइड- ;H2O2; न्यूराइट का बढ़ना; एनआरएफ2/एसआईआरटी1;एंटीऑक्सीडेंट; कैनोर्हाडाइटिस एलिगेंस;HT22;न्यूरो-2a

1 परिचय

अल्जाइमर रोग (एडी) एक प्रगतिशील तंत्रिका संबंधी बीमारी है, जो रोगियों में संज्ञानात्मक हानि और स्मृति समस्याओं का कारण बनती है [1]। एडी हिस्टोपैथोल-ओजी के विशिष्ट मार्कर हाइपरफॉस्फोराइलेटेड ताऊ प्रोटीन के न्यूरोफिब्रिलरी टेंगल्स (एनएफटी) और मस्तिष्क के ऊतकों में -एमाइलॉइड (ए) सजीले टुकड़े का संचय हैं, जो न्यूरोनल डिसफंक्शन और कोशिका मृत्यु का कारण बनते हैं [1]। ए और ताऊ प्रोटीन का असामान्य संचय न्यूरोप्लास-टिकिटी और न्यूरोडीजेनेरेशन को प्रभावित करता है, जो एडी रोगियों के संज्ञानात्मक लक्षणों के साथ अच्छी तरह से संबंध रखता है [1,2]। सबूत इस बात का समर्थन करते हैं कि ऑक्सीडेटिव तनाव से जुड़े न्यूरोनल सेल क्षति AD [3] के रोगजनन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। ऑक्सीडेटिव तनाव न्यूरोटॉक्सिसिटी के साथ निकटता से जुड़ा हुआ है, विशेष रूप से ए एग्रीगेशन और माइटोकॉन्ड्रियल क्षति को बढ़ावा देकर, जो न्यूरोनल सेल डेथ को ट्रिगर करता है [1]। ग्लूटामेट मुख्य उत्तेजक न्यूरोट्रांसमीटर है जिसे कई न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों [4,5] में न्यूरोनल मौत का एक प्रारंभिक कारक माना गया है। इसके अतिरिक्त, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) संचय का उच्च स्तर ग्लूटामेट [4,6,7] द्वारा न्यूरोनल क्षति से निकटता से संबंधित है, जो रिसेप्टर-मध्यस्थता एक्साइटोटॉक्सिसिटी और गैर-रिसेप्टर-मध्यस्थता ऑक्सीडेटिव विषाक्तता [4,6] के माध्यम से होता है।

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सिस्टैन्च एंटी-एजिंग कर सकता है

उम्र बढ़ने वाली आबादी के बीच एडी का प्रसार बढ़ रहा है [1]। वर्तमान में, AD उपचार के लिए कुछ प्रभावी दवाएं उपलब्ध हैं। हालांकि, एडी के इलाज के लिए इस्तेमाल की जाने वाली दवाएं विभिन्न प्रतिकूल प्रभाव डालती हैं [1,8]। हाल ही में, एडी के वैकल्पिक उपचार और रोकथाम के लिए एंटीऑक्सीडेंट यौगिकों को आवश्यक पूरक माना गया है [9] ऑक्सीडेटिव-तनाव-प्रेरित न्यूरोनल विषाक्तता के खिलाफ रोकथाम न्यूरोप्रोटेक्शन [10] की सहायता में एक महत्वपूर्ण पैरामीटर है। इसलिए, जड़ी-बूटियों या पौधों में शक्तिशाली एंटीऑक्सिडेंट और न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव वाले प्राकृतिक बायोएक्टिव यौगिक एडी और अन्य न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों के उपचार या रोकथाम के लिए पूरक और वैकल्पिक दृष्टिकोण प्रदान कर सकते हैं।

Glochidion zeylanicum(Gaertn.) A.Juss.(फैमिली Phyllanthaceae)(GZ), थाईलैंड सहित पूर्वी एशिया के मूल निवासी, एंटीऑक्सिडेंट यौगिकों का एक समृद्ध स्रोत है।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा अर्कहमारे पिछले अध्ययन में, GZ के पत्तों के अर्क को DAF-16/FoxO और SKN-1/Nrf{{3 के माध्यम से नेमाटोड Caenorhabditis एलिगेंस में ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिरोध को बढ़ावा देने और एंटी-एजिंग प्रभावों को प्रदर्शित करने के लिए दिखाया गया था। }} सिग्नलिंग रास्ते। [11,12]। फिर भी, GZ अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव और न्यूरिटोजेनेसिस गुणों की सूचना नहीं दी गई है।

वर्तमान अध्ययन ने सुसंस्कृत न्यूरोनल (एचटी-22 और न्यूरो-2ए) कोशिकाओं और सी. एलिगेंस मॉडल का उपयोग करके न्यूरोडीजेनेरेटिव घटनाओं पर जीजेड अर्क और इसके अंतर्निहित तंत्र के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभावों का पता लगाया। हमने न्यूराइट के प्रकोप के संदर्भ में जीजेड अर्क के न्यूरिटोजेनेसिस गुणों की भी जांच की। अध्ययन ऑक्सीडेटिव तनाव से जुड़े न्यूरोडीजेनेरेटिव स्थितियों की रोकथाम या उपचार में जीजेड अर्क और इसके अनुप्रयोगों के प्रायोगिक साक्ष्य प्रदान करता है। 2. सामग्री और

तरीकों

2.1.रसायन और अभिकर्मक

अध्ययन में इस्तेमाल किए गए सभी रसायनों और अभिकर्मकों को इनविट्रोजन (कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) और सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदा गया था। सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी (डेनवर, एमए, यूएसए) (सप्लीमेंट्री मैटेरियल्स) से एंटीबॉडी (प्राइ-मैरी और सेकेंडरी दोनों) खरीदे गए।

2.2.संयंत्र निष्कर्षण

दक्षिणी थाईलैंड में जाना जिले, सोंगखला प्रांत से श्रीमती लाओंग क्वुनपेट और श्रीमती कोराकोड चूसरी द्वारा ग्लोचिडियन ज़ेलेनिकम (जीजेड) पत्तियां एकत्र की गईं (7.205278 डिग्री एन, 100.596944 डिग्री ई)। पौधे के नमूने पहचान के लिए कासीन सुवाताब में जमा किए गए थे- हंडू हर्बेरियम, वनस्पति विज्ञान विभाग, विज्ञान संकाय, चुलालोंगकोर्न विश्वविद्यालय, थाईलैंड (वाउचर नमूना संख्या बीसीयू -016061)। सूखे और जमीन के पत्तों (40 ग्राम) को पहले वर्णित [11] के रूप में एक सॉक्सलेट तंत्र का उपयोग करके मेथनॉल (400 एमएल) के साथ निकाला गया था। अर्क को छानकर 35-45 डिग्री पर वाष्पित किया गया। GZ मेथनॉल GZM) अर्क DMSO में तैयार किया गया था और एक स्टॉक के रूप में -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

2.3. गुणात्मक फाइटोकेमिकल स्क्रीनिंग

रासायनिक घटकों (पूरक सामग्री) के विश्लेषण के लिए RSU विज्ञान और प्रौद्योगिकी अनुसंधान उपकरण केंद्र, रंगसिट विश्वविद्यालय, थाईलैंड में GZM अर्क की उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (HPLC) का प्रदर्शन किया गया था।

2.4. सेल संस्कृति

सेल संस्कृतियों को पहले वर्णित [13] के रूप में बनाए रखा गया था। एचटी -22 सेल (साल्क इंस्टीट्यूट, सीए, यूएसए) को डल्बेको के मॉडिफाइड ईगल मीडियम (डीएमईएम) और न्यूरो में संवर्धित किया गया था -2 एक सेल (जेसीआरबी सेल बैंक, ओसाका, जापान) को हैम के पोषक मिश्रण में बनाए रखा गया था। F12, 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम और 1 प्रतिशत स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक। दोनों कोशिकाओं को 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के साथ 37 डिग्री पर विकसित किया गया था।

2.5. कोशिका उपचार

HT-22 और न्यूरो-2का पूर्व-उपचार 48 घंटे के लिए GZM अर्क के विभिन्न सांद्रता (0.5-10 ug/mL) के साथ किया गया था। सेल विषाक्तता उत्प्रेरण के लिए ग्लूटामेट या H2O2 को तब संस्कृति माध्यम में मिलाया गया था। सुरक्षात्मक assays के लिए, अर्क को ग्लूटामेट (HT-22:18h, Neuro-2a:24h) या H2O2(15min) के साथ सह-उपचार किया गया था। DMSO (0.1 प्रतिशत v) ने नियंत्रण समूह के रूप में कार्य किया। DMSO उपचार और अनुपचारित नियंत्रण (चित्र S3, अनुपूरक सामग्री) के बीच कोई महत्व नहीं था।

2.6. सेल व्यवहार्यता का निर्धारण

सेल व्यवहार्यता MTT और LDH assays का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। विवरण पूरक सामग्री में प्रदान किए गए हैं। 2.7. इंट्रासेल्युलर आरओएस का मापन

उपचार पर उत्पन्न इंट्रासेल्युलर आरओएस की माप को डीसीएफएच-डीए डाई के साथ पहले वर्णित [11] के रूप में स्वीकार किया गया था। विवरण पूरक सामग्री में प्रदान किए गए हैं।

2.8.आरएनए अलगाव और मात्रात्मक आरटी-पीसीआर

TRIzol अभिकर्मक के साथ RNA निष्कर्षण किया गया। मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर मानक प्रक्रियाओं [13] का उपयोग करके किया गया था। प्राइमरी सीक्वेंस को सप्लीमेंट्री मैटेरियल में सूचीबद्ध किया गया है। -एक्टिन का उपयोग सामान्यीकरण नियंत्रण [7,13,14] (पूरक सामग्री) के रूप में किया गया था।

2.9.पश्चिमी धब्बा विश्लेषण

प्रोटीज इनहिबिटर कॉकटेल (PMSF) युक्त RIPA बफर का उपयोग करके lysis 1X द्वारा न्यूरो-2एक कोशिकाओं से प्रोटीन प्राप्त किए गए और ब्रैडफोर्ड परख का उपयोग करके मात्रा निर्धारित की गई। संक्षेप में, प्रोटीन को 10 प्रतिशत एसडीएस पॉलीएक्रिलामाइड जेल के माध्यम से इलेक्ट्रोफोर किया गया, इसके बाद पीवीडीएफ झिल्ली में स्थानांतरित किया गया और अवरुद्ध (5 प्रतिशत स्किम दूध) किया गया।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा समीक्षाझिल्लियों को संबंधित एंटीबॉडी (SIRT1, fNrf2, और -actin (पूरक सामग्री) का उपयोग करके इम्युनोब्लॉट विश्लेषण के अधीन किया गया था। धमाकों की पूरी छवियां पूरक सामग्री (चित्रा S2) में प्रदान की जाती हैं।

2.10.न्यूराइट आउटग्रोथ विश्लेषण

GZM अर्क पर न्यूराइट का प्रकोप ईक एट अल के अनुसार किया गया था। न्यूरो में-2एक कोशिकाओं और न्यूराइट-असर कोशिकाओं की संख्या और न्यूराइट लंबाई को मापा गया [15](पूरक सामग्री)।

2.11. सी. एलिगेंस उपभेदों और संस्कृति की स्थिति

अध्ययन में इस्तेमाल किए गए सभी सी. एलिगेंस स्ट्रेन कैनोर्हाडाइटिस जेनेटिक्स सेंटर (यूनिवर्सिटी ऑफ मिनेसोटा, यूएसए) से खरीदे गए थे और खाद्य स्रोत के रूप में एस्चेरिचिया कोलाई ओपी 50 के साथ बनाए रखा गया था। नेमाटोड को एनजीएम अगर प्लेटों में 16 डिग्री पर सुसंस्कृत किया गया था और पहले से वर्णित [7,12] के रूप में सिंक्रनाइज़ आबादी विकसित की गई थी। इस अध्ययन में प्रयुक्त उपभेदों में शामिल हैं CL4176(smg-1(cc546) I;dvls27[(myo-3p:A-Beta(1-42):let-8513'UTR) प्लस रोल-6(su1006)]X),CL2006 (dvls2 [pCL12(unc-54/मानव एबेटा पेप्टाइड 1-42मिनीजीन) प्लस pRF4),CL2355(smg-1( cc546)dvls50[pCL45(snb-1:Abeta1-42:3'UTR(long) plus mtl-2:GFP]I), और CL2122(dvls15[(pPD30.38)unc -54(वेक्टर) प्लस (pCL26)mtl-2:GFP। नेमाटोड को डीएमएसओ (1 प्रतिशत v/v) के साथ GZM अर्क के विभिन्न सांद्रता (1.25,2.5, और 5 ug/mL) के साथ इलाज किया गया था। ) नियंत्रण के रूप में।

2.12.लकवा परख

ट्रांसजेनिक वर्म (CL4176 और CL2006) मानव A को व्यक्त करते हैं 1-42 का उपयोग A विषाक्तता के खिलाफ GZM के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए किया गया था [17]। ट्रांसजेनिक वर्म CL4176 ने मानव A 1-42 पेप्टाइड्स को पेशी कोशिकाओं में 25 डिग्री तापमान में बदलाव के बाद व्यक्त और एकत्रित किया, जिससे ऑक्सीडेटिव तनाव और पक्षाघात हो गया [17]। ट्रांसजेनिक कृमि CL2006 संवैधानिक रूप से A को शरीर की दीवार की मांसपेशियों के साथ व्यक्त करता है जिससे वयस्कता में प्रगतिशील पक्षाघात होता है [17]। ए-निर्भर प्रभावों के लिए, CL802 स्ट्रेन को नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। L4 चरण में कृमियों को सिंक्रनाइज़ किया गया और GZM अर्क के साथ इलाज किया गया।

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CL4176 कीड़े को 48 घंटे के लिए 16 डिग्री पर बनाए रखा गया और A अभिव्यक्ति को प्रेरित करने के लिए 25 डिग्री पर स्थानांतरित कर दिया गया। तापमान में बदलाव के बाद लकवाग्रस्त कृमियों की संख्या 20,22,26,28 और 30 घंटे मापी गई।

CL2006 कीड़े को 16 डिग्री पर बनाए रखा गया था और उन्हें लकवाग्रस्त के रूप में वर्गीकृत किया गया था जब उन्होंने स्पर्श का जवाब नहीं दिया या कीड़े के सिर के चारों ओर प्रभामंडल दिखाई दिया। लकवाग्रस्त कृमियों को वर्गीकृत किया गया और हर दूसरे दिन प्लेटों से बाहर रखा गया।

2.13. केमोटैक्सिस परख

ट्रांसजेनिक स्ट्रेन CL2122 और CL2355 का उपयोग केमोटैक्सिस व्यवहार में ए-प्रेरित दोषों की पहचान के लिए किया गया था। ट्रांसजेनिक वर्म (L4 स्टेज) को GZM अर्क के साथ 36 घंटे के लिए 16 डिग्री पर उपचारित किया गया, और फिर ए 1-42 अभिव्यक्ति को प्रेरित करने के लिए 36 घंटे के लिए 23 डिग्री पर स्थानांतरित कर दिया गया। उपचार की अवधि के बाद, प्लेटों को धोया गया, और नेमाटोड को प्लेट के केंद्र में रखा गया। आकर्षित करने वाले पक्ष में प्लेट पर डायसेटाइल (0.1 प्रतिशत पूर्ण इथेनॉल में) और सोडियम एज़ाइड (1 एम) का मिश्रण होता है। प्लेट के विपरीत भाग (नियंत्रण) में निरपेक्ष इथेनॉल और सोडियम एजाइड (1M) का मिश्रण होता है। आकर्षित करने वाले और विकर्षक पक्षों की ओर खींचे गए कीड़ों की गणना की गई, और केमोटैक्सिस सूचकांक की गणना की गई (आकर्षक स्थान पर कीड़े की संख्या- नियंत्रण स्थान पर कीड़े की संख्या) / कीड़े की कुल संख्या)।

2.14.सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को माध्य ± SEM के रूप में दिखाया गया है। डेटा हैंडलिंग और सांख्यिकीय प्रसंस्करण ग्राफपैड प्रिज्म 8.0 का उपयोग करके पूरा किया गया और एकतरफा एनोवा द्वारा विश्लेषण किया गया, इसके बाद बोनफेरोनी का परीक्षण किया गया। और p 0.05 से कम या उसके बराबर को सार्थक माना गया।

3। परिणाम

3.1. संवर्धित न्यूरॉनल (HT-22 और न्यूरो-2a) कोशिकाओं में इष्टतम ग्लूटामेट और HzO2 स्थितियों का मापन

ऑक्सीडेटिव तनाव से प्रेरित न्यूरोनल सेल क्षति न्यूरोडीजेनेरेटिव स्थितियों [3] में एक प्रमुख घटना है।सिस्टैंच यूकेइष्टतम स्थितियां जिन पर H2O2/ग्लूटामेट HT22 में न्यूरोटॉक्सिसिटी को प्रेरित करता है और न्यूरो-2एक कोशिकाओं की जांच की गई। एचटी-22 और न्यूरो-2एक कोशिकाओं का ग्लूटामेट (2.{7}} मिमी) और एचओओ2 (100 से 400 यूएम) की विभिन्न खुराकों के लिए 1-24एच और {{ के लिए एक्सपोजर 12}} मिनट, क्रमशः। H2O2 उपचार के लिए, हमने पाया कि HT22 और न्यूरो-2एक कोशिकाओं में क्रमशः 15 मिनट के लिए 20 और 400 uMH2O2 के साथ उपचार के बाद अनुपचारित नियंत्रण की तुलना में दोनों कोशिकाओं की सेल व्यवहार्यता 50 प्रतिशत कम हो गई (चित्र ला, बी) )। ग्लूटामेट उपचार के मामले में, सेल व्यवहार्यता में 50 प्रतिशत की कमी क्रमशः एचटी22(18एच) और न्यूरो-2एक कोशिकाओं (24 एच) में 5 और 10 मिमी ग्लूटामेट में प्राप्त की गई थी (चित्रा 1सी,डी) ) इसलिए, इन इष्टतम स्थितियों का उपयोग निम्नलिखित प्रयोगों में किया गया था।

3.2. संवर्धित न्यूरोनल (एचटी-22 और न्यूरो-2ए) कोशिकाओं में एच2ओ2/ग्लूटामेट-प्रेरित न्यूरोनल डेथ के खिलाफ जीजेडएम अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव

दोनों कोशिकाओं में GZM अर्क की साइटोटोक्सिसिटी की जांच गैर-घातक एकाग्रता की जांच करने के लिए की गई थी। GZM अर्क (0.5-10 ug/mL) उपचार HT22 और न्यूरो-2एक कोशिकाओं में 48 घंटे के लिए किया गया था। जब DMSO नियंत्रण के साथ तुलना की जाती है, GZM एक्सट्रेक्ट ट्रीटमेंट 0.5-10 ug/mL） दोनों कोशिकाओं की सेल व्यवहार्यता को प्रभावित नहीं करता है। परिणामों ने संकेत दिया कि GZMextract परीक्षण की गई खुराक (0.5-10 ug/mL) पर गैर-विषाक्त है। इसलिए, इन सांद्रता का उपयोग बाद के प्रयोगों में किया गया था।

H4O2 / ग्लूटामेट के समय और खुराक पर निर्भर प्रतिक्रियाओं ने सुसंस्कृत न्यूरोनल (HT22 और न्यूरो -2 a) कोशिकाओं (चित्रा ला-डी) में न्यूरोटॉक्सिसिटी के प्रयोगात्मक मॉडल का समर्थन और पुष्टि की। सेल अस्तित्व, जब अकेले H2Oz के साथ इलाज किया गया था, DMSO नियंत्रण कोशिकाओं की तुलना में काफी कम (लगभग 50 प्रतिशत) था। हालांकि, GZM . के साथ सह-उपचार

3.2. संवर्धित न्यूरोनल (एचटी-22 और न्यूरो-2ए) कोशिकाओं में एच2ओ2/ग्लूटामेट-प्रेरित न्यूरोनल डेथ के खिलाफ जीजेडएम अर्क के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव

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H4O2 / ग्लूटामेट के समय और खुराक पर निर्भर प्रतिक्रियाओं ने सुसंस्कृत न्यूरोनल (HT22 और न्यूरो -2 a) कोशिकाओं (चित्र भूमि) में न्यूरोटॉक्सिसिटी के प्रयोगात्मक मॉडल का समर्थन और पुष्टि की। सेल अस्तित्व, जब अकेले H2Oz के साथ इलाज किया गया था, DMSO नियंत्रण कोशिकाओं की तुलना में काफी कम (लगभग 50 प्रतिशत) था। हालांकि, GZM के साथ सह-उपचार इसी तरह, GZM अर्क के साथ सह-उपचार ने ग्लूटामेट-उपचारित कोशिकाओं (चित्र 3a-c, f) की तुलना में सेल व्यवहार्यता में काफी सुधार किया। इसके अलावा, ग्लूटामेट-प्रेरित एलडीएच रिलीज को जीजेडएम उपचार (चित्रा 3सी, डी) द्वारा भी देखा गया था। परिणाम बताते हैं कि GZM अर्क ने H2O2 / ग्लूटामेट-प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी के खिलाफ एक प्रभावशाली न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव डाला।

यह लेख जीव विज्ञान 2021, 10, 800 से निकाला गया है। https://doi.org/10.3390/biology10080800 https://www.mdpi.com/journal/biology