कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन के लिए शराब की भठ्ठी के उप-उत्पादों से नई एंटीऑक्सीडेंट सामग्री

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सार:इस काम का उद्देश्य विभिन्न प्रकार के दस्तकारी बियर (अहंकार, ऑल्टर, आईएफिएट लक्स, ट्रिपलो माल्टो, यूबी, और मायर) की कुल फिनोल सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन करना था, साथ ही साथ प्रारंभिक सामग्री (माल्ट, हॉप्स, और यीस्ट), मध्यवर्ती उत्पाद, और अपशिष्ट उत्पाद (खर्च किए गए माल्ट, हॉप्स और यीस्ट) को नवीन कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन में उनके उपयोग को देखते हुए। शुरू और खर्च किए गए नमूनों से अर्क पानी या 70 डिग्री अल्कोहल से लिया गया था। सभी ब्रूइंग उत्पादों की कुल फिनोल सामग्री (फोलिन सिओकाल्ट्यू निबंध) जांच के तहत विशिष्ट उत्पाद पर निर्भर करती है। उच्चतम मूल्य शुरुआती हॉप्स (लगभग 93 से 155 मिलीग्राम जीएई / जी तक, निष्कर्षण विलायक के अनुसार), माल्ट शुरू करने और खमीर शुरू करने में मध्यवर्ती, और पौधा में सबसे कम मूल्यों में पाए गए। अंतिम बियर में कुल फिनोल सामग्री फिनोल से उत्पन्न होती है जो विभिन्न अवयवों से निकाले गए थे, अर्थात् शुरुआती माल्ट, हॉप्स और यीस्ट, लेकिन गैर-नगण्य मूल्य अभी भी खर्च किए गए उत्पादों में देखे गए थे। एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल की जाने वाली विधि, ट्रॉलॉक्स समकक्ष एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (एलपीपीएच), फेरिक-आयन कम करने वाले एंटीऑक्सीडेंट पैरामीटर (एफआरएपी), और कट्टरपंथी कटियन मैला ढोने की गतिविधि और कम करने की शक्ति (एबीटीएस) ने परिणामों को दृढ़ता से प्रभावित किया। सामान्य तौर पर, परिणाम कुल फिनोल सामग्री के लिए देखी गई प्रवृत्ति को दर्शाते हैं: बीयर उत्तरोत्तर सभी प्रारंभिक अवयवों से उत्पन्न होने वाले फिनोल द्वारा समृद्ध होते हैं, और यह कि खर्च किए गए उत्पादों में अभी भी गैर-नगण्य एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि होती है।सिस्टैंच कोलेस्ट्रॉलयह ध्यान रखना दिलचस्प है कि अपशिष्ट खमीर अक्सर प्रारंभिक सामग्री की तुलना में उच्च मूल्य दिखाता है; यह अनुमान लगाया जा सकता है कि शराब बनाने के दौरान खमीर बीयर से फिनोल को अवशोषित करने में सक्षम होता है। प्रसंस्करण खाद्य पदार्थों से प्राप्त कचरे के दोहन में रुचि पर विचार करते हुए, केराटिनोसाइट्स (माल्ट, हॉप और खमीर के खर्च किए गए उत्पाद) की सेल संस्कृति पर अपशिष्ट अल्टर ब्रूवरी उत्पादों की जैविक गतिविधि का मूल्यांकन किया गया है। केराटिनोसाइट एचसीएटी कोशिकाओं में प्रारंभिक इन विट्रो assays खर्च किए गए अर्क की संभावित जैव-सक्रियता का आकलन करने के लिए किए गए थे। खर्च किए गए अर्क के बीच, खर्च किए गए हॉप और खमीर के अर्क ने माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि में सुधार करने और एचसीएटी कोशिकाओं में ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकने की क्षमता दिखाई, त्वचा की उम्र बढ़ने में दो विशेषताएं, निष्कर्ष में, यह अध्ययन इस बात का सबूत देता है कि दस्तकारी बियर से अपशिष्ट एक दिलचस्प स्रोत हो सकता है। त्वचा विरोधी उम्र बढ़ने वाले सौंदर्य प्रसाधनों की तैयारी के लिए फिनोल।

कीवर्ड:व्यापार शराब; शराब बनाने वाले उत्पाद; कुल फिनोल सामग्री; प्रतिउपचारक गतिविधि; साइटोटोक्सिसिटी; विरोधी उम्र बढ़ने;

1 परिचय

क्राफ्टबीयर अमेरिका और यूरोप [1,2] में तेजी से लोकप्रिय हो गया है, जिसका अर्थव्यवस्था पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ा है [3]। इस सफलता को विभिन्न स्वादों और सुगंधों के साथ नए बियर का स्वाद लेने में उपभोक्ताओं की दिलचस्पी [2] और मध्यम बियर खपत [4] के स्वास्थ्य लाभों पर ध्यान दिया गया है।

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वाणिज्यिक बियर के विपरीत, क्राफ्ट बियर गैर-फ़िल्टर्ड और अनपश्चुराइज़्ड होते हैं, और इस प्रकार उनकी संवेदी विशेषताएं ब्रूइंग प्रक्रिया द्वारा अपरिवर्तित रहती हैं। इसके अलावा, स्वास्थ्य के लिए फायदेमंद पदार्थ, जैसे कि एंटीऑक्सिडेंट, को भी बख्शा जा सकता है।

वाणिज्यिक बियर और उनके अपशिष्ट उत्पादों का मूल्यांकन उनके एंटीऑक्सीडेंट गुणों के लिए पहले ही किया जा चुका है। झाओ एट अल। [5] 34 वाणिज्यिक बियर के फिनोल प्रोफाइल और संबंधित एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों को निर्धारित किया और कुल और व्यक्तिगत फेनोलिक सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि में उल्लेखनीय अंतर पाया। सबसे प्रचुर मात्रा में फेनोलिक यौगिक गैलिक और फेरुलिक एसिड थे। इसी अवधि में, रिबेरो ताफुलो एट अल। [6] कई स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधियों का उपयोग करते हुए, 27 अन्य वाणिज्यिक बियर की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को निर्धारित किया। उसी वर्ष, पियाज़ोन एट अल।, 2010 [7] ने विभिन्न प्रकार के वाणिज्यिक बियर (अभय, एले, बॉक, गेहूं, लेगर, पिल्सनर, और डील्कोहोलाइज्ड) की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और फेनोलिक सामग्री का मूल्यांकन किया, और उनमें बहुत विविधता पाई। होममेड बियर पर एक अध्ययन में, फ़ार्कास एट अल। [8] कच्चे माल (माल्ट और हॉप) से शुरू होकर और बरामद कचरे के साथ समाप्त होने पर, पूरी उत्पादन प्रक्रिया के दौरान कुल पॉलीफेनोल सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का निर्धारण किया। उन्होंने दिखाया कि कच्चे माल में एक प्रारंभिक उच्च कुल पॉलीफेनोल सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि माल्ट की उपस्थिति के कारण थी और बीयर के पास जाने पर कुल पॉलीफेनॉल सामग्री में जोरदार कमी आई और अंतिम बियर उत्पाद और खर्च किए गए माल्ट में माल्ट खर्च किया गया। खमीर का विश्लेषण नहीं किया गया था।

सिस्टैन्च एंटी-एजिंग कर सकता है

तथ्य यह है कि माल्ट से प्राप्त एंटीऑक्सीडेंट यौगिकों को झाओ और सहकर्मियों [9] द्वारा सिद्ध किया गया था, जिन्होंने जौ की कई किस्मों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और कुल फिनोल सामग्री को दिखाया था। अन्य लेखकों ने इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण हाइब्रिड रैखिक आयन-ट्रैप क्वाड्रुपोल ऑर्बिट्रैप मास स्पेक्ट्रोमेट्री तकनीक [10] के साथ मिलकर तरल क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करते हुए, चार प्रकार के वाणिज्यिक बियर से सैंतालीस फिनोल यौगिकों की पहचान की। हाल ही में, शिल्प बियर में कम आणविक-वजन वाले फेनोलिक और नाइट्रोजन यौगिकों की पहचान HPLC-ESI-MS/MS विश्लेषण [11] द्वारा प्राप्त की गई थी। लेखकों ने फेनोलिक और नाइट्रोजन यौगिकों के अनुसार बीयर के प्रकारों, जैसे आईपीए, लेगर और वीस में अंतर करने की कोशिश की, लेकिन विभिन्न बीयर प्रकारों के बीच इन यौगिकों में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया।

हाल ही में [12], 20 फेनोलिक यौगिकों, उदाहरण के लिए, गैलिक एसिड, कैटेचिन, कैफिक एसिड, क्वेरसेटिन, ज़ैंथोहुमोल, और ह्यूमुलोन, को विभिन्न शिल्प बियर, वार्ट्स, ब्रूइंग स्टार्टिंग सामग्री (जौ माल्ट, हॉप, और यीस्ट) में चुना और मात्राबद्ध किया गया था। ) और उप-उत्पाद (जौ की भूसी, खर्च किया हुआ हॉप, और खर्च किया हुआ खमीर)। इस अध्ययन से, यह पाया गया कि सभी नमूनों में महत्वपूर्ण अंतर मौजूद थे और बीयर की संरचना प्राप्ति और पकाने की प्रक्रिया पर निर्भर करती है। बियर के फेनोलिक यौगिक मुख्य रूप से जौ माल्ट से उत्पन्न हुए, और दिलचस्प बात यह है कि खमीर अन्य स्रोतों से फेनोलिक यौगिकों को अवशोषित करने में सक्षम था।

इस प्रकार, बियर उत्पादन से अपशिष्ट उत्पादों में एंटीऑक्सीडेंट का मूल्यांकन बहुत महत्वपूर्ण हो सकता है यदि कोई दुनिया भर में शिल्प बियर बाजार के तेजी से विकास पर विचार करता है।

सौंदर्य प्रसाधन और/या पूरक जैसे स्वास्थ्य उत्पादों को विकसित करने के लिए शराब की भठ्ठी के उप-उत्पादों का दोहन बीयर उत्पादन की स्थिरता को बढ़ाने में मदद करेगा। इस अध्ययन के कई उद्देश्य हैं: विभिन्न प्रकार के इतालवी शिल्प बियर (लेगर, एम्बर, ट्रिपल माल्ट, रेड और ब्लैक) की कुल फिनोल सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन करें, और उनके उत्पादन के मध्यवर्ती, साथ ही साथ उनके अपशिष्ट उत्पादों का मूल्यांकन करें। इस प्रकार ऑल्टर ब्रेवरी से अपशिष्ट अर्क की जैविक गतिविधि का मूल्यांकन मानव केराटिनोसाइट्स पर किया गया था। यह coSmetic योगों के लिए शराब की भठ्ठी के उप-उत्पादों से नई सामग्री का दोहन करने के लिए नए और दिलचस्प अवसर खोलता है।

2। प्रायोगिक

2.1. सामग्री

11-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH),2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ), (±)-6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchromane-2-carboxylic acid (TROLOX), 2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt(98%TLC)(ABTS), gallic acid, sodium carbonate monohydrate ACS reagent, sodium acetate and ethanol(ethanol absolute grade) were purchased from Sigma-Aldrich(Steinheim, Germany). Manganese (IV)oxidize activated(>90 प्रतिशत) और फोलिन-सियोकाल्टू के फिनोल अभिकर्मक को फ्लुका (बुच्स, स्विटजरलैंड) से खरीदा गया था। निर्जल सोडियम एसीटेट और निर्जल लोहा (III) क्लोराइड जेटी बेकर (सेंटर वैली, पीए, यूएसए) से खरीदा गया था और निर्जल सोडियम कार्बोनेट कार्लो एर्बा (मिलान, इटली) से खरीदा गया था। सभी सॉल्वैंट्स और अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे। अल्ट्राप्योर पानी का उत्पादन ग्रेडिएंट मिलि-क्यू (मिलिपोर, मोल्सहाइम, फ्रांस) द्वारा किया गया था। प्रारंभिक सामग्री, हस्तशिल्प बियर, वार्ट्स, और उनके अपशिष्ट उत्पादों की आपूर्ति बिर्रिफिसियो कोलेसी (अपेचियो, इटली) द्वारा की गई थी।

वर्तमान अध्ययन में जांच की गई बियर की विस्तृत विशेषताओं को तालिका 1 में प्रदान किया गया है। माल्ट और हॉप्स के प्रकार ने सभी बियर के बीच मुख्य अंतर को निर्धारित किया। पांच अलग-अलग शुरुआती माल्ट का इस्तेमाल अक्सर मिक्स में और अलग-अलग अनुपात में किया जा सकता है। पेर्ले और साज़ हॉप्स का इस्तेमाल अलग-अलग अनुपात में उनकी अलग-अलग सुगंध के लिए किया जाता है। एक ही खमीर, Saccharomyces Cerevisiae, सभी बियर के लिए इस्तेमाल किया गया था, जो सभी उच्च-किण्वन प्रकार थे। विभिन्न संयोजनों से विभिन्न प्रकार के बियर (लेगर, एम्बर, ट्रिपल माल्ट, रेड और ब्लैक) निकलते हैं, जिनमें अल्कोहल की मात्रा 6.0 से लेकर 9.0 प्रतिशत V/V तक होती है।

2.2. नमूना तैयार करना

विश्लेषण से पहले, प्रारंभिक सामग्री (माल्ट, हॉप्स, और यीस्ट), बियर, वार्ट्स, और अपशिष्ट (खर्च किए गए माल्ट, हॉप, और यीस्ट) को उनकी भौतिक स्थिति के अनुसार विभिन्न प्रक्रियाओं के अधीन किया गया था, जिन्हें ठोस, आर्द्र सुखाया जा सकता था। ठोस, या अशांत तरल (तालिका 2)।

नम ठोस और तरल पदार्थ पहले {{0}} डिग्री के तापमान और 0.03 बार (फ्रीज़ोन 1 लीटर बेंचटॉप सीरीज 77400 फ्रीज-ड्रायर, LABCONCO, कैनसन सिटी, एमओ, यूएसए) के दबाव के अधीन थे। सूखे ठोस पदार्थों को कटर मिलर में मिलिंग के अधीन किया गया था। इसके बाद, सभी नमूनों को निष्कर्षण के अधीन किया गया। एक नमूना राशि को सावधानी से तौला गया और 100 एमएल विलायक (पानी या 70 डिग्री इथेनॉल) में फैलाया गया। परिणामी तरल को एर्लेनमेयर फ्लास्क में रखा गया था, जिसे तब सावधानी से बंद कर दिया गया था। कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए नमूनों को चुंबकीय रूप से उभारा गया, फिर अघुलनशील कणों (Zetalab CNZ -140 HE, Padova, इटली) को हटाने के लिए 10 मिनट के लिए 20 डिग्री पर 12, 000 rpm पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। इष्टतम भंडारण की स्थिति सुनिश्चित करने के लिए नमूनों को एक स्क्रू कैप (बीडी फाल्कन टीएम, बीडी बायोसाइंसेज, बेडफोर्ड, एमए, यूएसए) के साथ 50 एमएल पॉलीइथाइलीन शीशियों में -20 डिग्री पर lyophilized और संग्रहीत किया गया था।

2.3. कुल फिनोल सामग्री निर्धारण

नमूनों की कुल फिनोल सामग्री (टीपीसी) कुछ संशोधनों [14] के साथ फोलिन-सियोकाल्टू स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि [13] के अनुसार निर्धारित की गई थी। संक्षेप में, सभी फ्रीज-सूखे उत्पादों का उपयोग 10 मिलीग्राम एमएल -1 की एकाग्रता में लिम्पिड समाधान तैयार करने के लिए किया गया था। इस घोल का एक 50 μL विभाज्य फॉलिन-सियोकाल्टु के फिनोल अभिकर्मक के 150 μL में जोड़ा गया, पानी के साथ 1:4 पतला। फिर, Na, CO3 संतृप्त घोल का 50 uL जोड़ा गया। 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के बाद, प्रत्येक कुएं का अवशोषण एक माइक्रोप्लेट रीडर (FLUOstar Omega, BMG Labtech GmbH, Ortenberg, Germany) का उपयोग करके 765 एनएम पर निर्धारित किया गया था। माप की तुलना गैलिक एसिड (जीए) के अंशांकन मानक समाधान से की गई थी, और परिणाम गैलिक एसिड समकक्ष (जीएई) प्रति ग्राम उप-उत्पाद (मिलीग्राम जीएई / जी) के मिलीग्राम के रूप में व्यक्त किए गए थे।

2.4. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन

क्राफ्ट बियर और उप-उत्पादों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन 11-डिफेनिल-2-पिक्रिलहाइड्राज़िल (डीपीपीएच")रेडिकल मैला ढोने की गतिविधि, 2,2'-एज़िनो-बीआईएस(3- को मापकर किया गया था। एथिलबेन्जोथियाजोलिन -6-सल्फोनिक एसिड) (ABTS*) रेडिकल कटियन मैला ढोने की क्षमता, और फेरिक-रिड्यूसिंग एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (FRAP)।सिस्टैंच खुराक redditट्रोलॉक्स(6-हाइड्रॉक्सी-2,5,7,8-टेट्रामेथिलक्रोमैन-2-कार्बोक्जिलिक एसिड) का उपयोग अंशांकन मानक के रूप में किया गया था। मूल्यों को IC50 के एक समारोह के रूप में नमूने के mmol Trolox समकक्ष / g के रूप में व्यक्त किया गया था, जिसे प्रारंभिक DPPH, ABTS या लोहे की एकाग्रता में 50 प्रतिशत की कमी के कारण आवश्यक परीक्षण सामग्री की एकाग्रता के रूप में परिभाषित किया गया था।

2.5. ट्रोलॉक्स समतुल्य एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (DPPH) का मूल्यांकन

DPPH मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि का मूल्यांकन एक माइक्रोप्लेट विश्लेषणात्मक परख के माध्यम से पहले प्रकाशित विधियों [15] के अनुसार कुछ संशोधनों [16] के साथ किया गया था। संक्षेप में, नमूना का एक 50 μL विभाज्य 10 मिलीग्राम एमएल-' की एकाग्रता और मानक को एक 96-अच्छी तरह से माइक्रोटाइटर प्लेट （बीडी फाल्कनटीएम）में निरपेक्ष इथेनॉल में DPPH के 150 μL में जोड़ा गया था）37 पर ऊष्मायन के बाद 20 मिनट के लिए डिग्री, माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके प्रत्येक कुएं का अवशोषण 517 एनएम पर निर्धारित किया गया था। एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि की गणना और समीकरण (1) [17] के अनुसार ट्रॉलॉक्स राशि के मुकाबले व्यक्त की गई थी, जहां एजी और ए क्रमशः नियंत्रण नमूने और निकालने के नमूनों की उपस्थिति में 517 एनएम पर डीपीपीएच● कट्टरपंथी समाधान के अवशोषण हैं।

2.6. रेडिकल कटियन मैला ढोने की गतिविधि और कम करने की शक्ति (ABTS)

ABTS परख पिछली प्रक्रियाओं [18] के बाद किया गया था और एक 96-अच्छी तरह से माइक्रोलिटर प्लेट परख पर लागू किया गया था। ABTS* प्लस विलयन (5 mM) ABTS को MnO के साथ, पानी में 30 मिनट के लिए अंधेरे में ऑक्सीकरण करके तैयार किया गया था। नमूना और मानक Trolox） के विभिन्न सांद्रता के एक 50 μL विभाज्य को ABTS* समाधान के 150 μL में 96-अच्छी तरह से माइक्रोटाइटर प्लेट (BD FalconTM) में जोड़ा गया था।सिस्टैंच का अर्क लाभ10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के बाद, प्रत्येक कुएं का अवशोषण एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके 734 एनएम पर निर्धारित किया गया था। समीकरण (2) [17] के अनुसार मूल्यों की गणना और ट्रॉलॉक्स राशि बनाम व्यक्त की गई थी, जहां एजी और ए क्रमशः नियंत्रण नमूने और निकालने के नमूनों की उपस्थिति में 734 एनएम पर ओएचई कट्टरपंथी समाधान के अवशोषण हैं।

2.7. फेरिक-लॉन्ग-रिड्यूसिंग एंटीऑक्सीडेंट पैरामीटर (FRAP)

शिल्प बियर/उप-उत्पादों के FRAP मूल्यों को कुछ संशोधनों [20] के साथ पहले प्रकाशित विधि [19] के अनुसार निर्धारित किया गया था। FRAP अभिकर्मक निम्नलिखित तीन समाधानों को मिलाकर तैयार किया गया था:

1. 50mL0.3M एसीटेट बफर pH3.6(1.23g सोडियम एसीटेट 50 mL जल अम्लीकरण में

एसिटिक एसिड के साथ);

2. 40 एमएम एचसीएल में 5एमएमटीपीटीजेड(2,4,6-ट्रिपाइरिडाइल-एस-ट्रायज़िन)(15.6एमजी) का 5एमएलओफ़स्टॉक समाधान;3। 40 एमएम एचसीएल में 5 एमएम FeCl3:6 एच2ओ (16.2 मिलीग्राम) का 5 एमएल।

FRAP अभिकर्मक का उपयोग करने से पहले 37 डिग्री सेल्सियस पर गरम किया गया था। एक 25 μL नमूने के विभाज्य (10 मिलीग्राम एमएल -1 की एकाग्रता पर समाधान) को एक 96-वेल प्लेट BD Falcone） के कुओं में तीन प्रतियों में जोड़ा गया था। प्रत्येक कुएं में 175 μL FRAP अभिकर्मक जोड़कर परख शुरू की गई थी। प्लेट को तुरंत 30 के लिए फ्लुओस्टार ओमेगा प्लेट रीडर में हिलाया गया और प्रतिक्रिया को 10 मिनट तक चलने दिया गया जिसके बाद प्लेट को प्लेट रीडर (593 एनएम) पर पढ़ा गया। ट्रॉलॉक्स का एक संदर्भ समाधान एक साथ चलाया गया था और रैखिक प्रतिगमन द्वारा अंशांकन वक्र उत्पन्न करने के लिए उपयोग किया जाता था। मानक वक्र 25 और 800μM Trolox（TE） के बीच रैखिक था। परिणाम μM Trolox समकक्ष TE） gI नमूने में व्यक्त किए गए थे।

2.8. कोशिका संवर्धन

मानव केराटिनोसाइट सेल लाइन, HaCaT, को नियमित रूप से Dulbecco के संशोधित ईगल मीडियम (DMEM) में उगाया गया था, जो 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), 2 mM L-glutamine, 50 U/mL पेनिसिलिन, और 50ug/mL स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ 37 डिग्री पर पूरक था। 5 प्रतिशत सीओ के साथ एक आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर। साइटोटोक्सिसिटी, माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि और इंट्रासेल्युलर आरओएस गठन का मूल्यांकन करने के लिए, एचसीएटी कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में 2 × 10 * कोशिकाओं / कुओं में रखा गया था। 5 प्रतिशत सीओ में 37 डिग्री पर ऊष्मायन के 24 घंटे के बाद सभी प्रयोग किए गए। HaCaT कोशिकाओं के प्रयोगों के लिए, खर्च किए गए अर्क के स्टॉक समाधान 60 मिलीग्राम/एमएल पर पानी में तैयार किए गए थे। खर्च किए गए अर्क की वांछित सांद्रता प्राप्त करने के लिए स्टॉक समाधानों को तब एक पूर्ण माध्यम में पतला किया गया था।

2.9. साइटोटोक्सिसिटी और माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि

सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन {{{10}}}}(4,5-डाइमिथाइल-2-थियाज़ोलिल)-2,5-डाइफिनाइल की कमी से किया गया था। -2H-tetrazolium bromide(MTT) को इसके अघुलनशील फॉर्मेज़ान में, जैसा कि पहले वर्णित 21]। संक्षेप में, एचसीएटी कोशिकाओं को 5 प्रतिशत सीओ में 37 डिग्री पर अर्क (0.{11}} मिलीग्राम/एमएल) की विभिन्न सांद्रता के साथ 24 घंटे के लिए इलाज किया गया था। इसके बाद, हांक के संतुलित नमक समाधान में एमटीटी के साथ उपचार माध्यम को बदल दिया गया था ( HBSS) (0.5 mg/mL) 5 प्रतिशत CO में 37 डिग्री पर 2 घंटे के लिए। HBSS से धोने के बाद, isopropanol में फॉर्मेज़ान क्रिस्टल भंग कर दिए गए थे। मल्टी-लेबल प्लेट रीडर VICTORTM X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) का उपयोग करके फॉर्मेज़न के स्तर (570 एनएम, संदर्भ फ़िल्टर 690 एनएम) को मापा गया। सेल व्यवहार्यता को नियंत्रण कोशिकाओं के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था।

माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि एमटीटी द्वारा निर्धारित की गई थी, जैसा कि पहले वर्णित है, मामूली संशोधनों के साथ [22]।सिस्टैंच डेजर्टिकोला साइड इफेक्टसंक्षेप में, HaCaT कोशिकाओं को 4 घंटे के लिए DMEM 1 0 प्रतिशत FBS (पोषक तत्व माध्यम) या Dulbecco के फॉस्फेट-बफर खारा (पोषक तत्वों के बिना खारा समाधान) के साथ इलाज किया गया था, जिसमें 5 में 37 डिग्री पर 0.03 मिलीग्राम / एमएल अर्क की उपस्थिति थी। प्रतिशत सीओ। इसके बाद, उपचार को एमटीटी के साथ 2 घंटे के लिए 37 डिग्री पर 5% सीओ 2 में बदल दिया गया था। HBSS से धोने के बाद, फॉर्मेज़ान क्रिस्टल को आइसोप्रोपेनॉल में भंग कर दिया गया था। माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि के साथ सहसंबद्ध फॉर्मेज़न के स्तर को मल्टीलेबल प्लेट रीडर VICTORTM X3 (PerkinElmer) का उपयोग करके मापा गया (570 एनएम, संदर्भ फ़िल्टर 690 एनएम)। माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि को नियंत्रण कोशिकाओं के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था।

2.10. इंट्रासेल्युलर आरओएस गठन

प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के गठन का मूल्यांकन फ्लोरोसेंट जांच 2'-7'डाइक्लोरोडिहाइड्रोफ्लोरेसिन डायसेटेट (H2DCF-DA) द्वारा किया गया था, जैसा कि पहले वर्णित [23] (HaCaT कोशिकाओं को 2 घंटे के लिए 0 के साथ इलाज किया गया था।{ {23}}37Cin 5 प्रतिशत CO2 पर 3 मिलीग्राम/एमएल का अर्क। इसके बाद, उपचार माध्यम को हटा दिया गया और प्रत्येक कुएं में 100 μL H2DCF-DA（10ug/mL） जोड़ा गया। कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के 30 मिनट के बाद, H2DCF-DA समाधान को 30 मिनट के लिए H2O2（100 μM） के समाधान के साथ बदल दिया गया था। HaCaT कोशिकाओं के समानांतर सेट को H2O के साथ इलाज किया गया था, और 30 मिनट के लिए 0.03 मिलीग्राम / एमएल अर्क।सिस्टांचे चंगेज खानROS गठन को मल्टीलेबल प्लेट रीडर VICTORTM X3 (PerkinElmer) का उपयोग करके प्रतिदीप्ति की मनमानी इकाइयों, AUF (485 एनएम पर उत्तेजना और 535 एनएम पर उत्सर्जन) के संदर्भ में मापा गया था। डेटा को आरओएस गठन बनाम अनुपचारित कोशिकाओं (यानी, अनुपचारित कोशिकाओं के एच, ओ, / एयूएफ के साथ इलाज किए गए कोशिकाओं के एयूएफ) में गुना वृद्धि के रूप में व्यक्त किया जाता है।

यह लेख कॉस्मेटिक्स 2021, 8, 96 से निकाला गया है। https://doi.org/10.3390/cosmetics8040096 https://www.mdpi.com/journal/cosmetics