भाग 1 Echinacoside NO-cGMP-PKG-BKCa चैनल खोलकर और इंट्रासेल्युलर Ca2 प्लस स्तर को कम करके चूहा पल्मोनरी धमनी वासोरेलेक्सेशन को प्रेरित करता है

इचिनाकोसाइड शिरापरक विश्राम को कैसे प्रेरित करता है?

जियांग-यूं GAI1, 2, 3, यू-है WEI4, वेई ZHANG2, ता-ना WUREN2, हां-पिंग WANG2, Zhan-Qiang LI2, Shou LIU2, Lan MA2, Dian-Xiang LU2, Yi ZHOU1, 2, री- ली जीई1, 2, * 1 फार्माकोलॉजी विभाग, स्कूल ऑफ लाइफ साइंस एंड बायोफर्मासिटिक्स, शेनयांग फार्मास्युटिकल यूनिवर्सिटी, शेनयांग 110016, चीन; 2 हाई एल्टीट्यूड मेडिसिन के लिए अनुसंधान केंद्र, किंघई विश्वविद्यालय का मेडिकल कॉलेज, ज़िनिंग 810001, चीन; 3 स्कूल ऑफ फार्मेसी, किंघई यूनिवर्सिटी फॉर नेशनलिटीज, ज़िनिंग 810007, चीन; 4 किंघई प्रवेश-निकास निरीक्षण और संगरोध ब्यूरो, Xining 810001, चीन

उद्देश्य:उच्च ऊंचाई पर अनुभव के रूप में निरंतर फुफ्फुसीय वाहिकासंकीर्णन से फुफ्फुसीय उच्च रक्तचाप (पीएच) हो सकता है। इस अध्ययन का मुख्य उद्देश्य के vasorelaxant प्रभाव की जांच करना हैइचिनाकोसाइड(ईसीएच), तिब्बती जड़ी बूटी लैगोटिस ब्रेविटुबा मैक्सिम से एक फेनिलएथेनॉयड ग्लाइकोसाइड औरसिस्टैंच ट्यूबुलोसाफुफ्फुसीय धमनी और इसके संभावित तंत्र पर।

तरीके:नर विस्टार चूहों से प्राप्त फुफ्फुसीय धमनी के छल्ले को क्रेब्स-हेन्सेलिट समाधान से भरे अंग कक्षों में निलंबित कर दिया गया था, और एक बल ट्रांसड्यूसर का उपयोग करके आइसोमेट्रिक तनाव को मापा गया था। इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस स्तर को सुसंस्कृत चूहे फुफ्फुसीय धमनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं (पीएएसएमसी) में फ्लुओ 4- एएम का उपयोग करके मापा गया था।

परिणाम: ईसीएच(30-300 μmol/L) आराम से चूहा फुफ्फुसीय धमनियों को नॉरएड्रेनालाईन (एनई) द्वारा एक एकाग्रता-निर्भर तरीके से पूर्व-संकुचित किया जाता है, और यह प्रभाव बरकरार एंडोथेलियम और एंडोथेलियम-अस्वीकृत रिंगों दोनों में देखा जा सकता है, लेकिन काफी कम अधिकतम प्रतिक्रिया के साथ और ए एंडोथेलियम-अस्वीकृत रिंगों में उच्च EC50। इस प्रभाव को L-NAME, TEA और BaCl2 द्वारा महत्वपूर्ण रूप से अवरुद्ध किया गया था। हालाँकि, IMT, 4-AP, और Gli ने बाधित नहीं कियाईसीएच-प्रेरित विश्राम। बाह्य सीए2 प्लस-मुक्त स्थितियों के तहत, अधिकतम संकुचन क्रमशः 24.54 प्रतिशत ± 2.97 प्रतिशत और 10.60 प्रतिशत ± 2.07 प्रतिशत ईसीएच के 100 और 300 μmol / L के साथ इलाज किए गए छल्ले में कम हो गया था। बाह्य कैल्शियम प्रवाह की स्थिति के तहत, अधिकतम संकुचन क्रमशः 30, 100, और 300 μmol / L ECH के साथ इलाज किए गए छल्ले में 112.42 प्रतिशत ± 7.30 प्रतिशत, 100.29 प्रतिशत ± 8.66 प्रतिशत, और 74.74 प्रतिशत ± 4.95 प्रतिशत तक कम हो गया था। कोशिकाओं को फ्लुओ 4- AM से लोड किए जाने के बाद, से उपचारित कोशिकाओं में माध्य प्रतिदीप्ति तीव्रता कम थीईसीएच(100 μmol/L) NE की तुलना में।

निष्कर्ष: ईसीएचइंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस स्तरों को कम करके चूहे की फुफ्फुसीय धमनी के एनई-प्रेरित संकुचन को दबाता है, और एनओ-सीजीएमपी मार्ग और के प्लस चैनल (बीकेसीए और केआईआर) के उद्घाटन के माध्यम से इसकी छूट को प्रेरित करता है।

कीवर्ड:तिब्बती जड़ी बूटी;इचिनाकोसाइड; फेफड़ों की धमनियों में उच्च रक्तचाप; अधिक ऊंचाई पर; वासोरिलैक्सेशन; ना; बीकेसीए; केआईआर; धमनी की अंगूठी; फुफ्फुसीय धमनी चिकनी पेशी कोशिकाएं।

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परिचय

उच्च ऊंचाई पर अनुभव के रूप में निरंतर फुफ्फुसीय वाहिकासंकीर्णन फुफ्फुसीय उच्च रक्तचाप (पीएच) और औसत दर्जे का अतिवृद्धि [1] का कारण बन सकता है, जिसे दाएं निलय अतिवृद्धि और हृदय की विफलता के मुख्य कारण के रूप में पहचाना गया है [2]। उच्च ऊंचाई पर रहने वाले व्यक्ति, अस्थायी रूप से या स्थायी रूप से, हल्के से मध्यम फुफ्फुसीय उच्च रक्तचाप पेश कर सकते हैं, और हाइपोक्सिया के लिए अधिक संवेदनशीलता वाले लोगों में अतिरंजित फुफ्फुसीय वाहिकासंकीर्णन हो सकता है, जिससे विभिन्न उच्च ऊंचाई वाली बीमारियां होती हैं जो महत्वपूर्ण रुग्णता और मृत्यु दर से जुड़ी होती हैं, जैसे कि उच्च ऊंचाई वाले फुफ्फुसीय एडिमा और हृदय रोग [3]।इचिनाकोसाइड(ईसीएच) (चित्र 1) एक हैफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइडविभिन्न प्रकार की चीनी जड़ी-बूटियों में पाया जाता है जैसे कि तिब्बती जड़ी बूटी लैगोटिस ब्रेविटुबा मैक्सिम औरसिस्टैंच ट्यूबुलोसा[4, 5]। लागोस ब्रेविटुबा मैक्सिम लैगोटिस एसपीपी की एक प्रजाति है जो स्क्रोफुलुलरियासी से संबंधित है और किंघई-तिब्बत पठार में 3000 मीटर से अधिक ऊंचाई पर व्यापक रूप से बढ़ती है।ईसीएचइसमें विभिन्न वांछनीय औषधीय विशेषताएं हैं, जैसे कि एंटीऑक्सीडेटिव, एंटी-इंफ्लेमेटरी, न्यूरोप्रोटेक्टिव, हेपेटोप्रोटेक्टिव, और नाइट्रिक ऑक्साइड (NO) रेडिकल-स्कैवेंजिंग गुण [6]। यह चूहे के वक्ष महाधमनी के छल्ले में एंडोथेलियम-निर्भर छूट भी प्राप्त कर सकता है और हृदय रोगों का इलाज कर सकता है [7]। हालांकि, हमारे सर्वोत्तम ज्ञान के लिए, फुफ्फुसीय धमनियों में संवहनी स्वर पर इसके प्रभावों की जांच करने वाला कोई अध्ययन नहीं हुआ है। इस अध्ययन के उद्देश्य इस प्रकार हैं: (1) यह पता लगाने के लिए कि क्या ईसीएच नॉरएड्रेनालाईन (एनई) के साथ पूर्व-अनुबंधित चूहे फुफ्फुसीय धमनियों में इन विट्रो वैसोरेलैक्सेशन को प्रेरित करता है, और क्या यह प्रभाव, यदि कोई हो, एंडोथेलियम-निर्भर है या सीधे संवहनी चिकनी पेशी पर कार्य करता है ; (2) चूहे फुफ्फुसीय धमनी चिकनी पेशी कोशिकाओं (PASMCs) में बाह्य कैल्शियम प्रवाह और इंट्रासेल्युलर कैल्शियम रिलीज पर ईसीएच के प्रभाव की जांच करने के लिए; और (3) ईसीएच-प्रेरित छूट में शामिल संभावित रास्तों और के प्लस चैनलों की पहचान करना।

सामग्री और तरीके

अभिकर्मकों

ईसीएच कृपया पेकिंग विश्वविद्यालय (बीजिंग, चीन) के डॉ. पेंग-फेई टीयू द्वारा प्रदान किया गया था, जिसमें उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा निर्धारित 98 प्रतिशत से अधिक की शुद्धता थी। डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO) को सोलर साइंस एंड टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (बीजिंग, चीन) से खरीदा गया था; एनई, एसिटाइलकोलाइन (एसीएच, 99 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर), इंडोमेथेसिन (आईएमटी), एनω-नाइट्रो-एल-आर्जिनिन मिथाइल एस्टर हाइड्रोक्लोराइड (एल-नेम), टेट्राएथिलमोनियम क्लोराइड (टीईए), बेरियम क्लोराइड (बीएसीएल2), {{ सिग्मा केमिकल कंपनी (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से 9}}एमिनोपाइरीडीन ({{10}}एपी), और ग्लिबेनक्लामाइड (ग्लि); उच्च ग्लूकोज डल्बेको का संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम), भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), और गिब्को बीआरएल कंपनी लिमिटेड (गेथर्सबर्ग, एमडी, यूएसए) से ट्रिप्सिन; माउस विरोधी चूहे प्राथमिक चिकनी पेशी एक्टिन (-SMA) एंटीबॉडी और बकरी विरोधी माउस माध्यमिक एंटीबॉडी Boshide Biotech Co, Ltd (वुहान, चीन) से; Invitrogen Corp (Carlsbad, CA, USA) की ओर से Fluo कैल्शियम संकेतक (Fluo 4- AM); और बीजिंग केमिकल रिएजेंट कंपनी लिमिटेड (बीजिंग, चीन) से सभी अकार्बनिक लवण। IMT को DMSO में भंग कर दिया गया था और 5 प्रतिशत NaH2PO4, Gli, Fluo 4- AM, और ECH को DMSO में भंग कर दिया गया था, और अन्य सभी अभिकर्मकों को क्रेब्स-हेंसेलिट (KH) या PBS समाधान में भंग कर दिया गया था। प्रारंभिक प्रयोगों से पता चला है कि 0.1 प्रतिशत (v/v) से कम पर डीएमएसओ का पृथक फुफ्फुसीय धमनी के छल्ले के तनाव विकास पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।

प्रायोगिक जानवर

सभी प्रक्रियाओं और प्रोटोकॉल को किंघई विश्वविद्यालय के मेडिकल कॉलेज की पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। नर विस्टार चूहों, 6-8 सप्ताह पुराने, 250-300 ग्राम शरीर के वजन, लान्झोउ विश्वविद्यालय (लान्झोउ, चीन) के पशु केंद्र से खरीदे गए थे और 22 ± के परिवेश के तापमान पर एक मानक प्रयोगशाला आहार और नल के पानी के एड लिबिटम पर बनाए रखा गया था। पूरे प्रयोग के दौरान 2 डिग्री और सापेक्षिक आर्द्रता 45 प्रतिशत -55 प्रतिशत।

इन विट्रो पल्मोनरी आर्टरी परफ्यूजन

चूहा फुफ्फुसीय धमनी के छल्ले की तैयारी

25 0-300 ग्राम वजन वाले चूहों को सोडियम पेंटोबार्बिटल (40 मिलीग्राम/किलो) के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया गया था, और फिर उनके दिल और फेफड़ों को हटा दिया गया और तुरंत बर्फ-ठंडे केएच समाधान (mmol/L में) में डुबो दिया गया। : 118 NaCl, 4.7 KCl, 2.5 CaCl2, 1.2 MgSO4·7H2O, 1.2 KH2PO4, 25 NaHCO3, और 11.1 ग्लूकोज (पीएच 7.4)। इंट्रापल्मोनरी धमनियों (0.7-1.5 मिमी व्यास) को आसपास के संयोजी ऊतक और एडिटिटिया से मुक्त विच्छेदित किया गया था और फिर लंबाई में लगभग 2–3 मिमी के छल्ले में काट दिया गया था। 37 डिग्री पर 10 एमएल केएच घोल से भरे अंग कक्षों में छल्लों को निलंबित कर दिया गया था और 95 प्रतिशत ओ 2-5 प्रतिशत सीओ 2 [8] के साथ गैसीकृत किया गया था, और आइसोमेट्रिक तनाव को एक बल ट्रांसड्यूसर (जेएच -2, स्पेस मेडिको का उपयोग करके मापा गया था। -इंजीनियरिंग संस्थान, बीजिंग, चीन)

वेसल रिंग गतिविधि मूल्यांकन और एंडोथेलियल फ़ंक्शन मूल्यांकन

400 मिलीग्राम के बेसल तनाव के तहत पोत के छल्ले को 2 घंटे के लिए संतुलित करने की अनुमति दी गई थी, इस दौरान केएच समाधान हर 15 मिनट में बदल दिया गया था; तब संकुचन प्रतिशत का पता लगाकर प्रत्येक वलय की गतिविधि का आकलन करने के लिए NE का 1 μmol/L कक्ष में जोड़ा गया था। प्रायोगिक प्रोटोकॉल से पहले और बाद में, संकुचन प्रतिशत मापा गया था (चित्र 2ए और 2बी)। एंडोथेलियम को कुछ रिंगों में एक महीन स्टील के तार के साथ अंतरंग सतह को रगड़ कर हटा दिया गया था, और NE द्वारा प्रेरित सिकुड़ा हुआ स्वर के प्रतिशत में ACh (10 μmol / L) के कारण छूट की डिग्री द्वारा अखंडता का गुणात्मक रूप से मूल्यांकन किया गया था। μmol / एल)। यदि एसीएच के साथ छूट 80 प्रतिशत से अधिक थी, तो एंडोथेलियम अच्छी स्थिति में रहा; यदि छूट 30 प्रतिशत से कम थी, तो एंडोथेलियम नष्ट हो गया था (चित्र 2क और 2ख)[9]।

चूहे PASMCs का अलगाव और संस्कृति

डिस्टल पल्मोनरी धमनियों को चूहों के फुफ्फुसीय लोब से अलग किया गया था, और एंडोथेलियम और एडिटिटिया को सावधानी से हटा दिया गया था। ऊतकों को {0}} मिमी टुकड़ों में कीमा बनाया जाने के बाद, उन्हें तुरंत फ्लास्क में जोड़ा गया, लगभग चार घंटे के लिए एक आर्द्र इनक्यूबेटर में 37 डिग्री और 5 प्रतिशत CO2 पर बनाए रखा गया, और फिर उच्च-ग्लूकोज DMEM के साथ सुसंस्कृत किया गया। लगभग पांच दिनों के लिए 20 प्रतिशत एफबीएस, 100 यू/एमएल पेनिसिलिन, और 100 यू/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक। कोशिकाओं के उभरने पर संस्कृति मीडिया के आधे हिस्से को नए मीडिया से बदल दिया गया। जब कोशिकाएं 80 प्रतिशत संगम पर पहुंच गईं, तो उन्हें 0.125 प्रतिशत ट्रिप्सिन के साथ काटा गया और फ्लास्क (1:2 अनुपात) में बोया गया जिसमें उच्च ग्लूकोज डीएमईएम 10 प्रतिशत एफबीएस, 100 यू/एमएल पेनिसिलिन, और 100 यू/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक था। . सभी प्रयोगों के लिए तीन से आठ मार्ग वाली कोशिकाओं का उपयोग किया गया।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा पीएएसएमसी की पहचान

PASMCs इम्यूनोकेमिकल धुंधला होने के लिए सकारात्मक थे जब विशिष्ट "पहाड़ी और घाटी" विशेषताएं देखी गईं। कोशिकाओं को 6-वेल प्लेट्स में ग्लास कवरस्लिप्स के साथ रखा गया था। जब कोशिकाएं 80 प्रतिशत संगम पर पहुंच गईं, तो उन्हें 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया, 15 मिनट के लिए 3 प्रतिशत हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ अवरुद्ध किया गया, और फिर 4 डिग्री पर रात भर माउस एंटी-चूहा प्राथमिक-एसएमए एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया। 10 मिनट के लिए पीबीएस में तीन बार धोए जाने के बाद, कोशिकाओं को 45 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर बकरी विरोधी माउस माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया, 10 मिनट के लिए पीबीएस में तीन बार फिर से धोया गया, और डायमिनोबेंज़िडाइन के साथ कल्पना की गई।

चूहे PASMCs में इंट्रासेल्युलर कैल्शियम सांद्रता का पता लगाना

PASMCs को {{0}}वेल प्लेट्स में ग्लास कवरस्लिप्स के साथ रखा गया था। जब कोशिकाएं 80 प्रतिशत संगम पर पहुंच गईं, तो संस्कृति मीडिया को सीरम-मुक्त DMEM से बदल दिया गया। चौबीस घंटे बाद, कोशिकाओं को 5 प्रतिशत CO2 के आर्द्र वातावरण में 7 μmol / L Fluo 4- AM 37 डिग्री पर 3 0 मिनट के लिए लोड किया गया। अवशिष्ट डाई को हैंक्स बैलेंस्ड सॉल्ट सॉल्यूशन (HBSS) के घोल से धोया गया था जिसमें निम्नलिखित (mmol/L में) थे: 1.26 CaCl2, 0.49 MgCl2·6H2O, 0.41 MgSO4·7H2O, 5.33 KCl, 0.44 KH2PO4, 4.17 NaHCO3, 137.93 NaCl, 0.34 Na2HPO4, और 5.56 D-ग्लूकोज, बिना फिनोल लाल के। Fluo 4- AM से भरी हुई कोशिकाओं को तीन उपचार स्थितियों में से एक के संपर्क में लाया गया: (1) नियंत्रण समूह (कोन समूह), जिसमें कोशिकाओं को सीरम-मुक्त DMEM के साथ जोड़ा गया था; (2) NE समूह, जिसमें कोशिकाओं को 10 मिनट के लिए NE के 1 μmol/L के साथ पूरक सीरम-मुक्त DMEM के साथ जोड़ा गया था; और (3) एनई प्लस ईसीएच (100 μmol/L) समूह (एनई प्लस ईसीएच100 समूह), जिसमें कोशिकाओं को सीरम-मुक्त DMEM के साथ जोड़ा गया था, 10 मिनट के लिए NE के 1 μmol/L और ECH के 100 μmol/L के साथ पूरक 20 मिनट के लिए प्रतिदीप्ति तीव्रता को प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (IX71, ओलिंप, टोक्यो, जापान) [11] द्वारा देखा और छायाचित्रित किया गया था। प्रत्येक नमूने के लिए दृष्टि के छह क्षेत्र (200 ×) एकत्र किए गए थे। छवि प्रो-प्लस 6.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके माध्य प्रतिदीप्ति तीव्रता को मापकर इंट्रासेल्युलर कैल्शियम एकाग्रता की मात्रा निर्धारित की गई थी।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को माध्य ± एसडी के रूप में व्यक्त किया गया था। जब डननेट के परीक्षण या छात्र-न्यूमैन-केल्स परीक्षण द्वारा एक-तरफ़ा विश्लेषण (एनोवा) के बाद कई तुलनाओं के लिए एक उपयुक्त, महत्वपूर्ण अंतर का मूल्यांकन किया गया था। P . का प्रायिकता स्तर<0.05 was="" considered="">

परिणाम पृथक फुफ्फुसीय धमनी पर ईसीएच के वासोरेलेक्सेंट प्रभाव

प्रयोग की शुरुआत में, 30 से 300 μmol/L तक ECH के संचयी जोड़ का फुफ्फुसीय धमनी के बेसल तनाव पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा। एनई-प्रेरित वाहिकासंकीर्णन एक पठार पर पहुंचने के बाद, ईसीएच को संचयी रूप से (30-300 μmol/L) अक्षुण्ण एंडोथेलियम (ई प्लस, चित्रा 2सी) या एंडोथेलियम-अस्वीकृत रिंगों (ई-, चित्रा 2सी) में जोड़ा गया था। अक्षुण्ण एंडोथेलियम के छल्ले में, ईसीएच के संचयी जोड़ ने जहाजों को एक एकाग्रता-निर्भर तरीके से फैलाया, जिसमें अधिकतम-

मम छूट प्रतिशत 89.22 प्रतिशत ±0.32 प्रतिशत 300 μmol/L पर और EC50 51.60±0.57 μmol/L (चित्र 2A और 2C)। इसी तरह, एंडोथेलियम-अस्वीकृत छल्ले में, ईसीएच ने भी जहाजों को एक एकाग्रता-निर्भर तरीके से फैलाया, लेकिन 67.72 प्रतिशत ± 1.69 प्रतिशत (पी) की काफी कम अधिकतम प्रतिक्रिया के साथ<0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings)="" and="" a="" higher="" ec50="" of="" 108.51±2.8="" μmol/l=""><0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings,="" figure="" 2b="" and="" 2c).="" the="" sustained="" plateau="" of="" the="" high-contraction="" percentage="" induced="" by="" ne="" (1="" μmol/l)="" after="" the="" experimental="" protocol="" indicated="" that="" the="" rings="" pretreated="" with="" ech="" (30–300="" μmol/l)="" had="" good="" activity="" (figure="" 2a="" and="">

इंट्रासेल्युलर कैल्शियम रिलीज और बाह्य कैल्शियम प्रवाह पर ईसीएच के प्रभाव

जब तक अधिकतम संकुचन प्राप्त नहीं हो जाता, तब तक एंडोथेलियम-अस्वीकृत छल्ले NE के 1 μmol / L के संपर्क में थे। बाह्य सीए 2 प्लस -फ्री परिस्थितियों में, रिंगों को सीए 2 प्लस -फ्री केएच समाधान में संतुलित किया गया था जिसमें प्रयोगों की शुरुआत से पहले ईजीटीए के 0 .2 मिमीोल / एल शामिल थे। सीए 2 प्लस - और ईजीटीए मुक्त केएच समाधान के साथ तीन washes के बाद, रिंगों को 20 मिनट के लिए ECH (30, 100, और 300 μmol / L) के साथ पूर्व-ऊष्मायन किया गया और फिर NE के 1 μmol / L के संपर्क में लाया गया। उत्पादित अंगूठियां

निरंतर संकुचन जो तेजी से बेसलाइन पर लौट आए, एनई द्वारा प्रेरित प्रारंभिक संकुचन की तुलना में, जो संदर्भ के रूप में कार्य करता था। नियंत्रण का अधिकतम संकुचन 33.27 प्रतिशत ± 2.94 प्रतिशत (चित्र 3ए और 3ई) था, लेकिन क्रमशः 24.54 प्रतिशत ± 2.97 प्रतिशत और 10.60 प्रतिशत ± 2.07 प्रतिशत ईसीएच के 100 और 300 μmol/L के साथ ढोंग किए गए छल्ले में काफी कम हो गया था (पी<0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3c–3e).="" under="" extracellular="" calcium="" influx="" conditions,="" 2.5="" mmol/l="" cacl2="" was="" added="" to="" the="" chamber="" when="" the="" curve="" reached="" a="" plateau.="" the="" control="" group="" produced="" sustained="" contractions,="" with="" a="" maximum="" contraction="" of="" 139.89%±7.38%="" (figure="" 3a="" and="" 3e);="" but="" the="" maximum="" contraction="" was="" significantly="" reduced="" to="" 112.42%±7.30%,="" 100.29%±8.66%,="" and="" 74.74%±4.95%="" in="" rings="" pretreated="" with="" 30,="" 100,="" and="" 300="" μmol/l="" of="" ech,="" respectively=""><0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3b–3e).="" under="" these="" conditions,="" the="" maximal="" effect="" caused="" by="" ech="" was="" more="" pronounced="" with="" 300="" μmol/l="" than="" with="" 100="" or="" 30="" μmol/l=""><0.01 vs="" 30="" or="" 100="" μmol/l="" ech="" group).="" different="" concentrations="" of="" ech="" all="" shortened="" the="" platform="" of="" sustained="" contraction,="" which="" was="" induced="" by="" extracellular="" calcium="" influx="" at="" different="" levels="" (figure="">

ईसीएच प्रेरित चूहे फुफ्फुसीय धमनी vasorelaxation में विभिन्न अवरोधकों की भूमिका

निम्नलिखित अवरोधकों की उपस्थिति या अनुपस्थिति में ईसीएच-प्रेरित चूहे फुफ्फुसीय धमनी वासोरेलेक्सेशन की जांच की गई: एल-नाम (ईएनओएस अवरोधक), आईएमटी (साइक्लोऑक्सीजिनेज अवरोधक), टीईए (बड़े-चालन सीए 2 प्लस-सक्रिय के प्लस चैनल अवरोधक), बासीएल 2 ( इनवर्ड रेक्टिफायर K प्लस चैनल इनहिबिटर), 4-AP (वोल्टेज-डिपेंडेंट K प्लस चैनल इनहिबिटर), और Gli (ATP-सेंसिटिव K प्लस चैनल इनहिबिटर)। रिंगों को अधिकतम NE के 1 μmol/L, और फिर L-NAME (100 μmol/L), IMT (10 μmol/L), TEA (1 mmol/L) के साथ अनुबंधित किया गया था। , BaCl2 (1 mmol/L), 4-AP (1 mmol/L), या Gli (10 μmol/L) क्रमशः जोड़े गए। एक बार एक नए पठार पर पहुंचने के बाद, ECH को 30 से 300 μmol/L तक संचयी तरीके से जोड़ा गया। विभिन्न अवरोधकों की उपस्थिति में एकाग्रता-प्रतिक्रिया वक्र चित्र 4 में दिखाए गए हैं। NE के 1 μmol/L के साथ अनुबंधित फुफ्फुसीय धमनी के छल्ले पर ECH के वासोरेलेक्सेंट प्रभाव को L-NAME (100 μmol/L), TEA द्वारा महत्वपूर्ण रूप से अवरुद्ध किया गया था। 1 mmol/L), और BaCl2 (1 mmol/L), अधिकतम छूट के साथ क्रमशः 64.41 प्रतिशत ±3.20 प्रतिशत, 84.38 प्रतिशत ±0.70 प्रतिशत, और 75.27 प्रतिशत ± 0.93 प्रतिशत (पी)<0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 89.22%±0.32%),="" and="" the="" values="" of="" ec50="" were="" increased="" to="" 197.32±2.75="" μmol/l,="" 91.42±2.11="" μmol/l,="" and="" 115.49±1.75="" μmol/l,="" respectively=""><0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 51.60±0.57="" μmol/l)="" (table="" 1).="" however,="" imt="" (10="" μmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l)="" did="" not="" inhibit="" the="" ech-induced="" relaxation="" (figure="" 4="" and="" table="" 1).="" to="" validate="" the="" effects="" of="" these="" inhibitors="" on="" ech-induced="" relaxation,="" the="" rings="" precontracted="" with="" 1="" μmol/l="" of="" ne="" were="" treated="" with="" l-name="" (100="" μmol/l),="" imt="" (10="" μmol/l),="" tea="" (1="" mmol/l),="" bacl2="" (1="" mmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l).="" after="" a="" new="" plateau="" was="" reached,="" ech="" was="" added="" to="" the="" chamber="" at="" a="" single="" concentration="" of="" 300="" μmol/l="" rather="" than="" in="" a="" cumulative="" manner.="" the="" maximum="" relaxation="" was="" reduced="" to="" 56.33%±0.90%,="" 82.21%±0.92%,="" and="" 72.16%±0.76%="" following="" the="" addition="" of="" l-name,="" tea,="" and="" bacl2,="">

चूहे PASMCs की पहचान

At low magnification, spindle cells were densely packed, and almost all the cells were stained positively for PASMCs (the PASMC purity was >95 प्रतिशत) (चित्र 6क)। उच्च आवर्धन (चित्रा 6बी) पर कोशिका द्रव्य में भूरे रंग के मायोफिलामेंट्स स्पष्ट रूप से देखे गए थे।

सिस्टांचेइचिनाकोसाइडविरोध कर सकते हैंapoptosis

चूहे PASMCs में इंट्रासेल्युलर कैल्शियम सांद्रता पर ECH का प्रभाव

NE (1 μmol/L) ने इंट्रासेल्युलर कैल्शियम एकाग्रता में काफी वृद्धि की (n=6, P<0.01 vs="" the="" control="" group)="" in="" rat="" pasmcs,="" and="" ech="" could="" decrease="" the="" mean="" fluorescence="" intensity="" (n="6,"><0.01 vs="" the="" ne="" group)="" (figure="">