भाग 1: सिस्टैंच टुबुलोसा से पृथक इचिनाकोसाइड, घ्रेलिन रिसेप्टर के सक्रियण के माध्यम से विकास हार्मोन स्राव को उत्तेजित करता है

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा से पृथक इचिनाकोसाइड घ्रेलिन रिसेप्टर के सक्रियण के माध्यम से विकास हार्मोन स्राव को बढ़ावा देता है

चीह-जू वू 1, मेई-यिन चिएन 2, नान-हे लिन 1, यी-चिआओ लिन 1, वेन-यिंग चेन 3, चाओ-हिसियांग चेन 2,4,* और जेसन टीसी त्ज़ेन 1,*

1 ग्रेजुएट इंस्टीट्यूट ऑफ बायोटेक्नोलॉजी, नेशनल चुंग-हिंग यूनिवर्सिटी, ताइचुंग 402, ताइवान; baby159357520@gmail.com (सी.-जेडब्ल्यू); CMNHEI@mohw.gov.tw (एन.-एचएल); s9755702@gmail.com (वाई.-सीएल)

2 को दा फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड, ताओयुआन 324, ताइवान; rd1@koda.com.tw

3 पशु चिकित्सा विभाग, राष्ट्रीय चुंग-हिंग विश्वविद्यालय, ताइचुंग 402, ताइवान; wychen@dragon.nchu.edu.tw

4 ग्रेजुएट इंस्टीट्यूट ऑफ फार्माकोग्नॉसी, ताइपे मेडिकल यूनिवर्सिटी, ताइपे 110, ताइवान

* पत्राचार: gm@koda.com.tw (सी.-एचसी); TCTZEN@dragon.nchu.edu.tw (जेटीसीटी); दूरभाष: प्लस 886-4-22840328 (ext. 776) (JTCT); फैक्स: प्लस 886-4-22853527 (जेटीसीटी)

अकादमिक संपादक: पिनारोसा अवतो

प्राप्त: 22 जनवरी 2019; स्वीकृत: 14 फरवरी 2019; प्रकाशित: 17 फरवरी 2019

संपर्क करना:joanna.jia@wecistanche.com/ व्हाट्सएप: 008618081934791

सार:सिस्टांचेप्रजाति, रेगिस्तान के जिनसेंग, को पारंपरिक चीनी फार्माकोपिया में कई जैविक गतिविधियों को रखने के लिए दर्ज किया गया है और इसे एंटी-एजिंग दवा के रूप में इस्तेमाल किया गया है। तीन फेनिलएथेनॉयड ग्लाइकोसाइड्स-इचिनाकोसाइड, ट्यूबलोसाइड ए, और एक्टोसाइड - के पानी के अर्क में पाए गए थेसिस्टांचेट्यूबुलोसा(शेंक) आर। वाइट और प्रमुख घटक,इचिनाकोसाइड, आगे शुद्ध किया गया था।इचिनाकोसाइड10_6 M से अधिक सांद्रण ने चूहे की पिट्यूटरी कोशिकाओं के वृद्धि हार्मोन स्राव को प्रोत्साहित करने के लिए महत्वपूर्ण गतिविधि प्रदर्शित की। ग्रोथ हार्मोन-रिलीजिंग हार्मोन-6 के समान, घ्रेलिन का सिंथेटिक एनालॉग, इचिनाकोसाइड द्वारा ग्रोथ हार्मोन स्राव की उत्तेजना को [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-पदार्थ P द्वारा बाधित किया गया था। , घ्रेलिन रिसेप्टर का एक उलटा एगोनिस्ट। आणविक मॉडलिंग से पता चला है कि सभी तीन फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स ने ग्रेलिन रिसेप्टर की बाध्यकारी जेब के साथ पर्याप्त रूप से बातचीत की, और इचिनाकोसाइड ने ट्यूबलोसाइड ए और एक्टोसाइड की तुलना में रिसेप्टर के साथ थोड़ा बेहतर संपर्क प्रदर्शित किया। परिणाम बताते हैं कि फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड, विशेष रूप सेइचिनाकोसाइड, सक्रिय घटक हैं जो सी. ट्यूबुलोसा के बुढ़ापा रोधी प्रभावों के लिए जिम्मेदार हैं और इसे घ्रेलिन के गैर-पेप्टिडाइल एनालॉग के रूप में विकसित करने के लिए माना जा सकता है।

कीवर्ड: सिस्टैंचेट्यूबुलोसा;इचिनाकोसाइड; घ्रेलिन; वृद्धि हार्मोन स्राव; फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स

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इचिनाकोसाइडcistanche में सुधार कर सकते हैंप्रतिरक्षा तंत्र

1 परिचय

सिस्टांचेप्रजाति (ओरोबंचेसी), जिसे रेगिस्तान का तथाकथित जिनसेंग कहा जाता है, उत्तर-पश्चिमी चीन के रेगिस्तानी क्षेत्र में पाया जाने वाला एक होलोपैरासिटिक पौधा है। इस हर्बल दवा को पारंपरिक चीनी फार्माकोपिया [1] में कई जैविक गतिविधियों जैसे कब्ज से राहत, दीर्घायु और कामोत्तेजक गुणों के लिए दर्ज किया गया है। सिस्टांचे की विभिन्न प्रजातियों को आमतौर पर उनके मेजबान और बढ़ते वातावरण के अनुसार नामित किया जाता है, जैसे कि सिस्टांच डेजर्टिकोला वाईसी मा औरसिस्टांचेट्यूबुलोसा(शेंक) आर वाइट। मुख्य रूप से इनर मंगोलिया में पाए जाने वाले हेलोक्सिलॉन एम्मोडेन्ड्रॉन द्वारा होस्ट किया गया सी। डेजर्टिकोला, मूल रूप से चीनी फार्माकोपिया में मानक सिस्टैंच स्रोत के रूप में माना जाता था, लेकिन 1984 से चीन में एक लुप्तप्राय पौधों की प्रजातियों के रूप में सूचीबद्ध किया गया है। सी। ट्यूबुलोसा, झिंजियांग में उगाए गए टैमरिक्स रामोसिसिमा द्वारा होस्ट किया गया। हेटियन, तेजी से विकास दर के अधिकारी हैं, और इस प्रकार इस अणु 2019, 24, 720 की कृषि खेती; doi:10.3390/अणु24040720 प्रजातियां पारंपरिक सी. डेजर्टिकोला की तुलना में काफी बेहतर उपज देती हैं। आजकल, उपरोक्त दोनों प्रजातियों को चीनी फार्माकोपिया [2] में एकत्र किया जाता है।

C. डेजर्टिकोलातथाC. ट्यूबुलोसासमान रासायनिक घटकों और औषधीय गतिविधियों के अधिकारी पाए जाते हैं, इस प्रकार दोनों को उम्र बढ़ने से संबंधित बीमारियों के लिए संभावित हर्बल दवा माना जाता है [3-5]। फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड इन दो प्रजातियों में पाए जाने वाले सामान्य सक्रिय तत्व हैं, और इचिनाकोसाइड को सी। ट्यूबुलोसा [6] में प्रमुख फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड के रूप में पहचाना जाता है। पिछले एक दशक में, इचिनाकोसाइड और सी। ट्यूबुलोसा के अर्क में इचिनाकोसाइड से भरपूर कई औषधीय गतिविधियों का प्रदर्शन किया गया था, जैसे कि एंटी-एजिंग, न्यूरोप्रोटेक्शन, सीखने और याददाश्त में वृद्धि, कार्डियक फ़ंक्शन में सुधार, हाइपरलिपिडिमिया और हाइपरग्लाइसेमिया में कमी, और मोटापे से प्रेरित मधुमेह और चयापचय सिंड्रोम की रोकथाम [7-12]।

"भूख हार्मोन" के रूप में जाना जाता है, घ्रेलिन एक पेप्टाइड हार्मोन है जो 28 अमीनो एसिड अवशेषों से बना होता है जिसमें तीसरे सेरीन अवशेष को उसके जैविक कार्यों के लिए आवश्यक एन-ऑक्टेनॉयल समूह के साथ जोड़ा जाता है [13]। घ्रेलिन को जी-प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर के लिए एक अंतर्जात लिगैंड के रूप में प्रदर्शित किया गया है, जिसका नाम ग्रोथ हार्मोन सेक्रेटागॉग -1एक रिसेप्टर (GHS-R1a) है, जो मुख्य रूप से हाइपोथैलेमस और पिट्यूटरी ग्रंथि [14] में व्यक्त किया जाता है। घ्रेलिन द्वारा GHS-R1a के सक्रियण के परिणामस्वरूप वृद्धि हार्मोन स्राव की उत्तेजना होती है और कई शारीरिक प्रतिक्रियाओं का नियमन होता है [15]। नैदानिक ​​अध्ययनों से पता चलता है कि वृद्धि हार्मोन के साथ बहिर्जात पूरक बुजुर्गों में उम्र बढ़ने से संबंधित बीमारियों के लक्षणों को कम कर सकता है, जैसे कि मांसपेशियों की ताकत और हड्डियों का घनत्व बढ़ाना और नींद की गुणवत्ता और संज्ञानात्मक क्षमता में सुधार [16,17]। हालांकि, गंभीर साइड इफेक्ट (जैसे, प्रोस्टेट कैंसर, जोड़ों का दर्द, इंसुलिन प्रतिरोध, द्रव प्रतिधारण, कार्पल टनल सिंड्रोम, और गाइनेकोमास्टिया) की चिंताओं को बहिर्जात वृद्धि हार्मोन [18,19] के साथ इलाज के लिए लाया गया है। इसलिए, GHS-R1a सक्रियण के माध्यम से घ्रेलिन द्वारा वृद्धि हार्मोन स्राव की उत्तेजना को बुजुर्गों की उम्र बढ़ने से संबंधित बीमारियों के लिए एक वैकल्पिक चिकित्सीय दृष्टिकोण के रूप में माना गया है, और इसके चिकित्सीय प्रभाव को विकास हार्मोन के बहिर्जात पूरकता से बेहतर माना जाता है।

हाल ही में, टीग्रेलिन और जिन्कगोग्रेलिन, चिन-शिन ऊलोंग चाय और जिन्कगो बिलोबा एल। (जिन्कगोएसी) के पत्तों में पाए जाने वाले अद्वितीय एसाइलेटेड एवोनोइड ग्लाइकोसाइड्स को घ्रेलिन रिसेप्टर [20-22] के माध्यम से चूहे की प्राथमिक पूर्वकाल पिट्यूटरी कोशिकाओं के विकास हार्मोन स्राव को प्रेरित करने के लिए प्रदर्शित किया गया था। ]. Cistanche एसपीपी के चिकित्सीय प्रभावों को ध्यान में रखते हुए। उम्र बढ़ने से संबंधित बीमारियों पर चिन-शिन ऊलोंग चाय और जिन्कगो बिलोबा के पत्तों के एंटी-एजिंग प्रभाव के समान थे, हमने सोचा कि क्या फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड की औषधीय गतिविधियों को उसी मार्ग के माध्यम से निष्पादित किया जा सकता है जैसे कि टीग्रेलिन और जिन्कगोग्रेलिन के लिए बाध्य करके। घ्रेलिन रिसेप्टर। सबसे पहले, तीन फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स-इचिनाकोसाइड, ट्यूबलोसाइड ए, और एक्टियोसाइड- को सी। ट्यूबुलोसा के पानी के अर्क में पहचाना गया था। प्रमुख घटक, इचिनाकोसाइड, को और अधिक शुद्ध किया गया और घ्रेलिन रिसेप्टर के सक्रियण के माध्यम से चूहे की पिट्यूटरी कोशिकाओं के विकास हार्मोन रिलीज को प्रोत्साहित करने की क्षमता के लिए जांच की गई। इचिनाकोसाइड, ट्यूबलोसाइड ए, और एक्टोसाइड डॉकिंग के घ्रेलिन रिसेप्टर के आणविक मॉडलिंग का प्रदर्शन किया गया था और बाध्यकारी जेब के भीतर संभावित बातचीत के लिए तुलना की गई थी।

2. परिणाम

2.1. दो सिस्टैंच प्रजातियों के पानी निकालने में तीन प्रमुख फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड का पृथक्करण और पहचान

दो सिस्टैंच प्रजातियों के एचपीएलसी विश्लेषण में, सी. ट्यूबुलोसा में सी. डेजर्टिकोला (चित्रा 1ए,बी)की तुलना में फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड की अधिक मात्रा पाई गई। तीन प्रमुख फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड्स को सी. ट्यूबुलोसा में देखा गया था और पहले से प्रकाशित ज्ञात यौगिकों के एचपीएलसी प्रोफाइल और एमएस डेटा की तुलना में मास स्पेक्ट्रोमेट्रिक विश्लेषण (चित्रा 2) द्वारा इचिनाकोसाइड, ट्यूबलोसाइड ए, और एक्टियोसाइड के रूप में पहचाना गया था [23,24]। MS1 में आणविक विखंडन 785 m/z और MS2 में 623 m/z के अनुसार, सी. ट्यूबुलोसा के पानी के अर्क में प्रमुख शिखर की पहचान इचिनाकोसाइड के रूप में की गई (चित्र 2क)। इसी तरह, ट्यूबलोसाइड ए को इसके आणविक विखंडन 827 एम/जेड द्वारा एमएस1 और 665, 623, और 782 एम/जेड में एमएस2 (चित्रा 2बी) द्वारा सौंपा गया था; एक्टोसाइड को MS1 में आणविक विखंडन 623 m/z और MS2 में 461 m/z द्वारा पुष्टि की गई थी (चित्र 2c)। इचिनाकोसाइड को निकट समरूपता (चित्रा 1सी) में शुद्ध किया गया था और निम्नलिखित जैविक assays में उपयोग किया गया था।

चित्र 2. जारी रखें।

चित्रा 2. MS1 (बाएं पैनल) और MS2 (दाएं पैनल) विखंडन में इचिनाकोसाइड (ए), ट्यूबलोसाइड ए (बी), और एक्टियोसाइड (सी) का मास स्पेक्ट्रोमेट्रिक विश्लेषण।

2.2. इचिनाकोसाइड का प्रभावचूहा पिट्यूटरी कोशिकाओं में वृद्धि हार्मोन स्राव की प्रेरण पर

मूल्यांकन करने के लिए कि क्या इचिनाकोसाइड वृद्धि हार्मोन स्रावी रिसेप्टर (जीएचएसआर) का एक एगोनिस्ट हो सकता है, यह प्राथमिक चूहे के पूर्वकाल पिट्यूटरी कोशिकाओं से वृद्धि हार्मोन स्राव के प्रेरण की जांच के अधीन था। GHRP-6 के समान, एक सिंथेटिक GHSR एगोनिस्ट, इचिनाकोसाइड चूहे की पिट्यूटरी कोशिकाओं से वृद्धि हार्मोन के स्राव को उत्तेजित करने में सक्षम था (चित्र 3)। वृद्धि हार्मोन स्राव में उल्लेखनीय वृद्धि का पता तब चला जब चूहे की पिट्यूटरी कोशिकाओं को 15 और 30 मिनट के लिए 10_6 M से अधिक सांद्रता वाले इचिनाकोसाइड से उपचारित किया गया। 15 और 30 मिनट के लिए इचिनाकोसाइड (10_8 से 10_5 एम) का उपचार खुराक पर निर्भर तरीके से चूहे पिट्यूटरी कोशिकाओं के वृद्धि हार्मोन स्राव को प्रोत्साहित करने के लिए पाया गया था। इसके अलावा, एक GHSR उलटा एगोनिस्ट, [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-पदार्थ P, ने स्पष्ट रूप से GHRP -6 और इचिनाकोसाइड के उत्तेजक प्रभावों को विकास हार्मोन स्राव के प्रेरण पर रोक दिया। चूहा पिट्यूटरी कोशिकाएं (चित्र 4)। परिणाम बताते हैं कि इचिनाकोसाइड जीएचएसआर का एक संभावित एगोनिस्ट है।

चित्रा 3. इचिनाकोसाइड का प्रभावपिट्यूटरी कोशिकाओं के वृद्धि हार्मोन स्राव पर प्रशासन। चूहे की प्राथमिक पिट्यूटरी कोशिकाओं से ग्रोथ हार्मोन (जीएच) स्राव मापा गया

माध्यम (नियंत्रण), GHRP-6 (GHSR एगोनिस्ट, 10_7 M), और विभिन्न सांद्रता (10_8 से10_5 एम) इचिनाकोसाइड (ईसीएच) के लिए 15 (ए) और 30 मिनट (बी) के लिए,

क्रमश। डेटा को माध्य o SD के साथ n=6 के रूप में प्रस्तुत किया गया था। महत्वपूर्ण कैंसर स्तर . द्वारा देखा गयाटी-टेस्ट थे * पी < 0। 0 5 और ** पी <0.005 बनाम नियंत्रण।