भाग 2 Cistanche Deserticola Phenylethanoside के प्रभाव एपीपी के हिप्पोकैम्पस में β-एमाइलॉइड प्रोटीन की अभिव्यक्ति पर / PS1 ट्रांसजेनिक चूहों

भाग 2 Cistanche के प्रभावी अवयवों: कुल के चिकित्सीय प्रभावफेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्सऔर अल्जाइमर रोग पर Acteosides

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4 . समाप्ति

अल्जाइमर रोगमुख्य रूप से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में होता है और कई कारकों से प्रेरित होता है। अब तक, इसका रोगजनन अभी भी अस्पष्ट है, लेकिन अनुसंधान का मूल अभी भी ए के आसपास है। मस्तिष्क में एपीपी द्वारा स्रावित मुख्य पेप्टाइड्स के रूप में, Aπ1-42 और Aπ1-40 का असामान्य जमाव सीधे न्यूरोनल अध: पतन का कारण नहीं बन सकता है। एटियलजि के परिप्रेक्ष्य से, यह घुलनशील oligomer ADDLs Aπ1-42 द्वारा उत्पादित है जो मस्तिष्क का कारण बनता है न्यूरोनल अध: पतन का वास्तविक कारण। हालांकि, इन दो प्रोटीनों की अभिव्यक्ति की जांच भी वास्तविक समय में एडी मस्तिष्क के घावों की सीमा को प्रतिबिंबित कर सकती है, अप्रत्यक्ष रूप से घुलनशील ओलिगोमर एडीडीएल की अभिव्यक्ति दिखा सकती है, और फिर गतिशील रूप से स्रोत से मस्तिष्क में न्यूरोनल क्षति की निगरानी कर सकती है, जिससे रोग की रोकथाम और उपचार के लिए एक संदर्भ प्रदान किया जा सकता है। इसे ध्यान में रखते हुए, Aπ1-42 और Aπ1-40 AD के रोगजनन के अध्ययन में प्रमुख लक्ष्य बन गए हैं। हिप्पोकैम्पस सीखने और स्मृति की क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए मस्तिष्क का मुख्य हिस्सा है। इसके न्यूरॉन्स की क्षति एडी में संज्ञानात्मक शिथिलता का प्रमुख कारण है। हिप्पोकैम्पस का CA1 क्षेत्र एडी पैथोलॉजिकल क्षति के मुख्य भागों में से एक है। प्रयोग का यह हिस्सा HE का उपयोग करता है धुंधला विधि से पता चला है कि सामान्य समूह के हिप्पोकैम्पस के CA1 क्षेत्र में न्यूरॉन्स को बड़े करीने से और कसकर व्यवस्थित किया गया था, अधिक समान रूप से वितरित किया गया था, और स्पष्ट परतें थीं। मॉडल समूह में, माउस के हिप्पोकैम्पल सीए 1 क्षेत्र ने चोट के कारण न्यूरोनल सेल एपोप्टोसिस जैसे अपक्षयी परिवर्तन दिखाए। Cistanche phenethyl अल्कोहल ग्लाइकोसाइड समूहों की विभिन्न खुराक के हस्तक्षेप के बाद, हिप्पोकैम्पल CA1 क्षेत्र की कोशिका आकृति विज्ञान

सभी के पास सुधार की अलग-अलग डिग्री है, यह सुझाव देते हुए किCistanche phenylethanoid glycosidesन्यूरॉन्स की रक्षा करने और उनके एपोप्टोसिस को बाधित करने का प्रभाव हो सकता है, लेकिन क्योंकि वह धुंधला सेल एपोप्टोसिस और न्यूरॉन हानि के लिए विशिष्ट नहीं है, इसलिए बाद के चरण में एपोप्टोसिस-विशिष्ट अणुओं को लक्षित करना अभी भी आवश्यक है। मार्करों का प्रासंगिक पता लगाना.

परीक्षण किया जा करने के लिए ऊतक के pretreatment सीधे धुंधला परिणाम से संबंधित है. प्रयोग में, लेखक ने पाया कि क्योंकि ट्रांसजेनिक चूहों का हिप्पोकैम्पस टेलेन्सेफेलन के टेम्पोरल लोब के गहरे आंतरिक भाग में स्थित है, इसलिए यह आकार में छोटा है और ऊतक को अलग करना मुश्किल है। थोड़ी सी लापरवाही इसे यांत्रिक क्षति पहुंचाएगी ताकि रोग संबंधी परिवर्तनों को प्रभावी ढंग से नहीं देखा जा सके। उसी समय, क्योंकि आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहे महंगे हैं और प्रयोगात्मक खुराक चक्र लंबा है, नमूनों का नुकसान अनुसंधान की समग्र प्रगति को प्रभावित कर सकता है। इसलिए, जब माउस कार्डियक परफ्यूजन पूरा करता है, तो पूरे मस्तिष्क को बाहर निकाल लिया जाता है और पैराफॉर्मेल्डिहाइड के साथ तय किया जाता है, स्केलपेल ब्लेड का उपयोग घ्राण बल्ब को हटाने के लिए किया जाता है, और मस्तिष्क के बाकी ऊतकों को निर्जलित और एम्बेडेड किया जाता है। स्लाइस की मोटाई को 3 से 5 μm पर नियंत्रित किया जाता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि हिप्पोकैम्पस बरकरार है। ऑपरेशन प्रक्रिया को अनुकूलित करने के आधार के तहत, अनुसंधान दक्षता में सुधार किया जाता है। पश्चिमी धब्बा का पता लगाने में, लेखक ने पाया कि Aπ1-42 और Aπ1-40 प्रोटीन के छोटे आणविक वजन के कारण, अभिव्यक्ति बैंड को धब्बा करना आसान नहीं है, इसलिए उनके एसडीएस-पेज जेल एकाग्रता, वैद्युतकणसंचलन समय और हस्तांतरण समय को स्क्रीन करना आवश्यक है। यदि अलग करने वाले जेल की एकाग्रता बहुत छोटी है, तो वैद्युतकणसंचलन लेन माइग्रेट हो जाएंगे और प्रोटीन सक्रियण अधूरा होगा; बहुत लंबे समय तक वैद्युतकणसंचलन समय बैंड को जेल परत से बाहर स्थानांतरित करने का कारण बनेगा; इसी हस्तांतरण समय पश्चिमी धब्बा धुंधला कर देगा, जिससे प्राथमिक एंटीबॉडी इनक्यूबेशन माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ गठबंधन को प्रभावित किया जा सकता है। इसे ध्यान में रखते हुए, यह अध्ययन प्रारंभिक प्रयोगों के माध्यम से किया गया था, और अंत में 15% पृथक्करण जेल का चयन किया गया, वैद्युतकणसंचलन, और उनकी अभिव्यक्ति की जांच करने के लिए Aπ1-42 और Aπ1-40 पर पश्चिमी ब्लोटिंग करने के लिए 2 घंटे के लिए झिल्ली को स्थानांतरित किया गया।

वर्तमान में प्रोटीन विनियमन के लिए उपयोग की जाने वाली तकनीकी विधियों में से, पश्चिमी धब्बा विधि का उपयोग मुख्य रूप से संबंधित प्रोटीन की विशिष्ट अभिव्यक्ति की जांच करने के लिए परिमाणीकरण के लिए किया जाता है। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री विधि एक गुणात्मक दृष्टिकोण से शुरू होती है। एक तरफ, यह प्रोटीन और एंटीबॉडी के विशिष्ट बंधन की डिग्री को अधिक सहजता से दिखा सकता है, और दूसरी ओर, यह मात्रात्मक परिणामों का समर्थन कर सकता है। क्योंकि इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री हिस्टोपैथोलॉजिकल स्लाइस पर एंटीजेनिक साइटों के लिए एंटीबॉडी को बांधकर प्रोटीन अभिव्यक्ति का पता लगाना है, हिस्टोपैथोलॉजिकल स्लाइस की तैयारी विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। अनुभाग बहुत मोटा होना आसान नहीं है। अनुभाग पूरा होने के बाद, ऊतक अनुभाग को बाहरी क्षति से बचने के लिए इसे बचाने के लिए देखभाल की जानी चाहिए; प्रसंस्करण से पहले पर्याप्त deparaffinization किया जाना चाहिए, और समय 2 घंटे से कम नहीं होना चाहिए; हल्के स्थितियों और एंटीजन को कम आकस्मिक क्षति के साथ एक साइट्रिक एसिड बफर चुनें मरम्मत करें, कैटालेज को हटा दें, एंटीजेनिक साइट को पूरी तरह से उजागर करें, और प्राथमिक एंटीबॉडी को साइट को पूरी तरह से फिट करें। उपरोक्त दो तरीके, आणविक जीव विज्ञान में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले पहचान विधियों के रूप में, एक-दूसरे के पूरक हैं और प्रोटीन विनियमन अनुसंधान के लिए तकनीकी सहायता प्रदान करते हैं।

इस अध्ययन ने हिप्पोकैम्पस घावों और मस्तिष्क में ए से संबंधित प्रोटीन की अभिव्यक्ति की जांच करने के लिए एचई और अन्य तरीकों का उपयोग किया। परिणामों से पता चला है कि के हस्तक्षेप के बादCistancheफेनिलिथेनॉइड , एडी मॉडल चूहों के मस्तिष्क में हिप्पोकैम्पस CA1 क्षेत्र की कोशिका आकृति विज्ञान अलग-अलग डिग्री में सुधार हुआ। Aπ1-42 और Aπ1-40 की अभिव्यक्ति का स्तर काफी नीचे-विनियमित था। इसके अलावा, यह पाया गया कि verbascoside हस्तक्षेप समूह का सुरक्षात्मक न्यूरॉन प्रभाव कुल की तुलना में बेहतर थाफेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्ससमूह। के कुल ग्लाइकोसाइड्सCistanche phenylethanoid glycosidesएडी मॉडल चूहों के मस्तिष्क क्षेत्र में रोग संबंधी परिवर्तनों में सुधार करने की महान क्षमता है और फिर एडी पर एक विरोधी प्रभाव खेलते हैं। कार्रवाई के विशिष्ट तंत्र को भविष्य में और अधिक अध्ययन करने की आवश्यकता है। यह अध्ययन के तंत्र पर अनुसंधान डेटा को पूरा करता हैCistancheए के परिप्रेक्ष्य से एडी को विरोध करना, और एक ही समय में प्रभावी घटकों या सक्रिय मोनोमर्स के तंत्र को और अधिक स्पष्ट करने के लिए अनुसंधान नींव रखता हैCistancheबाद की अवधि में एडी के खिलाफ।