भाग 3: हिप्पोकैम्पस में HDAC3 के डीएसेटाइलेज़ डोमेन के लिए विशिष्ट भूमिकाएँ और मेमोरी के गठन और विलुप्त होने में मेडियल प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स

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स्वीकृतियाँ

सांख्यिकीय विश्लेषण में मदद के लिए डॉ. नॉर्बर्ट जे. फोर्टिन का विशेष धन्यवाद।

फंडिंग स्रोत: इस काम को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑन ड्रग एब्यूज और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ मेंटल हेल्थ ग्रांट्स (DA025922, DA036984, MH101491) द्वारा MAW और NIDA और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑन एजिंग (NIA) ग्रांट्स (F32 DA043998 और T32 AG{{{{{} 6}}) से YA तक।

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व्हाइट एओ, क्रेमर ईए, लोपेज़ एजे, क्वापिस जेएल, दून जे, सलदाना डी, दावतोलहाग एमएफ, अलघबंद वाई, ब्लर्टन-जोन्स एम, मैथियोस डीपी, वुड एमए। BDNF नाभिक accumbens में BAF53b-निर्भर सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी और कोकीन से जुड़ी मेमोरी को बचाता है। नेट कम्यून। 2016; 7:11725. [पबमेड: 27226355]

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हाइलाइट

पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस में HDAC3 डीएसेटाइलेज़ गतिविधि को अवरुद्ध करने से दीर्घकालिक वस्तु स्थान स्मृति में वृद्धि हुई लेकिन कोकीन से जुड़ी स्मृति गठन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा। प्रीलिम्बिक कॉर्टेक्स में HDAC3 डीएसेटाइलेज़ डोमेन को ख़राब करने से कोकीन से जुड़ी स्मृति निर्माण पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा। इन्फ्रालिम्बिक कॉर्टेक्स में HDAC3 डीएसेटाइलेज़ गतिविधि को अवरुद्ध करने से विलुप्त होने पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा। पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस में HDAC3 डीएसेटाइलेज़ गतिविधि को बाधित करने के परिणामस्वरूप विलुप्त होने की सुविधा हुई।

आकृति 1।

प्रमुख नकारात्मक बिंदु उत्परिवर्ती वायरस (HDAC3 (Y298H) -v5 पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस में प्रभावी ढंग से व्यक्त करता है। (ए) वी 5 एपिटोप को बिंदु उत्परिवर्ती वायरस में जोड़ा गया था। (बी) प्रतिनिधि इम्यूनोफ्लोरेसेंस छवि में वी 5 एपिटोप टैग (हरा) की अभिव्यक्ति दिखा रही है AAV-HDAC3 (Y298H) -v5 के जलसेक के बाद पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस (DH)। AAV-EV नियंत्रण वायरस के साथ कोई V5 धुंधला नहीं देखा गया था। कोशिकाओं को DAPI (नीला) के साथ उलट दिया गया था। (C) DH में V5 mRNA काफी बढ़ गया था AAV-HDAC3(Y298H)-v5, AAV-EV n {{20}}, HDAC3(Y298H)-v5 n=4 से प्रभावित ऑफिसमाइस में भी काफी वृद्धि हुई थी AAV-EV नियंत्रण, AV-EV n=6, HDAC3 (Y298H)-v5 n=6 की तुलना में DH ऑफ़िस AAV-HDAC(Y298H)-v5 से प्रभावित है। *p <0.05।

चित्र 2।

ऑब्जेक्ट लोकेशन (OLM) के लिए DH एन्हांस्ड मेमोरी में HDAC3 गतिविधि को ब्लॉक करना, लेकिन ऑब्जेक्ट रिकग्निशन (ORM) के लिए नहीं। (ए) चूहे ने दो समान वस्तुओं वाले वातावरण में सबथ्रेशोल्ड प्रशिक्षण (3 मिनट) प्राप्त किया और 24 घंटे बाद एक अवधारण परीक्षण प्राप्त किया जिसमें एक वस्तु को एक नए स्थान पर ले जाया गया। योजनाबद्ध बी और सी के लिए विधियों का वर्णन करता है। (बी) चूहे दिए गए एएवी-एचडीएसी3 (वाई298एच)-वी5 ने ईवी नियंत्रण, एएवी-ईवी एन {{10 की तुलना में प्रशिक्षण के बाद उपन्यास वस्तु स्थान 24 घंटे के लिए एक महत्वपूर्ण प्राथमिकता दिखाई। }}, HDAC3(Y298H)-v5 n=6। (सी) समूह दो वस्तुओं के कुल अन्वेषण समय में भिन्न नहीं थे। (डी) चूहे ने दो समान वस्तुओं वाले वातावरण में सबथ्रेशोल्ड प्रशिक्षण (3 मिनट) प्राप्त किया और 24 घंटे बाद एक अवधारण परीक्षण प्राप्त किया जिसमें एक वस्तु को एक उपन्यास (ओआरएम), एएवी-ईवी एन=9 के साथ बदल दिया गया। HDAC3(Y298H)-v5 n=7। योजनाबद्ध ई और एफ के लिए विधियों का वर्णन करता है। (ई) न तो एएवी-ईवी नियंत्रण या एएवी-एचडीएसी3 (वाई298एच)-वी5 चूहों ने उपन्यास वस्तु के लिए महत्वपूर्ण वरीयता प्रदर्शित की। (एफ) समूह दो वस्तुओं के कुल अन्वेषण समय में भिन्न नहीं थे। * पी <>

चित्र तीन।

पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस में HDAC3 गतिविधि को अवरुद्ध करने से कोकीन-प्रेरित CPP मेमोरी के निर्माण पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है। (ए) कोकीन-सीपीपी प्रक्रिया की योजनाबद्ध। (बी) कोकीन- सीपीपी अभिव्यक्ति मतलब सीपीपी स्कोर (कोकीन-पेयर (सीएस प्लस) में बिताया गया समय माइनस सेलाइन-पेयर (सीएस−) ± सेमी) द्वारा दर्शाया गया है। 5 मिलीग्राम/किलोग्राम कोकीन कंडीशनिंग खुराक पर, AAV-HDAC3(Y298H)-v5 चूहों ने परीक्षण के बाद EV नियंत्रणों के समान CPP स्कोर प्रदर्शित किया, AAV-EV n=15, HDAC3(Y298H)-v5 n {{ 19}}.

चित्रा 4.

पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस में Hdac3 के फोकल समयुग्मजी जीन विलोपन का कोकीन-प्रेरित सीपीपी स्मृति के गठन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है। (ए) कोकीन-सीपीपी प्रक्रिया की योजनाबद्ध। (बी) कोकीन-सीपीपी अभिव्यक्ति मतलब सीपीपी स्कोर (कोकीन-पेयर (सीएस प्लस) में बिताया गया समय माइनस सेलाइन-पेयर (सीएस−) ± सेमी) द्वारा दर्शाया गया है। 5 मिलीग्राम/किलोग्राम कोकीन कंडीशनिंग खुराक पर, Hdac3flox/flox चूहों ने परीक्षण के बाद HDac3 प्लस / प्लस नियंत्रण के समान CPP स्कोर प्रदर्शित किया। (सी) एचडीएसी3 प्लस/प्लस और एचडीएसी3फ्लोक्स/फ्लोक्स चूहों में एएवी2.1 आरई के जलसेक के बाद पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस में एचडीएसी3 (हरा) की अभिव्यक्ति दिखाने वाली प्रतिनिधि इम्यूनोफ्लोरेसेंस छवि। कोशिकाओं को डीएपीआई (नीला) के साथ उलट दिया गया था। (डी) इम्यूनोस्टेनिंग की मात्रा ने पुष्टि की कि एचडीएसी3 प्लस / प्लस नियंत्रण, एचडीएसी3 प्लस / प्लस एन=12, एचडीएसी3फ्लोक्स/फ्लोक्स एन=11 की तुलना में एचडीएसी3फ्लोक्स/फ्लोक्स चूहों में एचडीएसी3 काफी कम हो गया था। *पी <>

चित्रा 5.

प्रीलिम्बिक कॉर्टेक्स (पीआरएल) में एचडीएसी3 गतिविधि को अवरुद्ध करने से कोकीन-प्रेरित सीपीपी मेमोरी के गठन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है। (ए) कोकीन-सीपीपी प्रक्रिया की योजनाबद्ध। (बी) कोकीन- सीपीपी अभिव्यक्ति मतलब सीपीपी स्कोर (कोकीन-पेयर (सीएस प्लस) में बिताया गया समय माइनस सेलाइन-पेयर (सीएस−) ± सेमी) द्वारा दर्शाया गया है। 5 मिलीग्राम/किलोग्राम कोकीन कंडीशनिंग खुराक पर, AAV-HDAC3(Y298H)-v5 चूहों ने परीक्षण के बाद EV नियंत्रणों के समान CPP स्कोर प्रदर्शित किया, AAV-EV n=12, HDAC3(Y298H)-v5 n {{ 19}}. (सी) एएवी-एचडीएसी3 (वाई298एच)-वी5 के पीआरएल को लक्षित करने के बाद वी5 एपिटोप टैग (हरा) की अभिव्यक्ति दिखाते हुए प्रतिनिधि इम्यूनोफ्लोरेसेंस छवि। AAV-EV नियंत्रण वायरस के साथ कोई V5 धुंधला नहीं देखा गया। कोशिकाओं को डीएपीआई (नीला) के साथ उलट दिया गया था और न्यूरॉन्स को न्यूरोट्रेस (लाल) के साथ उलट दिया गया था। V5 की अभिव्यक्ति काफी हद तक औसत दर्जे का प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स के प्रीलिम्बिक क्षेत्र तक ही सीमित थी। (डी) पीआरएल में लक्षित वायरल जलसेक। माउस एटलस छवियों के छायांकित क्षेत्र वायरल जलसेक के प्रतिनिधि विस्तार को दर्शाते हैं।

चित्र 6.

इन्फ्रालिम्बिक कॉर्टेक्स (IL) में HDAC3 गतिविधि को अवरुद्ध करने से कोकीन से प्रेरित CPP मेमोरी के विलुप्त होने पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है। (ए) कोकीन-सीपीपी प्रक्रिया की योजनाबद्ध। (बी) कोकीन- सीपीपी अभिव्यक्ति मतलब सीपीपी स्कोर (कोकीन-पेयर (सीएस प्लस) में बिताया गया समय माइनस सेलाइन-पेयर (सीएस−) ± सेमी) द्वारा दर्शाया गया है। जानवरों को शुरू में 20 मिलीग्राम/किलोग्राम कोकीन पर प्रशिक्षित किया गया था। इसके बाद, जानवरों को इंट्रा-आईएल एएवी-ईवी या एएवी-एचडीएसी3 (वाई298एच)-वी5 वायरल इन्फ्यूजन प्राप्त हुआ और विलुप्त होने की स्मृति की जांच की गई। AAV-HDAC3 (Y298H) -v5 चूहों ने परीक्षण के बाद 2-5, AAV-EV n=17, HDAC3 (Y298H) - v5 n=16 के दौरान EV नियंत्रणों के समान CPP स्कोर प्रदर्शित किया। (सी) आईएल को लक्षित करने वाले एएवी-एचडीएसी3 (वाई298एच)-वी5 के जलसेक के बाद वी5 एपिटोप टैग (हरा) की अभिव्यक्ति दिखाते हुए प्रतिनिधि इम्यूनोफ्लोरेसेंस छवि। AAV-EV नियंत्रण वायरस के साथ कोई V5 धुंधला नहीं देखा गया। कोशिकाओं को डीएपीआई (नीला) के साथ उलट दिया गया था और न्यूरॉन्स को न्यूरोट्रेस (लाल) के साथ उलट दिया गया था। V5 की अभिव्यक्ति काफी हद तक औसत दर्जे का प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स के इन्फ्रालिम्बिक क्षेत्र तक ही सीमित थी। (डी) आईएल में लक्षित वायरल जलसेक। माउस एटलस छवियों के छायांकित क्षेत्र वायरल जलसेक की प्रतिनिधि सीमा को दर्शाते हैं।