भागⅠकॉर्डिसेप्स मिलिटेरिस की नई खेती का उपयोग करके रक्त यूरिया नाइट्रोजन और सीरम क्रिएटिनिन में सुधार

अमूर्त

क्रोनिक किडनी डिजीज (सीकेडी) एक गंभीर सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्या है, जिसमें दुनिया भर के रोगियों और समाज दोनों के लिए भारी वित्तीय बोझ है। दुर्भाग्य से, अंत-चरण गुर्दे की बीमारी (ईएसआरडी) की प्रगति को रोकने या देरी करने के लिए वर्तमान में कोई प्रभावशाली उपचार नहीं हैं। पारंपरिक चीनी चिकित्सा पद्धतियों से पता चला है कि कॉर्डिसेप्स मिलिटरीज़ (सी. मिलिट्रीज़) मायसेलिया में ट्यूमररोधी, इम्यूनोमॉड्यूलेशन और हेपेटोप्रोटेक्शन सहित विभिन्न प्रकार के औषधीय रूप से उपयोगी गुण होते हैं। हालाँकि, CKD पर mycelial C. सेनाओं का प्रभाव स्पष्ट नहीं है। तरीके। यहां, हमने चार प्रकार के मीडिया का उपयोग करके सीकेडी के साथ चूहों पर सी। मिलिट्री मायसेलिया के प्रभावों की जांच की: एचकेएस, एचकेएस विथ विटामिन ए (एचकेएस प्लस ए), सीएम, और सीएम विथ विटामिन ए (सीएम प्लस ए)। परिणाम। .e 10वें दिन के परिणामों से पता चला कि एचकेएस (41 प्रतिशत), एचकेएस प्लस ए (41 प्रतिशत), और सीएम प्लस ए (34 प्रतिशत) समूहों की तुलना में रक्त यूरिया नाइट्रोजन (बीयूएन) का स्तर काफी कम था। संबंधित नियंत्रण समूह (नेफरेक्टोमी चूहों)। एचकेएस प्लस ए समूह में सीरम क्रिएटिनिन का ई स्तर 10वें दिन 35 प्रतिशत कम हो गया, जबकि एचकेएस और सीएम प्लस ए समूह में सीरम क्रिएटिनिन का स्तर 30वें दिन क्रमश: केवल 14 प्रतिशत और 13 प्रतिशत कम हुआ। एक साथ लिया गया, यह C. militaris mycelia के लिए चार नए मीडिया (HKS, HKS plus A, CM, and CM plus A medium) का उपयोग करने वाली पहली रिपोर्ट है। CKD पर mycelial C. सेनाओं का प्रत्येक माध्यम BUN, सीरम क्रिएटिनिन, शरीर के वजन, कुल प्रोटीन और यूरिक एसिड पर एक विशिष्ट प्रभाव प्रदर्शित करता है। निष्कर्ष। एक साथ लिया गया, सी। मिलिटेरिस मायसेलिया के लिए चार नए मीडिया (एचकेएस, एचकेएस प्लस ए, सीएम, और सीएम प्लस ए माध्यम) का उपयोग करने वाली यह पहली रिपोर्ट है। CKD पर mycelial C. सेनाओं का प्रत्येक माध्यम BUN, सीरम क्रिएटिनिन, शरीर के वजन, कुल प्रोटीन और यूरिक एसिड पर विशिष्ट प्रभाव प्रदर्शित करता है। हमने निष्कर्ष निकाला कि एचकेएस या सीएम प्लस ए माध्यम में सुसंस्कृत सी। मिलिटेरिस मायसेलिया के साथ उपचार संभावित रूप से सीकेडी के साथ चूहों में गुर्दे की कार्यप्रणाली को बिगड़ने से रोक सकता है।

कीवर्ड

क्रोनिक किडनी डिजीज (CKD), कॉर्डिसेप्स साइनेंसिस, माइसेलियम, ब्लड यूरिया नाइट्रोजन (BUN), सीरम क्रिएटिनिन,धनिया लाभ.

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परिचय

क्रोनिक किडनी रोग (सीकेडी) एक प्रचलित वैश्विक स्वास्थ्य समस्या है [1]। सीकेडी गुर्दे की संरचना और कार्य को प्रभावित करने वाले विषम विकारों के लिए एक सामान्य शब्द है [2]। सीकेडी के मरीजों में एंड-स्टेज रीनल डिजीज (ESRD) [3, 4] का खतरा बढ़ जाता है। मौजूदा फार्माकोलॉजिकल एजेंट सीकेडी उपचार से संबंधित जटिलताओं पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जैसे कि हाइपरलिपिडेमिया, मधुमेह और उच्च रक्तचाप, विशेष रूप से सीकेडी का इलाज करने के बजाय [5-8], गुर्दे की सुरक्षा के अध्ययन को एक उभरता हुआ चिकित्सा विज्ञान बनाते हैं। पिछले अध्ययनों ने होमोडोमैन-इंटरेक्टिंग प्रोटीन किनेज 2 (HIPK2) पर ध्यान केंद्रित किया है क्योंकि यह ट्यूबलर चोट और फाइब्रोसिस [9, 10] में शामिल जीन अभिव्यक्ति का एक ट्रांसक्रिप्शनल रेगुलेटर है; हालाँकि, विशिष्ट HIPK2 अवरोधक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नहीं हैं। इसके अलावा, रेनिन-एंजियोटेंसिन-एल्डोस्टेरोन प्रणाली को अवरुद्ध करने से हाइपरक्लेमिया प्रगति और पुनरावृत्ति दर [11, 12] दोनों के जोखिम को कम करने के लिए दिखाया गया है। हालांकि रेनिन-इनहिबिटिंग ड्रग एलिसिरिन को पहले एंजियोटेंसिन-कनवर्टिंग एंजाइम इनहिबिटर्स या एंजियोटेंसिन रिसेप्टर ब्लॉकर्स के साथ नियमित रूप से प्रशासित किया गया है, लेकिन अब इसके गंभीर दुष्प्रभावों के कारण इसे अधिक रूढ़िवादी रूप से उपयोग किया जा रहा है [13]।

यह बताया गया है कि क्रोनिक किडनी रोग के जोखिम कारक उम्र, नस्ल, मोटापा, मधुमेह, जन्म के समय कम वजन, उच्च रक्तचाप और पारिवारिक इतिहास थे [14]। सीकेडी रुग्णता और मृत्यु दर का जोखिम काफी अधिक रहता है, सीकेडी रोगियों को आमतौर पर गुर्दे की रिप्लेसमेंट थेरेपी, जैसे डायलिसिस और किडनी प्रत्यारोपण प्राप्त होती है। .us, उपन्यास उपचार विकसित किया जाना चाहिए। हाल के वर्षों में, हर्बल उपचारों ने सीकेडी [15, 16] के लिए एक वैकल्पिक उपचार विकल्प प्रदान किया है। इसके अलावा, कई प्रकार के शोधों से पता चला है कि उचित चीनी हर्बल दवाओं के नुस्खों का सीकेडी पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है, जो सीकेडी के रोगियों में ईएसआरडी के जोखिम को काफी कम कर सकता है और सीकेडी के रोगियों की दीर्घकालिक जीवित रहने की दर में सुधार कर सकता है [17]। उदाहरण के लिए, किडनी की बीमारियों पर रेडिक्स एस्ट्रागली, रुम ऑफिसिनेल, पैनाक्स जिनसेंग और लाइकोपस ल्यूसिडस सहित कई जड़ी-बूटियों की प्रभावकारिता की जांच की गई है [18-21]। कुछ जड़ी-बूटियों ने प्रोटीनमेह को कम करने या सीरम एल्बुमिन को बढ़ाने में आशाजनक परिणाम दिखाए हैं। हालांकि, अन्य में जहरीले तत्व होते हैं, जैसे एरिस्टोलोचिक एसिड या भारी धातुएं, जो गुर्दे के कार्य पर प्रतिकूल प्रभाव डाल सकती हैं और नेफ्रोपैथी [22] को प्रेरित कर सकती हैं। हालांकि कुछ विकासशील देशों में उनका अक्सर उपयोग किया जाता रहा है, लेकिन उनकी प्रभावकारिता की रिपोर्ट विवादास्पद बनी हुई है। इसलिए, सीकेडी के इलाज के लिए एक प्राकृतिक उत्पाद से प्राप्त एक प्रभावशाली यौगिक विकसित करना एक तत्काल चिंता का विषय है।

Cordyceps कवक परिवार से संबंधित है और एक प्रकार की पारंपरिक चीनी दवा है जिसमें परजीवी कीट लार्वा बढ़ते हैं और धीरे-धीरे एक परिपक्व फलने वाले शरीर में बदल जाते हैं। Cordyceps sinensis (C. sinensis) और Cordyceps militaries (C. militaries) दो प्रसिद्ध Cordyceps प्रजातियाँ हैं। कई वर्षों तक, सी. साइनेंसिस का उपयोग थकान, गुर्दे और फुफ्फुसीय शिथिलता, हाइपरग्लेसेमिया, हाइपरलिपिडेमिया और अतालता [23] के इलाज के लिए किया गया था, और सीकेडी रोगियों और गुर्दा प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं में इसके प्रभावों का अध्ययन किया गया है [24-26]। आम तौर पर, सी। मिलिटेरिस बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए अपेक्षाकृत अनुकूल है [27] और दोनों विविध और विशिष्ट औषधीय गुणों [28-30] को प्रदर्शित करता है। इसके अलावा, हमारे समूह द्वारा किए गए एक पिछले अध्ययन ने सी। मिलिटेरिस के एंटीकैंसर कार्यों की जांच की और प्रदर्शित किया कि इसका माइसेलियल किण्वन कोशिका चक्र को रोकने के लिए माइटोजेन-एक्टिवेटेड प्रोटीन किनेसिस (एमएपीके) सिग्नल पाथवे को नियंत्रित कर सकता है, क्रोमोसोमल डीएनए ब्रेकडाउन को उत्तेजित कर सकता है, और अंततः सुसंस्कृत ग्लियोब्लास्टोमा कोशिकाओं [31] की एपोप्टोटिक और ऑटोफैजिक दोनों तरह की मृत्यु का कारण बनता है। इसलिए, इस अध्ययन में सी. मिलिटेरिस को इसके पुनर्संरक्षी प्रभावों के लिए नियोजित किया जाएगा।

Mycelial C. militaris को हाल ही में एशिया में एक लोकप्रिय कार्यात्मक भोजन के रूप में विकसित किया गया था। सी। मिलिटेरिस फ्रूटिंग बॉडी के अर्क उप-कुल नेफरेक्टोमी [32] द्वारा प्रेरित गुर्दे की खराबी की प्रगति में काफी देरी कर सकते हैं। सीकेडी पर सी. मिलिटेरिस मायसेलिया के प्रभाव पर अध्ययन, हालांकि, दुर्लभ हैं। .is अध्ययन हमारी परिकल्पना का परीक्षण करेगा कि mycelial C. militaris संभावित रूप से CKD के साथ चूहों में गुर्दे के कार्य में गिरावट को रोक सकता है। Mycelial C. सेनाओं को इनक्यूबेट करने के लिए चार प्रकार के मीडिया को डिज़ाइन और नियोजित किया जाएगा: (i) HKS, (ii) HKS प्लस A, (iii) CM, और (iv) CM प्लस A. 30 दिनों के लिए, उपचार समूहों में चूहों चार अलग-अलग मीडिया में से एक में सुसंस्कृत सी। मिलिटेरिस मायसेलिया के मौखिक गैवेज द्वारा दैनिक प्रशासन प्राप्त होगा, जबकि नकली नियंत्रण (सी) और नेफरेक्टोमी नियंत्रण (एनएक्स) समूहों में चूहों को आसुत जल प्राप्त होगा। इन परीक्षणों से कार्यात्मक भोजन के रूप में mycelial C. militaris की सुरक्षा स्पष्ट होने की उम्मीद है।

सिस्टैंच ट्यूबलोसा

सामग्री और तरीके

1. सामग्री।

सी। मिलिटेरिस मायसेलिया (BCRC 32219) को खाद्य उद्योग अनुसंधान और विकास संस्थान (Hsinchu, ताइवान) में बायोरिसोर्स कलेक्शन एंड रिसर्च सेंटर से खरीदा गया था। जेटी बेकर (ईयू) से ग्लूकोज खरीदा गया था। माल्ट एक्सट्रैक्ट, पेप्टोन और यीस्ट एक्सट्रैक्ट बेक्टन डिकिंसन (फ्रैंकलिन लेक, एनजे, यूएसए) से खरीदे गए थे। विटामिन ए को सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदा गया था और अगर को क्रमशः हाई स्टैंडर्ड एंटरप्राइज कं, लिमिटेड (ताइवान) से खरीदा गया था। गुर्दे की कार्यप्रणाली का पता लगाने के लिए बायोकेमिकल परख किट अर्करे (क्योटो, जापान) से प्राप्त की गई थी।

2. कवक मीडिया तैयारी।

Mycelial C. militaris को चार प्रकार के मीडिया में इनक्यूबेट किया गया था, अर्थात् CM, CM प्लस A, HKS, और HKS प्लस A. e CM माध्यम में 2 प्रतिशत माल्ट एक्सट्रैक्ट, 2 प्रतिशत अगर, 0.1 प्रतिशत पेप्टोन, और 2 प्रतिशत ग्लूकोज [33]। .ई एचकेएस माध्यम प्रो. हुआंग केंग-शियांग द्वारा तैयार किए गए माध्यम का एक संशोधन था और इसमें 2 प्रतिशत माल्ट अर्क, 2 प्रतिशत अगर, 0.2 प्रतिशत पेप्टोन, और 0.2 प्रतिशत खमीर का अर्क शामिल था। . ई सीएम और एचकेएस मीडिया पेप्टोन और खमीर निकालने की सांद्रता में भिन्न थे। ई एचकेएस प्लस ए और सीएम प्लस ए मीडिया प्रत्येक में बेस माध्यम में अतिरिक्त 1 प्रतिशत विटामिन ए होता है। A 0.5 × 0.5 सेमी वर्ग सी। मिलिटेरिस मायसेलियम को काटकर प्रत्येक प्लेट पर प्रत्यारोपित किया गया और 25 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया। 30 दिनों के लिए अलग-अलग मीडिया में सी। मिलिटेरिस के सुसंस्कृत होने के बाद, फंगल मायसेलिया को चाकू का उपयोग करके ठोस माध्यम की सतह से सावधानीपूर्वक हटा दिया गया था। एकत्र किए गए फंगल मायसेलिया पाउडर को 48 घंटे के लिए -54 डिग्री पर वैक्यूम में फ्रीज-ड्राय (EYELA FDU-1100) किया गया था। .e फ्रीज-सूखे सी। मिलिटेरिस मायसेलिया पाउडर को उपयोग करने तक -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

3. सीकेडी चूहे मॉडल निर्माण।

पांच-छठा नेफरेक्टोमी सबसे स्थापित पुरानी प्रक्रिया थी जो वृक्क द्रव्यमान के नुकसान के बाद प्रगतिशील गुर्दे की विफलता की नकल करती है। ई सीकेडी चूहों को दो-चरण, पांच-छठे नेफरेक्टोमी के बाद स्थापित किया गया था जैसा कि पहले बताया गया है [34, 35]। संक्षेप में, बायीं किडनी को उजागर किया गया और ऊपरी और निचले एक तिहाई ध्रुवों पर काट दिया गया। बाएं गुर्दे की गुर्दे की धमनी की 2/3 अतिरिक्त शाखाओं को लिगेट किया गया और उसके बाद एक सप्ताह के बाद पूरी तरह से सही नेफरेक्टोमी किया गया। यूरेमिया प्रेरित होने से कम से कम दो सप्ताह पहले जानवरों को सर्जरी के बाद उनके पिंजरों में वापस कर दिया गया था। ई-प्रक्रियाओं को आई-शॉ विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (अनुमोदन संख्या: IACUC-ISU- 101025) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

4. प्रायोगिक प्रक्रिया।

सी। मिलिटेरिस मायसेलिया के फ्रीज-सूखे पाउडर को कमरे के तापमान पर आसुत जल (10 मिलीग्राम/एमएल) में भिगोया गया था। दूसरे नेफरेक्टोमी के दो सप्ताह बाद, चूहों को बेतरतीब ढंग से उपचार समूहों (n=4 से 6 प्रति समूह) में विभाजित किया गया और चार प्रकार के सी। मिलिटेरिस मायसेलिया समाधानों में से एक के साथ इलाज किया गया, एचकेएस, एचकेएस प्लस ए में इनक्यूबेट किया गया। , सीएम, या सीएम प्लस ए माध्यम, लगातार 30 दिनों तक मौखिक रूप से। शम समूह और एनएक्स चूहों को सी। मिलिटेरिस मायसेलिया के बिना आसुत जल के बराबर मात्रा में प्रशासित किया गया था। शरीर के वजन को मापा गया और क्रमशः 1, 10 और 30 दिनों में रक्त के नमूने एकत्र किए गए। उपचार की अवधि के अंत में, CO2 का उपयोग करके चूहों की बलि दी गई। ई किडनी को विच्छेदित किया गया और फॉस्फेट-बफर खारा से धोया गया और बाद के हिस्टोलॉजिकल प्रसंस्करण के लिए 10 प्रतिशत तटस्थ बफर फॉर्मेलिन में रखा गया। रक्त के नमूने पेरिओरिबिटल शिरापरक साइनस से एकत्र किए गए थे। रक्त यूरिया नाइट्रोजन (बीयूएन), सीरम क्रिएटिनिन, कुल प्रोटीन, और यूरिक एसिड को निर्माता के निर्देशों (अर्करी, इंक, क्योटो, इंक। जापान)।

मानकीकृत सिस्टंच

5. पशु आहार।

इंस्टीट्यूट ऑफ कैंसर रिसर्च पुरुष चूहों (लगभग 30 ग्राम) की आपूर्ति BioLASCO ताइवान कं, लिमिटेड द्वारा की गई थी और 12-घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र के साथ 22 ± 1 डिग्री के निरंतर तापमान पर मानक पिंजरों में रखा गया था। जानवरों को नियमित माउस चाउ और नल का पानी एड लिबिटम खिलाया गया। इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए जानवरों को प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए एनआईएच गाइड द्वारा रखा गया था और उनकी देखभाल की गई थी।

6. रक्त के नमूनों का जैव रासायनिक विश्लेषण।

रक्त के नमूने पेरिओरिबिटल शिरापरक साइनस से एकत्र किए गए थे। प्लाज्मा के नमूनों को 12, 000 आरपीएम पर 10 मिनट के लिए 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया और विश्लेषण से पहले -20 डिग्री पर संग्रहित किया गया। रक्त यूरिया नाइट्रोजन (BUN), सीरम क्रिएटिनिन, कुल प्रोटीन, और यूरिक एसिड को निर्माता के निर्देशों (Arkary, Inc., Kyoto, जापान)।

7. रीनल हिस्टोलॉजिकल एनालिसिस।

चूहों के गुर्दे पैराफिन ब्लॉकों में जड़े हुए थे, 3-माइक्रोन-मोटी वर्गों में विच्छेदित थे, और मानक प्रक्रिया का पालन करते हुए हैरी के हेमटॉक्सिलिन-एओसिन (एचई) दाग के साथ संसाधित किए गए थे। ई गुर्दे ग्लोमेरुली और नलिकाओं की जांच की गई और भविष्य के विश्लेषण के लिए तस्वीरें खींची गईं। एक माइक्रोस्कोप (DP72, ओलंपस, सेंटर वैली, पीए, यूएसए) से जुड़े एक रंगीन वीडियो कैमरा (VKC150, हिताची, टोक्यो, जापान) का उपयोग करके छवियों को कैप्चर किया गया और एक अनुभवी रोगविज्ञानी द्वारा नेत्रहीन विश्लेषण किया गया। इसका मतलब है कि ग्लोमेर्युलर क्रॉस-सेक्शनल एरिया लगभग 8 से 15 अलग-अलग ग्लोमेरुली के माध्य क्षेत्र की गणना करके प्रोग्राम इमेज जे का उपयोग करके प्राप्त किया गया था।

8. सांख्यिकीय विश्लेषण।

सभी डेटा माध्य के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं- ± माध्य की मानक त्रुटि (n=4 से 6 प्रति समूह)। बोनफेरोनी पोस्ट हॉक टेस्ट (सिग्माप्लॉट संस्करण 1 0। 0, सैन जोस, सीए, यूएसए) के बाद विचरण के दो-तरफ़ा विश्लेषण का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। पी <0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

सिस्टैंच का अर्क

संदर्भ

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[30] एच.-जे. पार्क, "अंकुरित सोयाबीन पर उगाए गए कॉर्डीसेप्स मिलिटरीज का इथेनॉल निकालने 2, 4-डाइनिट्रोफेनोल-फ्लोरोबेंजीन-प्रेरित एलर्जिक संपर्क त्वचा रोग को रोकता है," जर्नल ऑफ फंक्शनल फूड्स, वॉल्यूम। 17, पीपी। 938–947, 2015।

[31] सी.-एच. यांग, वाई.-एच. काओ, के.एस. हुआंग, सी.वाई. वांग, और एल.-डब्ल्यू। लिन, "कॉर्डिसेप्स मिलिटेरिस और मायसेलियल किण्वन प्रेरित एपोप्टोसिस और मानव ग्लियोब्लास्टोमा कोशिकाओं की ऑटोफैगी," सेल डेथ एंड डिजीज, वॉल्यूम। 3, नहीं। 11, पृ. ई431, 2012।

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चिह-हुई यांग, 1,2,3 वेन-शुओ कुओ, 4 जून-शेंगवांग, 2यी-पिंग हिसियांग, 3,5यू-मेई लिन, 1,6 यी-टिंग वांग, 1,6 फैन-हसन त्साई, 6 चुन- टिंग ली, 6,7 जिउन-हुआ चाउ, 1 हुई-या चांग, ​​1 फेफड़े-शुओ वांग, 6,8 शू-ची वांग, 6,9 और केंग-शियांग हुआंग 6

1 जैविक विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग, आई-शो विश्वविद्यालय, काऊशुंग, ताइवान

2 ताइवान इंस्ट्रूमेंट रिसर्च इंस्टीट्यूट, नेशनल एप्लाइड रिसर्च लेबोरेटरीज, सिंचु, ताइवान

ई-दा अस्पताल, काऊशुंग, ताइवान का 3 फार्मेसी विभाग

4 स्कूल ऑफ केमिस्ट्री एंड मैटेरियल्स साइंस, नानजिंग सूचना विज्ञान और प्रौद्योगिकी विश्वविद्यालय, नानजिंग, चीन

5 बायोटेक्नोलॉजी और केमिकल इंजीनियरिंग विभाग, आई-शो यूनिवर्सिटी, काऊशुंग, ताइवान

6 स्कूल ऑफ चाइनीज मेडिसिन फॉर पोस्ट-बैकलॉरीएट, आई-शो यूनिवर्सिटी, काऊशुंग, ताइवान

7 एमुलेट चीनी चिकित्सा क्लिनिक, ताइपेई, ताइवान

8 चीनी चिकित्सा विभाग, सिन-लाऊ अस्पताल, ताइनान, ताइवान

9 स्कूल ऑफ मेडिसिन फॉर इंटरनेशनल स्टूडेंट्स, आई-शो यूनिवर्सिटी, काऊशुंग, ताइवान