भाग : PKD1 की अधिकता पॉलीसिस्टिक किडनी रोग का कारण बनती है

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कैरोलीन थिविर्ज, अल्मीरा कुर्बेगोविच, मार्टिन कुइलार्ड, रिचर्ड गिलाउम, ओलिवियर कोटे और मैरी ट्रुडेल

अंतर्निहित रोगजनक तंत्रऑटोसोमल डोमिनेंट पॉलीसिस्टिक किडनी रोग(ADPKD) स्पष्ट किया जाना बाकी है। जबकि इस बात के प्रमाण हैं कि PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन अगुणता और हेटेरोज़ायोसिटी की हानि चूहों में पुटी गठन का कारण बन सकती है, PKD1 का विरोधाभासी रूप से उच्च स्तर (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1ADPKD (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) रोगियों के गुर्दे में अभिव्यक्ति का पता चला है। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) फ़ंक्शन का लाभ एक रोगजनक प्रक्रिया हो सकती है, एक PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीवाणु कृत्रिम गुणसूत्र PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1)-BAC) को एक सतत PKD1 को लक्षित करने के लिए सजातीय पुनर्संयोजन द्वारा संशोधित किया गया था (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) वयस्क गुर्दे के लिए अधिमानतः अभिव्यक्ति। कई ट्रांसजेनिक लाइनें उत्पन्न हुईं जो विशेष रूप से PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) गुर्दे में ट्रांसजीन 2- से 15-PKD1 से अधिक गुना (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग1) अंतर्जात स्तर। सभी ट्रांसजेनिक चूहों ने पुनरुत्पादित रूप से ट्यूबलर और ग्लोमेरुलर सिस्ट और गुर्दे की अपर्याप्तता विकसित की और गुर्दे की विफलता से मृत्यु हो गई। यह मॉडल दर्शाता है कि जंगली-प्रकार PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) अकेले मानव ADPKD जैसा सिस्टोजेनेसिस को ट्रिगर करने के लिए पर्याप्त है (ऑटोसोमल डोमिनेंटपॉलीसिस्टिक किडनी रोग) हमारे परिणामों ने सभी ट्रांसजेनिक लाइनों से चूहों में एक हड़ताली बढ़ी हुई वृक्क c-Myc अभिव्यक्ति को भी उजागर किया, यह दर्शाता है कि PKD1 के विवो डाउनस्ट्रीम इफ़ेक्टर में c-Myc एक महत्वपूर्ण है।पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) आणविक मार्ग। इस अध्ययन ने न केवल एक अमूल्य और पहला PKD（पॉलीसिस्टिक किडनी रोगआणविक रोगजनन और उपचारों का मूल्यांकन करने के लिए मॉडल, लेकिन यह भी सबूत प्रदान करता है कि कार्य का लाभ ADPKD में एक रोगजनक तंत्र हो सकता है (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग).

गुर्दे की बीमारी का इलाज करने वाले सिस्टांचे

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परिणाम

PKD1 का उत्पादन (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -एसी-बीएसी सजातीय पुनर्संयोजन द्वारा। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1एडीपीकेडी (ऑटोसोमल डोमिनेंट पॉलीसिस्टिक किडनी डिजीज) फेनोटाइप का उत्पादन करने के लिए अकेले फ़ंक्शन का लाभ पर्याप्त है, हमने पहले एक जीनोमिक क्लोन को अलग किया जिसमें संपूर्ण पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) एक बीएसी वेक्टर 129/एसवी पुस्तकालय में जीन। इस पुस्तकालय को पीसीआर द्वारा PKD1 के लिए प्राइमरों के दो सेटों के साथ प्रदर्शित किया गया था (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन जो एक्सॉन 1 को 5'छोर पर फैलाता है और 39 से 40 को 3'एंड (चित्र 1) की ओर बढ़ाता है। PKD1 के लिए एक सकारात्मक बीएसी क्लोन (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन की पहचान की गई थी जिसमें संपूर्ण आसन्न Tsc2 जीन शरीर शामिल था। PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) सम्मिलन को विस्तार से यह सुनिश्चित करने के लिए चित्रित किया गया था कि जीनोमिक संरचना अंतर्जात PKD1 से मेल खाती है (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग1) 129/एसवी माउस स्ट्रेन का जीन जिसमें से इंसर्ट व्युत्पन्न किया गया था और सी57बीएल/6जे ​​इनब्रेड स्ट्रेन से। PKD1 के जीनोमिक मानचित्र (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) बीएसी में और दक्षिणी धब्बा विश्लेषण द्वारा इन इनब्रेड स्ट्रेन में, चार प्रतिबंध एंजाइम पाचन और सात जांच पूरे PKD1 को कवर करते हैं (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन, पुनर्व्यवस्था के बिना किसी सबूत के समान दिखाई दिया (चित्र 1)। इस बीएसी में एक -121-kb इंसर्ट शामिल है जिसमें ~37 kb अपस्ट्रीम और -39 PKD1 के डाउनस्ट्रीम अनुक्रम का kb शामिल है (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग1) वैद्युतकणसंचलन और अनुक्रमण द्वारा निर्धारित जीन।

अंजीर। 2.SBPkdlrAc निर्माण और ट्रांसजेनिक चूहों का उत्पादन। (ए) दो संशोधनों को पेश करने के लिए murine Pkdl-BAC पर क्रमिक समरूप पुनर्संयोजन कार्यक्रम किए गए: SB नियामक तत्व Pkdl दीक्षा कोडन के तुरंत ऊपर डाले गए और EcoRI (RI *) का एक मूक बिंदु उत्परिवर्तन एक्सॉन (पूर्व) में पेश किया गया। 10. बीएसी पुनर्संयोजन वेक्टर में प्रतिकृति की एक R6Ky उत्पत्ति, एक एम्पीसिलीन-प्रतिरोधी जीन, एक SacB जीन, एक RecA जीन और एक अद्वितीय स्माल क्लोनिंग साइट होती है जिसमें "SB" नियामक तत्व (या एक्सॉन 10 साइलेंट पॉइंट म्यूटेशन) क्लोन किए गए थे। फ़्लैंकिंग Pkd1 जीन आर्म्स के साथ। BAC पुनर्संयोजन वेक्टर को E, कोलाई (DH10B) कोशिकाओं में इलेक्ट्रोपोरेट किया गया था जिसमें Pkdl-BAC जंगली प्रकार था, और चयन के बाद BAC संयोग का उत्पादन करने के लिए दो Pkd1 हथियारों में से एक के माध्यम से पहली समरूप पुनर्संयोजन घटना हुई। बीएसी सहसंयोजन के पुनर्संयोजन वेक्टर और डुप्लिकेट किए गए Pkdl क्षेत्रों को दूसरे चयन चरण में समाप्त कर दिया गया था। हल किए गए Pkdl-BACs या तो जंगली प्रकार में वापस आ सकते हैं या इच्छित संशोधन शामिल कर सकते हैं। इसके बाद नए संशोधित बीएसी में बाद के समरूप पुनर्संयोजन को पेश किया जा सकता है। (बी) (एसबीपीकेडी एल-एट्रांसजेनिक एमएक्ससी के डीएनए में एसबीपीकेडी एल-एट्रान्सजेनिक एमएक्ससी को एनकजेड बीवी सो थर्न ब्लॉट था। एवीआईसीटीओआईडी1ईसीलॉन रैखिक टुकड़ों के कारण सिर से सिर में ट्रांसजीन का सम्मिलन हुआ। सिर। -टू-टेल, और/या टेल-टू-टेल ओरिएंटेशन। 5'एंड का विश्लेषण हिंद III के साथ जीनोमिक डीएनए के पाचन द्वारा किया गया था और विशिष्ट ट्रांसजीन एसबी जांच (बाएं पैनल) के साथ हाइब्रिड किया गया था। सभी तीन ट्रांसजेनिक माउस लाइनों ने अपेक्षित 10 उत्पन्न किए। .9-केबी बैंड हेड-टू-टेल इंसर्शन के लिए; लाइन 39 में देखा गया अतिरिक्त बैंड एसबी और माउस जीनोम के बीच एक जंक्शन टुकड़े का प्रतिनिधित्व करता है। ट्रांसजीन की आंतरिक अखंडता की निगरानी कई प्रतिबंध एंजाइम पाचन द्वारा की गई थी, और इको आरआई के साथ पचने वाले जीनोमिक डीएनए का एक प्रतिनिधि धब्बा और Pkdl जांच (एक्सॉन 7-15) के साथ संकरणित दिखाया गया है (मध्य पैनल)।

यह एसबीपीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -बीएसी क्लोन को ई. कोलाई में दो क्रमिक समजातीय पुनर्संयोजन घटनाओं द्वारा संशोधित किया गया था। PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) जीन को सीडीएनए मानचित्र पर 2355 की स्थिति में एक उपन्यास इकोआरआई साइट बनाने के लिए एक न्यूक्लियोटाइड (जी से ए) को प्रतिस्थापित करके एक्सॉन 10 में टैग किया गया था। यह मूक बिंदु उत्परिवर्तन PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) अंतर्जात मूल के बीएसी के जीन और प्रतिलेख। इसके अलावा, हमने PKD1 के 5'नियामक तत्वों को बदल दिया है (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -बीएसी जीन एसबीएम (सी-माइसी से जुड़ा हुआ) या एसबीएफ से सी-फॉस से जुड़े पहले से पहचाने गए "एसबी" रीनल एपिथेलियल-विशिष्ट तत्वों का लाभ उठाकर किडनी को अभिव्यक्ति को प्रतिबंधित करने के लिए ट्रांस-जीन का निर्माण करता है (36, 38)(चित्र 2ए)।

यह नया SBPkdlrAG-BAC NotL के साथ पच गया था, जो SB तत्वों के तुरंत ऊपर स्थित एक अनूठी साइट है, और Tsc2 जीन बॉडी के भीतर ClaI, Tsc2 नियामक तत्वों और जीन बॉडी के 5'आधे हिस्से को T'sc2 की कमी सुनिश्चित करने के लिए छोटा करता है। सभी ऊतकों में बहिर्जात अभिव्यक्ति और प्रोकैरियोटिक बीएसी वेक्टर अनुक्रम (छवि 1 और 2) को हटाने के लिए। यह 70-kb NotI-ClaI रेखीयकृत टुकड़ा पृथक, शुद्ध किया गया था। और oocyte microinjection के लिए परिमाणित (36)।

सिस्टांचे लाभ: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

SBPkdl-ac ट्रांसजेनिक चूहों का उत्पादन और विश्लेषण। SBPkdlrAc ट्रांसजीन की कई प्रतियां ले जाने वाले चार ट्रांसजेनिक संस्थापकों ने लगातार PKD विकसित किया। चार एसबीपीकेडी1 से (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) दक्षिणी विश्लेषण द्वारा निर्धारित आरएसी संस्थापक चूहों, तीन एसबीपीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) TAG ट्रांसजेनिक लाइनों को ट्रांसजीन की दो से नौ प्रतियों के साथ स्थापित किया गया था (चित्र 2 बी)। इन पंक्तियों में ट्रांसजीन अखंडता की विशेषता की निगरानी 5', आंतरिक और 3' जांच के साथ की गई थी जैसा कि Fig.2b में प्रतिनिधि उदाहरणों द्वारा दिखाया गया है। 5' "SB" जांच के साथ प्रकट हुई ट्रांसजेनिक लाइनें SBPkdlrAc के अनुरूप 10.9 kb पर एक बैंड की जांच करती हैं। ट्रांस-जीन को हेड-टू-टेल ओरिएंटेशन में एकीकृत किया जा रहा है और 3 'जांच के साथ 7. 1- kb बैंड (Fig.2b) का पता चला है। इसके अलावा, आंतरिक जांच में ट्रांसजीन के 9.4-kb अंतर्जात PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) बैंड के साथ-साथ 6.9-kb और 2.5-kb बैंड का पता चला। एक्सॉन 10 (छवि 2 बी) में इको आरआई सम्मिलन साइट के कारण। इन चूहों में जीनोमिक अतिव्यापी संरचना विश्लेषण के आधार पर ट्रांसजीन की पूरी प्रतियां थीं।

पीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) वयस्क SBPkdl-Ac ट्रांसजेनिक चूहों में कार्य का लाभ। एसबीपीकेडीएल-एजी की अभिव्यक्ति। ट्रांसजीन और PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) विभिन्न अंगों में जीन की जांच की गई। उत्तरी धब्बा विश्लेषण (छवि 3 ए) द्वारा ट्रांसजीन और / या अंतर्जात जीन से प्रतिलेख स्तर की मात्रा का ठहराव किया गया था। जैसा कि अपेक्षित था, ट्रांसजीन और अंतर्जात जीन टेप समान लंबाई (14.2 kb) के थे। नियंत्रण GAPDH अभिव्यक्ति के आधार पर, सभी SBPkd 1 से गुर्दे एक माउस लाइनों ने सामान्य PKD1 की तुलना में लगातार प्रतिलेख अभिव्यक्ति में वृद्धि की थी (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) समान उम्र के वयस्क गुर्दे (n=3) में स्तर। विभिन्न ट्रांसजेनिक लाइनों के लिए वृक्क ट्रांसजीन और अंतर्जात अभिव्यक्ति ने नियंत्रण वृक्क अंतर्जात PKD1 के ऊपर 2- से 15- गुना की सीमा प्रदर्शित की(पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1)स्तर (चित्र 3 ए)। विशेष रूप से, ट्रांसजेनिक लाइन 3 9 (एन=4) ने उच्च पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) 3 (n=3) और 41(n=4) की तुलना में स्तर। इसके अलावा, PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1उत्तरी धब्बा विश्लेषण द्वारा मापा गया अभिव्यक्ति स्तर वास्तविक समय पीसीआर द्वारा एक्सॉन 1 और 2 (छवि 3 बी) में प्राइमरों का उपयोग करके प्राप्त किए गए लोगों के साथ सहसंबद्ध है।

अंजीर.3.SBPkdlrA चूहों का गुर्दे की अभिव्यक्ति विश्लेषण। (ए) उत्तरी सोख्ता द्वारा तीन ट्रांसजेनिक लाइनों से गुर्दे में Pkd1 अंतर्जात (एंडो) और SBPkdlrA ट्रांसजीन (Tg) लिपियों का अभिव्यक्ति विश्लेषण। प्रत्येक ट्रांसजेनिक लाइन से दो नमूनों, 3,39, और 41 की तुलना एक ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि से सामान्य नियंत्रण आयु-मिलान चूहों के अंतर्जात वृक्क Pkdl प्रतिलेख से की गई थी (C5BI 6I × CBA / DE, किडनी आरएनए नमूने ट्रांसजेनिक चूहों से पहले प्राप्त किए गए थे। अंत-चरण गुर्दे की बीमारी। एंडो और टीजी से टेप दोनों -14 .2 केबी लंबाई में हैं। गैर-ट्रांसजेनिक नियंत्रणों के सापेक्ष सभी ट्रांसजेनिक चूहों के गुर्दे में टेप का एक व्यवस्थित ओवरएक्प्रेशन देखा गया था। GAPDH का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था लोड करने के लिए। इन ट्रांसजेनिक चूहों में गुर्दे की अभिव्यक्ति की मात्रा 2- से 15- तक थी, नियंत्रण चूहों से Pkd1 अंतर्जात स्तरों के सापेक्ष गुना 1. (बी) SBPkdl- का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। ट्रांसजीन और प्राइमर थे वास्तविक समय पीसीआर और अर्धवार्षिक आरटी-पीसीआर द्वारा अंतर्जात और ट्रांसजीन (एक्सॉन 1 और एक्सॉन 2) और केवल पीकेडी 1 ट्रांसजीन (बी एक्सॉन 2) सहित कुल Pkdl को बढ़ाने के लिए उपयोग किया जाता है, SBPkdlAc ट्रांसजीन अभिव्यक्ति का RT-PCR विश्लेषण गुर्दे में निर्धारित किया गया था। और अतिरिक्त गुर्दे के ऊतक। SBPkdl.Ac ट्रांसजीन (Tg) का एक प्रतिनिधि अर्ध-मात्रात्मक मूल्यांकन दिखाया गया है जिसमें तीनों ट्रांसजेनिक लाइनों (3. 39, और 41) और एक्स्ट्रारेनल ऊतकों के एक माउस से एक वृक्क ऊतक नमूना (K) शामिल है। एच, दिल; लू, फेफड़े; बी मस्तिष्क; ली, जिगर; और एस. प्लीहा लाइन 39 के एक माउस से। ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति सभी ट्रांसजेनिक चूहों के गुर्दे में आसानी से पता लगाने योग्य है, जबकि एक्स्ट्रारेनल ऊतकों में यह पता लगाने योग्य नहीं है। SBPkd1rAc ट्रांसजीन से अभिव्यक्ति ने एक विशिष्ट 307-bp एम्प्लिकॉन का उत्पादन किया, जबकि S16 आंतरिक नियंत्रण ने एक 102-bp एम्प्लिकॉन उत्पन्न किया। एम, 100-बीपी मार्कर; एच, ओ, पीसीआर प्रवर्धन के लिए नकारात्मक नियंत्रण। (c) SBPkdlr का रीयल-टाइम पीसीआर एक्सप्रेशन विश्लेषण। ट्रांसजीन कई स्वतंत्र चूहों से निर्धारित किया गया था। तीन ट्रांसजेनिक माउस लाइनों 3 (n=5), 39 (n =7), और 41 (n=5) से SBPkdl.Ac ट्रांसजीन ने दिखाया कि 39 और 41 में सबसे अधिक थी गुर्दे की अभिव्यक्ति का स्तर। तीन ट्रांसजेनिक लाइनों के चूहों (n=3) से एक्स्ट्रारेनल ऊतकों में SBPkdlrAc ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति का वास्तविक समय पीसीआर द्वारा मूल्यांकन किया गया था। प्रत्येक ट्रांसजेनिक लाइन (100 प्रतिशत) के गुर्दे की तुलना में, एक्स्ट्रारेनल ऊतकों के विश्लेषण से पता चला है कि मस्तिष्क, हृदय, यकृत, अग्न्याशय में ट्रांसजीन अभिव्यक्ति का स्तर 10- से 1, 000- गुना कम था। , तिल्ली और फेफड़े। (डी) एसबीपीकेडीएल एसी किडनी में अंतर्जात सी-एमसी जीन की अभिव्यक्ति अर्ध-मात्रात्मक आरटी-पीसीआर द्वारा। एक योजनाबद्ध चित्रण c-Myc को बढ़ाने के लिए उपयोग किए जाने वाले प्राइमरों को दिखाता है। जैसा कि अपेक्षित था, वयस्क नॉनट्रांसजेनिक किडनी (नियंत्रण) में c-Myc की अभिव्यक्ति न्यूनतम है। इसके विपरीत, c-Mye की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति तीन पंक्तियों के सभी वयस्क SBPkdlrAc किडनी में पाई जाती है, जैसा कि वयस्क ट्रांसजेनिक SBM किडनी में देखा गया है। सकारात्मक नियंत्रण। c-Myc का एम्प्लिकॉन 250 बीपी था; S16 का आयाम, एक आंतरिक नियंत्रण, 102 bp.M, 100-bp मार्कर था।

ट्रांसजीन अभिव्यक्ति के स्तर का परिमाणीकरण विशेष रूप से वास्तविक समय पीसीआर और अर्धवार्षिक आरटी-पीसीआर द्वारा वयस्क उम्र में तीन ट्रांसजेनिक लाइनों में 5'अनट्रांसलेटेड क्षेत्र (बी, -ग्लोबिन प्रमोटर) और पीकेडी 1 के एक्सॉन 2 में प्राइमरों का उपयोग करके किया गया था। (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1)(चित्र 3बी)। एसबीपीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1ट्रांसजेनिक चूहों में आरएसी अभिव्यक्ति की तुलना आंतरिक मानक के रूप में S16 राइबोसोमल प्रोटीन जीन उत्पाद से की गई थी। अर्ध-मात्रात्मक आरटी-पीसीआर प्रवर्धन के लिए उपयोग की जाने वाली शर्तें रैखिक सीमा के भीतर थीं। वास्तविक समय पीसीआर और अर्धवार्षिक आरटी-पीसीआर द्वारा ट्रांसजीन अभिव्यक्ति लगातार और विशेष रूप से अन्य अंगों (छवि 3 बी और सी) के सापेक्ष सभी ट्रांसजेनिक लाइनों के गुर्दे में उच्चतम अभिव्यक्ति दिखाती है। एक व्यक्तिगत नमूने के लिए गुर्दे की अभिव्यक्ति का स्तर इस्तेमाल की जाने वाली किसी भी पहचान तकनीक के साथ प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य था। PKD1 का उच्चतम स्तर (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) ट्रांसजीन रीनल एक्सप्रेशन को लाइनों 39 और 41 के लिए मापा गया था। यह निगरानी करने के लिए कि क्या बढ़ी हुई PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) अभिव्यक्ति ट्रांसजीन या अंतर्जात जीन से हुई है, तीन ट्रांसजेनिक लाइनों से चूहों के एक ही समूह की वृक्क PKD1 के लिए तुलना की गई थी ( पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) ट्रांसजीन एक्सप्रेशन और रीनल पीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक किडनी डिजीज 1) के लिए रियल-टाइम पीसीआर द्वारा टोटल (ट्रांसजीन और एंडोजेनस) एक्सप्रेशन। दिलचस्प है। लाइन 39 और 41 लाइन 3 के सापेक्ष ने दिखाया कि पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) ट्रांसजीन रीनल एक्सप्रेशन PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी डिजीज 1) कुल रीनल एक्सप्रेशन के समान या उससे ऊपर था, जो इस प्रेरित अभिव्यक्ति के लिए विशेष रूप से जिम्मेदार ट्रांसजीन की ओर इशारा करता है। विभिन्न अंगों (हृदय, फेफड़े, मस्तिष्क, यकृत, अग्न्याशय और प्लीहा सहित) में, SBPKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) आरएसी; ट्रांसजीन ने प्लीहा और फेफड़े में बहुत कमजोर अभिव्यक्ति अवसर-सहयोगी का पता लगाया, अन्य अंगों में कम से कम undetectable अभिव्यक्ति के साथ (चित्र 3 बी)। वास्तविक समय पीसीआर द्वारा परिमाणीकरण ने गुर्दे की अभिव्यक्ति (छवि 3 सी) के सापेक्ष एक 10- से 1, 000- ट्रांसजीन अभिव्यक्ति के निचले स्तर को एक्सट्रारेनल ऊतकों में प्रदर्शित किया। SBPkdlrAc ट्रांसजीन के "SB" नियामक तत्वों ने अधिमान्य वृक्क अभिव्यक्ति प्रदान की; यह विशेष अंग वितरण भी निर्धारित किया गया था जब c-Myc (SBM) और c-fos (SBF) (36, 38) से जुड़े ट्रांसजेन में उपयोग किया जाता है। c-Mye, PKD1 का डाउनस्ट्रीम इफ़ेक्टर (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) SBPkdlrAc में सिग्नलिंग पाथवे: चूहों। SBPkdlrAc ट्रांसजेनिक चूहों के इंट्रासेल्युलर रोगजनक तंत्र में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए, हमने अगली बार मानव ADPKD (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) किडनी (22) में c-Myc डीरेग्यूलेशन के हमारे पिछले अवलोकन के आधार पर c-Myc वृक्क अभिव्यक्ति स्तर की निगरानी करने की मांग की। तीनों ट्रांसजेनिक लाइनों 3(n=4).39(n=7), और 41 (n =4) ​​के साथ-साथ नियंत्रण (n {{9} से किडनी का विश्लेषण किया गया। }})। जैसा कि Fig.3d में दिखाया गया है, समान उम्र के चूहों को नियंत्रित करने के सापेक्ष SBPkdlrAa चूहों में प्रेरित अंतर्जात सी-माई की पर्याप्त अभिव्यक्ति है। दिलचस्प बात यह है कि कुछ SBPkdlrAG किडनी में c-Myc अभिव्यक्ति का स्तर, विशेष रूप से लाइन 39 में, PKD SBM ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में देखे गए स्तर की तुलना में गुर्दे की c-Myc अभिव्यक्ति द्वारा निर्मित स्तर तक पहुंच गया।

SBPKD1 में गुर्दे की विसंगतियाँ (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) ARC mice similar to PKD. To characterize the phenotype caused by the transgene expression, gross and histologic examinations were undertaken on transgenic kidneys. Adult kidneys from all transgenic lines were affected bilaterally. Kidneys contained numerous cortical cysts that varied from microscopic to macroscopic in size (Fig.4a and b). SBPkdlrAc. kidneys were pale, a typical finding in PKD. On histologic examination, all transgenic founder mice and progenies (n = 25;n>प्रत्येक पंक्ति के लिए 6) ने कई ट्यूबलर (T) और ग्लोमेरुलर सिस्ट (G) (Fig.4d, f, और g) विकसित किए। कॉर्टिकल और मेडुलरी क्षेत्रों से नलिकाओं के साथ-साथ पैपिला (चित्र 4d और ई) से नलिकाओं को इकट्ठा करते हुए सिस्ट देखे गए। ट्रांसजेनिक चूहों ने ट्यूबलर एपिथेलियल हाइपरप्लासिया (एरोहेड) प्रदर्शित किया जिसमें सिस्टिक और गैर-सिस्टिक नलिकाएं और लगातार अतिवृद्धि (छवि 4 जी और एच) दोनों शामिल हैं। लेकिन गंभीरता अलग-अलग चूहों के बीच भिन्न होती है। इंटरस्टीशियल फाइब्रोसिस (एफ)। पेरिवास्कुलर लिम्फोइड घुसपैठ, और प्रोटीनयुक्त कास्ट (पी) अक्सर देखे गए थे (छवि 4 डी और ई)

अंजीर। 4

बढ़ी हुई PKD1 की स्थानीयकरण साइट को अधिक सटीक रूप से परिभाषित करने के लिए (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) गुर्दे में अभिव्यक्ति, हमने पहले इस्तेमाल किए गए एक्सॉन 36-45 जांच (16) का उपयोग करके स्वस्थानी संकरण में किया। संकरण संकेत विशेष रूप से उपकला कोशिकाओं के लिए सिस्ट और हाइपरप्लास्टिक नलिकाओं के साथ-साथ ग्लोमेरुलर सिस्ट को स्थानीयकृत किया गया था। इसके अलावा, गैर-सिस्टिक या थोड़ा पतला नलिकाओं के उपकला पर कुछ संकेत देखा गया था, संभावित रूप से भविष्य के सिस्टिक परिवर्तनों (छवि 4i और जे) से गुजरने के लिए पूर्वनिर्धारित नलिकाओं की पहचान करना। जन्म के समय ट्रांसजेनिक चूहों (n =8), प्रसवोत्तर दिन 10 (P10) (n=3), P20 (n =5), P35 (n) पर गुर्दे का हिस्टोलॉजिक विश्लेषण भी किया गया था। {10}}), और P45 (n=3) समान आयु वर्ग (n =2 से 4) के नकारात्मक साथियों की तुलना में। दिलचस्प बात यह है कि सभी नवजात ट्रांसजेनिक चूहों ने ट्यूबलर और ग्लोमेरुलर फैलाव के सापेक्ष प्रदर्शित किया नकारात्मक लिटरमेट्स को नियंत्रित करें (चित्र 4k और 1), यह दर्शाता है कि गुर्दे की विसंगतियाँ गर्भाशय में शुरू हुई हैं जैसा कि SBM चूहों और ADPKD में देखा गया है (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) रोगी। प्रगतिशील उम्र के साथ ट्यूबलर और ग्लोमेरुलर फैलाव आकार और संख्या में वृद्धि हुई है। P35 द्वारा, ट्रांसजेनिक चूहों ने SBPkdlrsc चूहों में अधिक गंभीर हाइपरप्लासिया और ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस परिवर्तित गुर्दे के शारीरिक कार्यों के प्रमाण प्रदर्शित किए। सभी ट्रांसजेनिक चूहों के गुर्दे के शारीरिक कार्यों ने पीकेडी के समान विशेषताएं प्रदर्शित कीं, जबकि नॉनट्रांसजेनिक लैटरमेट्स ने कभी भी रोग विकसित नहीं किया। जन्म के कुछ महीनों के भीतर, प्रभावित जानवरों में पुरानी गुर्दे की कमी हो गई। सीरम और मूत्र के स्तर की माप द्वारा इन जानवरों की गुर्दे के कार्यात्मक मापदंडों के लिए निगरानी की गई थी। रक्त यूरिया नाइट्रोजन (बीयूएन) और क्रिएटिनिन, मूत्र ऑस्मोलैलिटी, मूत्र प्रोटीन, और आयन उत्सर्जन (तालिका 1)। नियंत्रण की तुलना में तीन पंक्तियों के सभी चूहों ने ध्यान केंद्रित करने वाले दोषों को प्रदर्शित किया, ADPKD में एक सामान्य खोज (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) और इसके परिणामस्वरूप यूरिनरी BUN में कमी दिखाई दी। क्रिएटिनिन, प्रोटीन और आयरन सांद्रता। ट्रांसजेनिक एसबीपीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1प्रत्येक पंक्ति से rAc.संस्थापकों और संततियों (n=6) को एसडीएस-पेज (चित्र 5) द्वारा मूत्र के नमूनों पर प्रोटीनूरिया के लिए गुणात्मक रूप से मॉनिटर किया गया था। 2 महीने से अधिक उम्र के चूहों ने गैर-चयनात्मक प्रोटीनमेह प्रदर्शित किया जो उम्र के साथ बढ़ता गया। इसके अलावा, सीरम बुन और सीरम क्रिएटिनिन के स्तर में वृद्धि हुई, जिससे गुर्दे की कमी (तालिका 2) का खुलासा हुआ। क्योंकि क्रोनिक रीनल अपर्याप्तता आमतौर पर हेमटोलोगिक मापदंडों में परिवर्तन की ओर ले जाती है, इनकी जांच 3 से 14 महीने की उम्र के SBPkdlAc ट्रांसजेनिक चूहों (तालिका 2) में की गई थी। ये ट्रांसजेनिक चूहे एनीमिक थे, जैसा कि लाल रक्त कोशिका की संख्या में काफी कमी आई, जिसमें हीमोग्लोबिन और हेमटोक्रिट सामान्य स्तर से आधे तक पहुंच गए। अन्य लाल रक्त कोशिका पैरामीटर, जैसे रेटिकुलोसाइट्स का प्रतिशत, अप्रभावित थे, जैसा कि गुर्दे की खराबी से प्रेरित होने पर अपेक्षित था। इन जानवरों की लगातार -5.9± 2.8 महीने की उम्र में गुर्दे की विफलता से मृत्यु हो गई (n {{12} }) ट्रांस-जेनिक लाइन 39 और बाद की उम्र के लिए,-14.6±3.1 महीने (n= 20)और-11.7 ±6.5 महीने (n=7) , क्रमशः 3 और 41 पंक्तियों के लिए।

सिस्टांचे के प्रभाव: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

बहस

इसमें हम एक murine PKD1 के अलगाव और लक्षण वर्णन की रिपोर्ट करते हैं (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -बीएसी। यह PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन को टैग किया गया था और नियामक तत्वों को विशेष रूप से गुर्दे को लक्षित अभिव्यक्ति के लिए दो क्रमिक समरूप पुनर्संयोजन घटनाओं द्वारा प्रतिस्थापित किया गया था। इस उपन्यास SBPkdlrAG जीन के साथ उत्पादित ट्रांसजेनिक चूहों ने PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) की अभिव्यक्ति में 2- से 15- गुना वृद्धि दिखाई और PKD के विशिष्ट रूप से विकसित प्रारंभिक वृक्क रूपात्मक परिवर्तनों को पुन: उत्पन्न किया। मध्यम आयु में गुर्दे की कमी स्पष्ट होती है, और चूहे गुर्दे की विफलता से समय से पहले मर जाते हैं। हमारे परिणामों से यह भी संकेत मिलता है कि इस फेनोटाइप के लिए जिम्मेदार PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) ओवरएक्प्रेशन तंत्र विवो में c-Myc के सक्रियण को संकेत देकर मध्यस्थता करता है। यह अध्ययन दर्शाता है कि murine PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) गुर्दे में कार्य का लाभ PKD वृक्क फेनोटाइप का उत्पादन करने के लिए पर्याप्त है।

चूंकि murine PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन की नकल नहीं है क्योंकि यह मनुष्यों (27) में है, हमने सीधे एक बीएसी क्लोन की पहचान की है और अलग किया है जिसमें संपूर्ण पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन। 129/Sv murine PKD1 का पूर्ण लक्षण वर्णन (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -बीएसी। दो अन्य इनब्रेड माउस स्ट्रेन के साथ अप्रत्यक्ष तुलना ने PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) लोकस की अखंडता की पुष्टि की। पीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -BACinsert में PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) जीन से अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम अनुक्रमों के -37 से 39 kb शामिल हैं। हमारे विश्लेषण से पता चला है कि PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) इस बीएसी में जीन एक प्रामाणिक मुराइन जंगली-प्रकार का ठिकाना था जो आगे के अध्ययन के लिए काम कर सकता था।

हालांकि इस बात के पुख्ता सबूत हैं कि ADPKD में सिस्ट बनना (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) सामान्य PKD1 के दैहिक निष्क्रियता के बाद हेटेरोज़ायोसिटी के नुकसान के परिणामस्वरूप हो सकता है (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) एलील (3.21.32), सिस्टिक ट्यूबलर एपिथेलियम (22.29) में निरंतर या यहां तक ​​कि बढ़े हुए पॉलीसिस्टिन -1 अभिव्यक्ति के लिए भी विचारोत्तेजक साक्ष्य हैं। बाद का अवलोकन इस सवाल को उठाता है कि क्या पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) प्रति से अधिक सिस्टोजेनेसिस का पर्याप्त समीपस्थ कारण है। ट्रांसजेनिक चूहों में मानव PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1), टीएससी 2. आरएबी26. NTHL1 और SLC9A3R2 जीन, केवल चूहों की एक अल्पसंख्यक विकसित सिस्ट और किसी में भी ट्रांसजीन की 30 प्रतियों (31) के बावजूद वयस्कता में पता लगाने योग्य ट्रांसजीन अभिव्यक्ति नहीं थी। उन ट्रांसजेनिक चूहों में। सिस्टोजेनेसिस में पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) ओवरएक्प्रेशन के लिए एक स्पष्ट भूमिका स्थापित करना मुश्किल था। हमारा मॉडल अलग है, क्योंकि PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) की दो से नौ जंगली-प्रकार की प्रतियां, बिना सन्निहित जीन के, ट्रांसजेनिक चूहों में एकीकृत थीं। चूंकि PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) जीन के विभिन्न अंगों या ऊतकों में आवश्यक कार्य होते हैं, जैसा कि PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) जीन के अपस्फीति के साथ कई चूहों के लिए वर्णित है, PKD1 का एक प्रणालीगत अतिअभिव्यक्ति (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) अतिरिक्त भ्रमित प्रभाव पैदा कर सकता है। नतीजतन, हमने PKD1 की भूमिका को संबोधित किया है (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) विशेष रूप से गुर्दे को PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) को लक्षित करने वाले दृष्टिकोण का उपयोग करके कार्य का लाभ। सजातीय पुनर्संयोजन द्वारा, हमने पहले PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) अपस्ट्रीम नियामक क्षेत्र को "SB" वृक्क प्रतिबंधित नियामक तत्वों के साथ प्रतिस्थापित किया है, जिससे सामान्य रूप से PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) वयस्कता में और साथ ही संभावित माध्यमिक प्रतिक्रिया पाश विनियमन (36,38)। दूसरा, हमने murine PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) ट्रांसजीन (Pkdlr) एक्सॉन 10 में एक मूक बिंदु उत्परिवर्तन के साथ, लेकिन यह सुनिश्चित करने के लिए एक एपिटोप टैग नहीं डाला कि संरक्षित संरचना और अखंडता के साथ एक पूरी तरह कार्यात्मक "जंगली-प्रकार" प्रोटीन का उत्पादन किया जाएगा। इस संशोधित बीएसी से, एक SBPkdlrAG टुकड़ा Tsc2 जीन और BAC वेक्टर से दूर शुद्ध किया गया था ताकि Tsc2 जीन द्वारा हस्तक्षेप को रोका जा सके, जो एक सिस्टिक फेनोटाइप (8.20.28) भी प्रेरित कर सकता है। साथ ही प्रोकैरियोटिक अनुक्रमों के निरोधात्मक प्रभाव से बचने के लिए (5)।

चार अलग-अलग SBPkdlrActransgenic संस्थापक चूहों और तीन स्वतंत्र लाइनों को विशिष्ट वृक्क PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) - बढ़ी हुई अभिव्यक्ति। विशेष रूप से हड़ताली इन ट्रांसजेनिक चूहों में फेनोटाइप का पूर्ण प्रवेश है। एसबीपीकेडी1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) rAc के संस्थापक और माउस लाइनों ने ADPKD (ऑटोसोमल डोमिनेंट पॉलीसिस्टिक किडनी डिजीज) के साथ कई फिजियोपैथोलॉजिक विशेषताओं को साझा किया। इनमें कॉर्टेक्स, मेडुला और ग्लोमेरुली में सिस्ट का विकास एपिथेलियल हाइपरप्लासिया, इंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस और फोकल इंटरस्टिशियल सूजन के साथ शामिल है।

क्योंकि पीकेडी फेनोटाइप सभी अलग-अलग ट्रांसजेनिक संस्थापक चूहों में लगातार देखा गया था और माउस जीनोम में ट्रांसजीन एकीकरण एक यादृच्छिक घटना है, फेनोटाइप क्रोमोसोमल स्थिति प्रभाव से नहीं हो सकता है, लेकिन केवल पीकेडी 1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1)अभिव्यक्ति। दरअसल, सभी लाइनों में PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति को वृक्क प्रतिबंधित होने के लिए प्रदर्शित किया गया था। जैसा कि पहले "एसबी" तत्वों (36,38) द्वारा विनियमित अन्य ट्रांसजेन के लिए देखा गया था। इसके अलावा, यह बढ़ी हुई PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) अभिव्यक्ति ट्रांसजीन के कारण हुई थी न कि एक अप्रत्यक्ष अंतर्जात PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) सक्रियण। इसलिए, हमारे परिणाम स्पष्ट प्रमाण प्रदान करते हैं कि एक जंगली प्रकार के कार्यात्मक PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) के कार्य का लाभ कई गुर्दे के अल्सर का उत्पादन कर सकता है। महत्वपूर्ण रूप से, ये SBPKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) प्रथाएं मानव PKD1 के माउस ऑर्थोलॉग के एकमात्र ओवरएक्प्रेशन द्वारा उत्पन्न पहला माउस मॉडल बनाती हैं।पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) जीन।

SBPkdl-Ac चूहों से पता चलता है कि PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) overexpression वृक्क सिस्टोजेनेसिस का एक प्राथमिक रोगजनक तंत्र है। महत्वपूर्ण रूप से, गुर्दे में उच्चतम ट्रांसजीन अभिव्यक्ति का स्तर फेनोटाइप की प्रगति और गंभीरता के साथ सहसंबद्ध दिखाई दिया। हमने यह भी पाया कि SBPKD1 के विकास में PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) अतिसक्रियता (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) -एसी फेनोटाइप विवो में सी-माइसी के सक्रियण का संकेत देने की संभावना है। निश्चित रूप से, यह सक्रियण पॉलीसिस्टिन के माध्यम से भी प्रत्यक्ष हो सकता है -1 सी-टर्मिनल टेल अंडर-गोइंग प्रोटियोलिटिक क्लीवेज और न्यूक्लियर ट्रांसलोकेशन (7), चूंकि वयस्क चूहों में सी-माइसी की बढ़ी हुई गुर्दे की अभिव्यक्ति को पीकेडी को प्रेरित करने के लिए दिखाया गया था, यह PKD1 के प्रमुख डाउनस्ट्रीम इफ़ेक्टर के रूप में c-Myc को समर्थन देने के लिए अत्यधिक सुसंगत होगा (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) सिग्नलिंग रास्ते यह परिणाम सभी मानव ADPKD (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) के गुर्दे में बढ़ी हुई c-Myc अभिव्यक्ति के हमारे पिछले निष्कर्षों के साथ भी सहसंबद्ध है (22), कुल मिलाकर, इन परिणामों से संकेत मिलता है कि c-Mye PKD1 का एक प्रमुख मध्यस्थ है। (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) सिस्टोजेनेसिस।

PKD1 से हमारे परिणाम (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) गेन-ऑफ-फंक्शन मॉडल, साथ में murine PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) अगुणता और कार्य की हानि, यह दर्शाता है कि कोई भी PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) अनियमन से सिस्टोजेनेसिस (2.19.23-26.31.40) हो सकता है। गंभीर PKD1 (पॉलीसिस्टिक किडनी रोग 1) PKD1 द्वारा प्रेरित चूहों में असंतुलन (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1एब्लेशन या ट्रांसजेनिक ओवरएक्प्रेशन के कारण गुर्दे के सिस्ट की शुरुआत और तेजी से प्रगति हुई और नलिकाओं का एक उच्च अनुपात प्रभावित हुआ। इसके विपरीत, एक हल्का PKD1 (पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) असंतुलन जैसे कि अगुणता के कारण अधिक फोकल सिस्ट के साथ पीकेडी की धीमी प्रगति हुई। विपरीत पॉलीसिस्टिन -1 डिसरेगुलेशन के माध्यम से एक समान फेनोटाइप के स्पष्ट विरोधाभासी विकास को सामान्य परिणाम द्वारा समझाया जा सकता है, अर्थात् एक सापेक्ष प्रोटीन एकाग्रता असंतुलन जो एक सक्रिय पॉलीसिस्टिन मल्टीप्रोटीन कॉम्प्लेक्स के गठन या कार्य को बदल सकता है। एक साथ लिया गया, हमारे परिणाम और अन्य जांचकर्ताओं का तर्क है कि ADPKD में पुटी गठन का तंत्र (ऑटोसोमल प्रमुख पॉलीसिस्टिक किडनी रोग) तीन रोगजनक तंत्रों से उत्पन्न होने की संभावना है: कार्य का लाभ, कार्य की हानि, और जीन खुराक प्रभाव।

उपन्यास SBPkdlrAc; चूहे वृक्क सिस्टोजेनेसिस का एक शक्तिशाली मॉडल बनाते हैं जो PKD, PKD1 के पैथोफिज़ियोलॉजी में प्रमुख अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकता है।पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) सिग्नल ट्रांसडक्शन पाथवे, और इंटरेक्टिंग पार्टनर्स। इस मॉडल के अध्ययन से PKD1 के भीतर सामान्य प्रोटीन संतुलन बहाल करने के लिए नई चिकित्सीय रणनीतियों का विकास भी हो सकता है।पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग 1) मल्टीमेरिक कॉम्प्लेक्स।

सिस्टैंच गुर्दे की बीमारी का इलाज करता है और गुर्दा की कार्यप्रणाली में सुधार करता है

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