PartⅠQi सुई झू शुई प्लास्टर AQP1 को रोकता है और MAPK सिग्नलिंग सिरोथिक जलोदर से प्रेरित जिगर की क्षति को कम करता है

अमूर्त

1. उद्देश्य

वर्तमान में, आधुनिक चिकित्सा में सिरोथिक जलोदर के लिए कोई विशेष उपचार नहीं है। क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर (QSZSP) जलोदर में इस्तेमाल किया गया है। इस अध्ययन का उद्देश्य सिरोथिक जलोदर के उपचार में QSZSP की कार्रवाई के तंत्र और एक्वापोरिन 1 (AQP1) के साथ इसके संबंध की जांच करना था।

2. तरीके

चौबीस चूहों को चार समूहों में विभाजित किया गया, प्रत्येक समूह में छह चूहे। मॉडलिंग में कार्बन टेट्राक्लोराइड-जैतून का तेल इंजेक्ट किया जाता है। नियंत्रण और मॉडल समूहों को खाली जेल प्लास्टर (2 सेमी × 2 सेमी) के साथ इलाज किया जाता है, क्यूएसजेडएसपी कम खुराक समूह को क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर (1 सेमी × 1 सेमी) के साथ इलाज किया जाता है, और क्यूएसजेडएसपी उच्च खुराक समूह को क्यूई के साथ इलाज किया जाता है। सुई झू शुई प्लास्टर (2 सेमी × 2 सेमी)। शरीर के वजन और पेट की परिधि में परिवर्तन को मापा गया, लीवर, किडनी और पेरिटोनियम में हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन एचई स्टेनिंग में देखे गए, लिवर फंक्शन से संबंधित जैव रासायनिक सूचकांक का पता चला, और AQP1 अभिव्यक्ति में परिवर्तन और MAPK पाथवे की सक्रियता IHC धुंधला और पश्चिमी धब्बा में जिगर, गुर्दे और पेरिटोनियल ऊतकों का मूल्यांकन किया गया था।

3। परिणाम

कार्बन टेट्राक्लोराइड लिवर ऑयल के इंजेक्शन के एक सप्ताह के बाद, मॉडल समूह के चूहों ने अपने शरीर के वजन को धीरे-धीरे बढ़ाया, और मॉडल चूहों के पेट की परिधि समय के साथ बढ़ती रही। सिरोथिक जलोदर मॉडल के निर्माण के 16 सप्ताह के बाद, लीवर, किडनी और पेरिटोनियम को काफी नुकसान पहुंचा था, और चूहों में टीबीआईएल, एएसटी, एएलटी, सीआर, बीयूएन, के, ना और सीए का सीरम स्तर काफी अधिक था ( P <0.001) और ALB स्तर नियंत्रण समूह की तुलना में उल्लेखनीय रूप से कम (P <0.001) थे। 4 सप्ताह के उपचार के बाद, लीवर, किडनी और पेरिटोनियल चोटों में सुधार हुआ। TBiL, AST, ALT, Cr, BUN, K, Na, और Ca स्तर काफी कम थे (P <0.001) और ALB स्तर मॉडल समूह की तुलना में काफी अधिक (P <0.001) थे। AQP1, p-ERK, p-JNK, और p-p38 की प्लस ई प्रोटीन अभिव्यक्ति को लीवर, किडनी और पेरिटोनियम में बाधित पाया गया।

4। निष्कर्ष

QSZSP लिवर, पेरिटोनियम और किडनी में AQP1 और MAPK सिग्नलिंग पाथवे के प्रोटीन एक्सप्रेशन को रोकता है, जिससे लिवर, किडनी और सिरोथिक जलोदर के कारण पेरिटोनियल चोट कम हो जाती है, इस प्रकार पेट की परिधि की असामान्य वृद्धि कम हो जाती है।

कीवर्ड

AQP1, MAPK सिग्नलिंग, लीवर की चोट, जलोदर,Cistanche की खुराक.

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परिचय

सिरोसिस एक सामान्य नैदानिक ​​रोग है, जो यकृत के ऊतकों पर विभिन्न रोगजनक कारकों की लगातार या बार-बार कार्रवाई के कारण अध: पतन, परिगलन, पुनर्जनन, और हेपेटोसाइट्स के रेशेदार ऊतक प्रसार जैसे रोग परिवर्तनों की एक श्रृंखला के कारण होता है, मुख्य रूप से यकृत के रूप में प्रकट होता है। समारोह में गिरावट [1]। सिरोसिस का विश्वव्यापी प्रसार अज्ञात है। संयुक्त राज्य अमेरिका में सिरोसिस का प्रसार लगभग 0.15 प्रतिशत -0.27 प्रतिशत [2] है। 69 प्रतिशत लोगों को पता नहीं है कि उन्हें सिरोसिस है, और मधुमेह, शराब का दुरुपयोग, हेपेटाइटिस सी और हेपेटाइटिस बी, पुरुष होना और वृद्ध होना सभी सिरोसिस [3] से जुड़े हैं। एटियलजि के बावजूद, सिरोसिस वाले 50 प्रतिशत रोगियों में सिरोसिस कार्डियोमायोपैथी [4] विकसित होगी। संयुक्त राज्य अमेरिका के लिए 2017 की नेशनल वाइटल स्टैटिस्टिक्स रिपोर्ट ने बताया कि लगभग 4.5 मिलियन वयस्क, या 1.8 प्रतिशत वयस्क आबादी को क्रोनिक लिवर की बीमारी और सिरोसिस है। 41,473 लोग जीर्ण यकृत रोग और सिरोसिस [5] से मर गए।

जलोदर सिरोसिस की सबसे प्रमुख नैदानिक ​​अभिव्यक्ति है। यह उदर गुहा में असामान्य द्रव संचय है। प्रतिपूरक सिरोसिस वाले लगभग 60 प्रतिशत रोगियों में निदान के 10 वर्षों के भीतर असामान्य पेरिटोनियल द्रव संचय विकसित होता है, सिरोटिक जलोदर, विशेष रूप से दुर्दम्य जलोदर की उच्च घटना और खराब रोग का निदान, कई घातक जटिलताओं को प्रेरित कर सकता है, जो जीवन की गुणवत्ता और सिरोसिस रोगियों की उत्तरजीविता दर को गंभीर रूप से प्रभावित करते हैं। [7]। लिवर कैंसर के 90 प्रतिशत मामले सिरोसिस [8] की उपस्थिति से जुड़े होते हैं।

पारंपरिक चीनी दवा (टीसीएम) में दुर्दमता को रोकने या देरी करने का प्रभाव होता है और इसमें विषाक्तता कम होती है [9]। चीनी जड़ी-बूटियों का लंबे समय तक उपयोग क्रोनिक हेपेटाइटिस बी [10] के रोगियों में सिरोसिस के खतरे को कम कर सकता है। क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर (QSZSP) में मूलांक अस्त्रगली, मूलांक कांसुई, मूलांक ऑकलैंडिया, पोरिया, हर्बा लियोनुरी, मूलांक साल्विया मिल्टियोराइजा और पेरिकारपियम अरेका शामिल हैं। एक पिछले नैदानिक ​​अध्ययन में पाया गया कि सिरोथिक जलोदर वाले रोगियों के QSZSP सहायक उपचार के परिणामस्वरूप मूत्र उत्पादन में सुधार हुआ, 24 घंटे मूत्र सोडियम उत्सर्जन, कम क्रिएटिनिन, और कुल बिलीरुबिन स्तर, एल्ब्यूमिन सामग्री में वृद्धि हुई, QSZSP के साथ 3 महीने के निरंतर उपचार के बाद जलोदर पुनरावृत्ति दर में सुधार हुआ [11]। QSZSP और सिरोथिक जलोदर पर कुछ अध्ययन हैं। QSZSP और लीवर के सिरोसिस में घटकों पर शोध के इतिहास में, सिरोथिक जलोदर की प्राथमिक चिकित्सा के सहायक के रूप में Xiaozhang टाई सुरक्षित है [12]। Salviae miltiorrhizae सिरोसिस और पोर्टल उच्च रक्तचाप [13] में काफी सुधार करता है। सिरोथिक जलोदर के उपचार में QSZSP की कार्रवाई के एजेंटों पर आगे के अध्ययन की आवश्यकता है।

चैनल, और बाद में, CHIP28 का नाम बदलकर एक्वापोरिन [14, 15] कर दिया गया। तेरह एक्वापोरिन (AQP0-AQP12) की पहचान की गई है [16–18]। एक्वापोरिन में तीन आइसोफॉर्म होते हैं। पहला उपप्रकार केवल पानी के अणुओं का परिवहन करता है, दूसरा उपप्रकार पानी के अणुओं, यूरिया, ग्लिसरॉल, आदि का परिवहन करता है, और तीसरा उपप्रकार बिना ऊर्जा की खपत या विनियमन [19-21] के बिना लगातार खुले चैनलों को ट्रांसपोर्ट करता है। एक्वापोरिन 1 (AQP1) पहले उपप्रकार से संबंधित है, जो एक टेट्रामर के रूप में मौजूद है और केवल पानी के अणुओं को झिल्ली के पार ले जाने की अनुमति देता है, और यह एक स्वतंत्र जल चैनल है [22, 23]। लिवर, पेरिटोनियम और किडनी निकट संपर्क में आने वाले अंग हैं, और AQP1 लीवर, पेरिटोनियम और किडनी [24] में वितरित होता है। मानव शरीर की जल सामग्री शरीर के वजन का 70 प्रतिशत है, और पेरिटोनियल गुहा में असामान्य जल उत्पादन-अवशोषण-उत्सर्जन जलोदर [19] के गठन में एक महत्वपूर्ण कारक है। AQP1 केवल पानी के अणुओं के परिवहन में शामिल एक्वापोरिन में से एक है। सिरोसिस में जलोदर से लीवर में द्रव का संचय बढ़ जाता है, और अतिरिक्त तरल पदार्थ पेरिटोनियम में स्थानांतरित हो जाता है, जो पर्याप्त पानी को पुन: अवशोषित नहीं करता है और अंततः गुर्दे द्वारा पानी के पुन: अवशोषण में वृद्धि करता है, इसलिए AQP1 अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण मध्यवर्ती हो सकता है जलोदर का चयापचय।

प्रारंभ में, सिरोसिस से लीवर की कार्यक्षमता कम हो जाती है और पेट और वक्ष गुहाओं में द्रव का संचय बढ़ जाता है, जिससे जलोदर [25] हो जाता है। जलोदर आमतौर पर सिरोसिस [6] में होता है। जलोदर उदर गुहा [6] में असामान्य द्रव संचय है। सिरोथिक जलोदर गुर्दे की शिथिलता [26] का कारण बन सकता है। परिधीय धमनी वासोडिलेशन परिकल्पना में, गुर्दा जलोदर [27] के सभी 5 चरणों में शामिल है। लीवर, पेरिटोनियम और किडनी में AQP1 एक्सप्रेशन को जोड़कर, हम सिरोथिक जलोदर में "लिवर-पेरिटोनियल-किडनी" अक्ष का प्रस्ताव करते हैं और सुझाव देते हैं कि यह सिरोथिक जलोदर के निर्माण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यह बताया गया है कि AQP1 को MEK1 / 2 अवरोधकों द्वारा glial कोशिकाओं [28] में नियंत्रित किया जाता है। प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं में, AQP1 प्रोटीन अभिव्यक्ति का स्तर p38MAPK [29] द्वारा नियंत्रित किया जाता है। मानव फुफ्फुस मेसोथेलियल कोशिकाओं में, पेप्टिडोग्लाइकन AQP1 प्रोटीन अभिव्यक्ति [30] के p38 MAPK विनियमन को रोकता है। इसलिए, MAPK मार्ग "यकृत-पेरिटोनियल-किडनी" अक्ष में AQP1 परिवर्तनों की एक दिशा होगी।

सिरोथिक जलोदर के उपचार में QSZSP की भूमिका और AQP1 के साथ इसके संबंध की अभी तक रिपोर्ट नहीं की गई है। हम अनुमान लगाते हैं कि "लिवर-पेरिटोनियल-किडनी" अक्ष सामान्य सामग्री आधार के रूप में एक्वापोरिन के साथ जल चयापचय का एक कार्यात्मक अक्ष है, जो पेरिटोनियल तरल पदार्थ के "उत्पादन-अवशोषण-छांट" में शामिल है और गठन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। सिरोथिक जलोदर की। MAPK मार्ग AQP1 के QSZSP विनियमन में मध्यस्थता कर सकता है। इसलिए, इस अध्ययन में, हमने QSZSP के साथ इन विट्रो में सिरोथिक जलोदर के साथ चूहों का इलाज किया, लीवर, किडनी और पेरिटोनियम में हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों का अवलोकन किया, और AQP1 अभिव्यक्ति में परिवर्तन और लीवर, किडनी और पेरिटोनियल में MAPK मार्ग की सक्रियता का मूल्यांकन किया। सिरोथिक जलोदर और इसके तंत्र के उपचार में QSZSP के प्रभाव को स्पष्ट करने के लिए ऊतक।

सिस्टैंच का अर्क

सामग्री और विधियां

1. रीजेंट।

उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मक इस प्रकार हैं: मैकलिन से कार्बन टेट्राक्लोराइड (C805332), यिहाई केरी गोल्डन ड्रैगन फिश सीरियल्स, ऑयल्स एंड फूडस्टफ्स कं, लिमिटेड (चीन) से जैतून का तेल, नेशनल फार्मास्युटिकल ग्रुप केमिकल रिएजेंट कंपनी से जाइलीन और पूर्ण इथेनॉल। Ltd. (चीन), Solarbio (चीन) से eosin (E8090) और तटस्थ राल (G8590), और सेवा से hematoxylin (G1004)।

2. क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर प्रक्रिया।

क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर में मूलांक अस्त्रगली, मूलांक कंसुई, मूलांक ऑकलैंडिया, पोरिया, हर्बा लियोनुरी, मूलांक साल्विया मिल्टियोराइजा और पेरिकारपियम अरेका शामिल हैं। "चीनी फार्माकोपिया" 2010 संस्करण के प्रावधानों के अनुसार उपरोक्त सात चीनी दवाएं पारंपरिक चीनी चिकित्सा के गुआंग्शी विश्वविद्यालय के पहले संबद्ध अस्पताल से खरीदी गई थीं।

मूलांक Astragali, Poria, और Herba Leonuri के प्रत्येक 1 g में 12 ml पानी मिलाया जाता है और 3 0 मिनट के लिए भिगोया जाता है, जल भाटा निष्कर्षण 3 बार दोहराया जाता है, प्रत्येक बार 1.5 h, और अर्क संयुक्त और फ़िल्टर किया जाता है . रेडिक्स कंसुई, रेडिक्स ऑकलैंडिया, रेडिक्स साल्विया मिल्टियोराइजी, और पेरिकार्पियम एरेके के प्रत्येक 1 ग्राम में 85 प्रतिशत इथेनॉल के 6 मिलीलीटर जोड़े जाते हैं और 30 मिनट के लिए भिगोए जाते हैं, जल भाटा निष्कर्षण दो बार दोहराया जाता है, प्रत्येक बार 1.5 घंटे, और अर्क संयुक्त होते हैं और छाना हुआ। शुष्क पाउडर तैयार करने के लिए उपरोक्त दो अर्क को एक वैक्यूम के तहत मिलाया गया और सुखाया गया। बेस में 60 प्रतिशत सोडियम एक्रिलेट, 30 प्रतिशत कार्बोमर, 10 प्रतिशत एल्युमीनियम ग्लाइसीनेट और 6 गुना ग्लिसरीन होता है। पैठ बढ़ाने वाले में 50 प्रतिशत एज़ोन और 50 प्रतिशत प्रोपलीन ग्लाइकोल होते हैं। बेस, पैठ बढ़ाने वाला और सूखा पाउडर मिलाया जाता है। Coater (RK-200, तियानजिन रुइकांग बाबू फार्मास्युटिकल बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड) QSZSP का उत्पादन कर रहे हैं। हाइड्रोजेल पेस्ट को आरके -200 हाइड्रोजेल कोटिंग मशीन (टियांजिन रुइकांग बाबू फार्मास्युटिकल बायोटेक्नोलॉजी कंपनी) द्वारा तैयार किया जाता है। इस उत्पाद के प्रत्येक टैबलेट में मूलांक Astragali में Astragalus मिथाइलेज़ (C41H68O14), 0.6932 mg से कम नहीं, और रेडिक्स Kansui में Euphorbia Grandis Dienol (C30H50O), 1.4766 mg से कम नहीं है।

3. पशु।

तीन गोरजेस विश्वविद्यालय के पशु, चौबीस चूहे, नर, जिनका वजन 200 g 250 ग्राम है, को बिना किसी विशिष्ट रोगज़नक़ (विशिष्ट रोगज़नक़-मुक्त, एसपीएफ़) की स्थिति में उठाया गया था। खिला वातावरण 22-26 डिग्री, 50 प्रतिशत -60 प्रतिशत सापेक्ष आर्द्रता है। दो हफ्ते में मॉडलिंग शुरू हो जाएगी। कार्बन टेट्राक्लोराइड-जैतून का तेल 4:6 के अनुपात में, इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन की खुराक 3 एमएल/किलो शरीर के वजन की, और इंजेक्शन सप्ताह में दो बार (चार दिन और सात दिन) ग्यारह सप्ताह तक दिए गए। नियंत्रण समूह के लिए, जैतून के तेल की समान मात्रा का एक आइसोटोनिक इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन दिया गया था। प्रत्येक इंजेक्शन से पहले वजन और पेट की परिधि को मापा जाता है। इस अवधि के दौरान, चूहों के लिए पीने के पानी की 10 प्रतिशत सांद्रता तैयार करने के लिए 75 प्रतिशत मेडिकल अल्कोहल के साथ आसुत जल का उपयोग किया गया था। अंत में, चार सप्ताह के उपचार के भीतर, चूहों के शरीर के वजन (तालिका 1), और पेट की परिधि (तालिका 2) को 15 सप्ताह के लिए सप्ताह में दो बार मापा गया।

4. इलाज और नमूना लेना।

चौबीस चूहों को चार समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में छह चूहे, सभी चूहों को पेट पर गिराया गया था, और डीहेयरिंग क्षेत्र 3 सेमी × 3 सेमी था। नियंत्रण समूह (कोन) को खाली जेल प्लास्टर (2 सेमी × 2 सेमी) के साथ इलाज किया जाता है; मॉडल समूह (मॉड), खाली जेल प्लास्टर (2 सेमी × 2 सेमी); QSZSP कम-खुराक समूह, क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर (1 सेमी × 1 सेमी); और QSZSP उच्च खुराक समूह, क्यूई सुई झू शुई प्लास्टर (2 सेमी × 2 सेमी)। इन्हें 4 सप्ताह के लिए 6 घंटे के लिए दिन में एक बार वंचित चूहों की पेट की त्वचा पर लगाया गया था। सिरोसिस के उत्क्रमण को रोकने के लिए उपचार के दौरान सप्ताह में एक बार कार्बन टेट्राक्लोराइड-जैतून का तेल पीठ में चमड़े के नीचे इंजेक्ट किया गया था। चार सप्ताह के बाद, जानवरों को एनेस्थीसिया और रक्तपात से मार दिया गया। यदि जानवर मृत नहीं थे, तो जानवरों को पेंटोबार्बिटल सोडियम ओवरडोज (100 मिलीग्राम/किग्रा) के साथ मौत के लिए एनेस्थेटाइज किया गया था। एनेस्थीसिया के बाद, जानवर बिना सांस या दिल की धड़कन के मर गए। जलोदर प्राप्त करने के लिए फिल्टर पेपर विधि का उपयोग किया जाता है। उदर महाधमनी से रक्त एकत्र और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, और सीरम एकत्र किया जाता है। लिवर टिश्यू, किडनी टिश्यू और पेरिटोनियल टिश्यू की उचित मात्रा को काटकर 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ फिक्स किया जाता है। इसके अलावा, लीवर, पेरिटोनियम और किडनी के ऊतकों को -80 डिग्री पर अल्ट्रा-लो-टेम्परेचर रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया गया था। चूहों के निश्चित जिगर, गुर्दे और पेरिटोनियल ऊतक निर्जलित और मोम में जड़े हुए थे। वर्गों को -20 डिग्री पर जमे हुए थे और 3 माइक्रोन की मोटाई में काटा गया था, वर्गों को फैलाने के लिए एक पानी के स्नान का उपयोग किया गया था, वर्गों को स्लाइड से जोड़ा गया था, और बैकअप के लिए वर्गों को 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

सिस्टैंच पाउडर

5. हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एचई) धुंधला।

वर्गों को 4 मिनट के लिए हेमेटोक्सिलिन समाधान में दाग दिया गया था, इसके बाद 2 मिनट और 15 एस के लिए नल के पानी से कुल्ला किया गया था। वर्गों को 3 मिनट के लिए ईओसिन समाधान के साथ दाग दिया गया था। 30 एस प्रत्येक के लिए क्रमशः 80 प्रतिशत और 95 प्रतिशत इथेनॉल पर सफाई की गई। वर्गों को 3 एस के लिए ज़ाइलीन में साफ किया गया और तटस्थ बाल्सम के साथ लगाया गया। धुंधला होने के बाद, एक माइक्रोस्कोप का उपयोग करके वर्गों को देखा गया था, और नमूनों के संबंधित भागों को इकट्ठा करने और उनका विश्लेषण करने के लिए Leica Application Suite का उपयोग किया गया था।

6. जैव रासायनिक विश्लेषण।

सीरम के नमूनों को 4 डिग्री पर पिघलाए जाने के बाद, शेन्ज़ेन मिंड्रे बीएस420 ऑटोमैटिक बायोकेमिकल एनालाइज़र द्वारा सीरम के नमूनों का पता लगाया गया, और टीबीआईएल, एएसटी, एएलटी, एएलबी, सीआर, बीयूएन, के, ना, और सीए सांद्रता को शेन्ज़ेन मैरुई के साथ निर्धारित किया गया। शेनझेन, चीन) मैचिंग बायोकेमिकल किट।

7. इम्यूनोहिस्टोकेमिकल स्टेनिंग।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा लीवर, पेरिटोनियम और किडनी के ऊतकों में AQP1 की प्रोटीन अभिव्यक्ति की जांच की गई। स्लाइड्स को 1 घंटे के लिए 65 डिग्री पर बेक किया गया, 30 मिनट के लिए ज़ाइलीन में भिगोया गया और ग्रेडिएंट अल्कोहल में हाइड्रेटेड किया गया। 1 एमएम ट्रिस-ईडीटीए बफर सॉल्यूशन (जी1203, सर्विसबियो) का इस्तेमाल 18 मिनट की मरम्मत के लिए 125 डिग्री और 103 केपीए पर किया गया था, 10 मिनट के लिए 3 प्रतिशत एच2ओ2 (नेशनल फार्मास्युटिकल ग्रुप केमिकल रिएजेंट कं, लिमिटेड, चीन) के साथ इनक्यूबेट किया गया था। 30 मिनट के लिए 10 प्रतिशत बकरी सीरम (SL038, Solarbio), और प्राथमिक एंटीबॉडी AQP1 (PAB45863, Bioswamp), पेरिटोनियम कमजोर पड़ने 1: 250, और लीवर और किडनी कमजोर पड़ने 1: 400 के साथ रात भर 4 डिग्री सेल्सियस पर। वर्गों को 4 डिग्री से कमरे के तापमान में स्थानांतरित कर दिया गया और 45 मिनट के लिए छोड़ दिया गया। 37 डिग्री पर 60 मिनट के लिए मैक्स विजन टीएम एचआरपी पॉलिमर एंटी-रैबिट सेकेंडरी एंटीबॉडी (केआईटी -5020, एमएक्सबी) के साथ इलाज किया गया। वर्गों के रंग बदलने तक DAB (DA1010, Solarbio) से उपचारित। वर्गों को बारी-बारी से भिगोएँ, हेमटॉक्सिलिन 3 मिनट, 75 प्रतिशत अल्कोहल 5 मिनट, 85 प्रतिशत अल्कोहल 5 मिनट, 95 प्रतिशत अल्कोहल 5 मिनट, 100 प्रतिशत अल्कोहल 10 मिनट, ज़ाइलीन 10 मिनट। तटस्थ रेजिन सील अनुभाग। Leica एप्लिकेशन सूट इमेज सिस्टम का उपयोग नमूने के संबंधित भागों को कैप्चर करने के लिए किया गया था। नाभिक को हेमटॉक्सिलिन के साथ नीला दाग दिया गया था, और डीएबी ने सकारात्मक भूरा पीला दिखाया।

8. पश्चिमी धब्बा।

P38, p-p38, ERK1 / 2, p-ERK1 / 2, JNK1 / 2/3, p-JNK1 / 2/3, और लीवर, पेरिटोनियम और गुर्दे के ऊतकों में AQP1 के प्रोटीन स्तर का पश्चिमी धब्बा द्वारा विश्लेषण किया गया था। . ऊतक के नमूनों को RIPA lysate (R0010, Solarbio) में 4 डिग्री C पर प्रोटीज इनहिबिटर युक्त और 15 मिनट के लिए 12000 g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। BCA प्रोटीन परख किट (PC0020, Solarbio) का उपयोग करके प्रोटीन की सांद्रता को मापा गया। प्रोटीन (20 ug) को 12 प्रतिशत सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया गया और पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड झिल्ली (IPVH00010, Millipore) पर स्थानांतरित किया गया। झिल्ली को ट्रिस-बफर खारा में कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए 5 प्रतिशत स्किम दूध के साथ अवरुद्ध किया गया था और पी-ईआरके 1/2 (एबी 214036), जेएनके 1/2/3 (एबी 208035), पी-जेएनके 1/2 / के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था। Abcam (UK) से 3 (ab76572), और p-p38 (ab47363), और Bioswamp (चीन) से ERK1/2 (MAB37123), p38 (PAB37381), AQP1 (PAB45863), और GAPDH (PAB36269), रात भर 4 बजे डिग्री । GAPDH एंटीबॉडी (PAB36269, Bioswamp) को आंतरिक संदर्भ के रूप में चुना गया था। सभी प्राथमिक एंटीबॉडी तनुकरण अनुपात 1:1000 हैं। झिल्लियों को तब ट्रिस-बफर खारा से धोया गया था और कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी माध्यमिक एंटीबॉडी (SAB43714, बायोस्वैम्प, 1: 20000) में डाला गया था। Immobilon Western HRP (WBKLS0500, Millipore) का उपयोग करके वर्णमिति प्रतिक्रिया द्वारा प्रतिरक्षण की कल्पना की गई थी। झिल्लियों को एक स्वचालित रसायनयुक्त विश्लेषक (टैनन 5200, टैनॉन) के साथ स्कैन किया गया था।

9. सांख्यिकीय विश्लेषण।

SPSS 23. 0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए। सभी डेटा औसत ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में प्रस्तुत किए गए थे। स्वतंत्र-नमूना टी-परीक्षणों का उपयोग करके दो समूहों के बीच तुलना की गई। तीन या अधिक समूहों के बीच अंतरों की तुलना करने के लिए एक तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था, और फ़िशर के कम से कम महत्वपूर्ण अंतर (एलएसडी) परीक्षण का उपयोग व्यक्तिगत समूह तुलनाओं के लिए किया गया था। P <0.05 के मानों को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

सिस्टैंच के प्रभाव

संदर्भ

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रोंग जेन झांग 1 यिन लियू 1 मिन ली 2 योंग लिन हुआंग 3 और जेन हेंग सॉन्ग 3

1 हेपाटोलॉजी विभाग, चीनी चिकित्सा के गुआंग्शी विश्वविद्यालय, नाननिंग, चीन का पहला संबद्ध अस्पताल

2 चिकित्सा प्रयोगशाला विभाग, चीनी चिकित्सा के गुआंग्शी विश्वविद्यालय, नाननिंग, चीन का पहला संबद्ध अस्पताल

3 हेपेटोलॉजी विभाग, चीनी चिकित्सा के गुआंग्शी विश्वविद्यालय, नाननिंग, चीन