भाग Ⅰ: सिनबायोटिक लैक्टोबैसिलस बुल्गारिकस 6c3 स्ट्रेन, इनुलिन और फ्रुक्टुलिगोसेकेराइड का प्रशासन इंडोक्सिल सल्फेट और किडनी की क्षति की सांद्रता को कम करता है

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अलोंसो जेरेज़-मोरालेस, जोस एस मेरिनो, सिंधी टी। डियाज़-कैस्टिलो और एट अल।

1 परिचय

गुर्दे की पुरानी बीमारी(सीकेडी) का स्थायी परिवर्तन माना जाता हैगुर्दासंरचना, इसका कार्य, या, सबसे गंभीर मामलों में, दोनों। सीकेडी सीधे व्यक्ति के स्वास्थ्य और जीवन की गुणवत्ता को प्रभावित करता है [1,2]। शारीरिक स्तर पर, सीकेडी के कारण अक्सर देखे गए परिवर्तन क्रिएटिनिन, सिस्टैटिन कोर यूरिक नाइट्रोजन [2] के सीरम स्तर में वृद्धि हुई हैं। गहन निगरानी और जनसंख्या में जागरूकता ने सीकेडी के निदान में वृद्धि की है, उदाहरण के लिए, यह निर्धारित करने के लिए कि संयुक्त राज्य अमेरिका की आबादी का 15 प्रतिशत इस विकृति से प्रभावित है [3]। रोग की प्रगति, साथ ही उपर्युक्त मेटाबोलाइट्स के प्रभाव, हृदय और जठरांत्र प्रणाली सहित शरीर की कई प्रणालियों पर गंभीर प्रभाव डालते हैं, इन मेटाबोलाइट्स की उपस्थिति के कारण पूर्व में मृत्यु दर में वृद्धि हुई है। और बाद के [4,5] में आत्मसात, गतिशीलता और पारगम्यता को प्रभावित करता है। जठरांत्र संबंधी परिवर्तन आंत में चयापचयों के बढ़ते अवशोषण को भड़काते हैं जो एक प्रणालीगत सूजन को बनाए रखने में योगदान करते हैं, जो बदले में, सामान्य माइक्रोबायोटा की संरचना और इसके चयापचय कार्यों को प्रभावित करता है और आंतों के डिस्बिओसिस का कारण बन सकता है [6]।

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सीकेडी और आंतों के डिस्बिओसिस के बीच संबंध को न केवल आहार में बदलाव से समझाया जा सकता है, बल्कि इसके अलावा, ल्यूमिनल पीएच की वृद्धि से, अमोनियम की बढ़ी हुई एकाग्रता के लिए माध्यमिक [7]। अंतिम चरण के सीकेडी रोगियों ने स्वस्थ व्यक्तियों [8] की तुलना में अपने मल में कई जीवाणु करों की प्रचुरता में अंतर को चिह्नित किया है। विशेष रूप से, जीवाणु जीनस स्तर पर, सीकेडी के रोगियों में एंटरोरहैबडस, ब्लोटिया, रुमिनोकोकस, पैरासुटरेला, बैक्टेरॉइड्स, क्लोस्ट्रीडियम (सेंसू स्ट्रिक्टो), एस्चेरिचिया, शिगेला और एलोबैकुलम की वृद्धि और एकरमेनसिया, बिफीडोबैक्टीरियम, क्लोस्ट्रीडियम IV, लैक्टोबैसिलस, लैक्टोकोकस की कमी दिखाई देती है। , ल्यूकोनोस्टोक, अल्कलीफिलस, और स्यूडोमोनास [9-11]। या तो खराब गुर्दे की खराबी या आंतों के डिस्बिओसिस के कारण, विषाक्त चयापचयों का उत्पादन करने वाले रोगजनकों को चयापचय और बाधित करने में सक्षम बैक्टीरिया की कमी होती है, जिसके परिणामस्वरूप उनकी वृद्धि होती है [12]। वोंग एट अल। [8] ने प्रदर्शित किया कि उन्नत सीकेडी से पीड़ित रोगियों में यूरिया, यूरीकेस, और पी-क्रेसोल और इंडोल का उत्पादन करने वाले एंजाइमों वाले जीवाणु समूहों की वृद्धि देखी गई।

रक्त में यूरीमिक रिटेंशन मेटाबोलाइट्स (यूआरएम) का संचय, जिसमें शामिल हैंइंडोक्सिल सल्फेट(IS), p-cresyl सल्फेट (pCS), ट्राइथाइलैमाइन, और ट्राइमेथाइलमाइन N-ऑक्साइड (TMAO)[5] को CKD [13] के त्वरक के रूप में माना जाता है। है(इंडोक्सिल सल्फेट)सबसे प्रसिद्ध यूरेमिक इंडोल, समीपस्थ घुमावदार नलिकाओं द्वारा स्रावित होता हैगुर्दाऔर यह बैक्टीरियल ट्रिप्टोफैनेस द्वारा ट्रिप्टोफैन के चयापचय से उत्पन्न होता है। पशु मॉडल के साक्ष्य से पता चलता है कि IS(इंडोक्सिल सल्फेट)गुर्दे के कार्य को प्रभावित कर सकता है और यह एंडोथेलियल कोशिकाओं में ऑक्सीडेटिव तनाव पैदा करने वाली नलिकाओं की कोशिकाओं को नुकसान पहुंचा सकता है, मरम्मत तंत्र को बाधित कर सकता है, और इंटरस्टीशियल ट्यूबलर फाइब्रोसिस का पक्ष ले सकता है क्योंकि यह मेटालोप्रोटीनिस (टीआईएमपी) के ऊतक अवरोधक टीजीएफ -1 की जीनिक अभिव्यक्ति को बढ़ाता है। -1)और कोलेजन का [14]। फिर भी, आंतों के माइक्रोबायोटा के असंतुलन और विषाक्त चयापचयों के सहवर्ती उत्पादन को संशोधित किया जा सकता है। यह वर्णित किया गया है कि कुछ प्रोबायोटिक्स और प्रीबायोटिक्स के साथ पूरक कुछ यूरीमिक विषाक्त पदार्थों के उत्पादन को कम कर सकते हैं और सामान्य माइक्रोबायोटा को बहाल कर सकते हैं [5]। उदाहरण के लिए, मेटा-विश्लेषण अध्ययनों ने निष्कर्ष निकाला है कि प्रोबायोटिक उपभेदों के साथ पूरक प्राप्त करने वाले सीकेडी रोगियों ने अपने विरोधी भड़काऊ साइ-टोक्सिन में वृद्धि की और उनके यूरेमिक विषाक्त पदार्थों के स्तर को कम कर दिया [15,16]। कुछ अध्ययनों ने बताया कि सिनबायोटिक्स का प्रशासन, प्रोबायोटिक्स और प्रीबायोटिक्स का एक संयोजन, अनुकूल परिणामों के साथ सीकेडी की प्रगति को कम करने में सक्षम है [12]। वर्तमान कार्य के संदर्भ में, इनुलिन-प्रकार के फ्रुक्टेन प्रासंगिक प्रीबायोटिक्स हैं क्योंकि उन्होंने दिखाया है सीकेडी [17] की प्रगति को कम करने और यूआरएम को कम करने की उनकी क्षमता, जैसे कि पीसीएस और आईएस(इंडोक्सिल सल्फेट)[18]। पांजा एट अल। (2017) चरण 2-5 सीकेडी के रोगियों में प्रोबायोटिक्स एल.एसिडोफ्लिलस और बिफीडोबैक्टीरियम लोंगम प्लस फ्रुक्टूलिगोसेकेराइड्स (एफओएस) प्रशासित किया और बताया कि अनुपचारित रोगियों में काफी अधिक पीसीएस थे और वे हैं(इंडोक्सिल सल्फेट)सिनबायोटिक उपचार प्राप्त करने वाले रोगियों की तुलना में रक्त में [19]। इस काम में, हमने सबसे पहले आईएस . को कम करने के लिए प्रोबायोटिक उपभेदों की क्षमता का मूल्यांकन किया(इंडोक्सिल सल्फेट)इन विट्रो में सबसे होनहार का चयन करने के लिए। फिर, इस स्ट्रेन को प्रीबायोटिक्स इनुलिन और फ्रुक्टुलिगोसेकेराइड्स (FOS) के साथ जोड़ा गया ताकि एक पुटीय सिनबायोटिक प्राप्त किया जा सके। इन प्रीबायोटिक्स को इसलिए चुना गया क्योंकि उन्होंने दिखाया है कि वे पीसीएस और आईएस . को कम कर सकते हैं(इंडोक्सिल सल्फेट)रक्त में एकाग्रता [17,18]। अंत में, रक्त IS . का मूल्यांकन करते हुए, विवो में पुटीय सिनबायोटिक की दक्षता का परीक्षण किया गया(इंडोक्सिल सल्फेट)और क्रिएटिनिन का स्तर औरगुर्दाऔर एक चूहे के मॉडल (स्प्रैग-डावले चूहों) का उपयोग करके दिल की क्षति सहितगुर्दाकमी (नेफ्रक्टोमाइज्ड) और अनुपचारित जानवर।

2. परिणाम

2.1.आईएस को कम करने में सक्षम उपभेदों का अलगाव(इंडोक्सिल सल्फेट)कृत्रिम परिवेशीय

डेयरी उत्पादों के 36 नमूनों में से, एमआरएस अगर में 84 उपभेदों को ब्रोमोफेनॉल ब्लू (एमआरएस-बीएफबी) के साथ पूरक किया गया था, जो एक अंतर माध्यम के रूप में उपयोग किया जाता है। यह माध्यम लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया को अलग करने की अनुमति देता है। पीएच 3 पर कॉलोनियां पीले रंग की होंगी और पीएच 5 के करीब वे नीले रंग की होंगी [19]। आईएस . की कमी में मध्यस्थता करने की उनकी क्षमता का निर्धारण करने के लिए पृथक किए गए सभी 84 उपभेदों का इन विट्रो में परीक्षण किया गया था(इंडोक्सिल सल्फेट). इसके लिए, 2.8 एमएम आईएस . के साथ पूरक एमआरएस ब्रोथ में उपभेदों को संवर्धित किया गया था(इंडोक्सिल सल्फेट)48 घंटे के लिए, और फिर IS(इंडोक्सिल सल्फेट)उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) द्वारा मापा गया था। स्ट्रेन lc2, 6c3, और VIc2 काफी कम करने में सक्षम थे (p<0.05) the="" concentration="" of="" the="" compound="" (table="" 1).="" furthermore,="" the="" three="" strains="" were="" cultured="" together="" for="" 48="" h="" in="" the="" presence="" of="">(इंडोक्सिल सल्फेट)मूल्यांकन करने के लिए कि क्या उन्होंने आईएस को कम करने के लिए सहक्रियात्मक रूप से कार्य किया है(इंडोक्सिल सल्फेट). जब आईएस की उपस्थिति में तीनों उपभेदों को एक साथ सुसंस्कृत किया गया था(इंडोक्सिल सल्फेट), IS . की सांद्रता(इंडोक्सिल सल्फेट)सहक्रियात्मक गतिविधि (तालिका 1) की संभावना को खारिज करते हुए, अकेले उपभेदों द्वारा हासिल की गई तुलना में भी काफी कम हो गया था।

तालिका एक।इन विट्रो कमी, अगरइंडोक्सिल सल्फेट(आईएस), का मूल्यांकन उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) द्वारा किया जाता है, जो जीवाणु उपभेदों द्वारा मध्यस्थता करता है।

2.2. चयनित उपभेदों की पहचान

IS . को कम करने की उनकी क्षमता के कारण चुने गए तीन स्ट्रेन(इंडोक्सिल सल्फेट)डीएनए के पीसीआर प्रवर्धन के बाद 16S rRNA अनुक्रमण द्वारा पहचाने गए थे। स्ट्रेन 1c2 एक ग्राम-पॉजिटिव श्रृंखला थी जो कोकस बनाती थी, जो आणविक विश्लेषण में, स्ट्रेप्टोकोकस थर्मोफिलस के लिए लैक्ज़ प्राइमरों के साथ प्रवर्धित होती है। स्ट्रेन 6c3 और VIc2 दोनों ग्राम-पॉजिटिव बेसिली थे और जीनस लैक्टोबैसिलस की पहचान करने के लिए LbG प्राइमरों के साथ प्रवर्धित थे। 16SrRNA अनुक्रमण के विश्लेषण ने स्ट्रेप्टोकोकस थर्मोफिलस (97.3 प्रतिशत समानता; एक्सेस नंबर: AY188354.1) के रूप में तनाव एलसी 2 की पहचान करने की अनुमति दी, लैक्टोबैसिलस बुल्गारिकस (99.7 प्रतिशत समानता; एक्सेस संख्या: सीआर 954253) के रूप में तनाव 6c3 और लैक्टोबैसिलस एसिडोफिलस के रूप में तनाव VIc2 ( 99.5 प्रतिशत समानता; एक्सेस नंबर: AY773947.1)। सिनबायोटिक तैयार करने और निम्नलिखित assays को आगे बढ़ाने के लिए केवल तीन उपभेदों में से एक का चयन किया गया था। स्ट्रेप्टोकोकस थर्मोफिलस 1c2 स्ट्रेन को छोड़ दिया गया क्योंकि इसने कम विकास दर दिखाई। शेष दो उपभेदों में से, लैक्टोबैसिलस बुल-गैरिकस 6c3 स्ट्रेन का चयन किया गया क्योंकि यह लैक्टोबैसिलस एसिडोफिलस VIIc2 स्ट्रेन की तुलना में बेहतर प्रोबायोटिक कार्यक्षमता और सुरक्षा विशेषताओं को दर्शाता है।

2.3. रक्त क्रिएटिनिन और आईएस . में सिनबायोटिक का प्रभाव(इंडोक्सिल सल्फेट)स्तरों

प्रोबायोटिक L. bulgaricus 6c3 को प्रीबायोटिक्स Inuline और FOS के सहयोग से lyophilized किया गया था, जो कि lyophilized उत्पाद के प्रोबायोटिक 10 डिग्री CFU/g की सांद्रता है। नेफ्रक्टोमाइज्ड सिनबायोटिक उपचारित स्प्राग-डावले चूहों (लाख) के समूह को पीने के पानी में प्रतिदिन दस ग्राम सिनबायोटिक दिया गया। नेफरेक्टोमाइज्ड अनुपचारित समूह (नेफ) और गैर-नेफरेक्टोमाइज्ड नियंत्रण समूह को सिन-बायोटिक प्राप्त नहीं हुआ। सीरम क्रिएटिनिन और IS(इंडोक्सिल सल्फेट)शुरुआत में (नेफरेक्टोमी के एक सप्ताह बाद) और परख के अंत में एचपीएलसी द्वारा चूहों के स्तर को मापा गया। इसके अलावा, सभी समूहों के जानवरों के हेमटोक्रिट दर्ज किए गए थे। परख के अंत में सीरम क्रिएटिनिन के स्तर की भिन्नता काफी भिन्न थी (p .)<0.05) in="" the="" nef="" and="" lac="" groups,increasing="" 127%and="" 121%,="" respectively,="" when="" compared="" to="" their="" initial="" values(figure="" 1).="" the="" control="" group="" showed="" a="" non-significant="" creatinine="" increase="" of="" only="" 2%.="" the="" increase="" of="" creatinine="" serum="" levels="" in="" the="" nef="" and="" lac="" groups="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" but="" not="" significantly="" different="" between="" the="" nef="" and="" lac="" groups.="" nevertheless,="" all="" three="" groups="" maintained="" their="" creatinine="" levels="" within="" de="" normal="" limits="" for="" these="" rats.="" on="" the="" other="" hand,="" serum="">(इंडोक्सिल सल्फेट)केवल नेफरेक्टोमाइज्ड (गुर्दे की कमी वाले) जानवरों के अनुरूप एनईएफ समूह में स्तरों में उल्लेखनीय वृद्धि हुई है, जिन्हें सिनबायोटिक नहीं दिया गया है (38.8 प्रतिशत) (पी)<0.05).>(इंडोक्सिल सल्फेट)स्तरों ने नियंत्रण समूह में गैर-महत्वपूर्ण 0.5 प्रतिशत वृद्धि और लाख समूह में गैर-महत्वपूर्ण 0.8 प्रतिशत की कमी दिखाई (चित्र 2)। जब नेफरेक्टोमाइज्ड जानवरों के समूहों की तुलना की गई, तो समूह जो सिनबायोटिक (नेफ) का सेवन नहीं कर रहे थे, उन्होंने आईएस का एक महत्वपूर्ण उच्च स्तर दिखाया।(इंडोक्सिल सल्फेट)सिनबायोटिक (लाख) का सेवन करने वाले समूह की तुलना में। लाख समूह और नियंत्रण समूह के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। क्रिएटिनिन और आईएस के बीच संभावित सहसंबंध की खोज करने वाले डेटा का विश्लेषण(इंडोक्सिल सल्फेट)स्तरों से पता चला कि यह सहसंबंध मौजूद नहीं था (पूरक सामग्री: आंकड़े S1-S3)। अंत में, हेमटोक्रिट्स के परिणामों ने तीन समूहों (चित्र 3) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया।

आकृति 1. (ए) सिनबायोटिक के 16 सप्ताह के प्रशासन की शुरुआत और अंत में स्प्रेग-डावले चूहों का सीरम क्रिएटिनिन स्तर। (बी) 95 प्रतिशत तुकी एक साथ आत्मविश्वास अंतराल के साथ अंतिम क्रिएटिनिन सांद्रता के साधनों के अंतर (यदि अंतराल में शून्य नहीं है, तो संबंधित साधन काफी भिन्न हैं)। Nef: nephrectomized चूहों को सिनबायोटिक नहीं मिल रहा है, Lac: nephrectomized चूहों को सिनबायोटिक प्राप्त करना, नियंत्रण: sham-nephrectomized चूहों।

चित्र 2।(ए) सीरमइंडोक्सिल सल्फेट(आईएस) सिनबायोटिक के शुरूआती और 16 सप्ताह के अंत में स्प्राग-डावले चूहों का स्तर। (बी) अंतिम आईएस के लिए साधनों का अंतर(इंडोक्सिल सल्फेट)95 प्रतिशत तुकी के साथ सांद्रता एक साथ आत्मविश्वास अंतराल(यदि एक अंतराल में शून्य नहीं है, तो संबंधित साधन काफी भिन्न हैं)। नेफ: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक नहीं मिल रहा है, लैक: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक प्राप्त करना, नियंत्रण: शम-नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों।

2.4. हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण से पता चला है कि सिबायोटिक के प्रशासन ने सीकेडी की प्रगति को कम कर दिया है

प्रयोग के अंत में, चूहों को बाईं ओर से नमूने प्राप्त करने के लिए इच्छामृत्यु दी गईगुर्देऔर दिलों को हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए संसाधित किया जाना है। फ़ाइब्रोोटिक क्षेत्र को मेसन के ट्राइक्रोम (एमटी) दाग द्वारा सूचनात्मक उपकरण इमेज-प्रो प्लस 3 का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। 0 (मीडिया साइबरनेटिक्स, रॉकविल, एमडी, यूएसए) क्षतिग्रस्त (यानी, फाइब्रोटिक) क्षेत्र के प्रतिशत की गणना करने के लिए। (तालिका 2) और दो-फोटॉन उत्तेजना माइक्रोस्कोपी द्वारा, एक विधि जो दो-फोटॉन के उत्सर्जन द्वारा कोलेजन का पता लगाती है, जिससे कोलेजन एक दूसरा हार्मोनिक उत्पन्न करता है, जिसे कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा संगठन के करीब एक विशिष्ट छवि प्राप्त करके देखा जा सकता है और ऊतक के अंदर कोलेजन का वितरण। एमटी दाग ​​द्वारा मूल्यांकन किए गए गुर्दे के फाइब्रोटिक क्षेत्रों की तुलना करते समय, यह देखना संभव था कि फाइब्रोटिक क्षेत्र, नेफ समूह में 25 प्रतिशत बड़े थे, लेकिन लैक समूह में केवल 12 प्रतिशत बड़े थे, जब शम की तुलना में स्नैबायोटिक प्रशासित किया गया था- नेफ्रक्टोमाइज्ड कंट्रोल जानवर। इस धुंधला प्रक्रिया के साथ देखे गए घाव बोमन के कैप्सूल की पार्श्विका परत और समूह नेफ और लैक के जानवरों के समीपस्थ और बाहर के घुमावदार नलिकाओं के तहखाने की झिल्ली पर स्थित थे। नेफ समूह के मामले में, जिन जानवरों को सिनबायोटिक प्रशासित नहीं किया गया था, फाइब्रोटिक ऊतक के सहवर्ती विकास के साथ, घुमावदार नलिकाओं की कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म का नुकसान देखा गया था। जब दो-फोटॉन उत्तेजना माइक्रोस्कोपी द्वारा गुर्दे के ऊतकों का विश्लेषण किया गया था, तो कोलेजन को सभी नमूनों में जाली-प्रकार की संरचना के साथ देखा गया था। समूह नेफ और लाख ने नियंत्रण समूह की तुलना में अधिक घाव दिखाए, जिसमें केवल एक फाइब्रोटिक क्षेत्र पाया गया (चित्र 4)। दो-फोटॉन उत्तेजना माइक्रोस्कोपी के तहत देखे जाने पर किसी भी नमूने में वृक्क कोषिकाओं में कोई घाव नहीं पाया गया।

तालिका 2।मैसन के ट्राइक्रोम दाग में फाइब्रोटिक क्षेत्र का प्रतिशतगुर्दाऊतकीय खंड। परिणाम माध्य प्लस मानक त्रुटि के रूप में व्यक्त किए जाते हैं।

चित्र तीन।सिनबायोटिक के 16 सप्ताह के प्रशासन के अंत में स्प्रेग-डावले चूहों के हेमटोक्रिट मूल्य। नेफ: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक नहीं मिल रहा है, लैक: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक प्राप्त करना, नियंत्रण: शम-नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों।

चित्रा 4.स्प्राग-डावले चूहों के गुर्दे के ऊतकीय खंड। (एसी): नेफ्रॉन के मेसन का ट्राइक्रोम दाग। तंतुमय क्षेत्र नीले (तीर) में देखे जाते हैं। (DF): दो-फोटॉन उत्तेजना माइक्रोस्कोपी द्वारा देखा गया एक ही ऊतक। रेशेदार ऊतक हरे रंग में देखे जाते हैं। नेफ: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक नहीं मिल रहा है, लैक: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक प्राप्त करना, नियंत्रण: शम-नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों। स्केल बार: एसी माइक्रोग्राफ के लिए 100 माइक्रोन और डीएफ माइक्रोग्राफ के लिए 50 माइक्रोन।

2.5. सिनबायोटिक के प्रशासन ने कार्डिक फाइब्रोसिस को कम नहीं किया

दिल में, एमटी दाग ​​ने नेफ्रक्टोमाइज्ड चूहों के ऊतक में फाइब्रोटिक क्षेत्रों की उपस्थिति को दिखाया, जबकि ये क्षेत्र नियंत्रण वाले जानवरों में अनुपस्थित थे। चूहों में सीकेडी के शामिल होने से कार्डियक फाइब्रोसिस उत्पन्न होता है जिसे नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों (चित्रा 5) में सिनबायोटिक उपचार के प्रशासन द्वारा रोका नहीं गया था।

चित्रा 5.मेसन का ट्राइक्रोम (एमटी) स्प्रेग-डावले चूहों के दिल का धुंधलापन। फाइब्रोटिक क्षेत्र नीले (तीर) में दागे जाते हैं। नेफ: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक नहीं मिल रहा है, लैक: नेफरेक्टोमाइज्ड चूहों को सिनबायोटिक प्राप्त करना है। नियंत्रण: दिखावटी-नेफ्रक्टोमाइज्ड चूहे। स्केल बार 100 um.

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