भय‑ और पुरस्कार‑ आधारित सामाजिक रूप से प्राप्त जानकारी की दोहरी याद के बाद चूहे के मस्तिष्क में आर्क एमआरएनए अभिव्यक्ति के पैटर्न(2)

प्रत्यक्ष और सामाजिक रूप से अर्जित भय संघों की याद में आर्क।

प्रत्यक्ष सीखने के माध्यम से प्राप्त डर को याद करने के दौर से गुजर रहे हमारे चूहों के बारे में हमारे निष्कर्षों की व्याख्या करने की हमारी क्षमता इस बात से महत्वपूर्ण रूप से सहायता प्राप्त करती है कि डर सीखने और याद करने की अंतर्निहित प्रणाली कितनी अच्छी तरह से चित्रित है। जिन क्षेत्रों की हमने जांच की उनमें से कई क्षेत्र डर या विलुप्त होने की शिक्षा में शामिल हैं (जिनमें से बाद वाले को हम प्रदर्शनकारियों में शुरू किया गया मान लेंगे, क्योंकि वे एफसीबीपी के दौरान गैर-प्रबलित सीएस प्रस्तुति से गुजर चुके थे) विशेष रूप से एसीसी, पीएलसी और आईएलसी 30-32 ,37. हालाँकि सामाजिक भय के तंत्रिका तंत्र के संबंध में शोध का थोड़ा छोटा पूल उपलब्ध है, सामाजिक भय सीखने के प्रस्तावित मॉडल यह मानते हैं कि समान प्रणालियाँ सामाजिक और प्रत्यक्ष भय सीखने का आधार बनती हैं। हमारे निष्कर्ष सामाजिक रूप से अर्जित भय संघ या सीधे अर्जित भय संघ को वापस बुलाने में एसीसी, पीएलसी, या आईएलसी की कोई समग्र भूमिका नहीं दर्शाते हैं (हालांकि नीचे पीएलसी गतिविधि में लिंग अंतर की "चर्चा" भी देखें)। हालाँकि, जैसा कि पिछले अनुभाग में बताया गया है, यह संभवतः केवल यह इंगित करता है कि आर्क इस मामले में गतिविधि के विश्वसनीय संकेतक के रूप में काम नहीं करता है। भय के बाद अधिग्रहण के बाद इन क्षेत्रों की जांच संभवतः एक अलग कहानी बताएगी। डर को याद करने के बाद आर्क गतिविधि में कठिन स्पष्ट शोध सीमित है, इसमें कुछ पिछले शोध शामिल हैं। चिया और ओटो35 ने पाया कि बिना शर्त नियंत्रण की तुलना में ट्रेस डर कंडीशनिंग चूहों में पृष्ठीय और उदर हिप्पोकैम्पस दोनों में आर्क प्रोटीन की अभिव्यक्ति काफी अधिक थी। विशेष रूप से, इस प्रयोग में समरूप वेंट्रल और पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस के वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण द्वारा आर्क की मात्रा निर्धारित की गई थी, इसलिए हिप्पोकैम्पस गतिविधि का सटीक स्थानीयकरण उपलब्ध नहीं था। इन निष्कर्षों से यह संकेत मिलता है कि, जैसा कि एसटीएफपी में होता है, आर्क प्रतिलेखन को हिप्पोकैम्पस के कुछ क्षेत्रों में एक संकेतित भय स्मृति के लिए 48- घंटे के रिकॉल समय बिंदु पर प्रेरित किया जा सकता है। हमारे अशक्त परिणाम संभावित रूप से पर्यवेक्षकों की ओर से असफल रिकॉल के कारण भी हो सकते हैं, क्योंकि हमारी प्रयोगशाला 12-14,26 में पिछले अध्ययनों के विपरीत, हमने नियंत्रण की तुलना में पर्यवेक्षकों में सीएस में उच्च ठंड नहीं देखी। क्या यह वास्तव में पर्यवेक्षकों की असफल रिकॉल के कारण है या हमारी एकल सीएस रिकॉल प्रक्रिया और सीएस पर नियंत्रणों के पूर्व-प्रदर्शन के कारण स्पष्ट नहीं है।

सिस्टैंच क्या करता है-याददाश्त में सुधार

सामाजिक रूप से प्राप्त जानकारी को याद रखने में वेंट्रल ऑर्बिटोफ्रंटल कॉर्टेक्स की संभावित भूमिका।

एक ऐतिहासिक अध्ययन में, लेसबर्गुएरेस एट अल.24। यह प्रदर्शित करने में सक्षम थे कि जबकि पृष्ठीय हिप्पोकैम्पल (डीएचपीसी) गतिविधि अधिग्रहीत एसटीएफपी के अधिग्रहण और अल्पकालिक रिकॉल के लिए आवश्यक थी, एसटीएफपी मेमोरी को अंततः दीर्घकालिक भंडारण के लिए ओएफसी में उतार दिया गया था। इसके अतिरिक्त, लेस्बर्गुएरेस एट अल। यह प्रदर्शित करने में सक्षम थे कि एसटीएफपी अधिग्रहण के दौरान ऑर्बिटोफ्रंटल कॉर्टेक्स में न्यूरॉन्स की टैगिंग सामाजिक रूप से प्रसारित खाद्य प्राथमिकताओं के दीर्घकालिक भंडारण के लिए आवश्यक है और अधिग्रहण के बाद ओएफसी गतिविधि में हस्तक्षेप से अधिग्रहण के 30 दिनों के बाद स्मृति याद आती है (हालांकि यह भी देखें38)। ये निष्कर्ष एसटीएफपी अधिग्रहण के बाद पहले दिनों या हफ्तों में डीएचपीसी और ओएफसी के बीच संचार का सुझाव देंगे और एसटीएफपी मेमोरी के दीर्घकालिक भंडारण को समायोजित करने के लिए इस समय ओएफसी के चल रहे पुनर्गठन के बारे में बताएंगे। जबकि इस अध्ययन में प्रदर्शनकारियों, नियंत्रणों और पर्यवेक्षकों के बीच वेंट्रल या लेटरल ओएफसी आर्क अभिव्यक्ति में समग्र अंतर की कमी उस व्याख्या को चुनौती देगी, हमने समग्र सामाजिक शिक्षण प्रदर्शन और दोहरे-आर्क व्यक्त कोशिकाओं के हमारे संयुक्त माप के बीच एक महत्वपूर्ण नकारात्मक सहसंबंध का पता लगाया है। वीओसी में. इसके अलावा, पसंद परीक्षण प्रदर्शन और सीएस को फ्रीजिंग के आधार पर प्रदर्शनकारियों के लिए गठित समान मीट्रिक के बीच यह सहसंबंध नहीं देखा गया था। चूंकि सामाजिक रूप से अर्जित जानकारी पर निर्भरता को संभावित रूप से अविश्वसनीय सामाजिक जानकारी और प्रत्यक्ष अनुभव के माध्यम से सीखने के खतरों के बीच चयन के रूप में सोचा जा सकता है, सामाजिक रूप से प्राप्त जानकारी की अभिव्यक्ति में आवाज की यह स्पष्ट निरोधात्मक भूमिका मूल्य में ओएफसी की व्यापक भूमिका से जुड़ी हो सकती है। -आधारित निर्णय लेना39-42।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला प्रयोग

आर्क प्रतिलेखन में लिंग अंतर.

कई सांख्यिकीय और पद्धतिगत कारण। सबसे पहले, पर्याप्त व्यवहार्य वर्गों के बिना चूहों को हटाने के बाद लिंग/स्थिति संयोजनों के लिए समूह का आकार n{0}} से n{1}} तक होने के साथ, महिलाओं के लिए हमारा नमूना आकार कभी-कभी कम होता है (हालांकि विशेष रूप से, एक n<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

यद्यपि आर्क अभिव्यक्ति में लिंग अंतर की बहुत कम जांच की गई है, लेकिन कुछ निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि मादा चूहे अपेक्षाकृत समृद्ध वातावरण43 में बार-बार संपर्क में आने के बाद पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस के कुछ क्षेत्रों में अधिक आर्क व्यक्त करते हैं, हालांकि विपरीत दिशा में भी एक प्रवृत्ति रही है। पूर्व व्यवहारिक हस्तक्षेप के बिना परीक्षण किए गए चूहों में देखा गया43। हमारे निष्कर्ष यह संकेत दे सकते हैं कि आर्क प्रतिलेखन में लिंग अंतर कुछ सामान्य व्यवहार कार्यों या अनुभवों के बाद मौजूद हैं। एसीसी के सीजी1 क्षेत्र में, हमने पाया कि पुरुषों में, कुल मिलाकर, दोनों समय बिंदुओं पर अधिक कोशिकाएं सक्रिय थीं, संभवतः पुरुषों के एसीसी में उच्च बेसलाइन आर्कट्रांसक्रिप्शन या संदर्भ परिवर्तन/पुनः एक्सपोजर (होम केज → एसटीएफपी) के बाद बढ़े हुए ट्रांसक्रिप्शन के कारण परीक्षण कक्ष → कंडीशनिंग कक्ष) क्योंकि प्रासंगिक यादों के दीर्घकालिक स्मरण में एसीसी की भूमिका के लिए कुछ सबूत हैं - हालांकि सीमित हैं।44। नर चूहों ने भी आईएलसी में उच्च परमाणु और दोहरी आर्क गणना प्रदर्शित की। इसे विलुप्त होने और डर के निषेध में आईएलसी की भूमिका द्वारा समझाया जा सकता है और महिलाओं में सीखे हुए डर के निषेध और विलुप्त होने में देखी गई हानियां। यदि यह मामला है, तो यह सवाल उठता है कि हमारे नियंत्रण, पर्यवेक्षक और प्रदर्शनकारी चूहों के बीच कोई समग्र अंतर क्यों नहीं देखा गया, यदि आर्क अभिव्यक्ति सीएस-एलिसिटेड इन्फ्रालिम्बिक गतिविधि द्वारा ट्रिगर की जा रही थी।

महिलाओं ने vCA3 में सभी गणनाओं के लिए आर्क अभिव्यक्ति के उच्च स्तर दिखाए। परमाणु गणना में अंतर संभावित रूप से सीएस के संपर्क में आने या महिलाओं में कंडीशनिंग चैंबर के दोबारा संपर्क में आने के बाद अधिक सक्रियण का परिणाम हो सकता है, जबकि भोजन कार्य के बाद वीसीए 3 में साइटोप्लाज्मिक आर्क अभिव्यक्ति का उच्च स्तर लिंग अंतर का संकेत दे सकता है। वीसीए3 में आर्क की भूमिका या तो "परिचित" भोजन की पहचान है (यहां तक ​​कि पर्यवेक्षकों के लिए भी सुगंध प्रदर्शक के साथ उनकी पूर्व बातचीत के कारण परिचित होगी) या इनाम/सामान्य उपभोग्य प्रक्रियाएं। उस महिला ने vCA3 में काफी अधिक दोहरी-लेबलिंग भी दिखाई - हालांकि यह प्रभाव छोटा था - यह महिलाओं में vCA3 आर्क प्रतिलेखन में सामान्यीकृत वृद्धि का भी संकेत दे सकता है। मादा चूहों ने वीओएफसी में उच्च परमाणु आर्क प्रतिलेखन और एलओएफसी में आर्क एमआरएनए के उच्च दोहरे स्तर को भी प्रदर्शित किया, हालांकि मादा नियंत्रण चूहों की कम संख्या के कारण इन परिणामों की व्याख्या करना अधिक कठिन है, जिनके मस्तिष्क के ऊतक ओएफसी गिनती लेने के लिए पर्याप्त बरकरार थे। (क्रमशः पार्श्व और उदर ओएफसी के लिए n=2 और 3)। उपलब्ध नियंत्रण चूहों का डेटा ओएफसी आर्क एमआरएनए उत्पादन में संभावित लिंग-मध्यस्थता वृद्धि का संकेत देता है, लेकिन यह उतना ही संभव है कि यह प्रभाव उच्च एन के साथ जारी नहीं रहेगा। विशेष रूप से, पिछले कुछ शोधों ने ओएफसी में संरचनात्मक अंतर और महिला और पुरुष कृंतकों के बीच ओएफसी-मध्यस्थता वाले व्यवहार में कार्यात्मक अंतर का संकेत दिया है।

सिस्टैंच अर्क पाउडर

संभवतः आर्क एमआरएनए में हमारा सबसे दिलचस्प लिंग अंतर पीएलसी में पाया गया। यहाँ, पुरुषों में महिलाओं की तुलना में साइटोप्लाज्म और साइटोप्लाज्म और न्यूक्लियस (दोहरी अभिव्यक्ति) दोनों में आर्क को व्यक्त करने वाली कोशिकाओं की कुल संख्या अधिक देखी गई। हमने यह भी पाया कि जहां पुरुष प्रदर्शनकारियों और पर्यवेक्षकों ने डर-रिकॉल समय बिंदु पर नियंत्रणों पर आर्क ट्रांसक्रिप्शन में वृद्धि नहीं दिखाई, वहीं महिला प्रदर्शनकारियों ने नियंत्रणों की तुलना में काफी अधिक परमाणु आर्क ट्रांसक्रिप्शन दिखाया, जबकि महिला पर्यवेक्षक दोनों के बीच में आ गईं। यह सेक्स प्रभाव सीखे गए भय निषेध और विलुप्त होने में देखी गई उपरोक्त कमियों से प्रेरित हो सकता है जो 47-49 महिलाओं में देखी जाती हैं, क्योंकि पिछले शोध ने सुझाव दिया है कि पीएलसी गंभीर रूप से भय व्यवहार45,53,54 को उत्तेजित करने में शामिल है। इसके अलावा, कई अध्ययनों ने पीएलसी सिग्नलिंग और संरचना में अंतर को भय निषेध और विलुप्त होने में इन लिंग-विशिष्ट हानियों के लिए संभावित ड्राइविंग कारकों के रूप में दर्शाया है। हालांकि हमें संकेत के अनुसार महिला और पुरुष के ठंडे व्यवहार में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं मिला, विशेष रूप से महिला प्रदर्शनकारियों में सीएस से जुड़े एक गैर-प्रबलित भय के जवाब में आर्क एमआरएनए का अपग्रेडेशन पीएलसी में विभेदक तंत्रिका पुनर्गठन का संकेत हो सकता है जो अंततः नेतृत्व कर सकता है। डर की अभिव्यक्ति में लिंग भेद.

निष्कर्ष

हालाँकि इस अध्ययन के निष्कर्षों ने सामाजिक रूप से अर्जित यादों की पुनर्प्राप्ति में शामिल मस्तिष्क तंत्र के बारे में हमारी समझ को उतना व्यापक नहीं बनाया जितना हमें उम्मीद थी, हमारे परिणाम आर्क अभिव्यक्ति में लिंग अंतर के साथ-साथ भूमिका (या) पर कुछ संभावित अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। लंबी अवधि की मेमोरी रिकॉल में आर्क की कमी) हमारे निष्कर्ष बताते हैं कि - कम से कम प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स और वीसीए3 में - सामाजिक रूप से प्राप्त जानकारी को याद करके मस्तिष्क की गतिविधि को शामिल करना अकेले परीक्षण प्रक्रिया के कारण आर्क अभिव्यक्ति में वृद्धि का कारण बनने के लिए पर्याप्त नहीं प्रतीत होता है। हालाँकि, हमारे व्यवहार परीक्षणों के अनिर्णायक परिणामों से इस टेकअवे की वैधता निश्चित रूप से प्रश्न में आ गई है, क्योंकि प्रभाव की इस कमी के लिए सामाजिक रूप से प्राप्त जानकारी की खराब अवधारण गलती हो सकती है। हम सिद्धांत देते हैं कि ऐसा इसलिए हो सकता है क्योंकि सिस्टम समेकन से पहले रिकॉल होने पर न्यूनतम तंत्रिका पुनर्गठन शुरू हो जाता है। सामाजिक शिक्षण स्मरण प्रक्रियाओं में आर्क प्रोटीन की भूमिका पर आगे के शोध की अभी भी आवश्यकता है, क्योंकि हमारे व्यवहार संबंधी परिणाम ऑब्जर्वर चूहों में सामाजिक शिक्षण को प्रदर्शित नहीं करते हैं। सामाजिक शिक्षा के विभिन्न रूपों को नियंत्रित करने वाले तंत्रिका तंत्र में ओवरलैप की जांच करने वाले भविष्य के शोध में अधिग्रहण प्रक्रियाओं से गुजरने वाले जानवरों और दूरस्थ रिकॉल प्रक्रियाओं से गुजरने वाले जानवरों को शामिल करने से भी लाभ हो सकता है, क्योंकि ये समय बिंदु प्लास्टिसिटी परिवर्तन को प्रेरित करने की अधिक संभावना हो सकते हैं और इस प्रकार आर्क अभिव्यक्ति में परिवर्तन हो सकते हैं। .

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तरीकों

विषय. विषय ऑस्टिन में टेक्सास विश्वविद्यालय के पशु संसाधन केंद्र में घर में पाले गए नर और मादा स्प्रैग-डावले चूहे थे। सात प्रजनन जोड़ियों ने समूह 1 के लिए विषयों का उत्पादन किया (n=27 मादाएं, n{{3%) नर), और आठ प्रजनन जोड़ों ने समूह 2 के लिए विषयों का उत्पादन किया (n{{5%) नर, कोई मादा नहीं)। मादा प्रजनक चार्ल्स-रिवर्स (विलमिंगटन, एमए, यूएसए) से प्राप्त स्प्रैग-डावले चूहे (आगमन पर 215 और 260 ग्राम के बीच) थे, जबकि नर प्रजनक हरलान (अब) से प्राप्त स्प्रैग-डावले चूहे (आगमन पर 230 और 300 ग्राम के बीच) थे एनविगो) (ह्यूस्टन, TX, यूएसए)। जब तक मादा ने गर्भावस्था के स्पष्ट लक्षण नहीं दिखाए, तब तक सभी चूहों को विपरीत लिंग के पिंजरे के साथी के साथ रखा गया था, जिस बिंदु पर मादाओं को अकेले रखा गया था। सामाजिक भय सीखने26 को सुनिश्चित करने में मदद करने के लिए प्रसवोत्तर दिन 21 (पी21) में पिल्लों को समान लिंग वाले भाई-बहनों के समूह में शामिल किया गया। अतिरिक्त पिल्लों को असंबद्ध चूहों के साथ ट्रायड या डायड में डाल दिया गया और ऑस्टिन में टेक्सास विश्वविद्यालय में अन्य प्रयोगों में उपयोग किया गया। हमारे दूसरे समूह के कूड़े से मादा पिल्लों का उपयोग अन्य प्रयोगों में किया गया। पिल्लों को नियमित पशुपालन प्रक्रियाओं (उदाहरण के लिए, पिंजरे में बदलाव) से अलग न्यूनतम गड़बड़ी के साथ परिपक्व होने की अनुमति दी गई थी, जब तक कि आवास प्रक्रियाएं (महिला ट्रायड्स) या प्रभुत्व मूल्यांकन प्रक्रियाएं (पुरुष ट्रायड्स) शुरू नहीं हो गईं (प्रभुत्व प्रक्रियाएं और परिणाम पूरक सामग्री में विस्तृत हैं)। समूह 1 चूहों ने P106-P112 दिन की उम्र के बीच प्रक्रियाएं शुरू कीं और समूह 2 चूहों ने P99-P118 दिन की उम्र के बीच प्रक्रिया शुरू की। सभी विषयों को अपराह्न 3 बजे लाइट बंद करके 12- घंटे के रिवर्स डार्क-लाइट चक्र पर रखा गया था। सभी प्रायोगिक प्रक्रियाएं लाल रोशनी के तहत विषयों के अंधेरे चक्र के दौरान पूरी की गईं। इस प्रयोग के सभी भाग प्रायोगिक जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान गाइड के अनुपालन में आयोजित किए गए थे और ऑस्टिन पशु देखभाल और उपयोग समिति में टेक्सास विश्वविद्यालय द्वारा उपयोग के लिए अनुमोदित किए गए थे।

उपकरण और उत्तेजना. डर कंडीशनिंग. सभी डर कंडीशनिंग और डर कंडीशनिंग बाय-प्रॉक्सी प्रक्रियाएं मानक कंडीशनिंग कक्षों (30.48 सेमी × 25.4 सेमी × 30.48 सेमी) में पूरी की गईं, जो आगे और पीछे स्पष्ट प्लेक्सीग्लास दीवारों, किनारे पर दो स्टील की दीवारों और एक प्लेक्सीग्लास छत से निर्मित थीं। केंद्र में छेद. चैंबर का फर्श एक शॉक जनरेटर (कूलबर्न इंस्ट्रूमेंट्स, एलेनटाउन, पीए) से जुड़ी स्टेनलेस-स्टील की छड़ों की एक पंक्ति थी। सभी कक्षों को ध्वनिक अलगाव बक्सों (कूलबर्न इंस्ट्रूमेंट्स) में बंद किया गया था और आंतरिक लाल बत्ती से जलाया गया था। व्यवहार को कंडीशनिंग कक्षों के ऊपर लगे क्लोज-सर्किट कैमरों (पैनासोनिक™ WV-BP334) द्वारा रिकॉर्ड किया गया था, जिसमें प्लेक्सीग्लास छत में छेद के माध्यम से लेंस डाला गया था। प्रत्येक विषय के बीच 70 प्रतिशत अल्कोहल समाधान के साथ कक्षों को पूरी तरह से मिटा दिया गया। सभी प्रोत्साहन वितरण को फ़्रीज़ फ़्रेम सॉफ़्टवेयर (कूलबर्न इंस्ट्रूमेंट्स) का उपयोग करके नियंत्रित किया गया था। सीएस एक 20 स्टोन (5 किलोहर्ट्ज़, 80 डीबी) था और, कई सीएस प्रस्तुतियों के साथ प्रक्रियाओं में, 180 एस का औसत एक परिवर्तनीय अंतर-परीक्षण अंतराल (आईटीआई) था। बिना शर्त उत्तेजना (यूएस) एक 1 एमए झटका था जिसकी अवधि 500 ​​एमएस थी और यह सशर्त उत्तेजना के साथ समाप्त हो गया था।

भोजन की प्राथमिकता का सामाजिक संचरण। सभी एसटीएफपी प्रक्रियाएं कंडीशनिंग कक्ष वाले कमरे के बगल वाले कमरे में हुईं। 100 ग्राम पाउडर 5LL2 पुरीना रोडेंट चाउ को 1 ग्राम मैककॉर्मिक ग्राउंड दालचीनी (डाइट सिन) या 2 ग्राम हर्षे कोको पाउडर (डाइट कंपनी) के साथ मिलाकर नवीन आहार तैयार किया गया था। सादा आहार, जो भोजन प्रतिबंध अवधि के दौरान और प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के अंतिम दिन चूहों को नियंत्रित करने के लिए सभी चूहों को दिया गया था, शुद्ध पाउडर 5LL2 पुरीना कृंतक चाउ था। सभी पाउडर वाले चाउ - भोजन प्रतिबंध और प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं दोनों के दौरान - लटकते भोजन कप में प्रस्तुत किए गए थे जो 4 औंस से बनाए गए थे। कांच के जार और 12-गेज स्टील उपयोगिता तार। भोजन के कपों को धोया गया और फिर प्रत्येक उपयोग के बीच साबुन और पानी से अच्छी तरह धोने से पहले 70 प्रतिशत इथेनॉल घोल से पोंछ दिया गया। एसटीएफपी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के सभी अंतिम चरण मानक चूहे के पिंजरों (26.7 सेमी×48.3 सेमी×20.3 सेमी) में हुए, प्रत्येक चूहे को एक ताजा पिंजरा मिला। इंटरेक्शन चरण (एसटीएफपी अधिग्रहण चरण) लकड़ी के चिप फर्श बिस्तर के साथ एक बड़े प्लास्टिक बिन (50.5 सेमी × 39.4 सेमी × 37.5 सेमी) में हुआ, जिसे हर समूह के बीच बदल दिया गया। प्रत्येक सत्र के बीच प्लास्टिक के डिब्बे को विंडेक्स से अच्छी तरह से पोंछ दिया गया।

प्रयोगात्मक डिजाइन और सामाजिक शिक्षण प्रक्रियाओं का अवलोकन।

(ग्राफिकल अवलोकन के लिए चित्र 2 देखें)।

सभी चूहों को पांच दिनों के लिए भोजन प्रतिबंधित किया गया था और उन्हें संभालने की आदत थी और वह कमरा जहां प्रायोगिक प्रक्रियाओं के पहले दिन से ठीक पहले चार दिनों के लिए एसटीएफपी प्रक्रियाएं होंगी। जबकि आदतन प्रक्रियाएँ प्रायोगिक प्रक्रियाओं के पहले दिन से पहले समाप्त हो गईं, भोजन पर प्रतिबंध प्रयोग के अंत तक जारी रहा। प्रत्येक त्रय से एक चूहे को तीन स्थितियों में से एक को सौंपा गया था: प्रदर्शनकर्ता, पर्यवेक्षक, या नियंत्रण। समूह 2 पुरुष त्रय का प्रभुत्व के लिए मूल्यांकन किया गया था और सभी ने एक स्पष्ट पदानुक्रम दिखाया था और उन्हें ऐसे सौंपा गया था कि प्रमुख चूहा प्रदर्शक था और भय के सामाजिक संचरण को बढ़ाने के लिए एक अधीनस्थ पर्यवेक्षक था13। अलग-अलग परीक्षणों को आगे बेतरतीब ढंग से उन समूहों में विभाजित किया गया जहां प्रदर्शनकर्ता और पर्यवेक्षक को एसटीएफपी रिकॉल (च्वाइस) में एक विकल्प परीक्षण प्राप्त होगा और ऐसे समूह जहां उन्हें केवल प्रदर्शित भोजन (सिन) प्राप्त होगा।

प्रयोगात्मक प्रक्रिया के पहले दिन, प्रदर्शनकारी स्थिति के लिए नियुक्त चूहों को डर कंडीशनिंग कक्षों में ले जाया गया और उन्हें 3 सीएस के संपर्क में आने से पहले 10 मिनट के लिए अभ्यस्त होने की अनुमति दी गई, जो एक दर्दनाक झटके के साथ समाप्त हो गए (देखें "उपकरण और उत्तेजनाएं" विशिष्टताएँ)। डर कंडीशनिंग प्रक्रियाओं के बाद, डेमडेमोंस्ट्रेटर्स को उनके मूल घरेलू पिंजरे में वापस ले जाया गया। प्रायोगिक प्रक्रियाओं के दूसरे दिन, डर कंडीशनिंग के 24 घंटे बाद, प्रदर्शनकारियों को ऑब्जर्वर की स्थिति के लिए सौंपे गए उनके पिंजरे-साथी के साथ कंडीशनिंग कक्षों में लौटा दिया गया और एफसीबीपी प्रक्रिया (छवि 2) के माध्यम से रखा गया। एफसीबीपी प्रक्रिया के तुरंत बाद, पर्यवेक्षक चूहों को उनके घर-पिंजरे में लौटा दिया गया, जबकि प्रदर्शनकारियों को बगल के कमरे में ले जाया गया और दालचीनी के स्वाद वाले पाउडर चाउ का सेवन करने के लिए 1 घंटे का समय दिया गया। एक घंटा बीत जाने के बाद, पर्यवेक्षकों को उनके प्रदर्शनकारियों के साथ एक इंटरेक्शन बिन में ले जाया गया और सामाजिक रूप से प्रसारित खाद्य प्राथमिकता के अधिग्रहण की अनुमति देने के लिए 30 मिनट तक उनके साथ बातचीत करने की अनुमति दी गई। हमारी प्रयोगशाला के पिछले शोध ने इन समय बिंदुओं को एसटीएफपी ट्रांसमिशन33 के लिए पर्याप्त होने के रूप में मान्य किया है। बाद में, ऑब्जर्वर चूहों को उनके घर के पिंजरे में वापस कर दिया गया, जबकि प्रेक्षक या नियंत्रण को आगे एसटीएफपी संचरण को रोकने के लिए प्रदर्शनकारी चूहों को एकल आवास में ले जाया गया। प्रायोगिक प्रक्रियाओं के तीसरे दिन, नियंत्रण चूहों को अकेले कंडीशनिंग कक्षों में ले जाया गया और, कक्ष में 10 मिनट की आदत के बाद बिना किसी झटके के तीन 20 एस सीएस प्रस्तुत किए गए। यह लंबे समय तक रहने वाले अलार्म फेरोमोन की संभावना को कम करने के लिए एक अलग दिन पर किया गया था - जो खतरनाक उत्तेजनाओं के जवाब में चूहों द्वारा जारी किए जाते हैं और विशिष्ट सीखने को प्रभावित करते हैं - अभी भी कक्ष में मौजूद हैं।

प्रयोग के अंतिम दिन, चौथे दिन, सामाजिक रूप से प्रसारित भोजन प्राथमिकता और प्रॉक्सी स्मृतियों द्वारा भय कंडीशनिंग/भय कंडीशनिंग दोनों के लिए एक रिकॉल शुरू किया गया था। च्वाइस कंडीशन के लिए सौंपे गए ट्रायड के सभी पर्यवेक्षकों और प्रदर्शकों को दालचीनी और कोको-अनुकूलित आहार दोनों के लिए 10 मिनट की एड लिबिटम की अनुमति दी गई थी, जबकि सिने की स्थिति के लिए सौंपे गए ट्रायड के सभी पर्यवेक्षकों और प्रदर्शकों को दालचीनी के आहार के लिए 10 मिनट की एड लिबिटम की अनुमति दी गई थी। केवल। सभी त्रय में, नियंत्रण चूहों को सादे पाउडर वाले चाउ तक 10 मिनट की एड लिबिटम पहुंच दी गई थी। इसके तुरंत बाद, चूहों को उनके घर के पिंजरे में लौटा दिया गया और प्रयोगशाला स्थान पर वापस ले जाने और कंडीशनिंग कक्षों में रखे जाने से पहले उन्हें 10- मिनट की अवधि के लिए बिना किसी बाधा के छोड़ दिया गया। फिर सभी चूहों को एक 20 सेकंड का सीएस प्रस्तुत करने से पहले कक्ष में 3- मिनट की अभ्यस्त अवधि दी गई। सीएस की समाप्ति के 5 मिनट बाद, सभी चूहों को पेंटोबार्बिटल और फ़िनाइटोइन समाधान (यूथासोल; विरबैक एनिमल हेल्थ) के इंजेक्शन के माध्यम से इच्छामृत्यु दी गई और उन्हें सुगंधित किया गया। उनके दिमाग को बाद में आर्क एमआरएनए अभिव्यक्ति के लिए संसाधित किया गया। हमारी टर्मिनल प्रक्रिया के समय पाठ्यक्रम और आर्क एमआरएनए28 के ज्ञात माइग्रेशन समय-सीमा को देखते हुए, आर्क एमआरएनए की साइटोप्लाज्मिक अभिव्यक्ति में वृद्धि एसटीएफपी रिकॉल प्रक्रियाओं के कारण होगी, जबकि परमाणु अभिव्यक्ति एफसी/एफसीबीपी रिकॉल प्रक्रियाओं के कारण होगी, जिसमें कोशिकाएं दोहरी सक्रियता दिखाती हैं। दोनों समय-सीमाओं पर सक्रिय किया गया है (चित्र 1 देखें; ऊतक उपचार और प्रसंस्करण पर विवरण के लिए "ऊतक विश्लेषण" भी देखें)।

रेगिस्तान में रहने वाला सिस्टान्चे

प्रक्रियाएं.

आदत और भोजन पर प्रतिबंध. सारी आदत प्रायोगिक प्रक्रियाओं के पहले दिन से ठीक पहले हुई। आदतन में चूहों के प्रत्येक पिंजरे को उस कमरे में ले जाया जाता है जिसमें सभी एसटीएफपी प्रयोगात्मक प्रक्रियाएं होती हैं और उन्हें 15 मिनट के लिए कमरे में आदत डालने की अनुमति दी जाती है। इस अवधि के दौरान, प्रत्येक चूहे को उठाया गया और प्रयोगकर्ता द्वारा संभाला गया जो उन्हें और उस व्यक्ति को संभालने की आदत डालने के लिए 2 मिनट तक व्यवहार चलाएगा। सभी आदतन प्रक्रियाएं लाल रोशनी के नीचे एक अंधेरे कमरे में हुईं, और सभी चूहों को 4 दिनों की आदतन प्राप्त हुई। भोजन पर प्रतिबंध आदत शुरू होने से एक दिन पहले शुरू हुआ और प्रयोग के अंत तक जारी रहा। भोजन प्रतिबंध की शुरुआत में, सभी विषय जो भोजन कण खा रहे थे उन्हें पिंजरे से हटा दिया गया था। इसके बाद, सभी पिंजरों को 1 घंटे के लिए उनके घर के पिंजरे में सादे, पाउडर पुरीना 5एलएल2 आहार से भरे एक लटकते जार तक दैनिक एड लिबिटम पहुंच दी गई। भोजन प्रतिबंध की शुरुआत से लेकर प्रयोग समाप्त होने तक चूहों का प्रतिदिन वजन किया जाता था ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि वजन में कोई असामान्य कमी न हो।

व्यवहारिक स्कोरिंग.

इस प्रयोग के लिए सभी व्यवहारिक स्कोरिंग बिहेवियरल ऑब्जर्वेशन रिसर्च इंटरएक्टिव सोफ़वेयर (BORIS)60 का उपयोग करके पूरा किया गया था।

प्रॉक्सी सामाजिक संपर्क स्कोरिंग द्वारा डर कंडीशनिंग। हमारी प्रयोगशाला के पिछले शोध ने संकेत दिया है कि दीर्घकालिक स्मृति परीक्षण में पर्यवेक्षकों द्वारा प्रदर्शित भय की मात्रा और पुरुषों में सीएस के दौरान और महिलाओं में सीएस के बाद उनके प्रदर्शनकर्ता के साथ बातचीत में बिताए गए समय के बीच एक मजबूत संबंध है। इस प्रकार, प्रॉक्सी द्वारा भय-कंडीशनिंग के सामाजिक अधिग्रहण चरण के वीडियो को सीएस प्रस्तुति के दौरान प्रत्येक 20- अवधि के लिए पर्यवेक्षक और प्रदर्शनकर्ता के बीच सामाजिक संपर्क के लिए और प्रत्येक के तुरंत बाद 20- अवधि के लिए स्कोर किया गया था। भय अधिग्रहण का द्वितीयक सूचकांक प्रदान करने के लिए सीएस प्रस्तुति। सामाजिक संपर्क तब स्कोर किया गया जब पर्यवेक्षक और प्रदर्शनकारी चूहों ने क्यू अवधि के दौरान (सीएस संपर्क के दौरान) या सीएस (सीएस संपर्क के बाद) के बाद 20 एस में गुजरने के अलावा अन्य संपर्क किया। प्रदर्शक के संपर्क में बिताई गई प्रत्येक स्कोरिंग अवधि के प्रतिशत की गणना की गई। पुरुषों के लिए क्यू अवधि के दौरान प्रतिशत संपर्क के लिए डेटा और महिलाओं के लिए क्यू अवधि के तुरंत बाद प्रतिशत संपर्क के लिए डेटा निकाला गया और सभी अंतिम सांख्यिकीय विश्लेषणों में उपयोग करने के लिए एक एकल "प्रासंगिक संपर्क" माप में संयोजित किया गया।

च्वाइस टेस्ट स्कोरिंग. सामाजिक रूप से प्रसारित खाद्य प्राथमिकता को याद करने के लिए पसंद परीक्षण के वीडियो को उस समय की मात्रा के लिए स्कोर किया गया था जो एक चूहे ने भोजन कप के साथ बातचीत करने में बिताया था, इस आधार पर कि इसमें प्रदर्शित/पहले से ही उपभोग किया गया आहार (आहार सिन) या उपन्यास शामिल था। आहार (आहार सह)। यह भोजन की प्राथमिकता के एक संभावित माध्यमिक उपाय के रूप में किया गया था, क्योंकि हमने अनुमान लगाया था कि पसंद का परीक्षण आवश्यकता से असामान्य रूप से कम (10 मिनट) होने के कारण हम अकेले खाई गई मात्रा के आधार पर प्राथमिकताओं का पता लगाने में असमर्थ हो सकते हैं। जब भी कोई चूहा शारीरिक रूप से भोजन के कप के संपर्क में था और सक्रिय रूप से कप से दूर नहीं जा रहा था (यानी, सामने के पंजे जार के संपर्क में थे, सिर जार के अंदर था, जार के ऊपर चढ़ रहा था, या सक्रिय रूप से खा रहा था) के लिए भोजन कप के साथ इंटरेक्शन का स्कोर किया गया था। जार से)। सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए, हमने किसी दिए गए आहार वाले कप के साथ बातचीत करने में बिताए गए समय के प्रतिशत की गणना की, जो किसी भी कप के साथ बातचीत करने में बिताए गए समय की कुल मात्रा के आधार पर है (उदाहरण के लिए, आहार सिन के लिए, प्रतिशत समय=टाइमडाइट सिन/ (टाइमडाइट) सह प्लस टाइमडाइट सिन))। सभी चूहों के लिए संपूर्ण 10- मिनट की पसंद का परीक्षण सत्र स्कोर किया गया था।

ऊतक विश्लेषण.

राइबोन्यूक्लिज़ (RNase) द्वारा mRNA के क्षरण को कम करने के लिए, मस्तिष्क की तैयारी और प्रसंस्करण के दौरान उपयोग किए जाने वाले सभी उपकरणों और सतहों को नियमित रूप से RNase AWAY™ (टर्मो साइंटिटी; वाल्थम, MA, यूएसए) या RNAseZap™ (एम्बियन; ग्रैंड आइलैंड, NY) से साफ किया गया था। , यूएसए)।

मस्तिष्क की तैयारी. इच्छामृत्यु के तुरंत बाद, 4 प्रतिशत पैराफॉर्मल्डिहाइड (पीएफए) समाधान का उपयोग करके विषयों को इंट्राकार्डियल रूप से छिड़का गया था। फिर मस्तिष्क को हटा दिया गया और 24-48 घंटों के लिए पोस्ट-फिक्सेशन की अनुमति देने के लिए 4 प्रतिशत पीएफए ​​में डुबोया गया। एक बार जब पोस्ट-फिक्सेशन पूरा हो गया, तो मस्तिष्क को क्रायोप्रोटेक्शन के लिए फॉस्फेट-बफर सलाइन में 30 प्रतिशत सुक्रोज के घोल में स्थानांतरित कर दिया गया। एक बार जब मस्तिष्क शीशी के नीचे तक डूब गया, जो क्रायोप्रोटेक्शन के लिए पर्याप्त सुक्रोज ग्रहण का संकेत देता है, तो उन्हें पाउडर वाली सूखी बर्फ में फ्लैश-फ्रोजन किया गया और सेक्शनिंग तक भंडारण के लिए - 80 डिग्री फ्रीजर में ले जाया गया। फिर मस्तिष्कों को स्लाइडिंग माइक्रोटोम पर 30 µm मोटाई पर छह श्रृंखलाओं में विभाजित किया गया (इसलिए एक ही श्रृंखला में बाद के खंड 180 µm अलग थे) और तुरंत स्थापित किया गया और आर्द्रता स्पंज के साथ एक वैक्यूम कक्ष में रखने से पहले हवा में सूखने दिया गया जहां वे थे 24 घंटे के लिए पूरी तरह सूखने के लिए छोड़ दें। केवल हिप्पोकैम्पस अनुभाग (ब्रेग्मा से लगभग − 3.2 से − 5.2) या प्रीफ्रंटल क्षेत्र (ब्रेग्मा से लगभग प्लस 3.7 से प्लस 1.4) जिनमें रुचि के क्षेत्र शामिल थे, को विभाजित और संसाधित किया गया था। फिर माउंट किए गए अनुभागों को एक सीलबंद RNase-मुक्त स्लाइड बॉक्स में रखा गया और प्रसंस्करण तक - 80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

ऊतक प्रसंस्करण. सभी प्रक्रियाओं को ली एट अल.61 और पेट्रोविच एट अल.62 में प्रयुक्त प्रोटोकॉल से संशोधित किया गया था। ऊतक प्रसंस्करण से पहले, आर्क एमआरएनए के लिए एक सीआरएनए जांच का निर्माण एक प्लास्मिड से शुरू करके किया गया था जिसमें आर्क ट्रांसक्रिप्ट की पूर्ण लंबाई वाली सीडीएनए (~3.0 केबीपी) थी। जांच बनाने के लिए, डीएनए को सबसे पहले प्लास्मिड को 10×पाचन बफर (एनईबुफर; बायोलैब्स; इप्सविच, एमए, यूएसए), 10×ईकोआरआई प्रतिबंध एंजाइम (बायोलाब्स) और शुद्ध न्यूक्लीज-मुक्त पानी के साथ मिलाकर काटा गया था। 2 घंटे के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। डीएनए की उचित कटिंग को वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके सत्यापित किया गया था, जिसके बाद डीएनए को इथेनॉल में रात भर शुद्ध किया गया था। शुद्धिकरण के बाद, डीएनए गोली को एक अपकेंद्रित्र में घुमाया गया, EtOH में धोया गया, पूरी तरह से सुखाया गया, और TE बफर में फिर से निलंबित कर दिया गया। यह सत्यापित करने के लिए कि डीएनए ठीक से रैखिककृत था, आर्क एकाग्रता की गणना करें, और जांचें कि कोई संदूषक मौजूद नहीं था, डीएनए का एक नमूना स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री (नैनोड्रॉप लाइट; थर्मो साइंटिफिक, वाल्थम, एमए, यूएसए) के माध्यम से परीक्षण किया गया था। डिगॉक्सिजेनिन (डीआईजी) लेबल जांच को आरएनएएस-मुक्त पानी, एक 10 × प्रतिलेखन बफर (एम्बियन), आरएनएएस ब्लॉक (एम्बियन), डीआईजी आरएनए लेबलिंग मिश्रण (रोश एप्लाइड साइंस; इंडियानापोलिस, आईएन, यूएसए) के साथ रैखिक डीएनए के संयोजन से प्रतिलेखित किया गया था। , और 2 घंटे के लिए 37 डिग्री पर घोल को इनक्यूबेट करने से पहले एक टी7 आरएनए पोलीमरेज़ (एम्बियन)। अंत में, जांच को न्यूक्लियस-मुक्त पानी में पतला किया गया और एक मिनी क्विक-स्पिन कॉलम (रोश) में शुद्ध किया गया।

एक बार सीआरएनए जांच का निर्माण हो जाने के बाद, स्वस्थानी प्रसंस्करण के दौरान ऊतक की अखंडता को बढ़ाने के लिए नर चूहों के ऊतक वाली स्लाइडों को 4 प्रतिशत पीएफए ​​समाधान में 4 0 मिनट के लिए डुबोया गया था। मादा चूहों के ऊतकों को इस पीएफए ​​वॉश के बिना संसाधित किया गया था। पारगम्यीकरण के लिए ग्लेशियल एसिटिक एसिड युक्त 0.5 प्रतिशत एसिटिक एनहाइड्राइड/1.5 प्रतिशत ट्राइथेनॉलमाइन समाधान के साथ इलाज करने से पहले स्लाइडों को 37 डिग्री पर प्रोटीनएज़ के (पीके) बफर में धोया और ऊष्मायन किया गया था। इथेनॉल और हवा में सूखने की बढ़ती सांद्रता में डुबो कर निर्जलित होने से पहले स्लाइडों को खारा-सोडियम साइट्रेट (एसएससी) बफर में धोया गया था। अंत में, प्रत्येक स्लाइड को यीस्ट टीआरएनए (इन्विट्रोजन; कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए), सैल्मन स्पर्म डीएनए (एम्बियन), डाइथियोथेरिटॉल (सिग्मा; सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) और सीआरएनए जांच वाले संकरण बफर के 300 μL में कवर किया गया था। (1:100). फिर प्रत्येक स्लाइड को 60 डिग्री पर 20 घंटे के लिए संकरण समाधान में इनक्यूबेट करने से पहले डीपीएक्स माउंटेंट (इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी साइंसेज; हैटफील्ड, पीए, यूएसए) के साथ किनारों के चारों ओर कवर किया गया और सील कर दिया गया। विशेष रूप से, कवरस्लिप ने ऊतक को DPX माउंटेंट के साथ किसी भी सीधे संपर्क से बचाया, इसलिए बाद में कठोर DPX को हटाने से ऊतक को कोई नुकसान नहीं हुआ।

एक बार संकरण पूरा हो जाने के बाद, कवरस्लिप्स को सावधानीपूर्वक हटा दिया गया, और स्लाइड्स को 37ºC पर RNAse गतिविधि को रोकने के लिए एथिलीनडायमिनेटेट्राएसिटिक एसिड-आधारित समाधान के साथ इलाज करने से पहले एक घंटे के लिए 60 डिग्री पर सोडियम थायोसल्फेट (ST) के साथ मिश्रित 4xSSC बफर में इनक्यूबेट किया गया। इसके बाद, स्लाइडों को 60 डिग्री पर फिर से एसटी के साथ मिश्रित एसएससी समाधान की घटती सांद्रता में धोया गया। पर्किनएल्मर टीएसए फ्लोरेसिन सिस्टम (एनईएल701001केटी; पर्किनएल्मर, वाल्थम, एमए, यूएसए) के साथ रंगने से पहले ऊतक को डिटर्जेंट समाधान (ट्वीन20) में धोया गया था। स्लाइडों को एक आर्द्र कक्ष में रखा गया और एक अवरोधक बफर के साथ 2 घंटे के लिए एंटी-डीआईजी-एचआरपी संयुग्म के साथ इलाज किया गया। फिर स्लाइडों को एक अंधेरे आर्द्र कक्ष में वापस करने से पहले डिटर्जेंट समाधान में धोया गया और फ्लोरेसिन टायरामाइड अभिकर्मक (एफआईटीसी) युक्त समाधान के साथ लेपित किया गया और 30 मिनट तक बैठने दिया गया। अंत में, स्लाइडों को धोया गया, हवा में सूखने दिया गया, और परमाणु दाग ​​4′,6-डायमिडीनो-2-फेनिलिनोडोल (डीएपीआई) (वेक्टाशील्ड; वेक्टर लैब, बर्लिंगम, सीए, यूएसए) वाले माउंट के साथ कवर किया गया। . इमेजिंग तक स्लाइडों को -20 डिग्री पर अंधेरे में संग्रहीत किया गया था।

इमेजिंग. सभी इमेजिंग एक एक्सियो स्कोप ए1 माइक्रोस्कोप (ज़ीस; टॉर्नवुड, एनवाई, यूएसए) का उपयोग करके पूरी की गई थी। रुचि के क्षेत्रों की पहचान पैक्सिनो और वॉटसन मस्तिष्क एटलस 63 की सहायता से 1 {21 }}×उद्देश्य का उपयोग करके डीएपीआई धुंधलापन के माध्यम से की गई और फिर 40×उद्देश्य (वास्तविक आवर्धन~900×) के तहत चित्रित किया गया। छवियाँ DAPI और FITC दोनों दागों के लिए ली गईं और बाद में FIJI (NIH, बेथेस्डा, एमडी) के साथ ImageJ सॉफ़्टवेयर में एक कस्टम मैक्रो का उपयोग करके रंगीन और स्वचालित रूप से विलय कर दी गईं। पूरे स्थान पर होने वाले ऊतक क्षरण के कारण, संभावित रुचि के सभी वर्ग या क्षेत्र व्यवहार्य नहीं थे। इस प्रकार, छवियों को विश्वसनीय रूप से z-स्टैक्ड नहीं किया जा सका और इसके बजाय, उन्हें एक ही विमान पर लिया गया। निम्नलिखित क्षेत्रों को चित्रित और गिना गया: प्रीलिम्बिक कॉर्टेक्स (ब्रेग्मा से प्लस 3.72 से प्लस 2.52), इन्फ्रालिम्बिक कॉर्टेक्स (ब्रेग्मा से प्लस 3.52 से प्लस 2.2), लेटरल (ब्रेग्मा से प्लस 3.72 से प्लस 3.2) और वेंट्रल (प्लस 3.72) ब्रैग्मा से प्लस 3.0 तक) ऑर्बिटोफ्रंटल कॉर्टेक्स, पूर्वकाल सिंगुलेट कॉर्टेक्स का सीजी1 क्षेत्र (ब्रेग्मा से प्लस 3.72 से प्लस 2.52), और वेंट्रल हिप्पोकैम्पस का सीए3 क्षेत्र (ब्रेग्मा से − 4.3 से − 4.8) (चित्र एस6)। डर सीखने में अपनी अच्छी तरह से स्थापित भूमिका के लिए कठिन अमिगडालर नाभिक भी विशेष रुचि रखते थे, उपरोक्त ऊतक क्षति इस क्षेत्र में विशेष रूप से गंभीर थी। इस प्रकार, हम उस क्षेत्र को शामिल करने के लिए पर्याप्त बड़ा नमूना आकार प्राप्त करने में सक्षम नहीं थे (किसी दिए गए क्षेत्र के सांख्यिकीय विश्लेषण में चूहे को शामिल करने के लिए न्यूनतम 6 व्यवहार्य छवियों/क्षेत्र की आवश्यकता थी)।

गिनती क्षेत्र दर क्षेत्र पूरी की गई और सभी छवि फ़ाइलों को गिनती के समय छवि से संबंधित किसी भी विवरण से गिनती पूरी करने वाले प्रयोगकर्ता को अंधा करने के लिए एक यादृच्छिक संख्यात्मक कोड सौंपा गया था। सभी सेल काउंट को FIJI पैकेज के साथ ImageJ में लिया गया था और सेल काउंटिंग टूल का उपयोग करके बनाया गया था। कोशिकाओं को परमाणु और साइटोप्लाज्मिक आर्क एमआरएनए अभिव्यक्ति के लिए अलग से गिना गया था और ओवरलैपिंग अभिव्यक्ति दिखाने वाली कोशिकाओं को दोहरी अभिव्यक्ति के रूप में गिना गया था। परमाणु आर्क-व्यक्त करने वाली और साइटोप्लाज्मिक आर्क-व्यक्त करने वाली कोशिकाओं के लिए अंतिम गणना में केवल वे कोशिकाएँ शामिल थीं जो केवल उस क्षेत्र में व्यक्त हो रही थीं (यानी, दोहरे-व्यक्त करने वाली कोशिकाएँ शामिल नहीं थीं)। डीएपीआई दाग वाली कोशिकाओं की पूरी गणना की गई और प्रत्येक दिए गए क्षेत्र में अभिव्यक्ति दिखाने वाली कोशिकाओं के प्रतिशत की गणना की गई, इसके बाद व्यक्तिगत चूहों में प्रत्येक प्रकार की सक्रियता दिखाने वाली कोशिकाओं के औसत प्रतिशत की गणना की गई। बड़ी संख्या में छवियों वाले चूहों के स्कोर को हमारे आंकड़ों पर असंगत प्रभाव डालने से रोकने के लिए और नमूना आकार की मुद्रास्फीति को रोकने के लिए हमारे अंतिम विश्लेषण में केवल इन औसतों का उपयोग किया गया था।

सांख्यिकीय विश्लेषण सिंहावलोकन. सभी सांख्यिकीय विश्लेषण आर कोडिंग सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके पूरे किए गए। पूरा कोड हमारे डेटा रिपॉजिटरी https://datavers.tdl.org/datavers/MonflsFearMemoryLab पर देखने के लिए स्वतंत्र रूप से उपलब्ध है। जब तक अन्यथा न कहा जाए, सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माने जाने वाले परीक्षण के लिए कट-ऑफ पी निर्धारित की गई थी<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

उचित समय बिंदुओं पर होने वाली अभिव्यक्ति के लिए व्यवहार संबंधी उपायों और आर्क सेल गिनती के बीच संभावित संबंधों का आकलन करने के लिए पर्यवेक्षक और प्रदर्शनकारी चूहों के लिए द्विचर सहसंबंध की गणना की गई थी (उदाहरण के लिए, दालचीनी खाने के प्रतिशत के लिए साइटोप्लाज्मिक आर्क गिनती)। यदि ग्रब्स परीक्षण के साथ किसी भी डेटासेट में कोई आउटलेयर नहीं पाया गया तो पियर्सन के सहसंबंध गुणांक का उपयोग किया गया था। यदि आउटलेर्स का पता लगाया गया था, तो इसके बजाय स्पीयरमैन के सहसंबंध गुणांक का उपयोग किया गया था। यह पता लगाने के लिए कि ऑब्जर्वर में दोहरी अभिव्यक्ति कोशिकाओं में सामाजिक शिक्षा और आर्क के बीच कोई संबंध है या नहीं, सामाजिक शिक्षा का एक समग्र मीट्रिक - जिसे यहां से सामाजिक शिक्षण मीट्रिक (एसएलएम) के रूप में संदर्भित किया गया है - की गणना मानकीकृत स्कोर का माध्य लेकर की गई थी ( जेड-स्कोर) कुल खाए गए भोजन के प्रतिशत के लिए जो प्रदर्शित भोजन था और सीएस प्रस्तुति (पुरुषों) के दौरान या सीएस प्रस्तुति (महिलाओं) के बाद एफसीबीपी सामाजिक सीखने के चरण के दौरान प्रदर्शनकारी के संपर्क में बिताए गए समय का प्रतिशत। विशेष रूप से, अंतिम दिन क्यू पर प्रतिशत फ्रीजिंग का उपयोग ऑब्जर्वर चूहों के लिए नहीं किया गया था क्योंकि हमारे परिणाम और हमारे अनुवर्ती प्रयोग (पूरक सामग्री देखें) के परिणामों ने संकेत दिया था कि हमारी व्यवहार परीक्षण प्रक्रिया की स्थितियों के परिणामस्वरूप यहां तक ​​​​कि कुछ फ्रीजिंग व्यवहार भी हुआ था। चूहों पर नियंत्रण - कम से कम पुरुषों में - और, इस तरह, सामाजिक रूप से अर्जित भय प्रतिक्रिया की ताकत का सबसे अच्छा गेज नहीं हो सकता है। इस प्रकार, हमारे पिछले निष्कर्षों को देखते हुए कि सीएस के दौरान या उसके बाद (लिंग के आधार पर) प्रदर्शनकर्ता के साथ बातचीत की अत्यधिक भविष्यवाणी की गई थी, जो बाद में क्यू 12-14 तक स्थिर हो गई थी, परमाणु आर्क गतिविधि के खिलाफ सहसंबंधों के लिए लिंग-उपयुक्त समय बिंदु पर प्रदर्शनकर्ता के साथ बातचीत का परीक्षण किया गया था ऑब्जर्वर चूहों के लिए अंतिम दिन संकेत पर रुकने के बजाय। प्रदर्शनकारियों के लिए, एक समान मीट्रिक की गणना अंतिम दिन क्यू पर मानकीकृत ठंड और कुल खाए गए प्रतिशत के आधार पर की गई थी जो कि परिचित आहार (डाइट सिन) था और दोहरी आर्क गतिविधि के खिलाफ जांच की गई थी। प्रत्येक व्यवहार डेटासेट (प्रत्येक मस्तिष्क क्षेत्र के लिए 6) पर चलाए गए कई परीक्षणों को सही करने के लिए, सहसंबंधों के लिए महत्वपूर्ण पी-वैल्यू को बोनफेरोनी को 0.0083 पर समायोजित किया गया था।

संदर्भ

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58. डे, एचएलएल, सुवानसावांग, एस., हॉलिडे, डीएम और स्टीवेन्सन, सीडब्ल्यू श्रवण भय भेदभाव में लिंग अंतर परिवर्तित मेडियल प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स फ़ंक्शन से जुड़े हुए हैं। विज्ञान. प्रतिनिधि 10, 6300 (2020)।

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60. फ्रायर्ड, ओ. और गाम्बा, एम. बोरिस: वीडियो/ऑडियो कोडिंग और लाइव अवलोकनों के लिए एक निःशुल्क, बहुमुखी ओपन-सोर्स इवेंट-लॉगिंग सॉफ़्टवेयर। विधियाँ इकोल. विकास. 7, 1325-1330 (2016)। 61. ली, एचजे, हैबरमैन, आरपी, रोक्वेट, आरएफ और मोनफ्ल्स, एम.-एच. विलुप्त होने और पुनर्प्राप्ति के साथ-साथ वातानुकूलित भय का विलुप्त होने से चूहों में औसत दर्जे का प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स और एमिग्डाला सक्रिय हो जाता है। सामने। व्यवहार. तंत्रिका विज्ञान. 9, 1-10 (2016)।

62. पेट्रोविच, जीडी, हॉलैंड, पीसी और गैलाघेर, एम. एमिग्डालार और पार्श्व हाइपोथैलेमस के प्रीफ्रंटल मार्ग एक सीखे हुए संकेत द्वारा सक्रिय होते हैं जो खाने को उत्तेजित करता है। जे. न्यूरोसाइंस. 25, 8295-8302 (2005)।

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