फीनिक्स डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने एंटीऑक्सिडेंट प्रभाव प्रदर्शित करता है और मेलानोजेनेसिस को बढ़ाता है

ह्यूई-चुन हुआंग1 , श्री-शिआन वांगो2, त्सांग-ची त्साई3, वांग-पिंग को3 और सोंग-मिन चांग2,*

सार:पृष्ठभूमि: स्किनकेयर में फीनिक्स डेक्टाइलिफेरा बीज निकालने की क्रिया का तरीका कभी नहीं खोजा गया है। तरीके: P. dactylifera L. बीज अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण द्वारा निकाले गए थे। अर्क की एंटीऑक्सीडेंट विशेषताओं को 2,2-डाइफिनाइल-1-पिक्रीलहाइड्राज़िल (DPPH) और 2,2′-एज़िनो-डी-(3-एथिलबेन्ज़थियाज़ोलिन सल्फ़ोनिक एसिड) (ABTS plus) द्वारा निर्धारित किया गया था। परख और मैला ढोने के तरीके। कुल फेनोलिक सामग्री, कम करने की क्षमता, आयरन (II) आयन-केलेशन, और इंट्रासेल्युलर रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) -स्कैवेंजिंग क्षमता की भी जांच की गई। मेलेनोजेनेसिस पर पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने के प्रभावों का मूल्यांकन एक मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि परख, इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि का निर्धारण, और मेलेनिन सामग्री द्वारा स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से किया गया था। पश्चिमी सोख्ता द्वारा मेलानोजेनेसिस-संबंधित प्रोटीन की अभिव्यक्ति के स्तर का विश्लेषण किया गया था। परिणाम: परिणामों से पता चला कि पी।डैक्टिलिफेरा एल.बीज के अर्क ने स्पष्ट एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को बढ़ाया और {{0}}.245 और 0.49 (मिलीग्राम/एमएल) की सांद्रता में इंट्रासेल्युलर आरओएस सामग्री को काफी कम कर दिया। इसके अलावा, अर्क ने मेलानोकोर्टिन 1 रिसेप्टर (MC1R), माइक्रोफथाल्मिया-जुड़े ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर (MITF), टायरोसिनेस, टायरोसिनेज-संबंधित प्रोटीन -1 (TRP1), और टायरोसिनेज-संबंधित प्रोटीन -2 की अभिव्यक्ति को कम कर दिया। TRP2), और B16F10 कोशिकाओं में मेलेनोजेनेसिस को रोकता है। निष्कर्ष: हमारे परिणामों से पता चला है कि पी. डैक्टिलिफ़ेरा एल. सीड एक्सट्रेक्ट प्रोटीन किनसे ए (पीकेए) सिग्नलिंग पाथवे को डाउनरेगुलेट करके बी16एफ10 कोशिकाओं में मेलानोजेनेसिस को क्षीण करता है। इसलिए, त्वचा देखभाल उत्पादों में निकालने का उपयोग त्वचा-सफेद करने वाले एजेंट के प्रकार के रूप में किया जा सकता है।

कीवर्ड: फीनिक्स डेक्टाइलिफेरा;टायरोसिनेस; मेलेनिन; आरओएस; पीकेए

सिस्टैंच फार्मा स्पेशलत्वचा को गोरा करने वाला एक प्रकार का एजेंट है।

1 परिचय

कॉस्मेटिक और त्वचाविज्ञान क्षेत्रों में ऑक्सीडेटिव तनाव संबंधी विकारों को रोकने या उनका इलाज करने के लिए एंटीऑक्सिडेंट व्यापक रूप से लागू किए गए हैं। पिछले कुछ दशकों में, त्वचा की उम्र बढ़ने को रोकने या देरी करने के लिए कॉस्मेटिक उद्योग में एंटीऑक्सिडेंट का भी उपयोग किया गया है। यह बताया गया है कि मुक्त कण और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) कई बीमारियों से जुड़ी हैं, जैसे कि उम्र बढ़ने और उम्र से संबंधित बीमारियां [1]। दिलचस्प बात यह है कि यूवी-विकिरण तनाव और आरओएस के कारण त्वचा पर मुक्त कणों से होने वाली क्षति त्वचा के फोटोएजिंग की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है [2,3]। एंटीऑक्सिडेंट मुक्त कणों और आरओएस को साफ करके या ऑक्सीकरण-उत्प्रेरक धातुओं [4] को नष्ट करके ऑक्सीकरण प्रक्रिया में हस्तक्षेप करने की सूचना देते हैं। इसलिए, शरीर में ऑक्सीडेटिव तनाव या ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित क्षति को कम करने के लिए एंटीऑक्सिडेंट या एंटीऑक्सिडेंट पोषक तत्वों की खुराक के अनुप्रयोगों की संख्या में नाटकीय वृद्धि हुई है [5,6]। हालांकि, कुछ रासायनिक एंटीऑक्सिडेंट, जिनमें सोडियम एस्कॉर्बेट, टर्ट-ब्यूटाइल हाइड्रॉक्सीनिसोल (बीएचए), सोडियम एरिथोरबेट और टर्ट-ब्यूटाइल हाइड्रॉक्सीटोल्यूइन (बीएचटी) शामिल हैं, को मानव स्वास्थ्य पर कार्सिनोजेनिक प्रभावों को बढ़ावा देने के लिए दिखाया गया है [7]। इसलिए, पिछले दशकों में पौधों से प्राप्त प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट पर अध्ययन का तेजी से विकास हुआ है। महत्वपूर्ण रूप से, यह पाया गया कि आरओएस के स्तर में वृद्धि त्वचा की रंजकता को तेज कर सकती है। मेलानोसाइट्स और केराटिनोसाइट्स से प्राप्त आरओएस के बीच, नाइट्रिक ऑक्साइड, NO, टायरोसिनेस और टायरोसिनेस-संबंधित प्रोटीन 1 (TRP1) [8,9] के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर को बढ़ाकर मेलेनिन संश्लेषण को उत्तेजित करता है। यूवीबी-प्रेरित-मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (-एमएसएच) [10] की क्रिया को समाप्त करने के लिए एन-एसिटाइल सिस्टीन जैसे विभिन्न एंटीऑक्सिडेंट का उपयोग करके मेलेनिन उत्पादन पर आरओएस के प्रभाव का अध्ययन किया गया है।

मेलेनिन का उत्पादन और स्राव मेलानोसाइट्स द्वारा किया जाता है जो त्वचा के एपिडर्मिस [11] की बेसल परत में वितरित होते हैं। मनुष्यों में मेलेनोजेनेसिस मार्ग के पहले दो चरण हैं एल-टायरोसिन का हाइड्रॉक्सिलेशन 3-4-डायहाइड्रॉक्सी फेनिलएलनिन (एल-डीओपीए) और एल-डीओपीए का ओ-डोपाक्विनोन का ऑक्सीकरण। टायरोसिनेस (ईसी 1.14.18.1) एक दर-सीमित एंजाइम है जो मेलानोजेनेसिस [12] के दौरान पहली दो प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करता है। मेलेनिन सूर्य के प्रकाश की पराबैंगनी (यूवी) क्षति से त्वचा की रक्षा करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है और बालों, त्वचा और आंखों को रंगने के लिए भी जिम्मेदार है। यह बताया गया है कि विभिन्न त्वचा संबंधी विकार, जैसे कि उम्र के धब्बे, मेलास्मा, पोस्ट-इंफ्लेमेटरी मेलेनोडर्मा, झाई, और एक्टिनिक क्षति की साइटें, जो एपिडर्मल मेलेनिन के अत्यधिक स्तर के संचय के परिणामस्वरूप होती हैं [13]। त्वचा के हाइपरपिग्मेंटेड विकारों के उपचार या रोकथाम के लिए त्वचा देखभाल उत्पादों में मेलेनिन संश्लेषण के अवरोधकों को तेजी से लागू किया गया है [14,15]। इसके अलावा, एंटीऑक्सिडेंट, जैसे कि अर्बुटिन या कोजिक एसिड [16], का उपयोग हाइपरपिग्मेंटेशन [17] के उपचार में किया गया है। हाल ही में, त्वचा को गोरा करने वाले सौंदर्य प्रसाधनों में कॉस्मेटिक उत्पादों का एक बड़ा हिस्सा होता है। न केवल गहरी त्वचा वाली महिलाएं, बल्कि वे भी जो यूवी प्रकाश, गर्भावस्था या बढ़ती उम्र से उत्पन्न होने वाली त्वचा पर काले धब्बों से निपटने की कोशिश कर रही हैं, इन त्वचा को गोरा करने वाले उत्पादों का व्यापक रूप से उपयोग करती हैं।

मेलानोजेनेसिस को कई कारकों द्वारा नियंत्रित किया जाता है। उदाहरण के लिए, टायरोसिनेस-संबंधित प्रोटीन -1 (TRP1), माइक्रोफ़थाल्मिया-संबंधित ट्रांसक्रिप्शन फ़ैक्टर (MITF), और tyrosinase-संबंधित प्रोटीन -2 (TRP2) को मेलेनिन के उत्पादन को विनियमित करने के लिए सूचित किया गया था [18-20 ]. मेलानोकोर्टिन 1 रिसेप्टर (MC1R) भी -MSH- प्रेरित मेलेनिन संश्लेषण [21] में प्रमुखता से शामिल है। मेलेनिन उत्पादन में कई सिग्नलिंग मार्ग शामिल हैं। मेलेनिन उत्पादन को विनियमित करने वाले विभिन्न सिग्नलिंग मार्गों में, चक्रीय एएमपी (सीएमपी)-मध्यस्थ प्रोटीन किनेज ए (पीकेए) सक्रियण मेलानोजेनेसिस [22] के नियमन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। सीएएम-पीकेए सिग्नलिंग मार्ग में, सीएमपी पीकेए [23] की सक्रियता को प्रेरित करता है, जिसके बाद सीएमपी प्रतिक्रिया तत्व-बाध्यकारी प्रोटीन (सीआरईबी) का फॉस्फोराइलेशन होता है। सीआरईबी एक इंट्रासेल्युलर ट्रांसक्रिप्शन कारक है जो माइक्रोफथाल्मिया फैक्टर (एमआईटीएफ) जीन की अभिव्यक्ति को उत्तेजित करता है, जो मेलेनोजेनेसिस में महत्वपूर्ण है। MITF एक प्रतिलेखन कारक है जो मेलेनोजेनिक जीन tyrosinase, TRP1 और TRP2 के प्रमोटर क्षेत्रों को बांधता है, उनकी अभिव्यक्ति को बढ़ाता है [24,25]। बाद में, इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री बढ़ जाती है [26]। यह बताया गया है कि -एमएसएच सीएमपी के स्तर को बढ़ाता है और आमतौर पर सीआरईबी के फॉस्फोराइलेशन को सक्रिय करने और फिर एमआईटीएफ प्रोटीन के स्तर को बढ़ाने के लिए लागू किया जाता है [27]।

MITF अभिव्यक्ति को कई सिग्नलिंग मार्ग द्वारा नियंत्रित किया जाता है। सी-जून एन-टर्मिनल किनेज (जेएनके) और पी38 माइटोजेन-एक्टिवेटेड प्रोटीन किनेज (एमएपीके) एमआईटीएफ अभिव्यक्ति की सक्रियता में शामिल हैं और इसके परिणामस्वरूप टायरोसिनेस अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई है। एक्स्ट्रासेलुलर रिस्पॉन्सिव किनेज (ईआरके) सक्रियण संकेत भी क्रीब फास्फारिलीकरण और बाद में एमआईटीएफ अभिव्यक्ति को बढ़ाते हैं, जो मेलेनिन संश्लेषण को नियंत्रित करता है [28,29]। इसलिए, कई त्वचा-सफेद करने वाले एजेंटों को p38MAPK की मध्यस्थता वाले MITF फॉस्फोराइलेशन के डाउनरेगुलेशन के माध्यम से tyrosinase, TRP1, और TRP2 के प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर को कम करके MITF ट्रांसक्रिप्शनल गतिविधि को बाधित करने की सूचना मिली थी। इसके अलावा, ईआरके मार्ग को मेलानोजेनेसिस [30,31] के दौरान एमआईटीएफ विनियमन में शामिल होने के लिए वर्णित किया गया है। ईआरके फॉस्फोराइलेट्स एमआईटीएफ का सक्रियण, जिससे एमआईटीएफ का क्षरण होता है, जिसके परिणामस्वरूप मेलेनिन सामग्री में कमी होती है [32,33]।

ऑक्सीडेटिव तनाव या तो आरओएस अतिउत्पादन या घटी हुई एंटीऑक्सीडेंट रक्षा का परिणाम हो सकता है [1]। प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट की खोज और अनुप्रयोग पूरी दुनिया में कई शोध टीमों के केंद्र में हैं। हाल ही में, विभिन्न प्राकृतिक स्रोतों से प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट और फेनोलिक यौगिकों जैसे फाइटोकेमिकल्स के अनुसंधान और विकास में रुचि बढ़ रही है, जिनका उपयोग न्यूट्रास्यूटिकल्स, एंटी-एजिंग कॉस्मेटिक्स और औषधीय उत्पादों के रूप में किया जा सकता है [34]। फीनिक्स डेक्टाइलिफेरा एल मध्य पूर्व और उत्तरी अफ्रीका में उत्पादित प्रमुख फलों में से एक है [35,36]। पिछले अध्ययनों ने बताया है कि पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। फल एंटीऑक्सिडेंट, मुक्त कट्टरपंथी-स्कैवेंजिंग, रोगाणुरोधी और विरोधी भड़काऊ गतिविधियों का प्रदर्शन करते हैं [37,38]। P. dactylifera L. के कार्यात्मक प्रभाव केवल स्वयं फलों तक ही सीमित नहीं हैं, बल्कि उनके बीजों तक भी हैं, जो फलों का एक प्रकार का उप-उत्पाद है [39,40]। इसके एंटीऑक्सीडेंट गुणों के कारण, पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज का अर्क एंटीऑक्सिडेंट पदार्थों के स्रोत के रूप में काम कर सकता है जो ऑक्सीडेटिव तनाव [41-43] के खिलाफ कार्य करता है। हालांकि, कॉस्मीस्यूटिकल उत्पादों के विकास के लिए P. dactylifera L. बीजों के अनुप्रयोगों पर कुछ अध्ययन किए गए हैं। इन बीजों को आमतौर पर कचरे के रूप में छोड़ दिया जाता है, लेकिन एक कार्यात्मक कॉस्मेटिक घटक के रूप में उनका महत्व यहां पर प्रकाश डाला गया है। तिथि करने के लिए, त्वचा देखभाल सौंदर्य प्रसाधनों के क्षेत्र में पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने की क्रिया के तंत्र या मेलेनिन उत्पादन पर बीज निकालने के प्रभाव के बारे में कोई रिपोर्ट नहीं मिली है। वर्तमान अध्ययन का फोकस कॉस्मेटिक उद्योग के लिए मेलेनोजेनेसिस अवरोधक के रूप में पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने की क्षमता का निर्धारण करना था।

मेलानोजेनेसिस पर पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने के निरोधात्मक प्रभावों के अंतर्निहित तंत्र की अभी तक जांच नहीं की गई है। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य एमआईटीएफ प्रतिलेखन नियामकों और एमएपीके और पीकेए सिग्नलिंग मार्ग के नियामकों के फॉस्फोराइलेशन की जांच करके मेलेनोजेनेसिस पर पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने की कार्रवाई के संभावित तंत्र और एंटीऑक्सीडेंट विशेषताओं की जांच करना था।

ताजा सिस्टैंच

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. रसायन और अभिकर्मक

अध्ययन में प्रयुक्त रासायनिक अभिकर्मकों को सिग्मा-एल्ड्रिच केमिकल कंपनी (सेंट लुइस, एमएस, यूएसए) से खरीदा गया था। एंटीबॉडी सांता क्रूज़ बायोटेक (सांता क्रूज़, सीए, यूएसए) से थे और ईसीएल अभिकर्मक मिलिपोर (बिलरिका, एमए, यूएसए) से थे।

2.2. P. dactylifera बीज निकालने की तैयारी और निष्कर्षण

सूखे P. dactylifera L. फलों को 2019 में मदीना शहर, सऊदी अरब में स्थित पारंपरिक दुकानों से काटा गया। P. dactylifera L. बीजों को पूरी तरह से धोया गया, धूप के संपर्क में लाया गया, एक दिन के लिए हवा में सुखाया गया, और फिर ओवन में 2 घंटे के लिए 80 C पर सुखाया गया। निर्जलित बीजों को एक प्रतिबद्ध मिल (Retsch Ultra Centrifugal Mill and Sieving Machine, Type ZM1, Haan, Germany) के साथ एक महीन पाउडर (#50 मेष) में चूर्णित किया गया था। पाउडर को एक सीलबंद कांच की बोतल में एकत्र किया गया था और उपयोग होने तक 25 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था। चूर्णित desiccated P. dactylifera L. बीज पाउडर (2 g) को 10 mL आसुत जल वाले निष्कर्षण बीकर में रखा गया था। इसके बाद, अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण को ULTRAsonicTM 57H मॉडल (250 W, C, और A सेल्स इंडस्ट्रियल सप्लाई, Yucaipa, CA, USA) के साथ किया गया। 30 मिनट के लिए काम करने की आवृत्ति 45 kHz थी। निष्कर्षण के बाद, नमूने 4500 rpm पर 50 मिनट के लिए 25 C पर एक Eppendorf सेंट्रीफ्यूज 5810 R (हैम्बर्ग, जर्मनी) के साथ सेंट्रीफ्यूज किए गए थे। सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया और एक नायलॉन फिल्टर (छिद्र आकार: 0.45 माइक्रोन) के साथ फ़िल्टर किया गया और छानना 9.8 मिलीग्राम / एमएल तक केंद्रित था।

2.3. अल्ट्रा-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी (यूपीएलसी) पी. डेक्टाइलिफेरा सीड एक्सट्रैक्ट और फेरुलिक एसिड का विश्लेषण

P. dactylifera बीज निकालने का विश्लेषण एक फोटोडायोड सरणी डिटेक्टर (वाटर्स, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) के साथ ACQUITY UPLC H वर्ग का उपयोग करके किया गया था। कॉलम एक ACQUITY UPLC BEH C18 कॉलम, 130 , 1.7 माइक्रोन, 2.1 मिमी × 100 मिमी था। मोबाइल चरण ए 0.5 प्रतिशत एसिटिक एसिड था, और मोबाइल चरण बी एसीटोनिट्राइल था। समय अंक 0 और 5 मिनट के लिए, ए/बी का प्रतिशत अनुपात 95/5 था; 20 मिनट के लिए, ए/बी का प्रतिशत अनुपात 5/95 था; समय अंक 21 और 25 मिनट के लिए, ए/बी का प्रतिशत अनुपात 95/5 था। सकारात्मक मानक के रूप में फेरुलिक एसिड (1 पीपीएम) का उपयोग किया गया था।

2.4. डीपीपीएच मैला ढोने की गतिविधि परख

इस परख में, विटामिन सी ({0}}.5 मिलीग्राम/एमएल) और बीएचए (0.1 मिलीग्राम/एमएल) को एंटीऑक्सीडेंट मानकों के रूप में इस्तेमाल किया गया था। विभिन्न सांद्रता (0। 0 049, 0.0245, और 0.049 मिलीग्राम/एमएल) पर P. dactylifera L. बीज निकालने को DPPH (60 μM) समाधान के 2.9 एमएल में जोड़ा गया था। बीज निकालने में एंटीऑक्सीडेंट घटक डीपीपीएच को हाइड्रोजन दान कर सकते हैं और डीपीपीएच को कम रूप में परिवर्तित कर सकते हैं। यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर [44] का उपयोग करके 517 एनएम पर अवशोषण में परिणामी कमी दर्ज की गई थी।

2.5. एबीटीएस प्लस मैला ढोने की क्षमता परख

P. dactylifera L. बीज के अर्क की ABTS प्लस मैला ढोने की क्षमता की तुलना विटामिन C ({0}}.9 mg/mL) और BHA ({{10}} से की गई। 9 मिलीग्राम / एमएल)। इस परख के लिए, ABTS प्लस का उपयोग किया गया था। पोटेशियम परसल्फेट (2.45 मिमी) के साथ एबीटीएस (7 मिमी) के समाधान पर प्रतिक्रिया करके पहले कटियन का उत्पादन किया गया था, और मिश्रण को उपयोग से पहले कम से कम 6 घंटे के लिए अंधेरे में खड़े रहने दिया गया था। एबीटीएस प्लस समाधान [45] के 1 एमएल के साथ बीज निकालने (0.0098, 0.049, और 0.098 मिलीग्राम/एमएल) के विभिन्न सांद्रता के मिश्रण के बाद 734 एनएम पर अवशोषण को 1 0 मिनट मापा गया।

2.6. कुल फेनोलिक सामग्री का निर्धारण

कुल फेनोलिक सामग्री को फोलिन-सियोकाल्टू अभिकर्मक [46] का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, और गैलिक एसिड (2 कुरूप / एमएल) को एक सकारात्मक मानक के रूप में नियोजित किया गया था। P. dactylifera L. बीज के सत्त (0.0196, 0.098, और 0.196 mg/mL) के विभिन्न सांद्रण 80 प्रतिशत मेथनॉल में तैयार किए गए थे; 100 μL अर्क को एक परखनली में स्थानांतरित किया गया और 0.5 एमएल फोलिन-सियोकाल्टू अभिकर्मक (पहले पतला 10- विआयनीकृत पानी के साथ गुना) जोड़ा और मिलाया गया। मिश्रण को 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़े होने की अनुमति दी गई थी; 20 प्रतिशत सोडियम कार्बोनेट का 1.5 एमएल जोड़ा गया। 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर खड़े होने के बाद, यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके अवशोषण को 760 एनएम पर पढ़ा गया।

2.7. क्षमता कम करने का निर्धारण

इस परख में सकारात्मक मानकों के रूप में विटामिन सी ({0}}.008 मिलीग्राम/एमएल) या बीएचए (4.8 मिलीग्राम/एमएल) का उपयोग किया गया। Oyaizu [47] द्वारा वर्णित विधि के अनुसार बीज निकालने की कम करने की क्षमता निर्धारित की गई थी। P. dactylifera L. बीज के सत्त (0.0073, 0.036, 0.073 mg/mL) के विभिन्न सांद्रणों को फॉस्फेट बफर (2.5 mL, 0.2 M, pH 6.6) के साथ मिलाया गया। ) और पोटेशियम फेरिकैनाइड [K3Fe (CN)6] (2.5 एमएल, 1 प्रतिशत w/v)। मिश्रण 20 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। मिश्रण में ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड (2.5 एमएल, 10 प्रतिशत डब्ल्यू/वी) मिलाया गया, जिसे बाद में 10 मिनट के लिए 1000 × जी पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। समाधान की ऊपरी परत (2.5 एमएल) को आसुत जल (2.5 एमएल) और FeCl3 (0.5 एमएल, 0.1 प्रतिशत डब्ल्यू/वी) के साथ मिलाया गया था, और 700 एनएम पर अवशोषण मापा गया था।

2.8. आयरन का मापन (II) आयन चेलेटिंग क्षमता

P. dactylifera L. बीज निकालने, EDTA (0.02, 0.04, और { की Fe2 प्लस-आयन chelating क्षमता की माप के लिए) {10}}.08 mg/mL) का उपयोग सकारात्मक मानक के रूप में किया गया था। बीज निकालने के विभिन्न सांद्रता (0.0196, 0.098, और 0.196 मिलीग्राम/एमएल) को FeCl2 समाधान (0.05 एमएल, 1 मिमी) में जोड़ा गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण को फेरोज़िन (0.1 एमएल, 1 मिमी) के साथ प्रतिक्रिया दी गई थी, फिर मिश्रण को मेथनॉल के साथ 1 एमएल तक निर्धारित किया गया था और 10 मिनट के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण का अवशोषण 562 एनएम [48] पर मापा गया था।

2.9. सेल व्यवहार्यता परख

सेल व्यवहार्यता परख एमटीटी पद्धति [49] का उपयोग करके की गई थी। कोशिकाओं को पी. dactylifera एल. बीज निकालने (0.049, 0.245, और 0.49 मिलीग्राम/एमएल) के विभिन्न सांद्रता के संपर्क में 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए उजागर किया गया था। और आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में 5 प्रतिशत CO2 और कुओं में MTT घोल मिलाया गया। एमटीटी के अघुलनशील व्युत्पन्न को इथेनॉल-डीएमएसओ (1:1 मिश्रण समाधान) के साथ घुलनशील किया गया था। 570 एनएम पर कुओं के अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। B16F10 सेल (BCRC60031) Bioresource Collection and Research Center (BCRC), Hsinchu शहर, ताइवान से प्राप्त किए गए थे। कोशिकाओं को DMEM (Hyclone, Logan, UT, USA) में 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम और 1 प्रतिशत एंटीबायोटिक दवाओं के साथ बनाए रखा गया था। इसके अलावा, B16F10 सेल व्यवहार्यता पर P. dactylifera L. बीज के प्रभाव का भी ट्रिपैन ब्लू अपवर्जन परख विधि द्वारा मूल्यांकन किया गया था। बीज निकालने के साथ उपचार के बाद, कोशिकाओं को ट्रिप्सिनाइज़ किया गया और गोली को इकट्ठा करने के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। DMEM सेल कल्चर मीडिया के 300 μL में सेल गोली को फिर से निलंबित कर दिया गया था। सेल सस्पेंशन (20 μL) का एक छोटा विभाज्य 10 μL ट्रिपैन ब्लू (पीबीएस में 4 प्रतिशत) के साथ धीरे से मिलाया गया था। माइक्रोस्कोप के तहत एक हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके सेल नंबर की गणना की गई थी (अव्यवहार्य कोशिकाएं नीली और व्यवहार्य कोशिकाएं थीं)।

2.10. मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि का मापन

मशरूम टायरोसिनेस घोल (10 μL, 200 इकाइयों) को एक 96-अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट में जोड़ा गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण में फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) (5 0 मिमी, पीएच 6.8) में भंग एल-डीओपीए के 5 मिमी शामिल थे, और पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने (0 .049, 0.245 , और 0.49 मिलीग्राम/एमएल), कोजिक एसिड (200 मिमी; 0.03 मिलीग्राम/एमएल), या अर्बुटिन (2 मिमी; 0.54 मिलीग्राम/एमएल)। परख मिश्रण 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था और उत्पादित डोपाक्रोम का अवशोषण 490 एनएम मापा गया था। मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि का मापन पहले वर्णित [50] के रूप में किया गया था।

2.11. मेलेनिन सामग्री का निर्धारण

B16F1 0 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए -MSH (100 nM) से उपचारित किया गया और फिर या तो P. dactylifera L. बीज के अर्क (0.0245–0.147 mg/mL) से उपचारित किया गया। या अर्बुटिन (0.54 मिलीग्राम/एमएल) एक अतिरिक्त 24 घंटे के लिए। उपचार के बाद, सेल छर्रों को 60 मिनट के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर NaOH समाधान (1 एन) में घुलनशील किया गया था। 405 एनएम पर मेलेनिन सामग्री का पता चला था, जैसा कि पहले त्सुबोई [51] द्वारा वर्णित किया गया था।

सिस्टैंच मेलेनिन के उत्पादन को रोकता है।

2.12. इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि का मापन

इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि को पहले वर्णित [52] के रूप में निर्धारित किया गया था। कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए -MSH (100 nM) और फिर P. dactylifera L. बीज निकालने (0.0245–0.147 मिलीग्राम के साथ इलाज किया गया था। /एमएल) या अर्बुटिन (0.54 मिलीग्राम/एमएल) 24 घंटे के लिए। उपचार के बाद, सेल के अर्क (100 μL) को ताजा तैयार L-DOPA समाधान (पीबीएस में 0.1 प्रतिशत) के साथ मिलाया गया और 37 C पर ऊष्मायन किया गया, और 490 एनएम पर अवशोषण मापा गया।

2.13. पश्चिमी सोख्ता प्रयोग

कोशिकाओं को P. dactylifera L. बीज के सत्त ({{0}}.0245, 0.0368, 0) से उपचारित किया गया।{ {14}}49, और 0.147 मिलीग्राम/एमएल) या अर्बुटिन (0.54 मिलीग्राम/एमएल) और फिर पीबीएस में लीज़ेड जिसमें नॉनडाइट पी-40 (1 प्रतिशत), सोडियम डीऑक्सीकोलेट (0.5 प्रतिशत), सोडियम डोडेसिल होता है। सल्फेट (एसडीएस, 0.1 प्रतिशत), एप्रोटीनिन (5 यूजी/एमएल), फेनिलमेथाइलसल्फोनील फ्लोराइड (100 कुग/एमएल), पेप्सटिन ए (1 कुग/एमएल), और ईडीटीए (1 एमएम) 20 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर। माइक्रो बीसीए किट (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके कुल लाइसेट्स की मात्रा निर्धारित की गई थी। प्रोटीन (30 कुरूप) को एसडीएस-पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा हल किया गया था और इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से एक पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड झिल्ली में स्थानांतरित किया गया था। पीबीएसटी में 5 प्रतिशत वसा रहित दूध में झिल्ली को अवरुद्ध कर दिया गया था (पीबीएस 0.05 प्रतिशत ट्वीन -20 के साथ) और पीबीएसटी में पतला निम्नलिखित प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था: एमआईटीएफ एबी (1:1000), टीआरपी1 Ab (1:6000), TRP2 Ab (1:1000), MC1R Ab (1:500), GAPDH Ab (1:1500), tyrosinase Ab (1:2000), p-p38 Ab (1:500), p38 एबी (1:500), पी-जेएनके एबी (1:500), जेएनके एबी (1:500), पी-ईआरके एब (1:500), ईआरके एब (1:500), पी-सीईआरबी एबी (1: 500), और सीईआरबी एबी (1:200), सभी सांता क्रूज़ बायोटेक (डलास, TX, यूएसए) से)। बाध्य एंटीबॉडी का पता हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी (एमर्शम कॉर्प) द्वारा लगाया गया था, इसके बाद निर्माता के निर्देश के अनुसार ईसीएल डिटेक्शन सिस्टम (एमर्शम) था।

2.14. पीकेए अवरोधक परख

कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए -MSH (1 0 0 nM) के साथ इलाज किया गया था, इसके बाद PKA नियामक H89 के 10 μM के 1 घंटे के अलावा। उपचार के बाद, P. dactylifera L. बीज निकालने (0.147 mg/mL) और H89 को कोशिकाओं में जोड़ा गया और अतिरिक्त 23 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया। मेलेनिन सामग्री ऊपर वर्णित के रूप में निर्धारित की गई थी।

2.15. सांख्यिकीय विश्लेषण

सांख्यिकीय विश्लेषण तुकी के पोस्ट हॉक टेस्ट का उपयोग करके किया गया था, जिसका उपयोग सामाजिक विज्ञान (एसपीएसएस) संस्करण 22 के लिए सांख्यिकीय पैकेज का उपयोग करके मापा गया डेटा की तुलना के लिए किया गया था। 0 सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर (एसपीएसएस इंक, शिकागो, आईएल, अमेरीका)। * p < 0.05="" को="" महत्वपूर्ण="" माना="" गया,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p=""><>

3। परिणाम

3.1. पी. dactylifera एल. बीज निकालने का यूपीएलसी विश्लेषण

UPLC विश्लेषण के परिणाम चित्र 1A, B में दिखाए गए हैं। चित्र 1A में 330 एनएम पर P. dactylifera L. बीज निकालने और फेरुलिक एसिड के अतिव्यापी शिखर को दर्शाया गया है। चित्रा 1बी पी. dactylifera एल. बीज निकालने और फेरुलिक एसिड के लिए 220 और 500 एनएम के बीच समान स्कैन स्पेक्ट्रा दिखाता है।

3.2. P. dactylifera L. बीज निकालने के एंटीऑक्सीडेंट लक्षण

इन विट्रो में P. dactylifera L. बीज के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि ने एंटीऑक्सीडेंट क्षमता की उपस्थिति का खुलासा किया। DPPH परख में, विटामिन C ({{0}}.05 mM; 0.53 mg/mL) और tert-butyl hydroxyanisole (BHA) (0 .1 mg/mL) का उपयोग सकारात्मक एंटीऑक्सीडेंट मानकों के रूप में किया गया था। निकालने की डीपीपीएच सफाई क्षमता 49.97 ± 2.9 प्रतिशत, 81.36 ± 0.56 प्रतिशत, और 78.53 ± 3.83 प्रतिशत 0 के अर्क सांद्रता के लिए नियंत्रण थी।0{{ 31}}49, 0.0245, और 0.049 (मिलीग्राम/एमएल), क्रमशः। इसकी तुलना में, विटामिन सी और बीएचए की मैला ढोने की क्षमता क्रमशः 90.12 ± 0.31 प्रतिशत और 90.44 ± 0.49 प्रतिशत थी (चित्र 2ए)।

यह एबीटीएस रेडिकल कटियन नीले रंग का है और अधिकांश एंटीऑक्सिडेंट के प्रति प्रतिक्रियाशील है। इस प्रतिक्रिया के दौरान, नीला ABTS कट्टरपंथी धनायन वापस अपने रंगहीन तटस्थ रूप में परिवर्तित हो जाता है। प्रतिक्रिया की निगरानी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से की गई थी। एबीटीएस प्लस निकालने की क्षमता 5.69 ± 1.36 प्रतिशत, 18.81 ± 0.68 प्रतिशत, और 66.82 ± 8.51 प्रतिशत 0 की सांद्रता पर नियंत्रण की थी।0{{16 }}98, 0.{{20}}49, और 0.098 मिलीग्राम/एमएल, क्रमशः। इसके विपरीत, एबीटीएस प्लस विटामिन सी (0.9 मिलीग्राम/एमएल) और बीएचए (0.9 मिलीग्राम/एमएल) की मैला ढोने की क्षमता क्रमशः 95.52 ± 0.12 प्रतिशत और 40.3 ± 0.83 प्रतिशत थी। चित्र 2ख में परिणाम दर्शाते हैं कि बीज का अर्क ABTS प्लस रेडिकल की एक महत्वपूर्ण मात्रा को परिमार्जन करता है।

P. dactylifera L. बीज के अर्क की कुल फेनोलिक सामग्री का निर्धारण करने के लिए, गैलिक एसिड (2 ug/mL) को एक सकारात्मक मानक के रूप में उपयोग किया गया था। चित्र 2C के परिणाम दर्शाते हैं कि 0.0196, 0.{{20}}98, और 0 में कुल फेनोलिक सामग्री। 196 (मिलीग्राम/एमएल) का अर्क क्रमशः 33.43 ± 2.33 प्रतिशत, 117.22 ± 7.81 प्रतिशत, और 195.4 ± 10.91 प्रतिशत था। बीज के अर्क के उपरोक्त सांद्रता के गैलिक एसिड समकक्ष (जीएई) क्रमशः 0 थे। 0 68 ± 0.01, 0.365 ± 0.01, और 0.642 ± 0.03, क्रमशः (चित्रा 2सी)।

3.3. मेलानोजेनेसिस पर पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने के निरोधात्मक प्रभाव

चित्र 4क में दिखाए गए परिणाम दर्शाते हैं कि 0.049 मिलीग्राम/एमएल पी. dactylifera एल. बीज निकालनेमशरूम टायरोसिनेस गतिविधि पर एक निरोधात्मक प्रभाव नहीं डाला। दूसरी ओर, एंजाइम अवरोधन प्रतिशत 8.34 ± 2.67 प्रतिशत और 33 ± 2.36 प्रतिशत 0 .245 और 0 .49 मिलीग्राम/एमएल के नियंत्रण के थे।P. dactylifera L. बीज निकालने के उपचार, क्रमशः। इसके अलावा, कोजिक एसिड (200 μM; 0.03 mg/mL) और arbutin (2 mM; 0.54 mg/mL) का टायरोसिनेस अवरोध प्रतिशत ) क्रमशः 56.26 ± 5.06 प्रतिशत और 64.56 ± 2.88 प्रतिशत नियंत्रण के थे (चित्र 4ए)। इस प्रकार, P. dactylifera L. बीज निकालने (0.245 और 0.49 mg/mL) की उच्च सांद्रता मशरूम tyrosinase के निरोधात्मक स्तर का प्रतिनिधित्व कर सकती है।

चित्रा 4बी में, परिणामों ने संकेत दिया कि केवल 0.147 मिलीग्राम/एमएल पी. डेक्टाइलिफेरा एल. बीज निकालने से बी16एफ10 मेलेनोमा कोशिकाओं में मेलेनिन की मात्रा काफी कम हो सकती है। उपचार के बाद, B16F10 कोशिकाओं में मेलेनिन की मात्रा 80.66 ± 5.43 प्रतिशत नियंत्रण की थी। सकारात्मक मानक के लिए, अर्बुटिन (0.54 मिलीग्राम/एमएल), शेष इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री नियंत्रण के 61.19 ± 8.17 प्रतिशत थी। परिणामों ने संकेत दिया कि 0.147 मिलीग्राम / एमएल पी। डैक्टाइलिफेरा एल। बीज निकालने ने अर्बुटिन की तुलना में कम प्रभाव दिखाया। शेष इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि मान क्रमशः 0.098 और 0.147 मिलीग्राम/एमएल के लिए 85.1 ± 8.1 प्रतिशत और 73.7 ± 11.9 प्रतिशत थे। शेष इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि 64.3 ± 14.9 प्रतिशत नियंत्रण के बाद कोशिकाओं को अर्बुटिन (चित्रा 4सी) के साथ इलाज किया गया था। परिणामों ने संकेत दिया कि P. dactylifera L. बीज के अर्क की उच्च सांद्रता ने अभी भी arbutin की तुलना में B16F10 कोशिकाओं में -MSH- प्रेरित टायरोसिनेस गतिविधि पर एक छोटा निरोधात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया है।

3.4. P. dactylifera L. बीज का अर्क मेलानोजेनेसिस में शामिल प्रोटीन के अभिव्यक्ति स्तर को रोकता है

B16F1 0 कोशिकाओं (चित्र 5A) में मेलानोजेनेसिस-संबंधित प्रोटीन के अभिव्यक्ति स्तरों की जांच करने के लिए पश्चिमी धब्बों का उपयोग किया गया था। परिणामों से संकेत मिलता है कि P. dactylifera L. बीज के अर्क के विभिन्न सांद्रता के साथ उपचार से MC1R, MITF, tyrosinase, TRP1 और TRP2 का स्तर कम हो गया। प्रोटीन अभिव्यक्ति पर अर्क के निरोधात्मक प्रभाव {{1 0}}.147 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता में स्पष्ट थे। MC1R के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर में गुना परिवर्तन 0.74 ± 0.02 था; MITF के लिए यह {{20}}.51 ± 0.03 था; टायरोसिनेस के लिए यह 0.54 ± 0.26 था; टीआरपी के लिए -1 यह 0.57 ± 0.15 था; और टीआरपी-2 के लिए यह 0.49 ± 0.1 (चित्र 5बी) था।

पश्चिमी धमाकों (चित्रा 5सी) का उपयोग करके मेलानोजेनेसिस-संबंधित सिग्नलिंग प्रोटीन के अभिव्यक्ति स्तरों की जांच की गई। परिणामों से संकेत मिलता है कि 0.147 मिलीग्राम/एमएल P. dactylifera L. बीज निकालने के उपचार से स्पष्ट रूप से p-p38, p-JNK, p-ERK, और p-CREB के स्तर में कमी आई है। p-p38 के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर का गुना परिवर्तन 0.88 ± 0.15 था; पी-जेएनके के लिए यह 0.68 ± 0.39 था; पी-ईआरके के लिए यह 0.65 ± 0.23 था; और p-CREB के लिए यह 0.44 ± 0.07 (चित्र 5D) था।

3.5. P. dactylifera L. बीज का अर्क टायरोसिनेस, TRP1, TRP2, या MITF जीन अभिव्यक्ति को प्रभावित नहीं करता है

मेलानोजेनेसिस-संबंधित प्रोटीन के जीन अभिव्यक्ति स्तर, जैसे कि टायरोसिनेस, टीआरपी1, टीआरपी2 और एमआईटीएफ की मात्रात्मक वास्तविक समय पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आरटी-पीसीआर) द्वारा जांच की गई थी। 0.0367, 0.049, और 0.147 मिलीग्राम/एमएल के लिए tyrosinase/GAPDH के सापेक्ष सामान्यीकृत अभिव्यक्ति स्तर। dactylifera एल. बीज निकालने के उपचार क्रमशः 3.51 ± 0.52, 2.38 ± 0.24, और 1.64 ± 0.55 थे। TRP-1/GAPDH के लिए, 0.0367, 0.049, और {{4{{43} के लिए सापेक्ष सामान्यीकृत अभिव्यक्ति स्तर }}}. 147 मिलीग्राम/एमएल पी. डेक्टाइलिफेरा एल. बीज निकालने के उपचार 1.64 ± 0.2, 1.15 ± 0.02, और 0 थे। 89 ± 0.07, क्रमशः। 0 के लिए टीआरपी-2/जीएपीडीएच के सापेक्ष सामान्यीकृत अभिव्यक्ति स्तर।0367, 0।049, और 0.147 मिलीग्राम /एमएल पी. dactylifera एल. बीज निकालने 1.08 ± 0.13, 0.85 ± 0.01, और 0.7 ± 0.05, क्रमशः थे। MITF/GAPDH के लिए, 0.0367, 0.049, और पी. dactylifera एल. बीज निकालने के उपचार के 0.147 मिलीग्राम/एमएल के लिए सापेक्ष सामान्यीकृत अभिव्यक्ति स्तर क्रमशः 1.48 ± 0.19, 1.03 ± 0.02 और 0.74 ± 0.05 थे (चित्र 6)।

4। चर्चा

यह बताया गया है कि मेलानोजेनेसिस सेलुलर ऑक्सीडेटिव तनाव बढ़ाता है। इसके अलावा, कई एंटीऑक्सिडेंट, आरओएस मैला ढोने वाले, अवरोधक मैला ढोने वाले और अवरोधक यूवी-मध्यस्थता मेलेनिन संश्लेषण को रोक सकते हैं [54]। इसलिए, अवांछित त्वचा हाइपरपिग्मेंटेशन [14] की रोकथाम के लिए एंटीऑक्सिडेंट, आरओएस मैला ढोने वाले और मेलेनोजेनेसिस के अवरोधकों को त्वचा को गोरा करने वाले सौंदर्य प्रसाधनों पर तेजी से लागू किया गया है। यह भी पाया गया कि मेटालोथायोनिन की उत्तेजना, एक अंतर्जात एंटीऑक्सिडेंट मेलानोसाइट्स [55] में मेलेनोजेनेसिस को दबा सकती है। मानव त्वचा अक्सर पर्यावरणीय ऑक्सीकरण प्रदूषकों या यूवी प्रकाश के संपर्क में आती है और बाहरी पर्यावरणीय कारकों से क्षतिग्रस्त हो जाती है। विशेष रूप से, यूवी विकिरण को त्वचा में आरओएस की पीढ़ी को प्रेरित करने और कोशिका झिल्ली लिपिड पेरोक्सीडेशन [56] को बढ़ावा देने के लिए सूचित किया गया है। ऑक्सीडेटिव तनाव का मुकाबला करने के लिए, त्वचा विशेष एंटीऑक्सीडेंट सिस्टम [57] से लैस होती है।

P. dactylifera L. बीज निकालने, DPPH और ABTS प्लस रेडिकल मैला ढोने की गतिविधि, कुल फेनोलिक सामग्री, कम करने की क्षमता, और निकालने की धातु आयन-चेलेटिंग क्षमता की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को स्पष्ट करने के लिए पहले वर्णित [47,48] के रूप में निर्धारित किया गया था। P. dactylifera L. बीज के अर्क ने उपरोक्त सभी विश्लेषणात्मक अध्ययनों में काफी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों को अंजाम दिया। परिणामों ने पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को अलग-अलग श्रेणियों में अलग-अलग क्षमता के साथ दिखाया। बीज निकालने की डीपीपीएच-स्कैवेंजिंग गतिविधि चित्र 2ए में दिखाई गई थी जो एबीटीएस प्लस से अलग थी जो चित्र 2बी में दिखाई गई थी, जो एंटीऑक्सिडेंट-रेडिकल इंटरैक्शन के विभिन्न तंत्रों के परिणामस्वरूप हो सकती है। इसके अलावा, बीज निकालने में एंटीऑक्सीडेंट घटकों के बीच प्रतिक्रियाओं की स्टोइकोमेट्री भिन्न हो सकती है, जिसके परिणामस्वरूप मुक्त कट्टरपंथी-स्कैवेंजिंग क्षमता [58] में अंतर होता है। P. dactylifera L. बीज के अर्क में संभावित एंटीऑक्सिडेंट एक Fe3 प्लस / फेरिकैनाइड कॉम्प्लेक्स को फेरस रूप में बदल सकते हैं, और कम करने की क्षमता चित्र 2D में दिखाए गए बीज निकालने की एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि के संकेतक के रूप में कार्य करती है। यह पाया गया कि कोजिक एसिड [59] एक टायरोसिनेस अवरोधक के रूप में कार्य करता है क्योंकि कोजिक एसिड तांबे के आयनों को चेलेट करने के लिए धातु केलेटर के रूप में कार्य करता है और उन आयनों को टायरोसिनेस की सक्रिय साइट में प्रवेश करने से रोकता है। इसलिए, बीज निकालने में एंटीऑक्सिडेंट लौह आयनों के साथ अघुलनशील धातु परिसरों का निर्माण कर सकते हैं और फिर धातु आयनों और लिपिड के बीच बातचीत को रोक सकते हैं। बीज निकालने की उच्च धातु आयन-चेलेटिंग क्षमता ने इसकी संभावित एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और टायरोसिनेस गतिविधि (चित्रा 2ई) पर संभावित निरोधात्मक प्रभावों का संकेत दिया।

इंट्रासेल्युलर आरओएस की परख का सिद्धांत यह है कि डीसीएफएच-डीए कोशिका झिल्ली के माध्यम से फैलता है और एस्टरेज़ द्वारा डीसीएफएच को एंजाइमेटिक रूप से हाइड्रोलाइज्ड किया जाता है; तब DCFH ROS (जैसे H2O2) के साथ प्रतिक्रिया करके DCF प्राप्त करता है। डीसीएफ में तेजी से वृद्धि ने इंट्रासेल्युलर रेडिकल्स [60] द्वारा डीसीएफएच के ऑक्सीकरण का संकेत दिया। त्वचा को गोरा करने वाली गतिविधियों के लिए नए एंटीऑक्सिडेंट की खोज करने के पीछे का विचार इस परिकल्पना में निहित है कि यूवी विकिरण से उत्पन्न ऑक्सीडेटिव तनाव मेलेनिन संश्लेषण की उत्तेजना में योगदान कर सकता है। यूवी विकिरण को त्वचीय ऊतकों में आरओएस का उत्पादन करने के लिए सूचित किया गया है जो टाइरोसिनेस [61] को सक्रिय करके मेलेनिन उत्पादन को प्रेरित कर सकता है। इसके अलावा, यह बताया गया था कि कई त्वचा-सफेद करने वाले एजेंट मेलेनिन सिंथेटिक मार्ग [62] में मध्यवर्ती के पोलीमराइजेशन को अवरुद्ध करने के लिए टायरोसिनेस की सक्रिय साइट पर तांबे के आयनों के साथ या ओ-क्विनोन के साथ बातचीत करके मेलेनोजेनेसिस को रोक सकते हैं। इसके अतिरिक्त, विटामिन सी या विटामिन ई पहले से मौजूद मेलेनिन कणों के ऑक्सीकरण को कम कर सकता है। इसलिए, इन विटामिनों का व्यापक रूप से त्वचा को गोरा करने वाले उत्पादों [63] में उपयोग किया गया है। दिलचस्प बात यह है कि हमारे परिणामों ने P. dactylifera L. बीज के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट विशेषताओं का प्रदर्शन किया, जो दर्शाता है कि P. dactylifera L. के बीज का अर्क सौंदर्य प्रसाधनों में त्वचा को गोरा करने वाले घटक के रूप में कार्य कर सकता है।

एमटीटी परख एक प्रसिद्ध वर्णमिति परख है जो सेलुलर एनएडीएच / एनएडीपीएच-निर्भर ऑक्सीडोरक्टेज एंजाइम की गतिविधि को मापता है जो एमटीटी को बैंगनी रंग के फॉर्मेज़ान रंगों में कम करता है। इस परख को औषधीय एजेंटों और विषाक्त पदार्थों की संभावित साइटोटोक्सिसिटी की जांच करने के लिए लागू किया जा सकता है, क्योंकि ये एजेंट सेल व्यवहार्यता को बढ़ाते हैं या रोकते हैं। चित्रा 3ए में दिखाए गए परिणाम चित्रा 3बी में ट्रिपैन ब्लू अपवर्जन परख के अनुसार थे, जो इंगित करता है कि पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने का बी16एफ10 मेलेनोमा सेल व्यवहार्यता पर कोई साइटोटोक्सिक प्रभाव नहीं था।

मेलेनोजेनेसिस के संभावित अवरोधकों की जांच के लिए मशरूम टायरोसिनेस को आमतौर पर लक्ष्य एंजाइम के रूप में उपयोग किया जाता है। पहली बार यह पाया गया कि P. dactylifera L. बीज के अर्क की खुराक सीमा ({{0}}.049–0.49 mg/mL) मशरूम टायरोसिनेस की गतिविधि को बाधित कर सकती है। चित्र 4क में दिखाए गए परिणाम दर्शाते हैं कि बीज के अर्क ने कोजिक एसिड की तुलना में मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि पर कम निरोधात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया। मेलेनोजेनेसिस मार्ग के पहले दो चरणों में टायरोसिनेस एक प्रमुख भूमिका निभाता है। मेलेनिन उत्पादन पर P. dactylifera L. बीज के अर्क के वास्तविक निरोधात्मक प्रभाव को स्पष्ट करने के लिए, B16F10 मेलेनिन सामग्री और इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि निर्धारित की गई थी। चित्र 4ख में प्रस्तुत किए गए परिणाम दर्शाते हैं कि पी. डेक्टाइलिफेरा एल. बीज के अर्क की उच्च सांद्रता मेलेनिन निर्माण पर एक स्पष्ट निरोधात्मक प्रभाव डालती है। डेटा से पता चला है कि पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने वास्तव में मेलेनोमा कोशिकाओं में मेलेनोजेनेसिस को रोकता है। इसके साथ, चित्र 4C में दिखाए गए परिणाम चित्र 4B में दिखाए गए परिणामों के अनुसार थे। उपरोक्त सेलुलर प्रयोगों में, -MSH का उपयोग मेलेनिन संश्लेषण को प्रोत्साहित करने के लिए एक प्रेरक के रूप में किया गया था। -MSH को मेलानोकोर्टिन 1 रिसेप्टर (MC1R) को बांधने और इंट्रासेल्युलर एडिनाइलेट साइक्लेज को सक्रिय करने के लिए सूचित किया गया था, जो बदले में एटीपी को सीएमपी के लिए उत्प्रेरित करता है और सीएमपी-निर्भर पीकेए को सक्रिय करता है। चित्रा 5ए के परिणामों से पता चला है कि पी। डैक्टिलिफेरा एल। बीज निकालने ने एमसी1आर की अभिव्यक्ति को बाधित किया है, जिससे -एमएसएच मध्यस्थ इंट्रासेल्युलर सीएमपी अपग्रेडेशन द्वारा प्रेरित मेलेनिन उत्पादन को अवरुद्ध कर दिया गया है। इसके अलावा, सीएमपी की मध्यस्थता वाले पीकेए सिग्नलिंग मार्ग को निष्क्रिय कर दिया गया था और मेलानोजेनेसिस को रोक दिया गया था। अनुमान की पुष्टि करने के लिए, हमने PKA अवरोधक प्रयोग किए हैं, और चित्र 4D में दिखाए गए डेटा ने B16F10 कोशिकाओं में मेलानोजेनेसिस पर P. dactylifera L. बीज निकालने (0.147 mg/mL) के निरोधात्मक प्रभाव को H{{ द्वारा दबा दिया गया था। 24}}उपचार। H89 (N-[2-p-bromocinnamylamino-ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide) PKA का एक चयनात्मक और प्रबल अवरोधक है। परिणामों से संकेत मिलता है कि सीएमपी-मध्यस्थता वाले पीकेए सिग्नलिंग पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने से प्रभावित था।

टायरोसिनेस, टीआरपी1 और टीआरपी2 तीन प्रमुख एंजाइम हैं जो स्तनधारी कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण को नियंत्रित करते हैं [64]। इसके अलावा, MITF टायरोसिनेस, TRP1 और TRP2 का प्रमुख ट्रांसक्रिप्शनल रेगुलेटर है और मेलानोसाइट पिग्मेंटेशन [65] का सबसे महत्वपूर्ण नियामक है। चित्र 5क के परिणाम दर्शाते हैं कि पी. डैक्टिलिफेरा एल. बीज के अर्क ने इन मेलानोजेनेसिस-संबंधित प्रोटीनों के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर को कम किया, टायरोसिनेस गतिविधि को बाधित किया, और बी16एफ10 कोशिकाओं में मेलेनिन सामग्री को कम किया।

इस अध्ययन में, P. dactylifera L. बीज के अर्क ने CREB फॉस्फोराइलेशन और PKA सक्रियण को दबा दिया। ये आंकड़े बताते हैं कि सीएमपी-पीकेए मार्ग पी. डैक्टिलिफेरा एल. बीज निकालने से प्रेरित एंटी-मेलेनोजेनेसिस (चित्रा 5सी) के लिए जिम्मेदार हो सकता है।

एमएपीके को मेलानोजेनेसिस को संशोधित करने के लिए सूचित किया गया है [66]। एमएपीके परिवार में तीन प्रकार के प्रोटीन किनेसेस शामिल हैं, जिनमें बाह्य कोशिकीय उत्तरदायी किनेज (ईआरके), सी-जून एन-टर्मिनल किनेज (जेएनके), और पी 38 एमएपीके शामिल हैं। P38 MAPK cAMP प्रतिक्रिया तत्व-बाध्यकारी प्रोटीन को सक्रिय कर सकता है (CREB और CREB MITF अभिव्यक्ति को सक्रिय करता है, जो मेलेनिन संश्लेषण में सकारात्मक योगदान देता है [67]। चित्र 5C के परिणाम इस बात का प्रमाण देते हैं कि P. dactylifera L. बीज का अर्क CREB को निष्क्रिय कर सकता है, JNK, और p38, बदले में MITF अभिव्यक्ति को रोकते हैं (चित्र 5A)। इन परिणामों से पता चलता है कि dactylifera L. बीज निकालने से प्रेरित एंटीमेलेनोजेनिक प्रभाव को PKA पथों के डाउनरेगुलेशन द्वारा मध्यस्थ किया जा सकता है। इसके अलावा, यूवी प्रकाश विकिरण को खेलने के लिए सूचित किया गया है स्केलिंग, झुर्रीदार और हाइपरपिग्मेंटेशन [68] सहित कई त्वचा विकारों की शुरुआत में प्रमुखता से विशेषता है। परिणामों ने सुझाव दिया कि पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने से मेलेनिन उत्पादन में कमी आई, जिसे इंट्रासेल्युलर आरओएस की कमी के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।

सेलुलर मेलेनिन उत्पादन पर P. dactylifera L. बीज निकालने के प्रभाव का आकलन करने के लिए, हमने -MSH और P. dactylifera L. बीज निकालने के साथ इलाज किए गए B16F10 कोशिकाओं में mRNA स्तर निर्धारित किया। -MSH-उपचारित कोशिकाओं ने अपेक्षित के रूप में MITF, tyrosinase, TRP-1, और TRP-2 के बढ़े हुए स्तर दिखाए। दिलचस्प बात यह है कि पी. डैक्टिलिफेरा एल. बीज निकालने वाली कोशिकाओं ने इन मेलानोजेनेसिस-संबंधित जीनों की एमआरएनए अभिव्यक्ति में कमी दिखाई। हालांकि, स्तंभों के बीच कोई सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर मौजूद नहीं था, जिसने संकेत दिया कि पी। डैक्टिलिफ़ेरा एल। बीज निकालने से एमआईटीएफ, टायरोसिनेस, टीआरपी1 और टीआरपी2 के जीन अभिव्यक्ति स्तर प्रभावित नहीं होते हैं।

यह हमारा उत्पाद है।

अधिक जानकारी के लिए कृपया यहां क्लिक करें।

यह बताया गया है कि P. dactylifera L. बीज में पाया जाने वाला प्रमुख फेनोलिक एसिड फेरुलिक एसिड [69] है। यह दिखाया गया है कि फेरुलिक एसिड बी16 मेलेनोमा कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण को प्रभावी ढंग से रोकता है, जो कैसिइन किनेज 2-टायरोसिनेस के फॉस्फोराइलेशन को खुराक पर निर्भर तरीके से रोकता है [70]। ये रिपोर्ट चित्र 1 में दिखाए गए हमारे परिणामों का समर्थन करती हैं- पी. डेक्टाइलिफेरा एल. बीज के पानी के अर्क में फेरुलिक एसिड ने बी16एफ10 कोशिकाओं में मेलेनोजेनेसिस के निषेध में योगदान दिया। निश्चित रूप से, निकट भविष्य में बीज निकालने में अन्य कार्यात्मक घटकों की जांच की जानी चाहिए।

हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि P. dactylifera L. बीज निकालने ने PKA सिग्नलिंग पाथवे को डाउनरेगुलेट करके B16F10 कोशिकाओं में मेलानोजेनेसिस को रोक दिया। इसलिए, P. dactylifera L. बीज का अर्क एक प्रभावी त्वचा-सफेद करने वाले एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

5। निष्कर्ष

मेलेनिन संश्लेषण में पी. डैक्टिलिफेरा एल. बीज जल निकालने की क्रिया के तंत्र पर यह पहली रिपोर्ट है। वर्तमान अध्ययन ने P. dactylifera L. बीज निकालने के अपचयन प्रभाव में cAMP/PKA/CREB मार्ग की भागीदारी का प्रदर्शन किया। हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि P. dactylifera L. बीज निकालने ने PKA सिग्नलिंग पाथवे को डाउनरेगुलेट करके B16F10 कोशिकाओं में मेलानोजेनेसिस को रोक दिया। इसलिए, P. dactylifera L. बीज निकालने का उपयोग एक उपन्यास त्वचाविज्ञान एंटीमेलानोजेनेसिस एजेंट और एक प्रभावी त्वचा-सफेद करने वाले एजेंट के रूप में किया जा सकता है।