गुर्दा मायलोइड-संबंधित प्रोटीन का अनुमानित महत्व मोटापे के रोगियों में 8 अभिव्यक्ति- या टाइप 2 मधुमेह-संबद्ध गुर्दा रोग

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ताकाशिगे कुवाबारा¹, कियोशी मोरी1,^2*, मसातो कसाहारा^1,3, हिदेकी योकोई¹, हिरोताका इमामकी¹, अकीरा इशी¹, केनिची कोगा¹, अकीरा सुगवरा⁴, शिंजी यासुनो³, केंजी उशीमा³, ताकाशी मोरिकावा⁵योशियो कोनिशि⁵, मासाहितो इमनिशि⁵, अकीरा निशियामा⁶, काज़ुवा नाकाओ^1,2, मसाशी मुकोयामा¹

¹मेडिसिन और क्लिनिकल साइंस विभाग, क्योटो यूनिवर्सिटी ग्रेजुएट स्कूल ऑफ मेडिसिन, क्योटो, जापान,

²मेडिकल इनोवेशन सेंटर, क्योटो यूनिवर्सिटी ग्रेजुएट स्कूल ऑफ मेडिसिन, क्योटो, जापान,

³ईबीएम अनुसंधान विभाग, नैदानिक ​​और अनुवाद विज्ञान की उन्नति के लिए संस्थान, क्योटो विश्वविद्यालय अस्पताल, क्योटो, जापान,

⁴नेफ्रोलॉजी विभाग, ओसाका रेड क्रॉस अस्पताल, ओसाका, जापान,

5 डिवीजन ऑफ नेफ्रोलॉजी एंड हाइपरटेंशन, ओसाका सिटी जनरल हॉस्पिटल, ओसाका, जापान,

6 औषध विज्ञान विभाग, कागावा यूनिवर्सिटी मेडिकल स्कूल, कागावा, जापान

सार

पृष्ठभूमि और उद्देश्य: हमने बताया है कि टोल-जैसे रिसेप्टर 4 (TLR4) और इसके अंतर्जात लिगैंड्स में से एक, मायलॉइड-संबंधित प्रोटीन 8 (MRP8 या S100A8), चूहों में मधुमेह अपवृक्कता की प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य के महत्व का मूल्यांकन करना थागुर्दारोगियों में MRP8 अभिव्यक्तिमोटापा- या टाइप 2 मधुमेह से जुड़ेगुर्दा रोग. तरीके: मधुमेह, मोटापे या नियंत्रण विषयों में, गुर्दे की बायोप्सी नमूनों में MRP8 mRNA और प्रोटीन अभिव्यक्ति का स्तर वास्तविक समय आरटी-पीसीआर और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (क्रमशः n=28 और 65) द्वारा निर्धारित किया गया था, और बेसलाइन के साथ उनके जुड़ाव और प्रागैतिहासिक मापदंडों का विश्लेषण किया गया। मैक्रोफेज का उपयोग करके प्रो-भड़काऊ जीन अभिव्यक्तियों पर MRP8 के प्रभावों की जांच की गई। परिणाम:गुर्दाMRP8 जीन और प्रोटीन अभिव्यक्ति का स्तर नियंत्रण समूह की तुलना में मोटे या मधुमेह समूहों में ऊंचा हो गया था। सभी विषयों में, यूनीवेरिएट लीनियर रिग्रेशन एनालिसिस द्वारा, ग्लोमेरुलर एमआरपी 8- पॉजिटिव सेल काउंट और ट्यूबलोइंटरस्टीशियल एमआरपी 8- बेसलाइन पर पॉजिटिव एरिया, दोनों क्रमशः, डायबिटिक नेफ्रोपैथी के लिए विभिन्न ज्ञात जोखिम कारकों के साथ सहसंबद्ध नहीं थे (जैसे सिस्टोलिक ब्लड प्रेशर, प्रोटीनुरिया और सीरम क्रिएटिनिन के रूप में) लेकिन ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस की सीमा के साथ भी। एक साल बाद मूत्र प्रोटीन के स्तर की भविष्यवाणी करने वाले स्वतंत्र कारकों की बहुभिन्नरूपी विश्लेषण द्वारा जांच की गई, और उनमें ग्लोमेरुलर एमआरपी 8-पॉजिटिव सेल काउंट (बी=0.59, पी, 0.001), प्रोटीनूरिया शामिल थे। (बी=0.37, पी=0.002) और सिस्टोलिक ब्लड प्रेशर (बी=0.21, पी=0.04) बेसलाइन पर, ज्ञात जोखिम के समायोजन के बाद कारक MRP8प्रोटीन अभिव्यक्ति सीडी68-सकारात्मक मैक्रोफेज और एट्रोफिक नलिकाओं में देखी गई थी। सुसंस्कृत माउस मैक्रोफेज में, MRP8 प्रोटीन-प्रेरित प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकाइन एक्सप्रेशन ने MRP8 के ऑटो-इंडक्शन को TLR4-निर्भर तरीके से ट्रिगर किया।

निष्कर्ष: ग्लोमेरुलर MRP8 अभिव्यक्ति मोटे या टाइप 2 मधुमेह के रोगियों में प्रोटीनमेह की प्रगति के साथ जुड़ा हुआ प्रतीत होता है, संभवतः TLR4 सिग्नलिंग के माध्यम से मैक्रोफेज में भड़काऊ परिवर्तन को प्रेरित करके।

सिस्टैंच के प्रभाव: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

परिचय

मधुमेह के रोगजनन में पुरानी सूजन एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है यामोटापाऔर इसकी हृदय संबंधी जटिलताओं [1]। पुरानी सूजन की प्रक्रिया में जन्मजात प्रतिरक्षा रिसेप्टर्स और अंतर्जात लिगैंड्स की भागीदारी को फंसाया गया है। मायलोइड-संबंधित प्रोटीन 8 (MRP8, जिसे S100A8 या कैलग्रेनुलिन A के रूप में भी जाना जाता है) को मूल रूप से न्यूट्रोफिल और मोनोसाइट्स [2] में एक साइटोप्लाज्मिक कैल्शियम-बाइंडिंग प्रोटीन के रूप में पहचाना गया था और टोल-जैसे रिसेप्टर 4 (TLR4) के लिए एक शक्तिशाली अंतर्जात लिगैंड के रूप में व्यापक रूप से पहचाना गया है। ) सेप्टिक शॉक, संवहनी और ऑटोइम्यून विकारों सहित विभिन्न रोगों में [3,4,5]। हमने हाल ही में प्रस्तावित किया है कि MRP8/TLR4 सिग्नलिंग डायबिटिक नेफ्रोपैथी [6] के हाइपरलिपिडिमिया-प्रेरित प्रगति में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। डायबिटिक नेफ्रोपैथी [6] और रीनल फाइब्रोसिस [7] के माउस मॉडल में क्रमशः ग्लोमेरुलर मैक्रोफेज और कलेक्टिंग डक्ट सेल MRP8 के प्रमुख स्रोत हैं। MRP8 का प्लाज्मा स्तर, जो आमतौर पर रक्तप्रवाह में एक बाध्यकारी साथी MRP14 के साथ एक हेटेरोडिमेरिक कॉम्प्लेक्स बनाता है, मोटे विषयों में बढ़ जाता है [8,9]। हालांकि, मोटापे या के रोगियों में एमआरपी 8 की गुर्दे की अभिव्यक्ति की जांच करने वाली कोई रिपोर्ट नहीं मिली हैप्रकार2डायबिटीजऔर गुर्दे के पूर्वानुमान के साथ इसका संबंध।

इस अध्ययन का उद्देश्य एमआरपी8 के एमआरएनए और प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तरों को निर्धारित करना थागुर्दामधुमेह अपवृक्कता (डीएन) वाले जापानी रोगियों की,मोटापा-संबंधित ग्लोमेरुलोपैथी (ओआरजी), न्यूनतम परिवर्तन नेफ्रोटिक सिंड्रोम (एमसीएनएस) या मामूली ग्लोमेरुलर असामान्यता (एमजीए), जो सभी गुर्दे की बायोप्सी द्वारा निदान किए गए थे, और यह मूल्यांकन करने के लिए कि क्या गुर्दे की एमआरपी 8 अभिव्यक्ति गुर्दे के परिणामों की भविष्यवाणी कर सकती है।

सिस्टैंच किडनी के कार्य में सुधार कर सकता है

सामग्री और तरीके

नैतिक वक्तव्य

मानव अध्ययन हेलसिंकी की घोषणा में व्यक्त सिद्धांतों के अनुसार आयोजित किया गया था और क्रमशः क्योटो यूनिवर्सिटी ग्रेजुएट स्कूल ऑफ मेडिसिन और ओसाका सिटी जनरल अस्पताल के मानव अनुसंधान पर नैतिक समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया था। सभी प्रतिभागियों को सूचित सहमति लिख के दिया। पशु अध्ययन प्रोटोकॉल को क्योटो यूनिवर्सिटी ग्रेजुएट स्कूल ऑफ मेडिसिन की पशु अनुसंधान समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था (परमिट संख्या: मेड क्यो 13318)। सभी जानवरों की सर्जरी सोडियम पेंटोबार्बिटल एनेस्थीसिया के तहत की गई थी, और पीड़ा को कम करने के लिए सभी प्रयास किए गए थे।

अध्ययन विषय

प्रोटीन युक्त रोगीमोटापाया टाइप 2 मधुमेह जो गुर्दे की बायोप्सी से गुजरे थे, उन्हें इस अध्ययन में नामांकित किया गया था। संक्रामक रोग, कैंसर, यकृत रोग या कोलेजन रोग वाले मरीजों को बाहर रखा गया था। प्रोटीनुरिया को कम से कम दो लगातार मापों में 0 .5 ग्राम / ग्राम क्रिएटिनिन या मूत्र एल्ब्यूमिन 300 मिलीग्राम / ग्राम क्रिएटिनिन से अधिक मूत्र प्रोटीन के रूप में परिभाषित किया गया था।मोटापा25 से अधिक बॉडी मास इंडेक्स (बीएमआई) के रूप में परिभाषित किया गया था। 0 (किलो / एम .)²) टाइप 2 मधुमेह का निदान विश्व स्वास्थ्य संगठन के मानदंडों के अनुसार किया गया था। गुर्दे की बायोप्सी के लिए प्रवेश पर जैव रासायनिक माप का उपयोग क्रॉस-अनुभागीय विश्लेषण के लिए आधारभूत विशेषताओं के रूप में किया गया था। अनुमानित ग्लोमेर्युलर निस्पंदन दर (ईजीएफआर) की गणना जापानी सोसायटी ऑफ नेफ्रोलॉजी द्वारा प्रस्तावित एक सरल भविष्यवाणी समीकरण का उपयोग करके की गई थी: ईजीएफआर (एमएल / मिनट / 1.73 मीटर)²)=1946 [आयु (वर्ष)]20.287 6 [सीरम क्रिएटिनिन (मिलीग्राम perdl)]21.094 60.739 (महिलाओं के लिए), जो MDRD का एक मान्य स्थानीय संशोधन है [ 10]. क्रिएटिनिन के सीरम सांद्रता को एक एंजाइमी विधि का उपयोग करके मापा गया था।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए, 2000 और 2011 के बीच क्योटो यूनिवर्सिटी अस्पताल के मेडिसिन एंड क्लिनिकलसाइंस विभाग में गुर्दे की बायोप्सी कराने वाले 65 जापानी रोगियों का विश्लेषण किया गया। इस अवधि के दौरान सभी रोगियों के बायोप्सी-सिद्ध निदान को फ़ाइल S1 में तालिका S1 में सूचीबद्ध किया गया है। इस कार्य में जिन विषयों की जांच की गई उनमें डीएन (एन=19), ओआरजी (एन=10) और गैर-मोटे, गैर-मधुमेह नियंत्रण विषय शामिल थे जिन्हें एमजीए (एन=19) के रूप में निदान किया गया था या एमसीएनएस (एन=17)। इन श्रेणियों के कुछ मामलों को बाहर रखा गया था क्योंकि उपलब्ध अवशिष्ट नमूनों में 10glomeruli से कम था। डीएन की परिभाषा में शामिल हैं (1) मधुमेह की शुरुआत के बाद 5 साल से अधिक की अवधि, (2) माइक्रो- या मैक्रो-एल्ब्यूमिन्यूरिया का अस्तित्व, (3) डीएन के साथ संगत हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन जैसे ग्लोमेरुलर बेसमेंट मेम्ब्रेन का मोटा होना, मेसेंजियल विस्तार, गांठदार स्केलेरोसिस (किमेलस्टील-विल्सन नोड्यूल्स) और/या आर्टेरियोलर हाइलिनोसिस, और (4) वृक्क विकारों के अन्य कारणों का बहिष्करण [11]। ओआरजी को रूपात्मक रूप से फोकल सेग्मल ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और / या ग्लोमेरुलोमेगाली के रूप में परिभाषित किया गया था जिसमें दोनों विषयों मेंमोटापाऔर प्रोटीनुरिया, जिनकी परिभाषा ऊपर वर्णित की गई थी [12,13]।

एमआरएनए अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए, निम्न-गुणवत्ता वाले नमूने, जिनमें 18S राइबोसोमल आरएनए (आरआरएनए) का स्तर वास्तविक समय आरटी-पीसीआर द्वारा पता लगाने की संवेदनशीलता सीमा से कम था, को बाहर रखा गया था। नामांकित विषयों में 22 प्रकार के 2 मधुमेह रोगी शामिल थे, जिन्होंने 2000 और 2010 के बीच ओसाका सिटी जनरल अस्पताल में गुर्दे की बायोप्सी की थी, और 6 गैर-मधुमेह नियंत्रण विषय थे, जिनके पास बायोप्सी-सिद्ध एमजीए था।

टेबल्स 1 और 2 क्रमशः इम्यूनोहिस्टोकेमिकल या जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण द्वारा जांच की गई रोगियों की आधारभूत नैदानिक ​​​​विशेषताओं को संक्षेप में प्रस्तुत करते हैं। प्रकाश माइक्रोस्कोपी के लिए, ऊतक के नमूनों को मानक प्रक्रियाओं के अनुसार संसाधित किया गया था। वर्गों को हेमटॉक्सिलिन-एओसिन, आवधिक एसिड-शिफ, आवधिक-एसिड मिथेनामाइन सिल्वर या मैसन ट्राइक्रोम (चित्र। एस 1) के साथ दाग दिया गया था। कुल ग्लोमेरुली और ट्यूबलोइंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस के सापेक्ष क्षेत्रों के बीच वैश्विक स्केलेरोसिस के साथ ग्लोमेरुली की संख्या के अनुपात का मूल्यांकन स्वतंत्र रूप से निदान और नैदानिक ​​डेटा से अनजान दो रोगविदों द्वारा किया गया था।

सिस्टैंच के प्रभाव: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

गुर्दे के परिणामों की परिभाषा

निम्नलिखित दो रोगसूचक संकेतकों की जांच क्रमशः रेखीय प्रतिगमन और लॉजिस्टिक प्रतिगमन विश्लेषण द्वारा की गई: (1) एक वर्ष के बाद बायोप्सी में मापा गया प्रोटीनमेह की सीमा, और (2) गुर्दे की घटना को सीरम क्रिएटिनिन में .50 प्रतिशत की वार्षिक वृद्धि के रूप में परिभाषित किया गया है। बेसलाइन से या पुरानी डायलिसिस की शुरुआत से।

इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री

MRP8 और CD68 की इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग करके किया गयागुर्दावर्गों (मोटाई 4 मिमी) 4 प्रतिशत बफर्ड पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ तय किया गया। साइट्रेट बफर द्वारा प्रतिजन पुनर्प्राप्ति के बाद, गुर्दे के वर्गों को 10 प्रतिशत बकरी सीरम के साथ ऊष्मायन किया गया था, इसके बाद माउस मानव-विरोधी MRP8 (1:100; BMA बायोमेडिकल्स, अगस्त, स्विट्जरलैंड) [14] या माउस मानव-विरोधी CD68 एंटीबॉडी (1:50) थे। ; डको, एली, यूके), क्रमशः। प्राथमिक एंटीबॉडी की कल्पना हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी और 3, 3-डायमिनोबेंज़िडाइन टेट्राहाइड्रोक्लोराइड (डको यूएसए, कारपेंटेरिया, सीए) के साथ की गई थी। नाभिक को हेमटॉक्सिलिन के साथ उलट दिया गया था। एमआरपी 8-सकारात्मक कोशिकाओं को 10 से अधिक ग्लोमेरुली में गिना गया था, और एमआरपी 8- ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में सकारात्मक क्षेत्र को मेटामॉर्फ 7.5 सॉफ्टवेयर (आणविक उपकरण, डाउनिंगटाउन, पीए, यूएसए) का उपयोग करके प्रत्येक विषय के लिए औसत प्राप्त करने के लिए मात्रात्मक रूप से मापा गया था। ) सीडी के कोलोकलाइज़ेशन 68- और एमआरपी 8-पॉजिटिव सेल्स का मूल्यांकन सीरियल सेक्शन के साथ किया गया था। पहले एंटीबॉडी (छवि। S2) के बिना दागे गए नकारात्मक नियंत्रणों में न तो MRP8 और न ही CD68 संकेत था। रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर पुनः संयोजक मानव एमआरपी 8 प्रोटीन (लाइफ टेक्नोलॉजीज, कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) के 20 मोलर अतिरिक्त के साथ एंटी-एमआरपी 8 एंटीबॉडी का पुनर्संयोजन, धुंधलापन स्पष्ट रूप से कम हो गया था, अगर पूरी तरह से नहीं, तो एंटीबॉडी की विशिष्टता का समर्थन करते हुए (छवि। एस 3) .

किडनी का इलाज करने के लिए सिस्टांचे

एमआरएनए अभिव्यक्ति का मूल्यांकन

जमा हुआगुर्दावर्गों को पहले वर्णित [15] के रूप में लेजर कैप्चर माइक्रो-विच्छेदन (LM200; ओलिंप, टोक्यो, जापान) द्वारा ग्लोमेरुली और नोन्ग्लोमेरुलस ऊतकों में अलग किया गया था। टोटल RNA को RNeasy मिनी किट (क्यूजेन, टोक्यो, जापान) के साथ निकाला गया था। mRNA अभिव्यक्ति का स्तर TaqMan रियल-टाइम PCR (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, CA, यूएसए) [16,17] द्वारा निर्धारित किया गया था। 18S rRNA (आंतरिक नियंत्रण) स्तरों द्वारा सभी जीनों के अभिव्यक्ति स्तर को सामान्य किया गया। प्राइमरी और प्रोब सीक्वेंस के लिए फाइल S1 में टेबल S2 देखें। यूकेरियोटिक 18S rRNA का पता पूर्व-विकसित TaqMan परख अभिकर्मकों (एप्लाइड बायोसिस्टम्स) के साथ लगाया गया था।

तालिका 1. गुर्दे की बायोप्सी में रोगियों की आधारभूत नैदानिक ​​​​विशेषताएं जिनका इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा एमआरपी 8 प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए विश्लेषण किया गया था।

एमजीए: मामूली ग्लोमेरुलर असामान्यता, एमसीएनएस: न्यूनतम परिवर्तन नेफ्रोटिक सिंड्रोम, ओआरजी:मोटापा-संबंधित ग्लोमेरुलोपैथी, डीएन: डायबिटिक नेफ्रोपैथी, बीएमआई: बॉडी मास इंडेक्स, बीयूएन: ब्लड यूरिया नाइट्रोजन, सीआरपी: सी-रिएक्टिव प्रोटीन। डेटा का मतलब है 6 एसडी। *MGA, MCNS, ORG और DN समूहों के बीच समग्र अंतर की तुलना ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001 द्वारा की गई।

मैक्रोफेज का MRP8 उपचार

C57BL/6J आनुवंशिक पृष्ठभूमि (ओरिएंटल बायोसर्विस, क्योटो, जापान) पर जंगली-प्रकार या TLR4 नॉकआउट (KO) चूहों [18] से अस्थि मज्जा-व्युत्पन्न मैक्रोफेज उत्पन्न किए गए थे जैसा कि पहले [6] में वर्णित है। संक्षेप में, लाल रक्त कोशिकाओं के विश्लेषण के बाद, अस्थि मज्जा कोशिकाओं को 20 प्रतिशत भ्रूण बछड़ा सीरम और 50 एनजी / एमएल पुनः संयोजक मानव मैक्रोफेज-कॉलोनी-उत्तेजक कारक (पेप्रोटेक, रॉकी हिल, एनजे, यूएसए) वाले माध्यम में फिर से जोड़ा गया और सुसंस्कृत किया गया। 5 प्रतिशत CO2 वातावरण में 37uC। 7 दिन, मैक्रोफेज को 4 घंटे के लिए पुनः संयोजक माउस MRP8 (अबनोवा, ताइपे, ताइवान) या वाहन के साथ जोड़ा गया। Polymyxin B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kyoto, Japan) को प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया था ताकि एंडोटॉक्सिन के संदूषण को कम किया जा सके जैसा कि पहले बताया गया है [3,19]। Noendotoxin को MRP8 की किसी भी सांद्रता में पाया गया था, इसके बाद टॉक्सिन सेंसर क्रोमोजेनिक एलएएल एंडोटॉक्सिन परख किट (जेनस्क्रिप्ट, पिस्काटावे, एनजे, यूएसए) द्वारा 25 मिलीग्राम / एमएल पॉलीमीक्सिन बी के साथ ऊष्मायन किया गया था। कोशिकाओं से कुल आरएनए को RNeasy MiniKit के साथ निकाला गया था, और इंटरल्यूकिन के mRNA अभिव्यक्ति स्तर -1 बीटा (IL -1 b), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर-अल्फा (TNFa), और MRP8 को TaqMan वास्तविक समय द्वारा निर्धारित किया गया था। आरटी-पीसीआर। कृंतक GAPDH स्तरों (आंतरिक नियंत्रण, पूर्व-विकसित TaqMan परख अभिकर्मकों) द्वारा सभी जीनों के अभिव्यक्ति स्तर को सामान्य किया गया था। रीयल-टाइम पीसीआर के लिए प्राइमर और जांच अनुक्रम फ़ाइल S1 में तालिका S2 में सूचीबद्ध हैं।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को 6 एसडी के रूप में व्यक्त किया जाता है, या उपयुक्त होने पर 695 प्रतिशत विश्वास अंतराल (सीआई) का मतलब है। चार समूहों के बीच तुलना के लिए, बोनफेरोनी के पोस्ट-हॉक विश्लेषण के साथ एक-तरफ़ा या दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था, और श्रेणीबद्ध चर की तुलना x2 परीक्षण का उपयोग करके की गई थी। उपयुक्त के रूप में दो समूहों के बीच तुलना के लिए छात्र का अयुग्मित टी-परीक्षण लागू किया गया था। स्पीयरमैन सहसंबंध गुणांक का अनुमान दो चरों के बीच संबंध निर्धारित करने के लिए लगाया गया था। बायोप्सी के एक साल बाद ग्लोमेरुलर या ट्यूबलोइंटरस्टीशियल एमआरपी 8 अभिव्यक्ति या मूत्र प्रोटीन के स्तर की सीमा निर्धारित करने वाले बेसलाइन कोवरिएट्स के प्रभावों की जांच करने के लिए, एकतरफा और बहुभिन्नरूपी रैखिक प्रतिगमन विश्लेषण किए गए थे। गुर्दे की घटनाओं की घटना की भविष्यवाणी करने वाले व्याख्यात्मक चर का विश्लेषण करने के लिए लॉजिस्टिक रिग्रेशन विश्लेषण का उपयोग किया गया था। StatView 5.0 सॉफ्टवेयर (SAS InstituteInc., Cary, NC, USA) का उपयोग करके सभी डेटा का विश्लेषण किया गया। P मान,0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

सिस्टैंच के प्रभाव: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

परिणाम

हमने MRP8 प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तरों की तुलना कीगुर्दाडीएन, ओआरजी, और गैर-मोटे, गैर-मधुमेह नियंत्रण (एमजीए और सीएनएस) समूहों के बीच। इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण से पता चला है कि डीएन में ग्लोमेरुलर एमआरपी 8- पॉजिटिव सेल काउंट (छवि 1 ए) और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल एमआरपी 8- पॉजिटिव एरिया (छवि 1 बी) दोनों एमजीए, एमसीएनएस सहित अन्य समूहों की तुलना में काफी बड़े थे। और ओआरजी (पी<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

तालिका 2. गुर्दे की बायोप्सी में रोगियों की आधारभूत नैदानिक ​​​​विशेषताएं जिनका वास्तविक समय आरटी-पीसीआर द्वारा एमआरपी 8 एमआरएनए अभिव्यक्ति के लिए विश्लेषण किया गया था।

संघों के बीचगुर्दागुर्दे की बायोप्सी के समय MRP8 संकेतों और आधारभूत नैदानिक ​​मापदंडों का क्रॉस-अनुभागीय विश्लेषण किया गया (तालिका 3)। अविभाजित विश्लेषण द्वारा, ग्लोमेरुलर और / या ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल एमआरपी 8 प्रोटीन अभिव्यक्ति को उम्र, सिस्टोलिक और डायस्टोलिक रक्तचाप, मूत्र प्रोटीन, क्रिएटिनिन के सीरम स्तर, बीयूएन और एचडीएल कोलेस्ट्रॉल, ईजीएफआर, और वैश्विक ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस की सीमा से काफी सहसंबद्ध किया गया था। डायस्टोलिक ब्लड प्रेशर, ईजीएफआर और बीयूएन को कोलिनियरिटी के कारण छोड़कर बहुभिन्नरूपी विश्लेषण द्वारा इन मापदंडों की और जांच की गई। ट्यूबलोइंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस का प्रतिशत स्वतंत्र रूप से ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 सिग्नल (बी=0 .62, समायोजित पी=0। 0 2) और ट्यूबलोइंटरस्टिशियल एमआरपी 8 सिग्नल (बी=0.85, समायोजित पी के साथ स्वतंत्र रूप से सहसंबद्ध था। ,0.001), क्रमशः। इसके अतिरिक्त, ट्यूबलोइंटरस्टीशियल MRP8 संकेतों को भी बेसलाइन प्रोटीनुरिया (b=0.20, समायोजित P=0.01) के साथ स्वतंत्र रूप से सहसंबद्ध किया गया था। ग्लोमेरुली या ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में MRP8 संकेतों के बीच बिखरे हुए प्लॉट विश्लेषण और नैदानिक ​​​​मापदंडों से संकेत मिलता है कि MCNSgroup ने अन्य समूहों से एक अलग वितरण पैटर्न, विशेष रूप से मूत्र प्रोटीन और सीरम एलडीएल कोलेस्ट्रॉल के स्तर (चित्र। S5A-D, S6A-D) के रूप में। MCNS समूह के बहिष्करण ने MRP8 संकेतों और मूत्र प्रोटीन या सीरम LDL-कोलेस्ट्रॉल के स्तर (चित्र। S5E-F, S6E-F) के बीच सहसंबंध में सुधार किया। इसलिए, हमने एमसीएनएस रोगियों को छोड़कर एक उप-विश्लेषण किया और पाया कि मूत्र प्रोटीन बहुभिन्नरूपी विश्लेषण (तालिका 4; बी=0.36, समायोजित पी=0.03) द्वारा ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 संकेतों के साथ सहसंबद्ध एक स्वतंत्र कारक था। )

इसके बाद, हमने गुर्दे के परिणामों की भविष्यवाणी करने वाले व्याख्यात्मक कारकों की पहचान करने के लिए रैखिक प्रतिगमन या लॉजिस्टिक रिग्रेशन विश्लेषण किया, जो एक साल बाद प्रोटीनुरिया की सीमा और एक वर्ष के भीतर गुर्दे की घटना थी। चूँकि ग्लोमेरुलर और ट्यूबलोइंटरस्टीशियल MRP8 सिग्नल (चित्र। S7; R=0.67, P, 0। 0 01) के बीच एक अच्छा संबंध था, इन मापदंडों को वैकल्पिक रूप से आगे के विश्लेषणों में नामांकित किया गया था। . हमने कई प्रतिगमन विश्लेषण द्वारा गुर्दे की बायोप्सी के बाद 1 वर्ष में आधारभूत मापदंडों और मूत्र प्रोटीन के बीच संबंध का मूल्यांकन किया। जैसा कि तालिका 5 में दिखाया गया है, ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 सिग्नल (बी=0.59, समायोजित पी, 0.001) एक साल बाद प्रोटीनूरिया की सीमा के लिए एक भविष्य कहनेवाला कारक था, साथ ही बेसलाइन सिस्टोलिक ब्लड प्रेशर (बी {{13} }.21, समायोजित P=0.04) और आधारभूत प्रोटीनमेह (b=0.37, समायोजित P=0.002) थे। ये पैरामीटर अन्य ज्ञात मधुमेह अपवृक्कता जोखिम कारकों से स्वतंत्र थे जिनमें गुर्दे की शिथिलता (सीरम क्रिएटिनिन) और वैश्विक स्केलेरोसिस और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस [11,21-24] शामिल हैं। दूसरी ओर, ट्यूबलोइंटरस्टीशियल MRP8 सिग्नल (b=0.34, एडजस्टेड P=0.09) एक साल बाद मूत्र प्रोटीन के स्तर के लिए एक स्वतंत्र भविष्य कहनेवाला कारक नहीं था। गुर्दे की बायोप्सी के बाद एक वर्ष के भीतर 7 रोगियों (डीएन में 6 और ओआरजी मामलों में 1) में गुर्दे की घटनाएं हुईं। अविभाजित विश्लेषण द्वारा, न केवल ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस, और ग्लोमेरुलर और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल एमआरपी 8 संकेतों की सीमा, बल्कि रक्तचाप, गुर्दे की शिथिलता और बेसलाइन पर मूत्र प्रोटीन का स्तर गुर्दे की घटनाओं की घटना के लिए महत्वपूर्ण भविष्य कहनेवाला कारक थे। हालाँकि, बहुभिन्नरूपी विश्लेषण द्वारा, उनके सहसंयोजकों को एक दूसरे द्वारा रद्द कर दिया गया था (फ़ाइल S1 में तालिका S3), संभवतः इन मापदंडों के बीच उच्च सहसंबंधों के कारण।

अंत में, हमने सुसंस्कृत मैक्रोफेज का उपयोग करके टीएलआर 4 के लिए अंतर्जात लिगैंड के रूप में एमआरपी 8 की शक्ति की जांच की। जंगली-प्रकार के चूहों से अस्थि मज्जा-व्युत्पन्न मैक्रोफेज में, एमआरपी 8 प्रोटीन-प्रेरित प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकाइन जीन जैसे कि आईएल -1 बी और टीएनएफए और एमआरपी 8 के ऑटो-इंडक्शन को भी 1 के बीच खुराक पर निर्भर तरीके से ट्रिगर करता है। 15}}-1000 एनजी/एमएल। MRP8 के इन प्रभावों को TLR4 KO चूहों (P, 0.01) (चित्र 3) से प्राप्त मैक्रोफेज में लगभग दो-तिहाई द्वारा दबा दिया गया था।

चित्रा 1. इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और एमआरएनए एमआरपी 8 के लिए विश्लेषण करता हैगुर्दाबायोप्सी नमूने। ग्लोमेरुलर एमआरपी की मात्रा {0}}पॉजिटिव सेल काउंट (ए) और ट्यूबलोइंटरस्टिशियल एमआरपी8-पॉजिटिव एरिया (बी)। ग्लोमेरुलर और गैर-ग्लोमेरुलर अंशों (सी) में एमआरपी 8 की एमआरएनए अभिव्यक्ति। ओपन बार: गैर-मोटे, गैर-मधुमेह नियंत्रण जो एमजीए या एमसीएनएस हैं, बंद बार: ओआरजी या डीएन (ए-सी)। एमजीए, एमसीएनएस, ओआरजी, और डीएन समूहों (डी-जी) के प्रतिनिधि चित्र। एमजीए: मामूली ग्लोमेरुलर असामान्यता, एमसीएनएस: न्यूनतम परिवर्तन नेफ्रोटिक सिंड्रोम, ओआरजी: मोटापे से संबंधित ग्लोमेरुलोपैथी, डीएन: मधुमेह अपवृक्कता। *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

बहस

वर्तमान अध्ययन ने प्रदर्शित किया है कि ओआरजी और गैर-मोटे, गैर-मधुमेह नियंत्रण (एमजीए और एमसीएनएस) की तुलना में डीएनएस के रोगियों के ग्लोमेरुली और ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में एमआरपी 8 बहुतायत से व्यक्त किया गया है। इसके अलावा, ORG विषयों में, MRP8 अभिव्यक्ति का स्तर MGA या MCNS विषयों से अधिक था। सभी विषयों सहित बेसलाइन क्रॉस-सेक्शनल जांच में, यूनीवेरिएट लीनियर रिग्रेशन एनालिसिस, ग्लोमेरुलर एमआरपी 8-पॉजिटिव सेल काउंट और ट्यूबलोइंटरस्टीशियल एमआरपी8-पॉजिटिव एरिया दोनों क्रमशः, न केवल विभिन्न ज्ञात जोखिम कारकों के साथ सहसंबद्ध थे। डायबिटिक नेफ्रोपैथी (जैसे सिस्टोलिक ब्लड प्रेशर, प्रोटीनुरिया और सीरम क्रिएटिनिन) लेकिन ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस की सीमा के साथ भी। बहुभिन्नरूपी विश्लेषण द्वारा, ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल एमआरपी 8- सकारात्मक क्षेत्र को प्रोटीनुरिया और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस के साथ महत्वपूर्ण रूप से सहसंबद्ध किया गया था। ग्लोमेरुलर एमआरपी 8- प्राथमिक विश्लेषण में ट्यूबलोइंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस के साथ सकारात्मक सेल गिनती और एमसीएनएस समूह को छोड़कर उप-विश्लेषण में प्रोटीनुरिया के साथ काफी सहसंबद्ध था। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री ने संकेत दिया कि MRP8 को कम से कम आंशिक रूप से, CD68 (प्लस) -एक्सप्रेसिंग मैक्रोफेज और एट्रोफिक नलिकाओं द्वारा व्यक्त किया गया था। ये निष्कर्ष इस संभावना को बढ़ाते हैं किगुर्दाग्लोमेरुली या ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में MRP8 संकेत मधुमेह अपवृक्कता के उपन्यास मार्कर के रूप में काम कर सकते हैं।

चित्रा 2. मधुमेह अपवृक्कता मामलों के धारावाहिक वर्गों में CD68 और MRP8 प्रोटीन अभिव्यक्ति का स्थानीयकरण। युग्मित वृक्क नमूनों (ए और सी, ओरबी और डी) में सीडी68 (ए, बी) और एमआरपी8 अभिव्यक्ति (सी, डी) की अभिव्यक्ति। तीर CD68 और MRP8 संकेतों के कोलोकलाइज़ेशन का संकेत देते हैं। doi: 10.1371/journal.pone.0088942.g002

प्रागैतिहासिक अध्ययन में, बहुभिन्नरूपी विश्लेषण से पता चला कि गुर्दे की बायोप्सी के एक साल बाद मूत्र प्रोटीन का स्तर स्वतंत्र रूप से ग्लोमेरुलर एमआरपी8-पॉजिटिव सेल काउंट, यूरिनरी प्रोटीन और बेसलाइन पर सिस्टोलिक ब्लड प्रेशर से जुड़ा था। ध्यान दें, ग्लोमेरुलर MRP8 अभिव्यक्ति ने एक साल बाद मूत्र प्रोटीन के साथ सबसे मजबूत सहसंबंध दिखाया (b=0.87), यहां तक ​​​​कि आधारभूत मूत्र प्रोटीन (b=0.78) से भी मजबूत, अविभाज्य विश्लेषण द्वारा। यह आंशिक रूप से इसलिए है क्योंकि ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 की अभिव्यक्ति प्रोटीनुरिया के 'सौम्य' रूपों में बड़े पैमाने पर नहीं होती है, जैसे कि एमसीएनएस रोगियों में मनाया जाता है, जिनके प्रोटीन्यूरिया का स्तर गुर्दे की बायोप्सी द्वारा निदान में बहुत अधिक होता है, लेकिन आमतौर पर इम्यूनोसप्रेसेरिव थेरेपी की शुरुआत के बाद एक वर्ष के भीतर हल हो जाता है। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 अभिव्यक्ति में रोग मार्कर के रूप में एक अद्वितीय भविष्य कहनेवाला प्रकृति हो सकती है, जिसे वैश्विक ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस का मूल्यांकन करने वाले बेसलाइन प्रोटीनुरिया या नियमित रोग विश्लेषण द्वारा प्रतिस्थापित नहीं किया जा सकता है। इसके अलावा, हम अनुमान लगाते हैं कि ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 अभिव्यक्ति एक साधारण मार्कर या बाईस्टैंडर नहीं है बल्कि ग्लोमेरुलर चोट में एक सक्रिय खिलाड़ी है जैसा कि नीचे चर्चा की गई है।

एकाधिक प्रतिगमन विश्लेषण में नामांकित व्याख्यात्मक मापदंडों के साथ गणना का निर्धारण गुणांक (R2) क्रमशः 0.52* और 0.74# था। वाई, साल; बीपी, रक्तचाप; जीसीआर, जी क्रिएटिनिन; टी-चोल, कुल कोलेस्ट्रॉल; एचडीएल-चोल, एचडीएल कोलेस्ट्रॉल; एलडीएल-चोल, एलडीएल कोलेस्ट्रॉल; जीएस, ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस; टीआई, ट्यूबलोइंटरस्टिशियल.डोई:10.1371/journal.pone.0088942.t003

तालिका 4. एमसीएनएस समूह के बहिष्करण के बाद, बेसलाइन नैदानिक ​​​​मापदंडों और एमआरपी 8 संकेतों के बीच संबंधों का उप-विश्लेषण।

तालिका 5. गुर्दे की बायोप्सी के 1 साल बाद मूत्र प्रोटीन के स्तर की भविष्यवाणी करने वाले कारकों की पहचान के लिए एकाधिक प्रतिगमन विश्लेषण

चित्रा 3. अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज पर MRP8 के प्रभाव। अस्थि मज्जा-व्युत्पन्न मैक्रोफेज (बीएमडीएम) को 4 घंटे के लिए पुनः संयोजक माउस एमआरपी 8 से प्रेरित किया गया था। त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है कि 95 प्रतिशत सीआई और सांख्यिकीय विश्लेषण लॉग-रूपांतरित मूल्यों के साथ किए गए थे। दोतरफा एनोवा ने जीनोटाइप, एमआरपी8 सांद्रता और सभी 3 जीनों की अभिव्यक्ति के लिए उनकी बातचीत के महत्वपूर्ण प्रभावों का खुलासा किया (पी,0।00सभी तुलनाओं के लिए 1)। एन=4। WT, जंगली-प्रकार; केओ, नॉकआउट; आईएल-1बी, इंटरल्यूकिन 1 बीटा; टीएनएफए, ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर-अल्फा। * पी, 0.01 विभिन्न सांद्रता के बीच, # पी, 0.01 जीनोटाइप्स के बीच।

अनुदैर्ध्य अध्ययन के एक अन्य प्रयास में, लॉजिस्टिक रिग्रेशन विश्लेषण एक वर्ष के भीतर गुर्दे की घटना की घटना के लिए किसी भी स्वतंत्र भविष्यवाणियों का पता लगाने में विफल रहा। हम अनुमान लगाते हैं कि यह आंशिक रूप से है क्योंकि ट्यूबलोइंटरस्टीशियल एमआरपी 8 एक्सप्रेशन और ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल फाइब्रोसिस यूनीवेरिएट विश्लेषण में गुर्दे की घटना के लिए दो शक्तिशाली भविष्यवक्ता थे, लेकिन बहुभिन्नरूपी विश्लेषण में उनके महत्व को एक दूसरे द्वारा रद्द कर दिया गया था। इन दो मापदंडों ने एक मजबूत सहसंबंध दिखाया (R=0.68, P, 0.001) (चित्र। S8), यह सुझाव देते हुए कि ये दो पैरामीटर गुर्दे की घटनाओं की भविष्यवाणी करने के बराबर हो सकते हैं। वास्तव में, अंतरालीय MRP8 अभिव्यक्ति ने मेसन ट्राइक्रोम धुंधला द्वारा मूल्यांकन किए गए अंतरालीय फाइब्रोसिस के समान पैटर्न दिखाया। अंतरालीय MRP8 की मात्रा काफी हद तक मैक्रोफेज के बजाय एट्रोफिक नलिकाओं में सकारात्मक संकेतों पर निर्भर करती है, जिनकी विशेषता एक पंचर वितरण में ग्लोमेरुलर MRP8 से भिन्न होती है। इसके अलावा, एक छोटा नमूना आकार, लघु अवलोकन अवधि, और कुछ विषयों जिन्होंने गुर्दे की घटनाओं को विकसित किया है, ने पता लगाने की शक्ति को कम कर दिया है। चूंकि ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं में एमआरपी 8 अभिव्यक्ति वृक्क फाइब्रोसिस [7] के एक माउस मॉडल में ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल सूजन की प्रगति में एक प्रेरक भूमिका निभाता है, डीएन में ट्यूबलोइन्टरस्टीशियल एमआरपी 8 की भूमिका को स्पष्ट करने के लिए और विश्लेषण की आवश्यकता होगी।

हमारे पिछले अध्ययन [6] के अनुसार, MRP8 mRNA को मुख्य रूप से मानव DN विषयों के ग्लोमेरुलर अंश में MGA के साथ नियंत्रित विषयों की तुलना में अपग्रेड किया गया था। दूसरी ओर, MRP8 प्रोटीन की अभिव्यक्ति न केवल ग्लोमेरुलस में बल्कि ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में भी देखी गई थी। इस संबंध में, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि डीएन के ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में एमआरपी 8 धुंधला होने के दो अलग-अलग पैटर्न थे। एक गंभीर रूप से एट्रोफिक नलिकाओं में तीव्र और फोकल धुंधला था। दूसरा समीपस्थ नलिकाओं के ब्रश बॉर्डर के साथ वितरित हल्का धुंधला था, जो ओआरजी और एमसीएनएस में भी पाया गया था। बाद के संकेत संभावित रूप से रक्त से प्राप्त MRP8 प्रोटीन का प्रतिनिधित्व करते हैं और समीपस्थ नलिकाओं द्वारा पुन: अवशोषित होते हैं, जो कि बढ़े हुए MRP8 mRNA अभिव्यक्ति के साथ नहीं होने चाहिए। MRP8 के अलावा अन्य प्रोटीनों के संबंध में, हमने और अन्य ने हाल ही में समीपस्थ नलिकाओं में प्रतिरक्षी प्रोटीन का पता लगाने की समान घटना की सूचना दी है, जो पुन: अवशोषण के कारण होती है, लेकिन वृक्क संश्लेषण द्वारा नहीं [25,26]। दूसरी ओर, चूंकि थोड़ा MRP8 धुंधला एंटीबॉडी अवशोषण परीक्षण में बना रहा, विशेष रूप से ग्लोमेरुलर एक्सयूडेटिव घावों और एट्रोफिक नलिकाओं के आसपास गंभीर रूप से जख्मी, फाइब्रोटिक घावों में, गैर-विशिष्ट संकेतों की उपस्थिति को पूरी तरह से नकारा नहीं जा सकता (चित्र। S3)।

ग्लोमेरुलर MRP8 संकेतों ने मुख्य रूप से DN विषयों (चित्र 1, चित्र। S4) में पंचर पैटर्न दिखाया। चूंकि CD68 और MRP8 दोनों का पता माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी द्वारा लगाया गया था, इन अणुओं के स्थानीयकरण का मूल्यांकन सीरियल सेक्शन द्वारा किया गया था, न कि डबल इम्यूनोस्टेनिंग द्वारा। MRP8 के धुंधला पैटर्न IgAnephritis [27], मेम्ब्रेनोप्रोलिफेरेटिव ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस [14], और ANCA से संबंधित ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस [20] सहित अन्य भड़काऊ गुर्दे संबंधी विकारों के साथ संगत थे, जिसमें मैक्रोफेज को MRP8 के प्रमुख स्रोत के रूप में सुझाया गया था, जैसा कि हमने रिपोर्ट किया था। एक कृंतक मॉडल [6]। इसके अलावा, न्यूट्रोफिल को संवहनी जटिलताओं को प्रभावित करने वाले MRP8 के एक अन्य स्रोत के रूप में माना जा सकता है [28]। वर्तमान में, हम आणविक तंत्र की जांच कर रहे हैं कि क्यों MRP8 मुख्य रूप से ग्लोमेरुली में घुसपैठ करने वाली मायलोइड-वंश कोशिकाओं में अपग्रेड किया जाता है। इन विट्रो अध्ययन से पता चला है कि MRP8 ने भड़काऊ साइटोकिन अभिव्यक्ति को प्रेरित किया और MRP8 की अभिव्यक्ति को TLR 4- पर निर्भर तरीके से मैक्रोफेज में ही प्रबल किया। इसके अतिरिक्त, एमआरपी 8- गांठदार काठिन्य घावों में सकारात्मक कोशिकाएं अनुपस्थित थीं, यह सुझाव देते हुए कि ग्लोमेरुलर एमआरपी 8 चल रहे ग्लोमेरुलर क्षति [20] को दर्शा सकता है। महत्वपूर्ण रूप से, एक बड़े पैमाने पर मानव अध्ययन ने बताया कि टाइप 1 मधुमेह रोगियों के रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं में एमआरपी 8 जीन अभिव्यक्ति नेफ्रोपैथी [29] सहित मधुमेह संबंधी जटिलताओं वाले विषयों में काफी बढ़ जाती है।

चूंकि रेनिन-एंजियोटेंसिन सिस्टम (आरएएस) का निषेध गुर्दे के परिणामों का एक महत्वपूर्ण निर्धारक है, इसलिए हमने आरएएसब्लॉकेड के प्रभावों की जांच की।गुर्दाMRP8 अभिव्यक्ति। हमें आरएएस नाकाबंदी (छवि। एस 9) के साथ या बिना इलाज किए गए डीएन रोगियों के बीच गुर्दे एमआरपी 8 एमआरएनए अभिव्यक्ति में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं मिला, शायद इसलिए कि आरएएस नाकाबंदी के साथ इलाज किए गए मामलों में आरएएस नाकाबंदी के बिना मामलों की तुलना में अधिक गंभीर उच्च रक्तचाप और प्रोटीनूरिया होता है।

मोटे मनुष्यों और चूहों में, बढ़ा हुआ प्लाज्मा MRP8/14complex एक डिग्री को प्रतिबिंबित कर सकता हैमोटापाऔर एडिपोसाइट्स के साथ-साथ ल्यूकोसाइट्स [8,9] से उत्पन्न होते हैं। हमारे ORG मामलों में समीपस्थ नलिकाओं में MRP8 का हल्का धुंधलापन था, जो MRP8 के बढ़े हुए प्लाज्मा स्तर का सुझाव देता है। इसके विपरीत, ट्यूबलोइंटरस्टिशियल एमआरपी 8 एक्सप्रेशन और बॉडी मास इंडेक्स (छवि। एस 6 जी) के बीच कोई महत्वपूर्ण संबंध नहीं था। इसलिए, स्थानीय MRP8 अभिव्यक्तिगुर्दागुर्दे की चोट के लिए मार्कर के रूप में बेहतर काम कर सकता हैमोटापा[8,9].

गुर्दे की शिथिलता में सुधार के लिए सिस्टैंच

हमारे अध्ययन की अनेकों सीमाएं हैं। अध्ययन किए गए प्रत्येक समूह की नमूना संख्या छोटी थी। गैर-समान विषयों को एमआरएनए और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण में नामांकित किया गया था। चूंकि हमने केवल उन रोगियों का विश्लेषण किया है जो गुर्दे की बायोप्सी से गुजरे हैं, यहां जांच किए गए रोगियों की संरचना सामान्य प्रकार के 2 मधुमेह रोगियों या सामान्य रूप से पुराने रोगियों को प्रतिबिंबित नहीं कर सकती है।गुर्दारोग विषय। यद्यपि हमारे डेटा (तालिका 3) में एमआरपी 8 संकेतों से जुड़े एक स्वतंत्र कारक के रूप में उम्र को बरकरार नहीं रखा गया था, यह ज्ञात है कि उम्र बढ़ने से पुरानी सूजन [30] जुड़ी हुई है। उम्र के प्रभाव को पूरी तरह से नकारा नहीं जा सकता। यद्यपि अधिकांश एमआरपी8 संकेत एंटीबॉडी अवशोषण परीक्षण में खो गए थे, कुछ सकारात्मक संकेत शेष थे, जो पहले एंटीबॉडी के गैर-विशिष्ट बंधन के कारण हो सकते हैं। जैसा कि ऊपर चर्चा की गई है, रीनल बायोप्सी द्वारा रीनल एमआरपी8एक्सप्रेशन की जांच हमें पैथोफिजियोलॉजी और क्रोनिक किडनी रोगों के पूर्वानुमान को समझने में मदद करती है, विशेष रूप से इससे जुड़ेमोटापाऔर मधुमेह, लेकिन आउट पेशेंट क्लीनिक में नियमित और बार-बार उपयोग के लिए एक नुकसान है

सारांश में, वर्तमान अध्ययन से पता चलता है कि MRP8 की अभिव्यक्तिगुर्दावर्तमान रोग की स्थिति को दर्शाता है और रोगियों में गुर्दे के परिणामों की भी भविष्यवाणी करता हैमोटापायामधुमेह प्रकार 2. बड़े पैमाने पर मोटापे या मधुमेह के रोगियों में मूत्र एमआरपी 8 के स्तर का अध्ययन करने वाली आगे की जांच की आवश्यकता हो सकती है

सहायक सूचना

चित्रा S1 प्रतिनिधि तस्वीरें (ए) आवधिक एसिड शिफ, (बी) आवधिक-एसिड मिथेनमाइन चांदी या (सी) मेसन ट्राइक्रोम के साथ दाग वाले एक डीएन रोगी के गुर्दे की बायोप्सी अनुभाग दिखा रहा है। इस रोगी में कुल ग्लोमेरुली और ट्यूबलोइंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस के सापेक्ष क्षेत्र के बीच ग्लोबल स्केलेरोसिस (तीर) के साथ ग्लोमेरुली की संख्या का अनुपात क्रमशः 33 प्रतिशत और 65 प्रतिशत था। (टीआईएफएफ)

DN रोगियों में MRP8 और CD68प्रोटीन के लिए चित्र S2 इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री। दाएँ स्तंभ में तस्वीरें 1 एंटीबॉडी के बिना नकारात्मक नियंत्रण प्रयोग दिखाती हैं। (टीआईएफ)

चित्रा S3 MRP8 धुंधला के लिए एंटीबॉडी अवशोषण परीक्षण। PBS: फॉस्फेट-बफर खारा, rhMRP8: पुनः संयोजक मानवMRP8। (TIF)

चित्रा S4 एमजीए, एमसीएनएस, ओआरजी, और डीएन समूहों में एमआरपी 8 अभिव्यक्ति की प्रतिनिधि तस्वीरें। (टीआईएफ)

चित्रा S5 ग्लोमेरुलर एमआरपी 8- पॉजिटिव सेल काउंट और क्लिनिकल पैरामीटर्स के बीच सहसंबंध। MRP8 संकेतों के लॉग-रूपांतरित मूल्यों का उपयोग किया गया था। एमसीएनएस समूह (ई, एफ) को छोड़कर सभी 4 समूहों (ए-डी, जी) या 3 समूहों का उपयोग करके सहसंबंधों का विश्लेषण किया गया था। खुले घेरे: मामूली ग्लोमेरुलर असामान्यता (MGA), बंद घेरे: न्यूनतम परिवर्तन नेफ्रोटिक सिंड्रोम (MCNS), खुले त्रिकोण:मोटापा-संबंधित ग्लोमेरुलोपैथी (ओआरजी), बंद त्रिकोण: मधुमेह अपवृक्कता (डीएन)। (टीआईएफ)

चित्रा S6 ट्यूबलोइंटरस्टिशियल एमआरपी 8-सकारात्मक क्षेत्र और नैदानिक ​​​​मापदंडों के बीच सहसंबंध। MRP8 संकेतों के लॉग-रूपांतरित मूल्यों का उपयोग किया गया था। एमसीएनएस समूह (ई, एफ) को छोड़कर सभी 4 समूहों (ए-डी, जी) या 3 समूहों का उपयोग करके इन सहसंबंधों का विश्लेषण किया गया था। (टीआईएफ)

चित्र S7 ग्लोमेरुलर और ट्यूबलोइंटरस्टीशियल MRP8 अभिव्यक्ति के बीच सहसंबंध। MRP8 संकेतों के लॉग-रूपांतरित मूल्यों का उपयोग किया गया था। (TIF)

चित्र S8 ट्यूबलोइंटरस्टीशियल एमआरपी8-पॉजिटिव एरिया और ट्यूबलोइंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस के बीच सहसंबंध। MRP8 संकेतों के लॉग-रूपांतरित मूल्यों का उपयोग किया गया था। (TIF)

चित्रा S9 रेनिन-एंजियोटेंसिन नाकाबंदी के साथ या बिना डीएन रोगियों में एमआरपी 8 की रेनल एमआरएनए अभिव्यक्ति। एनएस: महत्वपूर्ण नहीं। एन=15 (हां), 6 (नहीं)। 22 डीएन मामलों में, एक रोगी में दवा के बारे में जानकारी उपलब्ध नहीं थी। (टीआईएफ)

फ़ाइल S1 सहायक तालिकाएँ।

तालिका S1, 2000 और 2011 के बीच चिकित्सा और नैदानिक ​​विज्ञान विभाग, क्योटो विश्वविद्यालय अस्पताल में गुर्दे की बायोप्सी से गुजरने वाले सभी मामलों का पैथोलॉजिकल निदान। तालिका S2, ताकमान वास्तविक समय आरटी-पीसीआर के लिए प्राइमर और जांच अनुक्रम। तालिका S3, एक वर्ष के भीतर गुर्दे की घटना की घटना के लिए लॉजिस्टिक प्रतिगमन विश्लेषण। (डीओसी) आभार हम सांख्यिकीय सलाह के लिए एस. तनाका, तकनीकी सहायता के लिए वाई. ओगावा, एन.इगाराशी, और सी. किमुरा, और सचिव सहायता के लिए ए. यामामोटो और सोगिनो को धन्यवाद देते हैं। लेखक के योगदान ने प्रयोगों की कल्पना की और डिजाइन किया: टीके केएम एमके एचवाई एमआई एएन केएनएमएम। प्रयोग किए: TK HI AI KK TM YK MI AN। डेटा का विश्लेषण किया: टीके केएम एमके एचवाई एएस एसवाई केयू केएन एमएम। योगदान किए गए अभिकर्मकों / सामग्री / विश्लेषण उपकरण: टीके केएम। पेपर लिखा: टीके केएमएमएम।

सिस्टैंच के प्रभाव: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

संदर्भ

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प्रशस्ति पत्र: कुवाबारा टी, मोरी के, कसाहारा एम, योकोई एच, इमामकी एच, एट अल। (2014) भविष्यवाणी का महत्वगुर्दामाइलॉयड-संबंधित प्रोटीन 8 के रोगियों में अभिव्यक्तिमोटापा- या टाइप 2 मधुमेह से जुड़े गुर्दा रोग। प्लस वन 9(2): e88942. डोई: 10.1371/journal.pone.0088942

संपादक: उत्पल सेन, लुइसविले विश्वविद्यालय, संयुक्त राज्य अमेरिका

11 सितंबर, 2013 को प्राप्त हुआ; 14 जनवरी 2014 को स्वीकार किया गया; 18 फरवरी 2014 को प्रकाशित

कॉपीराइट: 2014 कुवाबारा एट अल। यह क्रिएटिव कॉमन्स एट्रिब्यूशन लाइसेंस की शर्तों के तहत वितरित एक ओपन-एक्सेस लेख है, जो किसी भी माध्यम में अप्रतिबंधित उपयोग, वितरण और प्रजनन की अनुमति देता है, बशर्ते मूल लेखक और स्रोत को श्रेय दिया जाए।

अनुदान: इस काम को जापान के स्वास्थ्य, श्रम और कल्याण मंत्रालय (केएम) से मधुमेह संबंधी नेफ्रोपैथी और नेफ्रोस्क्लेरोसिस अनुसंधान के लिए अनुदान सहायता द्वारा समर्थित किया गया था, जापानी शिक्षा मंत्रालय, संस्कृति, खेल, विज्ञान से अनुसंधान अनुदान , और प्रौद्योगिकी (टीके, केएम, और एमएम के लिए), जापान फाउंडेशन फॉर एप्लाइड एंजाइमोलॉजी (टीके के लिए) और धूम्रपान अनुसंधान फाउंडेशन (एमएम से) से। अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह, और विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि तैयार करने में फंडर्स की कोई भूमिका नहीं थी।

प्रतिस्पर्धी रुचियां: लेखकों ने घोषणा की है कि कोई प्रतिस्पर्धी हित मौजूद नहीं है।

* ई-मेल: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp