लिम्फोसाइट प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला से पॉलीसेकेराइड के प्रभाव और तंत्र को बढ़ावा देने की प्रारंभिक खोज

तरीकों

चूहों में स्प्लेनिक लिम्फोसाइटों के प्रसार का पता लगाने के लिए एमटीटी परख का उपयोग किया गया था। साइक्लोफॉस्फ़ामाइड (Cy) का उपयोग प्रतिरक्षाविहीन जानवरों के पशु मॉडल को दोहराने के लिए किया गया था, और सामान्य और प्रतिरक्षाविहीन जानवरों के प्लीहा और थाइमस सूचकांकों को मापा गया था। इंटरल्यूकिन-2 (IL-2) की गतिविधि को थाइमोसाइट प्रसार परख द्वारा मापा गया था। परिणाम: सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड ने माइटोजेन (कॉनए और एलपीएस) सक्रिय लिम्फोसाइटों और गैर-सक्रिय सामान्य कोशिकाओं के प्रसार को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ावा दिया, और लिम्फोसाइटों में IL-2 के स्राव को बढ़ावा दिया। इंट्रापेरिटोनियल प्रशासन से पता चला है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड ने सामान्य और प्रतिरक्षाविहीन चूहों के प्लीहा सूचकांक में काफी वृद्धि की है, और साइ के कारण थाइमस सूचकांक में कमी पर भी इसका महत्वपूर्ण प्रतिकूल प्रभाव पड़ा है। निष्कर्ष: सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड चूहों में स्प्लेनिक लिम्फोसाइटों के प्रसार को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ावा दे सकता है, जो इसके IL-2 स्राव को बढ़ावा देने से संबंधित हो सकता है।

रेगिस्तान में रहने वाला सिस्टान्चे

[मुख्य शब्द]सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड; प्लीहा सूचकांक; थाइमस सूचकांक; लिम्फोसाइट प्रसार; इंटरल्यूकिन-2

पादप पॉलीसेकेराइड ने अपने व्यापक इम्यूनोमॉड्यूलेटरी प्रभाव और अपेक्षाकृत कम विषाक्तता [1] के कारण व्यापक ध्यान आकर्षित किया है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला मा, जिसे "डेजर्ट जिनसेंग" के नाम से जाना जाता है, ओरोबेसी के एक पौधे सिस्टैंच डेजर्टिकोला का पपड़ीदार, सूखा, मांसल तना है, जिसका व्यापक औषधीय प्रभाव होता है। इसके पानी का काढ़ा मैक्रोफेज के फागोसाइटिक प्रतिशत और फागोसाइटिक इंडेक्स को काफी बढ़ा सकता है। आगे के अध्ययनों से पता चला है कि इसका भौतिक आधार सिस्टैंच डेजर्टिकोला [3] का कुल पॉलीसेकेराइड है। ज़ेंग क्यूनली एट अल। [4] पाया गया है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का एक घटक इन विट्रो में माउस थाइमिक लिम्फोसाइटों पर महत्वपूर्ण प्रसार प्रभाव डालता है। लिम्फोसाइट प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव विवो और इन विट्रो में देखा गया था।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला का आणविक सूत्र

1सामग्री एवं विधियाँ

1.1 औषधियाँ और अभिकर्मक

सिस्टैंच डेजर्टिकोला से पॉलीसेकेराइड मेडिकल कॉलेज के मेडिसिन एंड प्लांटिंग संस्थान के प्लांट और केमिकल विभाग द्वारा प्रदान किया जाता है। इसे सिस्टैंच अर्क पाउडर से निकाला जाता है, और इसमें पॉलीसेकेराइड सामग्री 87% है।

सिस्टैंच अर्क पाउडर

विवो प्रयोगों में उपयोग करने से पहले, आवश्यक एकाग्रता तक शारीरिक खारा के साथ घोलें और पतला करें, और नसबंदी के लिए उबालें। इन विट्रो प्रयोगों के उपयोग से पहले, RPMI-1640 संस्कृति माध्यम को भंग और पतला किया गया था, और उच्च दबाव नसबंदी की गई थी। लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS), कॉन्केनवेलिन (ConA), डेक्सामेथासोन (DEX), और MTT सभी सिग्मा कॉर्पोरेशन के उत्पाद हैं। साइक्लोफॉस्फ़ामाइड, शांक्सी ताइशेंग फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड का एक चीन-अमेरिकी संयुक्त उद्यम, भ्रूण गोजातीय सीरम, आरपीएमआई1640 संस्कृति माध्यम, और ट्रिप्सिन सभी गिब्को उत्पाद हैं। अन्य अभिकर्मक घरेलू विश्लेषणात्मक अभिकर्मक हैं।

1.2 पशु

BALB c युवा चूहों (SPF स्तर) को विटन लिहुआ एक्सपेरिमेंटल एनिमल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड द्वारा प्रदान किया जाता है। [SCXK (बीजिंग) 2002-2003]। एसपीएफ़-ग्रेड जानवरों को एक कमरे में पाला जाता है और उन्हें स्वतंत्र रूप से खिलाया-पीया जाता है।

1.3 उपकरण

मल्टीकन एसेंट एंजाइम मार्कर, थर्मो इलेक्ट्रॉन कंपनी, यूएसए का एक उत्पाद। लीसी PHS-3B प्रिसिजन पीएच मीटर, शंघाई प्रिसिजन साइंटिफिक इंस्ट्रूमेंट कंपनी लिमिटेड, NAPCOo 5410 कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर, NAPCO, यूएसए। BCN-1360 अल्ट्रा क्लीन वर्कबेंच, बीजिंग डोंगलियानहार इंस्ट्रूमेंट मैन्युफैक्चरिंग कंपनी लिमिटेड। XDS-1B इनवर्टेड माइक्रोस्कोप, चोंगकिंग ऑप्टोइलेक्ट्रॉनिक इंस्ट्रूमेंट कंपनी लिमिटेड।

1.4 विधि

1.4.1 लिम्फोसाइट प्रसार पर प्रभाव [5]:

BALB/c चूहों से प्लीहा लिम्फोसाइटों की नियमित तैयारी, कोशिका सांद्रता को 1 × 107 एमएल तक समायोजित करने के लिए RPMI-1640 का उपयोग करके, 96-वेल कल्चर प्लेट पर टीका लगाया जाता है, प्रत्येक कुएं μL-50 में 100 सेलसस्पेंशन जोड़े जाते हैं। इसे सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की विभिन्न सांद्रता के साथ सह-संवर्धित किया गया था (गैर-सक्रिय लिम्फोसाइटों के प्रसार के लिए सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की अंतिम सांद्रता क्रम में 6.25, 12.5, 25, 50 और 100 मिलीग्राम/लीटर थी; कॉनए-सक्रिय टी लिम्फोसाइटों के प्रसार के लिए सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की अंतिम सांद्रता थी) 3.9, 7.8, 15.6, 31.2, और 62.5 मिलीग्राम/लीटर क्रम में; और एलपीएस सक्रिय बी लिम्फोसाइटों के प्रसार के लिए सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की अंतिम सांद्रता 1.56, 3.13, 6.25, 12.5, और 25 मिलीग्राम/लीटर क्रम में थी) और कॉनए या एलपीएस, RPMI-1640 माध्यम का उपयोग नियंत्रण के रूप में किया गया था। प्रत्येक छेद का कुल आयतन 200 μL है। माइटोजेन कॉनए और एलपीएस जोड़ते समय (नियंत्रण {{2%) है जिसमें कॉनए या एलपीएस की संगत सांद्रता होती है), दोनों की अंतिम सांद्रता क्रमशः 2.5 मिलीग्राम/एल और 10 मिलीग्राम/एल होती है। विभिन्न उपचारों के लिए तीन समानांतर छेद बनाए गए थे। कल्चर प्लेट को 37 डिग्री, 5% CO2 संतृप्त आर्द्रता इनक्यूबेटर में 68 घंटे के लिए रखें, एमटीटी डालें, और 4 घंटे तक कल्चर करना जारी रखें। प्रसार का पता लगाने के लिए एमटीटी विधि का उपयोग करके एंजाइम मार्कर के साथ ए540 एनएम मान को मापें। प्रत्येक समूह की तुलना करते समय, निम्नलिखित सूत्र के अनुसार A540nm मान को लिम्फोसाइट प्रसार दर में परिवर्तित करें:लिम्फोसाइट प्रसार दर=एए नमूना ए नियंत्रण × 100%।

सिस्तांचे के प्रभाव-प्रतिरक्षा में सुधार

1.4.2 सामान्य चूहों में प्रतिरक्षा अंगों के वजन पर प्रभाव [6,7]:

युवा BALB c चूहों (पुरुष, 4-सप्ताह का, शरीर का वजन 10-15 ग्राम) को यादृच्छिक रूप से एक खाली नियंत्रण (खारा) समूह और विभिन्न खुराक समूहों (125 मिलीग्राम (किलो · बीडब्ल्यू) और 250 मिलीग्राम (किलो · बीडब्ल्यू)) में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में 11 चूहों के साथ। दवा को लगातार 7 दिनों तक दिन में एक बार इंट्रापेरिटोनियल तरीके से दिया गया। गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के बाद चूहों को मार दिया गया। प्लीहा और थाइमस लिया गया, वसा और प्रावरणी ऊतक हटा दिए गए, और सतह के तरल को फिल्टर पेपर से सुखाया गया। वजन करने के बाद, प्लीहा सूचकांक =100 × प्लीहा वजन (मिलीग्राम) शरीर का वजन (मिलीग्राम); hthymusindex=100 × थाइमस वजन (मिलीग्राम) शरीर का वजन (मिलीग्राम)। प्रत्येक 100 मिलीग्राम शरीर के वजन के लिए क्रमशः प्लीहा सूचकांक और थाइमस सूचकांक की गणना करें।

1.4.3 प्रतिरक्षाविहीन चूहों में प्रतिरक्षा अंग के वजन पर प्रभाव [7,8]:

युवा BALB c चूहों (पुरुष, 6 सप्ताह का, शरीर का वजन 15-20 ग्राम) को शरीर के वजन के अनुसार यादृच्छिक रूप से 12 समूहों में विभाजित किया गया था। सामान्य नियंत्रण समूह (शारीरिक सेलाइन की समतुल्य मात्रा का इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन) को छोड़कर, अन्य समूहों को प्रतिदिन इंट्रापेरिटोनियल रूप से Cy 50 मिलीग्राम (किलो · बीडब्ल्यू) इंजेक्ट किया गया था, और परीक्षण दवा समाधान को इंट्रापेरिटोनियल रूप से प्रशासित किया गया था [125 और 250एमजी (किलो · बीडब्ल्यू)], सामान्य नियंत्रण समूह और मॉडल समूह को दिन में एक बार लगातार 13 दिनों तक समान मात्रा में फिजियोलॉजिकल सेलाइन दिया गया था। अंतिम प्रशासन के 9 घंटे बाद प्रयोग के दौरान पशु के वजन में परिवर्तन देखा गया, प्लीहा और थाइमस सूचकांकों को 1.4.2 में उसी विधि का उपयोग करके मापा और गणना की गई।

1.4.4 IL-2 गतिविधि पर प्रभाव:

① IL-2 का प्रेरण [9]: 96-वेल सेल प्लेट μL में प्रत्येक कुएं में 50 जोड़ें, सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की विभिन्न सांद्रता (अंतिम सांद्रता क्रम में: 3.91, 7.82, 15.63, 31.25, 62.5, 125 मिलीग्राम/लीटर, नियंत्रण कुएं μL संस्कृति माध्यम में 50 मिलीग्राम/लीटर जोड़ें) और 50 μL ConA (अंतिम सांद्रता 5 mg/L), प्रति कुएं में 1 और जोड़ें × 106 प्लीहा कोशिकाएँ। 37 डिग्री, 5% सीओ2 संतृप्त आर्द्रता इनक्यूबेटर में 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें, 2500 आर मिनट पर 20 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, और सेल सुपरनैटेंट लें और इसे स्टैंडबाय के लिए - 20 डिग्री पर स्टोर करें। ② IL-2 गतिविधि का पता लगाना [9,10]: मूल विधि साहित्य पर आधारित है [9], और साहित्य के अनुसार उचित समायोजन किए जाते हैं [10]। BALB c माउस थाइमोसाइट्स सस्पेंशन की पारंपरिक तैयारी, 96 वेल सेल कल्चर प्लेट, 1 इनोक्यूलेशन प्रति वेल × 106 थायमोसाइट्स, जबकि प्रति वेल 50 सेल μ L ConA (अंतिम सांद्रण 2.5 mg/L) जोड़ते हैं, और फिर तैयार IL-2 सतह पर तैरनेवाला 50 μ L जोड़ते हैं (रिक्त नियंत्रण छेद μ L कल्चर समाधान में 50 जोड़ें), 54 घंटे के लिए एक साथ इनक्यूबेट करें, MTT जोड़ें, 4 घंटे तक इनक्यूबेटिंग जारी रखें, 1000 आर मिनट पर 10 से 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, सतह पर तैरनेवाला हटा दें, और डीएमएसओ 100 प्रति अच्छी तरह से μ एल जोड़ें, 8 मिनट के लिए माइक्रो ऑसिलेटर के साथ हिलाएं, और एक एंजाइम मार्कर के साथ ए 540 एनएम मान मापें।

1.5 सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को माध्य और मानक विचलन (x ± s) के रूप में व्यक्त किया गया था। डेटा को एकत्रित करने के लिए Microsoft Excel सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था, और एक टी-परीक्षण आयोजित किया गया था। पी<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. परिणाम

2.1 लिम्फोसाइट प्रसार पर प्रभाव

जैसा कि तालिका 1 से देखा जा सकता है, 25 मिलीग्राम/एल से ऊपर की सांद्रता पर इन विट्रो में संवर्धित माउस प्लीहा लिम्फोसाइटों के संस्कृति माध्यम में सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड जोड़ने से लिम्फोसाइट प्रसार को महत्वपूर्ण रूप से उत्तेजित किया जा सकता है, जो दर्शाता है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड में स्वयं एक माइटोटिक प्रभाव होता है। एक ही समय पर,तालिका 2 और तालिका 3 से देखा जा सकता है कि सीडीपीएस का कॉनए-प्रेरित टी लिम्फोसाइट्स या एलपीएस-प्रेरित बी लिम्फोसाइटों के प्रसार पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है।.

Tab.1 गैर-सक्रिय लिम्फोसाइटों के प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव (x ±s, n =3)

नहीं: नियंत्रण समूह की तुलना में, ＊P<0.05.

Tab.2 ConA (x ±s, n =3) से प्रेरित टी लिम्फोसाइटों के प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव

 

नोट: ConA समूह के साथ तुलना में, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

टैब.3 एलपीएस (x ±s, n =3) द्वारा प्रेरित बी लिम्फोसाइटों के प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव

नोट: एलपीएस समूह की तुलना में, ＊पी<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 सामान्य चूहों में प्रतिरक्षा अंगों के वजन पर प्रभाव

जैसा कि तालिका 4 से देखा जा सकता है,सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड सामान्य BALB/cc युवा चूहों के प्लीहा सूचकांक को काफी बढ़ा सकता है लेकिन थाइमस ग्रंथि को प्रभावित नहीं करता है।

2.3 प्रतिरक्षाविहीन चूहों में प्रतिरक्षा अंग के वजन पर प्रभाव

तालिका 5 से,यह देखा जा सकता है कि साइ इम्युनोसप्रेसिव समूह में चूहों के प्लीहा और थाइमस अंग सूचकांक नियंत्रण समूह के चूहों की तुलना में कम हैं, और सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड (125, 250 मिलीग्राम/किग्रा) प्लीहा और थाइमस सूचकांक में काफी सुधार कर सकता है।

2.4 IL-2 गतिविधि पर प्रभाव

जैसा कि तालिका 6 से देखा जा सकता है,जब सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की खुराक 7.82 मिलीग्राम/लीटर तक पहुंच जाती है, तो यह माउस प्लीहा कोशिकाओं से IL-2 की रिहाई को काफी बढ़ा सकती है।

Tab.4 सामान्य चूहों में प्रतिरक्षा अंगों के वजन पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव (x ±s, n =11)

नोट: नियंत्रण समूह की तुलना में, ＊＊P<0.01.

टैब.5 इम्यूनोडिप्रेस्ड चूहों में प्रतिरक्षा अंगों के वजन पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव (x ±s, n =12)

नोट: नियंत्रण समूह की तुलना में, ## पी <0.01; मॉडल समूह के साथ तुलना में, ＊＊P<0.01.

Tab.6 चूहों में स्प्लेनिक लिम्फोसाइटों द्वारा IL-2 उत्पादन पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का प्रभाव (x ±s, n =3)

नोट: नियंत्रण समूह की तुलना में, ＊＊P<0.01.

3. चर्चा

चूहों में कॉनए और एलपीएस-प्रेरित स्प्लेनिक लिम्फोसाइट प्रसार टी और बी लिम्फोसाइटों के कार्य का पता लगाने के लिए एक इन विट्रो प्रयोग है और यह विशिष्ट प्रतिरक्षा क्षमता का एक महत्वपूर्ण संकेतक है। अध्ययनों से पता चला है कि जब सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की अंतिम सांद्रता 25 मिलीग्राम/लीटर से ऊपर होती है, तो यह लिम्फोसाइट प्रसार को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ावा दे सकता है, जो दर्शाता है कि इसका एक निश्चित माइटोटिक प्रभाव है। माइटोजेन (कॉनए या एलपीएस) की उपस्थिति में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड की एक छोटी खुराक शरीर में महत्वपूर्ण प्रजनन गतिविधि प्रदर्शित करने में सुधार कर सकती है। हम जानते हैं कि कॉनए और एलपीएस मुख्य रूप से क्रमशः टी लिम्फोसाइट्स या बी लिम्फोसाइटों के प्रसार को प्रेरित करते हैं। अध्ययनों से पता चला हैसिस्टैंच पाउडर स्वास्थ्य लाभ: सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड टी लिम्फोसाइट प्रसार और बी लिम्फोसाइट प्रसार दोनों को बढ़ावा दे सकता है, लेकिन बी लिम्फोसाइटों पर इसका प्रसार प्रभाव टी लिम्फोसाइटों की तुलना में काफी मजबूत है।

सिस्टैंच पाउडर स्वास्थ्य लाभ-सुधारई प्रतिरक्षा

सिस्टैंच इम्प्रूव इम्युनिटी उत्पादों को देखने के लिए यहां क्लिक करें

【अधिक के लिए पूछें】 ईमेल: xue122522@foxmail.com / व्हाट्सएप 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

थाइमस और प्लीहा जानवरों में मुख्य प्रतिरक्षा अंग हैं। प्लीहा में प्रतिरक्षा कोशिकाएं मुख्य रूप से परिपक्व बी लिम्फोसाइट्स होती हैं, जबकि थाइमस मुख्य रूप से अपरिपक्व टी लिम्फोसाइट्स होती हैं। थाइमस और प्लीहा सूचकांक प्रतिरक्षा अंगों के विकास और प्रतिरक्षा कोशिकाओं की कार्यात्मक स्थिति को दर्शा सकते हैं। सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन सामान्य और इम्यूनोसप्रेस्ड चूहों के प्लीहा सूचकांक में काफी वृद्धि कर सकता है और चूहों में साइ द्वारा प्रेरित थाइमिक शोष पर एक महत्वपूर्ण प्रतिकूल प्रभाव पड़ता है।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड का सामान्य जानवरों में थाइमिक इंडेक्स पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ता है, जो इन विट्रो प्रयोगों के परिणामों के अनुरूप है जिसमें सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड टी लिम्फोसाइटों के बजाय बी लिम्फोसाइटों के प्रसार को बढ़ावा देता है।

Cमेरे पास इस्तांच पूरक-सुधाररोग प्रतिरोधक क्षमता

IL-2 कोशिका चक्र के G1 चरण से S चरण तक टी लिम्फोसाइटों द्वारा निर्मित एक साइटोकिन है। यह एक प्रमुख टी कोशिका वृद्धि कारक है जो ऑटोक्राइन वृद्धि कारक के रूप में कार्य करता है। इसके अलावा, IL-2 बी सेल प्रसार और एंटीबॉडी संश्लेषण को बढ़ावा दे सकता है [11,12]। सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड लिम्फोसाइटों से IL-2 की रिहाई को बढ़ावा देता है, जो स्पष्ट रूप से स्प्लेनिक लिम्फोसाइटों के प्रसार को बढ़ावा देने वाले सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड से संबंधित है।

चिकित्सा अनुसंधान से पता चलता है कि सिस्टैंच में पॉलीसेकेराइड, इचिनाकोसाइड्स और एक्टियोसाइड होते हैं, जो लिम्फोसाइटों को सक्रिय कर सकते हैं और शरीर में सुधार कर सकते हैं; सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के कार्यात्मक घटक 60 सह गामा किरण क्षति के बाद कोशिका पुनर्प्राप्ति पर महत्वपूर्ण प्रभाव डालते हैं, और विकिरण क्षति के खिलाफ प्रतिरक्षा कार्य में भी सुधार कर सकते हैं। सिस्टैंच डेजर्टिकोला की खुराक प्रतिदिन लेने से प्रतिरक्षा में सुधार के प्रभाव को प्राप्त किया जा सकता है।