लंबे समय तक पूर्व-विवो नॉर्मोथर्मिक किडनी छिड़काव: परफ्यूसेट संरचना का प्रभाव

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सार

दाता का नॉर्मोथर्मिक मशीन परफ्यूज़न (एनएमपी)गुर्दे बेहतर भ्रष्टाचार संरक्षण और उद्देश्य पूर्व-प्रत्यारोपण पूर्व-विवो अंग मूल्यांकन का अवसर प्रदान करता है। वर्तमान में, रीनल एनएमपी के लिए ढेर सारे परफ्यूज़न समाधान मौजूद हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य चार अलग-अलग छिड़काव समाधानों का साथ-साथ मूल्यांकन करना और माप पर विभिन्न परफ्यूसेट रचनाओं के प्रभाव का निर्धारण करना है।गुर्देछिड़काव पैरामीटर। सुअर कागुर्देऔर खून एक बूचड़खाने से प्राप्त किया गया था।गुर्दे4 अलग-अलग छिड़काव समाधानों (n=5 प्रति समूह) के साथ, 7 घंटे के लिए 37˚C पर NMP से गुजरना पड़ा। समूह 1 में लाल रक्त कोशिकाओं (आरबीसी) और विलियम्स मीडियम ई पर आधारित एक छिड़काव समाधान शामिल था। समूह 2 में आरबीसी, एल्ब्यूमिन और एक संतुलित इलेक्ट्रोलाइट संरचना शामिल थी। समूह 3 में आरबीसी और एक ब्रिटिश क्लिनिकल एनएमपी समाधान पर आधारित एक माध्यम था। समूह 4 में आरबीसी और 24-घंटे के छिड़काव प्रयोगों में प्रयुक्त एक माध्यम शामिल था। समाधान 1 और 2 के लिए NMP प्रवाह पैटर्न समान थे, समाधान 3 और 4 ने कम लेकिन अधिक स्थिर प्रवाह दर दिखाई। अन्य समूहों की तुलना में समाधान 1 और 4 में थायोबार्बिट्यूरिक एसिड प्रतिक्रियाशील पदार्थ काफी अधिक थे। इंजरी मार्कर एन-एसिटाइल- -डी ग्लूकोसामिनिडेज़ के स्तर समाधान 3 और 4 की तुलना में समाधान 2 में काफी कम थे। यह अध्ययन दर्शाता है कि एनएमपी के दौरान परफ्यूसेट संरचना मापा छिड़काव और चोट मापदंडों को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करती है और इस प्रकार व्याख्या को प्रभावित करती है। संभावित व्यवहार्यता मार्करों की। एनएमपी के दौरान सबसे इष्टतम स्थितियों को निर्धारित करने और अंततः सार्वभौमिक अंग मूल्यांकन मानदंड विकसित करने के लिए प्रमुख परफ्यूसेट घटकों के व्यक्तिगत प्रभावों की जांच के लिए और शोध की आवश्यकता है।

कीवर्ड:गुर्दे समारोह; गुर्दा; गुर्दे की चोट; गुर्दे सुगंधित; वृक्क नलिकाकार

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की कार्यक्षमता में सुधार होगा

परिचय

दुनिया भर में, मानक दातागुर्दापरिरक्षण विधि स्थिर कोल्ड स्टोरेज (एससीएस) है। हालांकि, नीदरलैंड्स में हाइपोथर्मिक मशीन परफ्यूज़न (HMP) का उपयोग चिकित्सकीय रूप से सभी मृत दाता को संरक्षित करने के लिए किया जाता हैगुर्दे।HMP ने विलंबित ग्राफ्ट फ़ंक्शन में कमी और एक बेहतर 1- और 3-वर्ष . दिखायागुर्देSCS परिरक्षण [1,2] की तुलना में ग्राफ्ट सर्वाइवल। दाता की आपूर्ति और मांग के बीच पर्याप्त अंतर को कम करने के लिएगुर्दे,उप-इष्टतम मृतक-दातागुर्देअधिकाधिक प्रयोग हो रहे हैं। इष्टतम गुणवत्ता से कम दाता के इन के बढ़ते उपयोग के कारणगुर्दे,मजबूत और उद्देश्यपूर्ण पूर्व-प्रत्यारोपण मूल्यांकन के साथ-साथ संरक्षण के लिए और भी अनुकूलित रणनीतियों को स्थापित करना अत्यंत महत्वपूर्ण है। इन मृतक-दाता के लिए नॉर्मोथर्मिक मशीन परफ्यूज़न (एनएमपी) का उपयोगगुर्देतेजी से विचार किया जा रहा है। पूर्व-नैदानिक ​​​​अध्ययनों से पता चला है कि एनएमपी अकेले एससीएस [3] की तुलना में बेहतर प्रत्यारोपण परिणाम दे सकता है। हृदय की मृत्यु और विस्तारित मानदंड दाता के बाद दान के रूप मेंगुर्देमानक मानदंड दाता प्रक्रियाओं से प्राप्त अंगों की तुलना में हाइपोथर्मिक भंडारण के प्रति कम सहिष्णु हैं, सीमांत-गुणवत्ता वाले दाता अंगों को एनएमपी संरक्षण [4,5] से लाभ हो सकता है। वर्तमान में, केवल एक नैदानिकगुर्देएनएमपी परीक्षण यूके में आयोजित किया जा रहा है, जिसमें अपेक्षाकृत कम प्री-ट्रांसप्लांट छिड़काव अवधि 1 घंटे [6] है। पर्याप्त अंग मूल्यांकन और पुनर्जीवन के लिए, हालांकि, लंबे समय तक एनएमपी समय बोधगम्य रूप से आवश्यक है [7]। यह विधि प्रत्यारोपण से पहले अंग निदान, बेहतर संरक्षण, और प्रत्यारोपण से पहले पूर्व-विवो हस्तक्षेप के लिए अवसर प्रदान करती है ताकि पोस्ट-प्रत्यारोपण में सुधार किया जा सके।गुर्दे समारोह. आजकल, कई प्रत्यारोपण केंद्रों ने इस आशाजनक नॉर्मोथर्मिक पूर्व-विवो छिड़काव रणनीति में निवेश करना शुरू कर दिया है। इन केंद्रों में, एनएमपी परफ्यूज़न समाधानों की एक विस्तृत विविधता मौजूद है। संरचना में बड़ी विविधता समान और मजबूत एनएमपी मूल्यांकन मानदंड को परिभाषित करने के अंतिम लक्ष्य को बाधित कर सकती है। यह विविधता आंशिक रूप से वर्तमान में केवल सीमित समझ से प्रेरित है कि एनएमपी समाधान का सटीक सूत्रीकरण क्या होना चाहिए। सबसे अधिक संभावना है, एक नॉर्मोथर्मिक छिड़काव समाधान में एक ऑक्सीजन वाहक, एक कोलाइड और एक संतुलित इलेक्ट्रोलाइट संरचना होती है [8]। रचना एनएमपी की अवधि पर भी निर्भर करेगी, क्योंकि लंबे समय तक छिड़काव के लिए पूरे छिड़काव के दौरान एक स्थिर निकट-शारीरिक वातावरण बनाए रखने के लिए अनुकूलित परफ्यूसेट रचनाओं की आवश्यकता होगी। इस अध्ययन ने चार अलग-अलग नॉर्मोथर्मिक छिड़काव समाधानों का मूल्यांकन किया, तीन आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले मौजूदा समाधान जिनमें कोई बदलाव नहीं किया गया था और एक नया डिज़ाइन किया गया समाधान था। हमने लंबे समय तक (7 घंटे) एनएमपी एक सुअर में आयोजित कियागुर्दादान मॉडल। हमारा उद्देश्य यह विश्लेषण करना था कि संपूर्ण प्रभाव इलेक्ट्रोलाइट संतुलन के रूप में विभिन्न परफ्यूसेट रचनाएं किस हद तक हैं,गुर्दे समारोह, और चोट के निशान एनएमपी के दौरान मापा जाता है।

सामग्री और तरीके

गुर्दा और रक्त पुनर्प्राप्तिव्यवहार्य सुअरगुर्देघरेलू लैंड्रेस सूअरों से (बोना; टाइप टोपिग्स 20) और रक्त एक स्थानीय बूचड़खाने (क्रून वेलेस, ग्रोनिंगन, नीदरलैंड) से प्राप्त किया गया था। सूअर एक द्वि-अस्थायी बिजली के झटके से दंग रह गए और बाद में सामान्य बूचड़खाने की प्रक्रियाओं के अनुसार बहिष्कृत हो गए। रक्त को थक्के बनने से रोकने के लिए ऑटोलॉगस रक्त एकत्र किया गया और हेपरिन (5000 अंतर्राष्ट्रीय यूनिट प्रति एमएल (IU), LEO1 फार्मा, बैलेरुप, डेनमार्क) जोड़ा गया।गुर्देसुअर की परिसंचरण मृत्यु के बाद तेजी से पुनर्प्राप्त किया गया, जिसके परिणामस्वरूप ठंड संरक्षण से पहले लगभग 20 मिनट गर्म इस्किमिया (WI) हो गया। WI अवधि के बाद,गुर्दे4˚C पर 180 मिली सोडियम क्लोराइड (NaCl) (0.9 प्रतिशत) (बैक्सटर BV, यूट्रेक्ट, नीदरलैंड) के साथ फ्लश और ठंडा किया गया, जिसने कोल्ड इस्किमिया (CI) की शुरुआत को चिह्नित किया।गुर्देअतिरिक्त वसायुक्त ऊतक से मुक्त विच्छेदित थे और रक्त वाहिकाओं को उजागर किया गया था। अगला,गुर्देa . से जुड़े थेगुर्दाअसिस्ट ट्रांसपोर्ट एचएमपी डिवाइस (ऑर्गन असिस्ट, ग्रोनिंगन, नीदरलैंड-लैंड्स)। यह एचएमपी मशीन संरक्षितगुर्देठंड के साथ (0–4˚C) UW मशीन परफ्यूजन सॉल्यूशन (बेल्जर UW-MP सॉल्यूशन, ब्रिज टू लाइफ लिमिटेड, कोलंबिया, SC) 2-4 घंटे के लिए 2-4 घंटे के लिए ऑक्सीजन युक्त पल्सेटाइल HMP का उपयोग 25 mmHg के औसत धमनी दबाव पर . हेपरिनिज्ड ऑटोलॉगस रक्त ल्यूकोसाइट फिल्टर (बीओआर 02 प्लस बीएस पीएफ, फ्रेसेनियस काबी, ज़ीस्ट, नीदरलैंड) का उपयोग करके ल्यूकोसाइट समाप्त हो गया था, सेंट्रीफ्यूज किया गया और बाद में, सतह पर तैरनेवाला प्लाज्मा हटा दिया गया।

छिड़काव समाधानचार प्रयोगात्मक समूहों को परिभाषित किया गया था (n=5 प्रति समूह), प्रत्येक समूह में एक अलग एनएमपी समाधान के साथ। निम्न से पहलेगुर्दापुनर्प्राप्ति, प्रयोग के दौरान उपयोग किए जाने वाले छिड़काव समाधान का निर्धारण किया गया था। सभी चार छिड़काव समाधानों में ऑटोलॉगस पोर्सिन लाल रक्त कोशिकाएं (आरबीसी) शामिल थीं, लेकिन प्रत्येक एनएमपी माध्यम की संरचना अलग थी (तालिका 1)। हमारी प्रयोगशाला में, पोर्सिन के छिड़काव से पर्याप्त अनुभव प्राप्त हुआ हैगुर्देऔर विलियम्स मीडियम ई (WME) (लाइफ टेक्नोलॉजीज लिमिटेड, ब्लीस्विज्क, नीदरलैंड्स) [9–11] का उपयोग करते हुए कृंतक लीवर। इस परफ्यूसेट में वैसोडिलेटर नहीं होता है और हमने इसे नहीं बनाने का फैसला किया है

प्रारंभिक समाधान में परिवर्तन। समूह 2 का छिड़काव समाधान हमारे समूह द्वारा शारीरिक सांद्रता में इलेक्ट्रोलाइट्स को शामिल करने और ग्लोमेरुलर झिल्ली पर एक शारीरिक कोलाइड आसमाटिक दबाव डालने के लिए विकसित किया गया था। समूह 3 परफ्यूसेट एक कोलाइड-मुक्त चिकित्सकीय रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला ब्रिटिश एनएमपी समाधान था, जिसका उपयोग वर्तमान में एक यादृच्छिक नियंत्रित परीक्षण में किया जाता है, जिसमें मानव मृत दाता के एससीएस के साथ 1 एच एनएमपी की तुलना की जाती है।गुर्देयूनाइटेड किंगडम में [12]। समूह 4 के लिए, इस समाधान का सफलतापूर्वक आरहूस, डेनमार्क [13] में एक पोर्सिन ऑटोट्रांसप्लांटेशन अध्ययन में उपयोग किया गया था। यह Weissenbacher et al द्वारा डिजाइन किए गए परफ्यूसेट पर आधारित है, जो प्रति-जुड़े हुए मानव को छोड़ देता हैगुर्दे24 घंटे [7] के दौरान। उपर्युक्त घटकों के अलावा, समूह 1 में परफ्यूसेट को ग्लूकोज के साथ पूरक किया गया था जब एकाग्रता 4 मिमीोल / एल से नीचे गिर गई थी। उत्पादित मूत्र था

प्रति घंटा WME के ​​​​साथ बदल दिया। समूह 2 में एक सिरिंज इन्फ्यूजन पंप ने 0.5 मिली/हैंड इंसुलिन (10{{1{ की दर से कुल पैरेंटेरल न्यूट्रिशन (SmofKabiven) (फ्रेसेनियस काबी नेदरलैंड बीवी, ज़ीस्ट, नीदरलैंड) का संचार किया। {12}}}} 0 आईयू, नोवो नॉर्डिस्क ए/एस) 0.005 मिली/घंटा की दर से। हर घंटे के बाद, स्थिर इलेक्ट्रोलाइट संतुलन बनाए रखने के लिए समूह 2 में मूत्र उत्पादन को फिर से प्रसारित किया गया। तीसरे समूह में, 170 मिलीलीटर शुद्ध आरबीसी को 120 मिलीलीटर खारा, एडेनिन, ग्लूकोज और मैनिटोल (एसएजी-एम) के साथ मिलाया गया, जिससे 0.5–0.65 लीटर/लीटर का हेमटोक्रिट बन गया। आरबीसी (जिसका उपयोग ब्रिटिश नैदानिक ​​एनएमपी परफ्यूसेट में किया जाता है)। इन प्रयोगों के दौरान, फ़्लोलन (ग्लैक्सोस्मिथक्लाइन बीवी, ज़ीस्ट, नीदरलैंड) को 5 मिली/घंटा की दर से, ग्लूकोज़ 5 प्रतिशत (बैक्सटर बीवी, यूट्रेक्ट, नीदरलैंड्स) को 4 मिली/ एच और 150 मिली सिंथामिन -17 10 प्रतिशत (बैक्सटर हेल्थकेयर लिमिटेड, नॉरफ़ॉक, यूनाइटेड किंगडम), 6 मिली सोडियम बाइकार्बोनेट (NaHCO 3) 8.4 प्रतिशत (बी. ब्रौन मेल्सुन-जेन एजी, मेलसुंगेन, जर्मनी) का मिश्रण। , 30 IU इंसुलिन (1000 IU, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Den-mark) और Cernevit (Baxter BV, Utrecht, नीदरलैंड्स) 20 ml/h की दर से, वर्तमान नैदानिक ​​यूके अध्ययन के प्रोटोकॉल के अनुसार। मूत्र उत्पादन को प्रति घंटा रिंगर्स लैक्टेट (बैक्सटर बीवी भी) द्वारा बदल दिया गया था। चौथे समूह के एनएमपी के दौरान, एक सिरिंज इन्फ्यूजन पंप ने वेरापामिल (2.5 मिलीग्राम / एमएल, सैंडोज़ बीवी भी) को 0.3 मिली / घंटा की दर से खारा में भंग कर दिया। एक स्थिर इलेक्ट्रोलाइट संतुलन बनाए रखने के लिए हर घंटे के बाद इस समूह में मूत्र उत्पादन को भी पुन: प्रसारित किया गया। प्रत्येक समूह में नमूना संस्करणों को विभिन्न घटकों के साथ ठीक किया गया था। समूह 1 में मात्रा को WME से, समूह 2 में छिड़काव माध्यम से, समूह 3 में रिंगर्स लैक्टेट के साथ और समूह 4 में Sterofundin1 (भी B. ब्रौन) के साथ प्रतिस्थापित किया गया था।

एनएमपी सेटअपछिड़काव सेटअप हमारे समूह [14] द्वारा पहले वर्णित के समान था।गुर्देसभी प्रयोगों के दौरान 60 पल्स प्रति मिनट की आवृत्ति, एटीए सेट, गैर-प्रतिक्रिया विनियमित, 110/70 एमएमएचजी के दबाव और 95 प्रतिशत ऑक्सीजन/5 प्रतिशत कार्बन डाइऑक्साइड (कार्बोजेन) के साथ ऑक्सीजन युक्त, एसिनसॉइड पल्सेटाइल फैशन में सुगंधित थे। यह सुपरफिजियोलॉजिकल ऑक्सीजन स्तर सभी चार मौजूदा प्रोटोकॉल में मानक प्रक्रिया है। छिड़काव को कस्टम-निर्मित इलेक्ट्रॉनिक इंटरफ़ेस और नियंत्रण सॉफ़्टवेयर (LabView Software, National Instruments नीदरलैंड BV, Woerden, नीदरलैंड्स) द्वारा नियंत्रित किया गया था। थेनोर्मोथर्मिक परफ्यूजन सर्किट का एक योजनाबद्ध आंकड़ा चित्र 1 में दिखाया गया है।

मूत्र और परफ्यूसेट विश्लेषणप्रति घंटा, धमनी परफ्यूसेट और मूत्र के नमूने लिए गए। समूह 2 और 4 में, जिसमें मूत्र का पुन: परिसंचारण किया गया था, मूत्र के पुनरावर्तन से पहले परफ्यूसेट के नमूने लिए गए थे। एनएमपी के 0, 240 और 420 मिनट के बाद परफ्यूसेट के धमनी रक्त गैस के नमूनों का विश्लेषण किया गया। हर आधे घंटे में छिड़काव मापदंडों का दस्तावेजीकरण किया गया। लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (एलडीएच) और एस्पार्टेट एमिनोट्रांस्फरेज (एएसएटी), सोडियम, पोटेशियम, ग्लूकोज और क्रिएटिनिन की सांद्रता को परफ्यूसेट में मानक नैदानिक ​​​​परख के साथ मापा गया था। क्रिएटिनिन निकासी, प्रति 100 ग्राम क्रिएटिनिन का आंशिक उत्सर्जन (एफई क्रिएटिनिन / 100 ग्राम), और आंशिक सोडियम उत्सर्जन (फेना प्लस) की गणना निर्धारित करने के लिए की गई थीगुर्दे समारोह. समीकरण S1 परिशिष्ट में पाए जा सकते हैं। दोनों एन-एसिटाइल- -डी ग्लूकोसामिनिडेस (एनएजी) (सिग्मा-एल्ड्रिच भी), के मार्कर के रूप मेंगुर्देऑक्सीडेटिव तनाव को मापने के लिए ट्यूबलर डिसफंक्शन / चोट, और थियोबार्बिट्यूरिक एसिड प्रतिक्रियाशील पदार्थ (टीबीएआरएस) (लिपिड पेरोक्सीडेशन-मेलोंडियलडिहाइड (एमडीए)) परख किट, सिग्मा-एल्ड्रिच बीवी, ज़्विजेंड्रेच, नीदरलैंड्स को परफ्यूसेट में मापा गया।

प्रोटोकॉलऊपरी की एनीडल बायोप्सीवृक्क छालएनएमपी की शुरुआत से पहले लिया गया था। प्रत्येक प्रयोग के अंत में, ऊपरी प्रांतस्था से सर्जिकल ऊतक के नमूने एकत्र किए गए थे। ये बायोप्सी थे

सांख्यिकीय विश्लेषणग्राफपैड प्रिज्म संस्करण 8.3.1 (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर इंक, ला जोला, सीए, यूएसए) का उपयोग करके डेटा विश्लेषण किया गया था। एएसएटी और एलडीएच जैसे सभी निरंतर अनुदैर्ध्य रूप से मापा चर के लिए, वक्र (एयूसी) के तहत क्षेत्र की गणना की गई थी। यदि डेटा सामान्य रूप से वितरित किया गया था (शापिरो विल्क परीक्षण) और भिन्नताओं की समरूपता थी (बार्टलेट परीक्षण के माध्यम से परीक्षण) तो समूहों के बीच एयूसी मूल्यों की तुलना करने के लिए कई तुलनाओं के साथ एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। यदि डेटा इन मान्यताओं को विफल कर देता है, तो डन के बहु-तुलनात्मक परीक्षण के साथ क्रुस्कल-वालिस परीक्षण का उपयोग किया गया था। सांख्यिकीय महत्व को इंगित करने के लिए 0.05 या उससे कम के दो-तरफा पी-मानों पर विचार किया गया।

परिणाम

छिड़काव पैरामीटरतालिका 2 में, गर्म और ठंडे इस्किमिया पर डेटा (माध्य, न्यूनतम और अधिकतम), एचएमपी अवधि और वजन शुरू होने से पहले और एनएमपी के बाद के साथ-साथ डेल्टा वजन (वजन में अंतर टी=420 बनाम टी {{2 }}) प्रस्तुत हैं। समूह 2 (पी=0.041) की तुलना में समूह 1 में डेल्टा भार काफी अधिक था। सभी प्रायोगिक समूहों के मूल्यों के बीच कोई अन्य महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे। एनएमपी . के दौरानगुर्देसमूह 1 और 2 में रीपरफ्यूजन के पहले 60 मिनट के दौरान धमनी प्रवाह में वृद्धि हुई। 60 मिनट के बाद प्रवाह दर आमतौर पर घटने लगी। समूह 3 और 4 में छिड़काव कम प्रवाह मूल्यों के साथ शुरू हुआ लेकिन पूरे एनएमपी में अधिक निरंतर प्रवाह दिखा। एनएमपी के 7 घंटे के बाद अंतिम मान सभी समूहों में लगभग 75 मिली/मिनट/100 ग्राम था (चित्र 2)।

मूत्र और परफ्यूसेट विश्लेषणछिड़काव के दौरान कार्यात्मक और चोट के मापदंडों पर व्यक्तिगत डेटा तालिका 3 में पाया जा सकता है।गुर्दे समारोह।समूह 3 ने मूत्र उत्पादन का उच्चतम स्तर दिखाया (चित्र 3)। समूह 1 (p=0.003), समूह 2 (p <0.001) और="" समूह="" 4="" (p="0.008)" की="" तुलना="" में="" समूह="" 3="" में="" संचयी="" मूत्रलता="" काफी="" अधिक="" थी।="" कुछ="">गुर्देसमूह 2 में t=180 और t=300 पर मूत्र का उत्पादन नहीं हुआ, जिससे t=360 और t=420 पर संचयी मूत्र उत्पादन का औसत स्तर कम हो गया। सोडियम और पोटेशियम का स्तर समूहों के बीच काफी भिन्न होता है (चित्र 4)। t=0 के स्तर परफ्यूजन के शुरुआती शुरुआती मूल्यों को दर्शाते हैं। विशेष रूप से समूह 3 ने अत्यधिक दिखाया

छिड़काव के दौरान, समूह 3 में पीएच स्थिरीकरण के बिना कम हो गया, जबकि अन्य समूह एनएमपी (चित्र 5) के 7 घंटे के बाद लगभग 7.4 के अधिक संतुलित स्तर पर पहुंच गए। सभी समूहों में क्रिएटिनिन निकासी कम थी (चित्र 6ए और 6बी)। फिर भी, यह समूह 2 (p=0.039) की तुलना में समूह 3 की तुलना में काफी अधिक था। समूह 1 (p=0.026), समूह 2 (p=0.017), और समूह 4 ( पी=0.045)। फेना प्लस सभी समूहों में उच्च था, यह दर्शाता है कि ट्यूबलर फ़ंक्शन गंभीर रूप से बिगड़ा हुआ था (चित्र 6E और 6F) इन इस्कीमिक रूप से क्षतिग्रस्तगुर्दे. समूह 3 में फेना प्लस समूह 2 (पी=0.037) और समूह 4 (पी=0.019) की तुलना में काफी अधिक था। अन्य सभी समूह महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नहीं थे।गुर्दे की चोट।NMP के दौरान ASAT स्तरों का विश्लेषण किया गया (चित्र 7A और 7B) सामान्य कोशिका क्षति के लिए एक मार्कर के रूप में। प्रत्येक समूह के लिए माध्य AUC निर्धारित किया गया था। समूह 4 में स्तर समूह 1 (पी=0.022) और समूह 2 (पी=0.011) की तुलना में काफी अधिक थे। एलडीएच के स्तर को सामान्य चोट मार्कर (छवि 7 सी और 7 डी) के रूप में परफ्यूसेट में भी मापा गया था। एक एयूसी की गणना की गई जिसने समूह 1 और 2 में एलडीएच का निम्नतम स्तर दिखाया। समूह 2 समूह 4 (पी=0.020) की तुलना में काफी कम था। समूह 1 ने समूह 4 (पी=0.022) की तुलना में काफी कम स्तर दिखाया। समूह 1 (p=0.043) और समूह 2 (p=0.006) (चित्र 8A और 8B) की तुलना में समूह 3 में NAG का स्तर काफी अधिक था। TBARS, malondialdehyde (MDA) की सांद्रता, सभी चार समूहों में लिपिड पेरोक्सीडेशन (चित्र 8C और 8D) के लिए एक मार्कर के रूप में मापा गया था। समूह 2 (पी=0.003) और समूह 3 (पी <0.001) की="" तुलना="" में="" समूह="" 1="" में="" एमडीए="" का="" स्तर="" काफी="" अधिक="" था।="" समूह="" 2="" ने="" समूह="" 4="" (पी="0.006)" की="" तुलना="" में="" काफी="" कम="" एमडीए="" स्तर="" दिखाया।="" समूह="" 3="" ने="" समूह="" 4="" (पी="" .)="" की="" तुलना="" में="" काफी="" कम="" स्तर=""><>

प्रोटोकॉल

चित्र 9 में डॉट प्लॉट दिखाते हैंगुर्देNMP (t {0}}) की शुरुआत से पहले और NMP के 7 घंटे (t=420) के बाद ट्यूबलर क्षति/ATN, ट्यूबलर फैलाव, और ग्लोमेरुलर फैलाव स्कोर। हिस्टोलॉजिकल नेक्रोसिस और ट्यूबलर फैलाव के प्रारंभिक मूल्य समूहों के बीच तुलनीय थे, केवल अंत-बिंदु स्कोर में मामूली अंतर के साथ। अन्य 3 समूहों की तुलना में समूह 2 में टी=420 पर ग्लोमेरुलर फैलाव उल्लेखनीय रूप से कम था। प्रति समूह हिस्टोलॉजिकल आंकड़े S1 अंजीर में पाए जा सकते हैं। बैक्स और बीसीएल -2 फोल्ड इंडक्शन, प्रो- और एंटी-एपोप्टोटिक जीन अभिव्यक्ति के लिए संकेतक, दोनों ने स्तरों की तुलना में एंड-पॉइंट एनएमपी स्तरों में बदलाव दिखाया। टी=0 (आकृति 10)। डेल्टा बैक्स जीन अभिव्यक्ति (टी=0 और टी=420 के बीच अंतर) की गणना सभी समूहों में की गई थी और समूह 2 (पी=0.046), समूह 3 की तुलना में समूह 1 में काफी अधिक थी। (पी <0.001) और="" समूह="" 4="" (पी="0.003)।" समूहों="" के="" बीच="" कोई="" महत्वपूर्ण="" अंतर="" नहीं="" होने="" के="" साथ="" 7="" घंटे="" के="" छिड़काव="" के="" बाद="" सभी="" समूहों="" में="" बीसीएल="" -2="" अभिव्यक्ति="" में="" कमी="">

बहस

सामान्य रुचिगुर्देनॉर्मोथर्मिक एक्स-विवो मशीन छिड़काव तकनीक बढ़ रही है, लेकिन नैदानिक ​​​​साक्ष्य केवल एक चल रहे नैदानिक ​​एनएमपी परीक्षण के साथ सीमित है। एनएमपी की क्षमता की जांच के लिए व्यापक पूर्व-नैदानिक ​​​​अध्ययन आयोजित किए गए हैं। बहुत अलगगुर्देविभिन्न शोध समूहों के बीच नॉर्मोथर्मिक परफ्यूसेट मौजूद हैं। हालांकि, सवाल यह है कि परफ्यूसेट रचना किस हद तक प्रभावित करती हैगुर्दे समारोहऔर यह संभावित व्यवहार्यता मार्करों की व्याख्या को कैसे प्रभावित करता है। इसलिए, इस अध्ययन ने चार अलग-अलग मानदंड पूर्व-विवो छिड़काव समाधानों के साथ-साथ प्रभाव का मूल्यांकन कियागुर्दे समारोहतथागुर्दे की चोटलंबे समय तक एनएमपी के दौरान एक सुअर का उपयोग करगुर्दासर्कुलेटरी डेथ मॉडल के बाद दान।

पृथक का आकलन करेंगुर्दे समारोहप्रत्यारोपण से पहले। होसगूड और उनके सहयोगियों ने के दौरान पूर्व-प्रत्यारोपण व्यवहार्यता मूल्यांकन की व्यवहार्यता का पहला नैदानिक ​​​​साक्ष्य प्रदान कियागुर्देएनएमपी उनका छिड़काव समाधान वर्तमान में एनएमपी के दौरान सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है और शुरू में इसका आकलन करने के लिए विकसित किया गया थागुर्दे समारोह1-2 घंटे के अंतराल के भीतर प्रत्यारोपण से पहले [16]।गुर्देइस घोल के साथ सुगंधित आमतौर पर उच्च मूत्र उत्पादन [17] दिखाते हैं। वास्तव में, उच्चतम मूत्र उत्पादन समूह 3 में देखा गया था, जो कि इस नैदानिक ​​यूके परफ्यूसेट पर आधारित है, जिससे एनएमपी के 7 घंटों के दौरान इस समूह में परफ्यूसेट के परिसंचारी मात्रा का पूर्ण मूत्र उत्सर्जन होता है। परिसंचारी छिड़काव द्रव मात्रा के निरंतर नुकसान की भरपाई रिंगर के लैक्टेट के समान संस्करणों के आंतरायिक जोड़ द्वारा की जानी थी, इस छिड़काव समाधान के लिए नैदानिक ​​प्रोटोकॉल के अनुरूप। हमारे अध्ययन में, इसके परिणामस्वरूप इलेक्ट्रोलाइट संरचना और पीएच में काफी बदलाव आया, क्योंकि मूत्र को पुन: परिचालित नहीं किया गया था। इस उच्च मूत्र उत्पादन को केवल इस छिड़काव समाधान में कोलाइड की अनुपस्थिति के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। अन्य सभी तीन समूहों के छिड़काव समाधानों में एल्ब्यूमिन की काफी मात्रा होती है। इंट्रावास्कुलर स्पेस में, एल्ब्यूमिन मुख्य घटक है जो एक सामान्य कोलाइड ऑस्मोटिक दबाव [18] बनाए रखता है। हाइड्रोस्टेटिक दबाव और कोलाइड आसमाटिक दबाव के बीच संतुलन के परिणामस्वरूप ग्लोमेरुलर झिल्ली पर एक शारीरिक अल्ट्राफिल्ट्रेशन दर होती है [19]। कैथ एट अल। ने दिखाया कि एनएमपी के दौरान मूत्र उत्पादन पोस्ट-ट्रांसप्लांट फ़ंक्शन से संबंधित नहीं था। उन्होंने अनुमान लगाया कि मूत्र उत्पादन काफी हद तक परफ्यूसेट संरचना से प्रभावित होता है, विशेष रूप से ऑन्कोटिक दबाव और ऑस्मोलैरिटी, जो हमारे परिणामों के अनुरूप है [20]।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की खराबी में सुधार होगा

इलेक्ट्रोलाइट्स के नियमन के लिए मुख्य जिम्मेदार अंग हैगुर्दालेकिन इस बात के सबूत हैं किगुर्दाइलेक्ट्रोलाइट्स में संतुलन से खुद को भी फायदा होता है। यह स्थापित किया गया है कि पोटेशियम और विशेष रूप से हाइपोकैलिमिया में असंतुलन से कई प्रकार के परिवर्तन हो सकते हैंगुर्दे समारोहबिगड़ा हुआ ट्यूबलर परिवहन, बिगड़ा हुआ मूत्र ध्यान केंद्रित करने की क्षमता, परिवर्तित सोडियम पुन: अवशोषण और इंट्रासेल्युलर एसिडोसिस [21-23] शामिल हैं। महत्वपूर्ण परफ्यूसेट इलेक्ट्रोलाइट्स के अपरिहार्य मूत्र हानि के लिए खाते में, वीसेनबैकर एट अल। एनएमपी के दौरान मूत्र पुनर्रचना के उपयोग का प्रस्ताव रखा। उन्होंने दिखाया कि यह छोड़े गए मानव में परफ्यूसेट मात्रा और होमोस्टैसिस के उचित रखरखाव की सुविधा प्रदान करता हैगुर्दे, एनएमपी [7] के 24 घंटों के बाद भी। परफ्यूसेट में मापी गई एल्ब्यूमिन सांद्रता छिड़काव के दौरान समय के साथ कम होती गई। यह कमी सबसे अधिक संभावना प्लास्टिक परफ्यूज़न सर्किट टयूबिंग में एल्ब्यूमिन के पालन के कारण होती है और उत्पादित मूत्र में नुकसान के लिए केवल एक छोटी राशि को जिम्मेदार ठहराया जा सकता है, जो अन्य एनएमपी अध्ययनों [24] में भी देखा गया है। एल्ब्यूमिन के इस मूत्र हानि को एंडोथेलियल कोशिकाओं को गर्म इस्किमिया-प्रेरित क्षति द्वारा समझाया जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप फिल्टर डायफ्राम में व्यवधान होता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीनूरिया होता है, जो एनएमपी [25] के दौरान एल्बुमिनुरिया के हमारे देखे गए स्तरों के अनुरूप है।

हम उन समूहों के बीच अंतर के तंत्र की पूरी तरह से व्याख्या नहीं कर सकते हैं जिन्हें हमने देखा थागुर्दाएनएमपी के दौरान वजन बढ़ना। एडिमा गठन के संभावित क्षेत्रों पर हिस्टोलॉजिकल परीक्षा निर्णायक नहीं थी। उपयोग किए गए छिड़काव समाधान के संबंध में वजन बढ़ाने के संभावित बहुक्रियात्मक तंत्र को स्पष्ट करने के लिए आगे की जांच की आवश्यकता है। विभिन्न छिड़काव मापदंडों को मापा गया, जहांगुर्देप्रवाह ने सबसे हड़ताली अंतर दिखाया।गुर्देसमूह 3 और 4 में प्रवाह ने 7-घंटे की NMP अवधि के दौरान सबसे स्थिर स्तर बनाए रखा। इन समूहों में समाधान वैसोडिलेटर के साथ पूरक थे जबकि पहले दो समूहों में समाधान नहीं थे। अंतर्जात वाहिकाविस्फारक संवहनी चिकनी मांसपेशियों में छूट को बढ़ावा देते हैं और इस तरह क्षेत्रीय रक्त प्रवाह को नियंत्रित करते हैं [26]। चूंकि समूह 1 और 2 को वासोडिलेटर के साथ पूरक नहीं किया गया था, इसलिए वासोस्पास्म कम हो सकता थागुर्देधमनी प्रवाह। इसके अलावा, इस बात के प्रमाण हैं कि मेडुलरी और कॉर्टिकल प्रवाह को व्यक्तिगत रूप से विनियमित किया जा सकता है [27,28]। एनएमपी के दौरान सटीक और मात्रात्मक कार्यात्मक एमआरआई (एएसएल) प्रवाह माप के आधार पर हमारे समूह से प्रारंभिक अप्रकाशित डेटा इस तंत्र का दृढ़ता से समर्थन करता है। उन प्रयोगों में,गुर्देएनएमपी के पहले घंटे के दौरान प्रवाह मुख्य रूप से मेडुलर होता है, जो छिड़काव के एक घंटे से अधिक समय के बाद कॉर्टिकल प्रवाह में बदल जाता है। प्रवाह का यह क्षेत्रीय पुनर्वितरण समूह 1 और 2 के छिड़काव में देखे गए शिखर की व्याख्या कर सकता है, संभवतः पहले घंटे के दौरान मेडुलरी शंटिंग के कारण। एनएमपी की शुरुआत में एक वैसोडिलेटर को जोड़ने से एनएमपी की शुरुआत में तुरंत मुख्य रूप से कॉर्टिकल माइक्रोपरफ्यूज़न बढ़ सकता है, जिसके परिणामस्वरूप समूह 3 और 4 में देखा गया अधिक स्थिर प्रवाह होता है। इसलिए, यदि एक स्थिर प्रवाह पैटर्न और संभवतः अधिक शारीरिक रूप से मुख्य रूप से कॉर्टिकल एनएमपी के दौरान छिड़काव वांछित है, छिड़काव समाधान में वैसोडिलेटर जोड़ने की सलाह दी जा सकती है। वैकल्पिक रूप से, छिड़काव से पहले आरबीसी की बार-बार धुलाई कम हो सकती हैगुर्देआरबीसी [29] की वाहिकासंकीर्णन गतिविधि को कम करके वाहिकासंकीर्णन।

गुर्दा कार्यएनएमपी के दौरान सभी सूअरों में स्पष्ट रूप से बिगड़ा हुआ थागुर्देसंभवतः प्रारंभिक गर्म इस्केमिक क्षति और शारीरिक हास्य नियामक तंत्र की कमी के कारण, जैसे कि एंटी-मूत्रवर्धक हार्मोन और एल्डोस्टेरोन द्वारा संचालित। क्रिएटिनिन क्लीयरेंस कम था और सभी समूहों में फेना प्लस के उच्च मूल्य देखे गए। समूह 2 में एनएमपी के 3 घंटे के बाद फेना प्लस में अचानक वृद्धि कई में मूत्र उत्पादन की अनुपस्थिति का परिणाम हो सकती है।गुर्देt=240 और t=300 पर, जबकि छिड़काव के अंत मेंगुर्देफिर से पेशाब आने लगा। फेना प्लस का ऊंचा मूल्य संभवतः ट्यूबलर नेक्रोसिस का परिणाम है जैसा कि पिछले अध्ययनों में भी बताया गया है [30,31]। इसके अलावा, इन-विवो क्रिएटिनिन क्लीयरेंस और फेना प्लस स्तर ह्यूमरल रेगुलेशन से काफी हद तक प्रभावित होते हैं। हास्य विनियमन के रूप में

एनएमपी प्रयोगों के दौरान कमी, शारीरिक क्रिएटिनिन निकासी और फेना प्लस स्तर हमारे एनएमपी सेटअप में अपेक्षित नहीं हैं।

चोट को मापने के लिएगुर्देकोशिकाओं, एएसएटी और एलडीएच स्तरों को मापा गया। उच्चतम स्तर समूह 3 और 4 में देखे गए, यह सुझाव देते हुए कि इन दो समूहों में सबसे अधिक चोट लगी है। कैथ एट अल। ने दिखाया कि एनएमपी के दौरान बढ़े हुए एएसएटी स्तर पोस्ट-प्रत्यारोपण के साथ सहसंबद्ध हैंगुर्दे समारोहऔर इसलिए ASAT एक महत्वपूर्ण अंग व्यवहार्यता मूल्यांकन बायोमार्कर [20] हो सकता है। मापा एएसएटी स्तरों पर विभिन्न परफ्यूसेट रचनाओं का प्रभाव वैश्विक आधार पर एनएमपी डेटा की लगातार व्याख्या को सक्षम करने के लिए प्रत्यारोपण केंद्रों के बीच एनएमपी प्रोटोकॉल के सामंजस्य के महत्व पर जोर देता है। एनएजी के स्तर, परिवर्तित ट्यूबलर अखंडता और ट्यूबलर क्षति [32,33] के लिए एक मार्कर, समूह 3 में उच्चतम थे, यह दर्शाता है कि इस समूह में सबसे अधिक ट्यूबलर चोट हुई है। छिड़काव के दौरान ऑक्सीडेटिव तनाव की मात्रा निर्धारित करने के लिए टीबीएआरएस के स्तर को मापा गया। उच्चतम स्तर समूह 1 और 4 में देखे गए, जो सुझाव देते हैं किगुर्देइन समूहों में उच्चतम ऑक्सीडेटिव तनाव का अनुभव हुआ, जिसके परिणामस्वरूप बिगड़ा हुआ सेलुलर कार्य हो सकता था [34]। एनएमपी से पहले बायोप्सी की तुलना में एनएमपी के 7 घंटे के बाद बैक्स/बीसीएल -2 अनुपात में बदलाव संभवत: एनएमपी के दौरान होने वाले संभावित हानिकारक प्रभावों के बजाय प्रारंभिक गर्म इस्केमिक अवधि का परिणाम है। परिणामी पुनर्संयोजन के बाद इस्केमिक चोट एक नियामक एपोप्टोसिस कैस्केड को प्रेरित करती है, जो क्षतिग्रस्त समीपस्थ नलिका [35] की मरम्मत की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। हालांकि कई नॉर्मोथर्मिक चोट मार्करों का प्रस्ताव किया गया है, आज तक किसी को भी एक अच्छी तरह से संचालित नैदानिक ​​​​परीक्षण में मान्य नहीं किया गया है। पोस्ट-ट्रांसप्लांट के साथ एनएमपी के दौरान मापे गए होनहार चोट मार्करों की एक सरणी से संबंधित एक अध्ययनगुर्दे समारोहयह स्पष्ट करने की आवश्यकता है कि कौन से संभावित बायोमार्कर को नॉर्मोथर्मिक एक्स-विवो व्यवहार्यता मूल्यांकन मानदंड में शामिल किया जाना चाहिए।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे के संक्रमण में सुधार होगा

हमारे एनएमपी सेटअप का उपयोग डीसीडी के पोर्सिन मॉडल के संयोजन में किया गया थागुर्दादान किस बूचड़खाने मेंगुर्देउपयोग किए जाते थे। इस अध्ययन की एक सीमा यह है कि एक बूचड़खाने की प्रक्रिया हृदय की गिरफ्तारी के बाद अतिशयोक्ति पर आधारित होती है, जो इसे वास्तविक डीसीडी मॉडल से थोड़ा अलग बनाती है जिसमें कार्डियक इस्किमिया और / या विफलता से परिसंचरण गिरफ्तारी होती है। हालाँकि, हमने देखा किगुर्देहमारे अध्ययन में डीसीडी [36,37] के बाद हुई इस्केमिक चोट के समान ही दिखाया गया है। इसलिए, हमें लगता है कि वर्तमान बूचड़खाने डीसीडी मॉडल आवश्यक विश्वसनीयता और प्रजनन क्षमता को बनाए रखते हुए प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग को कम करने में मदद करेगा। यद्यपि हमारे प्रायोगिक समूह अपेक्षाकृत छोटे थे, हमारे समूह के आकार अन्य सूअरों के समान हैंगुर्दामशीन छिड़काव अध्ययन [17,38-40]। एनएमपी परफ्यूजन पैरामीटर जो हमने समूह 3 में दर्ज किया था, जो होसगूड एट अल द्वारा उपयोग किए जाने वाले ब्रिटिश क्लिनिकल परफ्यूजन समाधान पर आधारित था। लीसेस्टर/कैम्ब्रिज समूह [6,12] द्वारा पहले रिपोर्ट किए गए परिणामों की तुलना पूरी तरह से नहीं की जा सकती है। हमारे अध्ययन में,गुर्देएनएमपी की एक लंबी अवधि के दौरान और उच्च माध्य धमनी दबाव के साथ सुगंधित थे। आगे,गुर्देहोसगूड एट अल द्वारा सुगंधित। मशीन परफ्यूज़न के बाद ट्रांसप्लांट किया गया। चार छिड़काव समाधानों के बीच पूरी तरह से विश्वसनीय तुलना के लिए, भविष्य के अध्ययन में का प्रत्यारोपण शामिल होना चाहिएगुर्देएनएमपी के बाद क्योंकि यह विवो में वास्तविक अनुवर्ती और कार्यात्मक मूल्यांकन की अनुमति देगा।

अंत में, सुअर का छिड़कावगुर्देपरीक्षण किए गए सभी चार समाधानों के साथ व्यवहार्य साबित हुआ। हालांकि, इलेक्ट्रोलाइट स्तरों के बीच पर्याप्त अंतर थे,गुर्दे समारोहचार समूहों में पैरामीटर, और चोट के निशान। समूहों के बीच लागू छिड़काव समाधानों में वर्तमान विविधता के संयोजन में ये अंतर, मानकीकृत एनएमपी मूल्यांकन मानदंडों के विकास में बाधा डालते हैं। हमें लगता है कि प्रायोगिक और नैदानिक ​​एनएमपी दोनों में एनएमपी के सटीक उद्देश्य और वांछित अवधि को सावधानीपूर्वक पूर्व-निर्दिष्ट करना आवश्यक है, क्योंकि प्रत्येक परफ्यूसेट और परफ्यूजन प्रोटोकॉल में आवश्यक समायोजन के लिए कह सकता है। इस बात पर जोर देना महत्वपूर्ण है कि यह अध्ययन व्यक्तिगत परफ्यूसेट घटकों की भूमिकाओं की जांच करने के बजाय, मौजूदा परफ्यूसेट्स के प्रभावों पर समग्र रूप से मापा परिणामों पर केंद्रित है। एनएमपी के दौरान प्रत्येक परफ्यूसेट घटक के व्यक्तिगत प्रभावों और गुणों को स्पष्ट करने के लिए आगे के अध्ययन की आवश्यकता है