इंजेक्शन कॉस्मेटोलॉजी के लक्ष्य के रूप में मानव त्वचा कोशिकाओं के सिग्नलिंग अणु

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परिचय:त्वचा की उम्र बढ़ना एक प्राकृतिक प्रक्रिया है जिसे रोका नहीं जा सकता। हालांकि, त्वचा की समय से पहले उम्र बढ़ने को कम करने और पहले से दिखाई देने वाले संकेतों को कम करने में मदद करने के कई तरीके हैं। उनमें से एक हाइलूरोनिक एसिड, सक्रिय अमीनो एसिड और पेप्टाइड्स के संयोजन से युक्त तैयारी का उपचर्म प्रशासन है जो एंटी-एजिंग नैदानिक ​​प्रभाव प्रदान करता है। इस शोध का उद्देश्य इन विट्रो नए सिग्नलिंग अणुओं का अध्ययन करना है, जो उम्र बढ़ने के प्रभाव और उनकी अभिव्यक्ति पर हयालूरोनिक एसिड फिलर्स के प्रभाव के साथ हैं।

तरीके:अध्ययन मानव चेहरे की त्वचा की सेल संस्कृतियों का उपयोग करके आयोजित किया गया था: 1) मानव चेहरे की त्वचा केराटिनोसाइट्स और फाइब्रोब्लास्ट की मिश्रित संस्कृति, और 2) मर्केल कोशिकाओं से समृद्ध मानव चेहरे की त्वचा केराटिनोसाइट्स की संस्कृति। उम्र बढ़ने के मार्करों की पहचान करने के लिए इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री, कन्फोकल माइक्रोस्कोपी और वेस्टर्न ब्लॉट का इस्तेमाल किया गया।

परिणाम:HA-Y और HA-S ने मानव त्वचा केराटिनोसाइट्स और मर्केल कोशिकाओं की मिश्रित संस्कृति की उम्र बढ़ने के मामले में क्लोथो की अभिव्यक्ति को सक्रिय किया। संस्कृतियों की उम्र बढ़ने के साथ एमटीएच की अभिव्यक्ति में वृद्धि -1 एचए-एस और एचए-वाई की कार्रवाई के तहत प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के खिलाफ रक्षा तंत्र को सक्रिय करने का प्रमाण प्रदान करती है जो उम्र बढ़ने के साथ जमा हो रही हैं। सुसंस्कृत कोशिकाओं में HA-S और HA-Y दोनों को जोड़ने पर मेलाटोनिन रिसेप्टर 1A और 1B मार्करों की अभिव्यक्ति के क्षेत्र में सांख्यिकीय रूप से वैध वृद्धि हुई थी।

निष्कर्ष:इस जांच से पता चला है कि अध्ययन किए गए फिलर्स में जैविक प्रभाव होते हैं, जो उनके नियंत्रण में त्वचा में पुनर्योजी प्रक्रियाओं की उत्तेजना की गवाही देते हैं। कीवर्ड: त्वचा की उम्र बढ़ने, हयालूरोनिक एसिड, सक्रिय अमीनो एसिड, कोलेजन, पुनर्योजी प्रक्रियाएं, क्लोथो, घड़ी, मर्केल कोशिकाएं

परिचय

कई कॉस्मेटिक उत्पाद हर साल बाजार में दिखाई देते हैं, लेकिन केवल कुछ ही विज्ञान और प्रौद्योगिकी में नवीनतम उपलब्धियों के आधार पर बनाए गए हैं, त्वचा के शरीर विज्ञान और जैव रसायन विज्ञान और जटिल अंतरकोशिकीय बातचीत में ज्ञान का उपयोग करते हुए।प्यूरिटन विटामिन सीआज के नवोन्मेषी सौंदर्य प्रसाधनों के मुख्य घटक पादप अर्क और जैव प्रौद्योगिकी और बायोइंजीनियरिंग मेथ-ओड्स का उपयोग करके प्राप्त सामग्री हैं, जिनमें पेप्टाइड्स, पेप्टाइड कॉम्प्लेक्स, ओलिगो- और पॉलीसेकेराइड, विटामिन, एंजाइम और एंटीऑक्सिडेंट शामिल हैं। नोवाकुटन" चिकित्सा उत्पादों के नवाचार में HOPAAB (Hyaluronate Optical Pure Amino Acid Bond) नामक प्रौद्योगिकी समाधान शामिल है, जो हायलूरोनिक एसिड, सक्रिय अमीनो एसिड और पेप्टाइड्स का एक संयोजन है। HOPAAB नेटवर्क संरचना में निर्मित वैकल्पिक रूप से शुद्ध अमीनो एसिड का एक परिसर है। हयालूरोनिक एसिड का, जो सिग्नलिंग अणुओं की अभिव्यक्ति को सक्रिय करता है जिससे चयापचय, कार्यों और क्षतिग्रस्त कोशिकाओं के विकास में परिवर्तन होता है। हयालूरोनिक एसिड एक अद्वितीय बायोपॉलिमर है जिसमें हाइड्रोफिलिक गुण होते हैं और त्वचा पर मॉइस्चराइजिंग प्रभाव पड़ता है।

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जेरियाट्रिकियन रूस में 2030 तक मौजूदा 73.5 साल से 80.1 साल तक जीवन विस्तार की उम्मीद करते हैं। शारीरिक आकर्षण के नुकसान से अक्सर आत्म-सम्मान और जीवन की गुणवत्ता में कमी आती है, खासकर 35-60 साल की उम्र में, और यह लोगों का समूह अपनी उपस्थिति में सुधार करने में सबसे अधिक रुचि रखता है। HA-Y और HA-S को विभिन्न आयु समूहों के लिए प्रशासित किया जाता है: जबकि HA-Y का उपयोग 25 वर्ष से अधिक उम्र के युवा रोगियों के लिए काले घेरे से लड़ने और त्वचा के जलयोजन में सुधार करने के लिए किया जा सकता है, HA-S, की दोहरी एकाग्रता होती है। अमीनो एसिड, झुर्रियों से लड़ता है और एक भारोत्तोलन प्रभाव प्रदान करता है, और इसका उपयोग 35 से 65 वर्ष के रोगियों के लिए किया जा सकता है।

विभिन्न पर्यावरणीय ऑक्सीडेटिव तनाव उम्र बढ़ने के मार्करों (नीली रोशनी, यूवीए / यूवीबी, शहरी धूल, और आईआर एक्सपोजर) पर एचए-वाई और एचए-एस तैयारी प्रभावों की जांच बेल्जियम (स्ट्रैटीसेल एसए) में एक स्वतंत्र प्रयोगशाला में की गई थी। ऑक्सीडेटिव तनाव अध्ययन का उद्देश्य दो मॉडलों, पूर्व-विवो मानव त्वचा के अन्वेषकों और सामान्य मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट (एनएचडीएफ) की इन विट्रो मोनोलेयर संस्कृतियों में विभिन्न चल-लंगिंग स्थितियों के माध्यम से संभावित सुरक्षात्मक प्रभावों को उजागर करना है। परीक्षण उत्पादों के सुरक्षात्मक प्रभावों का मूल्यांकन यूवीए/यूवीबी विकिरण के बाद एक्स-विवो त्वचा के एक एपिडर्मल खंड के भीतर साइक्लोब्यूटीन पाइरीमिडीन डिमर्स (सीपीडी) बहुतायत में वृद्धि के खिलाफ किया गया था; NHDFs फाइब्रोब्लास्ट से जीन अभिव्यक्ति पर नीली रोशनी का प्रभाव; एनएचडीएफ फाइब्रोब्लास्ट में जीन अभिव्यक्ति पर प्रदूषकों (शहरी धूल, यूबीडी) के प्रभाव; और, इन्फ्रारेड-ए विकिरण के बाद एनएचडीएफ फाइब्रोब्लास्ट द्वारा प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) उत्पादन में वृद्धि। इस जांच के दौरान कुछ इंटर-एस्टिंग निष्कर्ष सामने आते हैं, उदाहरण के लिए, एचए फिलर्स के नीले प्रकाश-प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ लाभकारी प्रभाव; शहरी धूल परीक्षण, आदि में डीएनए क्षति-इंडु-साइल ट्रांसक्रिप्ट 3 प्रोटीन (डीडीआईटी -3) का अप-विनियमन।

HA फिलर्स में सक्रिय तत्व होते हैं जो चिकित्सकीय रूप से प्रभावी होते हैं जिनमें से अच्छी तरह से प्रलेखित हैं।सिस्टैंचउदाहरण के लिए, मुक्त अमीनो एसिड त्वचा के पानी और प्रोटीन संतुलन में सुधार करने में योगदान करते हैं, जिससे त्वचा की इलास्टी-सिटी बनी रहती है। क्षतिग्रस्त त्वचा पर पेप्टाइड्स का पुनरोद्धार प्रभाव पड़ता है, जबकि मॉइस्चराइजिंग घटकों की शुरूआत अपेक्षित मॉइस्चराइजिंग प्रभाव पैदा करती है और परिणामस्वरूप त्वचा कस जाती है और रंग में सुधार होता है।3

पेप्टाइड्स बहुक्रियाशील एजेंटों का एक उल्लेखनीय उदाहरण प्रदान करते हैं, जिनका व्यापक रूप से सौंदर्य प्रसाधनों के दुनिया के अग्रणी निर्माताओं द्वारा उपयोग किया जाता है। पेप्टाइड्स न केवल त्वचा में उम्र से संबंधित परिवर्तनों के खिलाफ प्रभावी ढंग से लड़ते हैं बल्कि हानिकारक कारकों से भी सुरक्षा प्रदान करते हैं।"

इस शोध का उद्देश्य चेहरे की त्वचा कोशिका संस्कृतियों में सिग्नल-आईएनजी अणुओं संभावित जीरोप्रोटेक्टर्स की अभिव्यक्ति पर एक इंजेक्शन एचए-आधारित उत्पाद (एक बाँझ तैयार-से-उपयोग समाधान के रूप में एक सिरिंज में पैक) के प्रभावों का अध्ययन करना है।

सामग्री और तरीके

अध्ययन मानव चेहरे की त्वचा की सेल संस्कृतियों का उपयोग करके आयोजित किया गया था: 1-मानव चेहरे की त्वचा केराटिनोसाइट्स और फाइब्रोब्लास्ट की मिश्रित संस्कृति, और 2-मर्केल कोशिकाओं से समृद्ध मानव चेहरे की त्वचा केराटिनोसाइट्स की संस्कृति। दूसरे मॉडल ऑब्जेक्ट को इसकी अनूठी उप-जनसंख्या के कारण चुना गया था। मेर्केल कोशिकाएं न्यूरोएंडोक्राइन त्वचा कोशिकाएं हैं जो बालों के रोम की बाहरी परतों में, एपिडर्मल स्पाइ-नस और बेसल परतों में और श्लेष्म झिल्ली में स्थानीयकृत होती हैं। मर्केल कोशिकाओं के अंतःस्रावी कार्य विभिन्न विकास कारकों और वहां स्थानीयकृत न्यूरोपैप्टाइड्स से जुड़े होते हैं। चूंकि मर्केल कोशिकाओं में बॉम्बेसिन, वासोएक्टिव आंतों के पॉलीपेप्टाइड्स, तंत्रिका विकास कारक और मेट-एनकेफेलिन होते हैं, इसलिए उनका त्वचा के उपांगों और नसों के बढ़ने पर एक ट्रॉफिक प्रभाव होता है।

सिस्टैन्च एंटी-एजिंग कर सकता है

सेल संस्कृतियों को सर्कुलर फेसलिफ्ट ऑपरेशन (1973,1971 और 1967 में पैदा हुई महिलाओं) के दौरान प्राप्त वयस्क त्वचा के नमूनों से निकाला गया था। सेंट-पीटर्सबर्ग इंस्टीट्यूट ऑफ बायोरेग्यूलेशन एंड जेरोन्टोलॉजी की एथिक्स कमेटी ने अध्ययन डिजाइन के सभी पहलुओं को मंजूरी दी, और सभी प्रतिभागियों से लिखित सहमति प्राप्त हुई। अध्ययन हेलसिंकी नैतिक सिद्धांतों की घोषणा के अनुसार आयोजित किया गया था। आयु मार्करों की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करने के लिए, केराटिनोसाइट्स और फ़ाइब्रोब्लास्ट की मिश्रित संस्कृति के लिए 2 ("युवा" कोशिकाओं) और मार्ग 6 ("पुरानी" कोशिकाओं) को पारित करने के लिए संवर्धन किया गया था, और समृद्ध संस्कृति के लिए 1 और मार्ग 3 को पारित करने के लिए किया गया था। मर्केल कोशिकाएं। संस्कृति में मर्केल कोशिकाओं और केराटिनोसाइट्स को बनाए रखने में कठिनाई और उनकी सीमित प्रसार क्षमता के कारण इन चौकियों का चयन किया गया था।

Hyaluronic एसिड भराव Y (HA-Y) (1.4 MDa गैर-क्रॉस-लिंक्ड HA का 2.3 प्रतिशत जलीय घोल जिसमें आर्जिनिन, वेलिन, थ्रेओनीन, फेनिलएलनिन, ग्लाइसिन, ग्लूटामिक एसिड, प्रोलाइन और मेथियोनीन शामिल हैं); और हयालूरोनिक एसिड फिलर एस (एचए-एस) (1.4 एमडीए गैर-क्रॉस-लिंक्ड एचए का 2.3 प्रतिशत जलीय घोल जिसमें आर्गिनिन, वेलिन, थ्रेओनीन, फेनिलएलनिन, ग्लाइसिन, ग्लूटामिक एसिड, प्रोलाइन और मेथियोनीन शामिल हैं)। एजेंट को मार्ग 1 से शुरू किया गया था। हा भराव के विश्लेषण के लिए इष्टतम एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए, एक प्रारंभिक खुराक-खोज प्रयोग किया गया था।सिस्टैंच क्या है?सेल व्यवहार्यता माप के अनुसार एचए फिलर का 3 प्रतिशत पांच सांद्रता से चुना गया था। एजेंट को प्रत्येक मार्ग पर प्रशासित किया गया था।

अध्ययन में 3 समूह शामिल थे:

1-नियंत्रण समूह (मध्यम=हयालूरोनिक एसिड);2-HA-Y का प्रशासन; 3-एचए-एस का प्रशासन।

इम्यूनोसाइटोकेमिकल विश्लेषण

एक इम्यूनोसाइटोकेमिकल जांच के लिए निम्नलिखित प्राथमिक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग किया गया था: टाइप I कोलेजन (1:150, Abcam), इलास्टिन (1:50, Abcam), AP -1 (1:200, सिग्मा), क्लोथो (1: 250, Abcam), MTH-1 (1:1000, Abcam), मेलाटोनिन रिसेप्टर 1A (1:200, Abcam), मेलाटो-निन रिसेप्टर 1B (1:100, Abcam), घड़ी (1:100, Abcam) ), साइटोकैटिन 20 (1:150, डको)। Alexa Fluor 488 और 647(1:1000, Abcam) के साथ संयुग्मित द्वितीयक एंटीबॉडी का उपयोग इम्यूनोफ्लोरेसेंट माइक्रोस्कोपी के लिए किया गया था। एक ओलिंप FV 1000 माइक्रोस्कोप (जापान) का उपयोग करके कन्फोकल माइक्रोस्कोपी किया गया था।

चूंकि जांच का संबंध अद्वितीय त्वचीय मर्केल कोशिकाओं से था, इसलिए संस्कृति में इन कोशिकाओं के एक सबपो-पुलेशन के अस्तित्व की पुष्टि करने के लिए, हमने एक विशेष मार्कर साइटोकैटिन -20 का उपयोग किया। हमने साइटोकैटिन -20 (हरी प्रतिदीप्ति) और एंटीबॉडी को क्लोथो (लाल प्रतिदीप्ति) में एंटीबॉडी का उपयोग करके डबल लेबलिंग की विधि लागू की। अभिव्यक्ति के क्षेत्र की गणना मर्केल कोशिकाओं के संबंध में की गई थी जो सीके -20 कोशिकाओं के प्रतिरक्षी थे।

वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

सभी कोशिकाओं को प्रोटीज इनहिबिटर कॉकटेल (थर्मो फिशर, यूएसए) युक्त उप-कोशिकीय प्रोटीन भिन्नात्मक किट के साथ बर्फ पर lysed किया गया था। प्रोटीन lysates को सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (SDS-PAGE) द्वारा अलग किया गया था, और नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली (Invitrogen, USA) में स्थानांतरित कर दिया गया था। )

झिल्ली को एक वाणिज्यिक सेट iBindTM सॉल्यूशन किट (Invitrogen, USA) के साथ अवरुद्ध किया जाता है और फिर 2 घंटे के लिए डिवाइस iBind (Invitrogen, USA) का उपयोग करके प्राथमिक और द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ इनक्यू-बेट किया जाता है। इस अध्ययन में एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया गया था जिसमें खरगोश विरोधी क्लोथो (1:1000, एबकैम), खरगोश विरोधी एपी -1 (1:500, सिग्मा), खरगोश विरोधी - - एक्टिन (1: 5000, एबकैम) शामिल थे। ) और हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज- (HRP-) संयुग्मित द्वितीयक एंटीबॉडी (खरगोश विरोधी IgG; 1:10000; Invitrogen)। प्रत्येक बैंड की तीव्रता iBright Analysis Software (Invitrogen) द्वारा निर्धारित की गई थी।

प्रयोगात्मक डेटा के सांख्यिकीय विश्लेषण में प्रत्येक नमूने के लिए अंकगणितीय औसत, मानक विचलन और विश्वास अंतराल की गणना शामिल थी। समूहों की तुलना मान-व्हिटनी यू-मानदंड का उपयोग करके की गई थी।

एचए-आधारित फिलर गेरोप्रोटेक्टिव गुणों की इन विट्रो जांच के परिणाम

मर्केल कोशिकाओं से समृद्ध मानव त्वचा संस्कृति पर किए गए जांच के परिणाम

खेती के लंबे समय के साथ, CK-20 लेबल वाली कोशिकाओं का रूप 3-8 दिनों में गोलाकार से अधिक चपटा और वृक्ष के समान हो गया। खेती की शुरुआत के 8 दिनों के बाद, मेर्केल कोशिकाओं ने एपोप्टोसिस के लिए विशिष्ट परमाणु विघटन के कोई संकेत नहीं दिखाए।

नियंत्रण समूह (प्रशासित हयालूरोनिक एसिड के साथ) में क्लोथो मार्कर की अभिव्यक्ति के लिए मॉर्फोमेट्रिक विश्लेषण डेटा के सांख्यिकीय प्रसंस्करण ने मार्ग 1 और 3 के बीच कोई अंतर नहीं दिखाया। मार्ग 1 पर HA-S के प्रशासन-प्रशासन के साथ अभिव्यक्ति का क्षेत्र 5.28±0.74 प्रतिशत था, जबकि मार्ग 3 पर यह लगभग दोगुना होकर 9.23±0.89 प्रतिशत हो गया। इसी तरह की तस्वीर HA-Y के प्रशासन के साथ समूह में देखी गई, जहां उम्र बढ़ने के साथ क्लोथो की अभिव्यक्ति 2 गुना बढ़ गई। इस प्रकार, HA-Y और HA-S ने मानव त्वचा केराटिनोसाइट्स और मर्केल कोशिकाओं की मिश्रित संस्कृति की उम्र बढ़ने के मामले में क्लोथो की अभिव्यक्ति को सक्रिय किया।

एक अन्य सिग्नलिंग अणु जो उम्र बढ़ने को रोकता है वह मेलाटोनिन (एमटी) है।एंटी एजिंग सिस्टैन्चमेलाटोनिन की एक महत्वपूर्ण विशेषता कोशिका विभाजन को नियंत्रित करने की इसकी क्षमता है। एमटी विभाजन मेटाफ़ेज़ में देरी करके सेल माइटोसिस को रोकता है।

हमने मेलाटोनिन रिसेप्टर्स की अभिव्यक्ति का भी अध्ययन किया। सुसंस्कृत कोशिकाओं में HA-S और HA-Y दोनों को जोड़ने पर मेलाटोनिन रिसेप्टर 1A मार्कर की अभिव्यक्ति के क्षेत्र में सांख्यिकीय रूप से वैध वृद्धि हुई थी।

मेलाटोनिन रिसेप्टर 1ए मार्कर की अभिव्यक्ति को दर्शाने वाले माइक्रोफोटोग्राफ नीचे दिए गए हैं (चित्र 1)। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि लाल प्रतिदीप्ति न केवल मर्केल कोशिकाओं में बल्कि केराटिनोसाइट्स में भी देखी गई थी, हालांकि यह मेर्केल कोशिकाओं में अधिक व्यक्त की गई थी, जिसमें त्वचा के उपांगों और तंत्रिकाओं के बढ़ने पर एक ट्रॉफिक क्रिया थी।

मेलाटोनिन रिसेप्टर्स 1 बी की अभिव्यक्ति के सापेक्ष क्षेत्र के संबंध में डेटा के विश्लेषण से पता चला है कि मार्ग 1 पर नियंत्रण समूह और एचए-वाई / एचए-एस प्रशासन समूह के बीच कोई सांख्यिकीय रूप से मान्य अंतर नहीं थे, जबकि मार्ग 3 पर रिश्तेदार मानव फाइब्रोब्लास्ट और केराटिनोसाइट्स की मिश्रित संस्कृति पर किए गए जांच के परिणामों के साथ रिसेप्टर मेलआरआईबी के अभिव्यक्ति क्षेत्र में 4 प्रतिशत की वृद्धि हुई

जांच का अगला चरण मानव फ़ाइब्रोब्लास्ट और केराटिनोसाइट्स की मिश्रित संस्कृति पर नई HA-Y और HA-S दवाओं के geroprotec-tive गुणों का परीक्षण था। जांच के लिए निम्नलिखित इम्यूनोहिस्टोकेमिकल मार्करों का चयन किया गया: इलास्टिन, क्लोथो, एमटीएच 1, एपी -1, घड़ी (तालिका 1 में डेटा)।

सेल सिंथेटिक गतिविधि की जांच के लिए इलास्टिन के एंटीबॉडी का उपयोग किया गया था। फोटोएज्ड त्वचा के लिए लोचदार फाइबर में परिवर्तन सबसे अधिक विशेषता है।

सामान्य स्थिति (नियंत्रण समूह) में, त्वचा संस्कृति उम्र बढ़ने के साथ, मानव त्वचा फाइब्रोब्लास्ट द्वारा इलास्टिन की अभिव्यक्ति में कमी देखी गई। HA-Y और HA-S के प्रशासन वाले समूहों में एक समान तस्वीर देखी गई, फिर भी HA-Y और HA-S के साथ "युवा" सेल संस्कृतियों में इलास्टिन मार्कर की अभिव्यक्ति नियंत्रण नमूनों में अभिव्यक्ति से अधिक हो गई {{ 4}}.17 और 0.26 बार, क्रमशः। एचए-वाई और एचए-एस के साथ "पुरानी" सेल संस्कृतियों के नमूनों के लिए इलास्टिन अभिव्यक्ति के क्षेत्र में सांख्यिकीय रूप से वैध वृद्धि क्रमशः {{1 0}} .14 और 0.19 गुना थी। नियंत्रण नमूनों के साथ तुलना।

मानव त्वचा फ़ाइब्रोब्लास्ट्स और केराटिनोसाइट्स की मिश्रित संस्कृति में HA-Y और S की क्रिया कोशिकाओं की सिन-थेटिक गतिविधि को ट्रिगर करती है, जो मार्ग 3 और मार्ग 6 (चित्र 2) दोनों में इलास्टिन की उच्च अभिव्यक्ति से प्रकट होती है।

एपी {0}} या उत्प्रेरक प्रोटीन -1 एक प्रतिलेखन कारक है जो विभिन्न उत्तेजनाओं के जवाब में जीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है। इस तरह की उत्तेजनाओं में साइटोकिन्स, वृद्धि कारक, तनाव और विभिन्न जीवाणु और वायरल संक्रमण शामिल हैं। '6 इस अध्ययन ने "युवा" सेल संस्कृतियों की तुलना में "पुरानी" सेल संस्कृतियों के नियंत्रण नमूनों में एपी -1 के औसत अभिव्यक्ति क्षेत्र में सांख्यिकीय रूप से वैध वृद्धि का प्रदर्शन किया; जबकि प्रायोगिक समूहों में, संस्कृति की उम्र बढ़ने के साथ एपी -1 मार्कर की अभिव्यक्ति में 0 की कमी देखी गई। HA-Y के मामले में 2 गुना और HA-S के मामले में 0.24 गुना , नियंत्रण समूह की तुलना में।

HA-Y और HA-S के साथ "पुरानी" सेल संस्कृतियों के नमूनों के लिए 0.1{{12 नियंत्रण नमूनों की तुलना में }} और 0.11 गुना, क्रमशः। "पुरानी" संस्कृतियों में MTH-1 की उच्च अभिव्यक्ति पेरोक्साइड (H2O2) प्रदान करती है। मानव फाइब्रोब्लास्ट और केराटिनोसाइट्स की मिश्रित संस्कृति में रिश्तेदार क्लोथो अभिव्यक्ति क्षेत्र के विश्लेषण से एचए-वाई और एचए-एस के साथ "पुरानी" सेल संस्कृतियों में क्लोथो अभिव्यक्ति के औसत क्षेत्र में क्रमशः 0.72 और 0.73 गुना वृद्धि हुई है। , नियंत्रण नमूनों की तुलना में। पश्चिमी धब्बा विश्लेषण द्वारा इन परिणामों की पुष्टि की गई। प्रोटीन अभिव्यक्ति में वही मोड था जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है। HA-Y और HA-S की कार्रवाई के तहत क्लोथो की उच्च अभिव्यक्ति ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रतिरोध में वृद्धि का प्रमाण प्रदान करती है, जो विशेष रूप से उम्र बढ़ने और यूवी जोखिम के तहत प्रोफिलैक्सिस के लिए महत्वपूर्ण है। .

एक इम्यूनोसाइटोकेमिकल विश्लेषण करके, फाइब्रोब्लास्ट साइटोप्लाज्म में CLOCK मार्कर की कल्पना की गई थी। उम्र बढ़ने वाले फ़ाइब्रो-ब्लास्ट सेल संस्कृति में नियंत्रण नमूनों में सापेक्ष क्लॉक अभिव्यक्ति क्षेत्र में सांख्यिकीय रूप से वैध कमी थी, जबकि सेल संस्कृतियों में HA-Y और HA-S जोड़ने के मामले में, "छोटी" और "पुरानी" संस्कृतियों के बीच का अंतर समतल किया गया। यह भी पाया गया कि HA-Y के साथ माध्यम में फ़ाइब्रोब्लास्ट की खेती में, नियंत्रण समूह की तुलना में 60 से 1.9 गुना के सापेक्ष अभिव्यक्ति क्षेत्र में वृद्धि हुई थी। HA-S का फ़ाइब्रोब्लास्ट कल्चर पर निम्नलिखित प्रभाव पड़ा: इसके प्रशासन ने CLOCK की अभिव्यक्ति को मार्ग 3 पर 1.5 गुना और मार्ग 6 पर 2 गुना बढ़ा दिया।

बहस

"सौंदर्य चिकित्सा में नकली उत्पाद: डॉक्टर और उपभोक्ता का एक दृष्टिकोण" (2019, Merz रूस और ब्रांड मॉनिटर की भागीदारी के साथ आयोजित) शीर्षक के अध्ययन के अनुसार, नकली सामानों की तस्करी का अनुमान विशेषज्ञों द्वारा 200 मिलियन अमेरिकी डॉलर है। नकली उत्पादों का मतलब न केवल निर्माताओं के लिए नुकसान है, बल्कि स्वास्थ्य के लिए अपूरणीय क्षति हो सकती है। इसलिए, बेल्जियम और रूस में अग्रणी प्रयोगशालाओं में परीक्षण किए गए एक नए रूसी इंजेक्शन रिवाइटलाइज़र को लॉन्च करना महत्वपूर्ण है।

वर्तमान कार्य में जांचे गए मार्करों की नीचे सूचीबद्ध विशेषताओं में जीरोप्रोटेक्टिव प्रभाव, त्वचीय होमियोस्टेसिस पर उनका प्रभाव और HA-Y और HA-S तैयारियों से प्रेरित उनकी अभिव्यक्ति में परिवर्तन शामिल हैं।

एचए-फिलर्स का प्रशासन मेर्केल कोशिकाओं और केराटिनोसाइट्स की संस्कृति में क्लोथो प्रोटीन की अभिव्यक्ति को बढ़ाता है। चूंकि यह प्रोटीन ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रतिरोध को बढ़ाता है और कोशिका चक्र को नियंत्रित करता है, इसकी उच्च अभिव्यक्ति सेल संस्कृति में उम्र बढ़ने की प्रक्रिया को धीमा करने वाला एक अनुकूल कारक है। क्लोथो एक ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन है, इसकी अधिकता से कोशिकाओं का जीवनकाल बढ़ जाता है। नॉकआउट चूहों में इस प्रोटीन की अनुपस्थिति उनके त्वरित उम्र बढ़ने का कारण बनती है। क्लोथो के कार्यों का वर्णन करने वाले अधिकांश कार्य तंत्रिका, संवहनी और नेफ्रिटिक प्रणालियों के विभिन्न आयु-संबंधित विकृति को दबाने के तंत्र-इसमें इस प्रोटीन की भूमिका की जांच करते हैं। फाइब्रोब्लास्ट की उम्र बढ़ने पर इसके प्रभाव के बारे में, इन विट्रो प्रयोगों ने प्रदर्शित किया है कि डीएनए क्षति के मामले में क्लोथो प्राथमिक मानव फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं एमआरसी -5 में एपोप्टोटिक मार्ग (पी 53 / {{8) में कोशिका उम्र बढ़ने की मंदता में योगदान देता है। }}आश्रित)।" प्री-मैरी फ़ाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं MRC -5 में क्लोथो गतिविधि के नुकसान से समय से पहले बूढ़ा होने का फेनोटाइप हो जाता है, जो p53 प्रोटीन पर निर्भर करता है-बाद के p -53- आश्रित CDK कारक p21। यह परिणाम p53/p21-संवेदनशील पथ-मार्ग के माध्यम से उम्र बढ़ने की प्रक्रिया में क्लोथो की भागीदारी की ओर इशारा करता है। ऊपर से यह इस प्रकार है कि HA-Y और HA-S की क्रिया के तहत Klotho अभिव्यक्ति सक्रियण कोशिकाओं को समय से पहले बूढ़ा होने से बचा सकता है।

यह प्रदर्शित किया गया है कि HA-Y और HA-S का मर्केल कोशिकाओं और केराटिनो-साइटों की संस्कृति में lA और 1B प्रकार के मेलाटोनिन के रिसेप्टर्स की अभिव्यक्ति पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। HA-Y ने उम्र बढ़ने की संस्कृति में HA-S से कहीं अधिक मेल-एटोनिन 1B के लिए रिसेप्टर की अभिव्यक्ति को प्रेरित किया। मेलाटोनिन एक शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट है। मेलाटोनिन का प्रत्यक्ष एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव कोशिका गतिविधियों के दौरान बनने वाले मुक्त कणों की निष्क्रियता के माध्यम से महसूस किया जाता है। इसके अलावा, सेल एंटीऑक्स-आइडेंट एंजाइमों के संश्लेषण को उत्तेजित करके, यह हार्मोन परमाणु डीएनए को मुक्त-कट्टरपंथी ऑक्सीकरण से बचाता है।

प्रयोगशाला जानवरों पर कई अध्ययनों से पता चला है कि मेलाटोनिन में एक एंटीनोप्लास्टिक, ऑन्कोस्टेटिक क्रिया होती है। एक प्रयोग में, पीनियल ग्रंथि के कार्य की सक्रियता या मेलाटोनिन के बहिर्जात प्रशासन ने ट्यूमर की घटना दर को कम किया, जबकि पाइनएलेक्टोमी का ट्यूमर के विकास पर उत्तेजक प्रभाव पड़ा। "

अन्य सभी हार्मोनों की तरह, मेलाटोनिन 2 प्रकार के विशेष रिसेप्टर्स के माध्यम से अपना प्रभाव पैदा करता है: मेलाटोनिन रिसेप्टर्स 1 ए (मेलआरआईए) और मेलाटोनिन रिसेप्टर्स 1 बी (मेलआरआईबी)।लाभार्थीMelRIA और MelRIB पाए गए हैं और पूरी तरह से रेटिना, सुप्राचैस्मैटिक न्यूक्लियस, मायोम-ट्रियम, प्लेसेंटा, ग्रैनुलोसा और कॉर्पस ल्यूटियम कोशिकाओं, प्रतिरक्षा कोशिकाओं, जठरांत्र संबंधी मार्ग और त्वचा में पाए गए हैं।

मानव त्वचा कोशिकाओं की मिश्रित संस्कृति में HA-Y और HA-S की क्रिया कोशिकाओं की सिंथेटिक गतिविधि को ट्रिगर करती है, जो इन दवाओं के प्रशासन के साथ "छोटी" और "पुरानी" संस्कृतियों में इलास्टिन की उच्च अभिव्यक्ति से प्रमाणित होती है। . इलास्टोसिस इलास्टिन सामग्री के बढ़े हुए जमाव के साथ त्वचीय ऊतक में अपक्षयी परिवर्तन को संदर्भित करता है। इसका एक स्पष्ट संकेत इलास्टोसिस है - यानी अनाकार इलास्टिन सामग्री की विधानसभाओं की उपस्थिति। सूर्य की किरणों के अलावा, इलास्टिन फाइबर तंत्रिका, अंतःस्रावी और प्रतिरक्षा प्रणाली के कामकाज और चयापचय में परिवर्तन से प्रभावित हो सकते हैं। इस प्रकार, महिला सेक्स हार्मोन (एस्ट्रोजेन) त्वचा की दृढ़ता और लोच बनाए रखने में योगदान करते हैं, कोलेजन, इलास्टिन फाइबर और हाइलूरोनिक एसिड के फाइब्रोब्लास्ट द्वारा संश्लेषण को उत्तेजित करते हैं। रजोनिवृत्ति के दौरान महिलाओं में एस्ट्रोजेन के स्तर में अचानक कमी के परिणामस्वरूप त्वचा में निर्जलीकरण और झुर्रियों का निर्माण हो सकता है। उसी समय, उम्र बढ़ने के साथ, विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स के उत्पादन में वृद्धि होती है, जो कोलेजन, इलास्टिन और अन्य त्वचा तत्वों के क्षरण के कारण भड़काऊ परिवर्तन का कारण बन सकती है।

उम्र बढ़ने के साथ AP-1 अभिव्यक्ति मार्कर बढ़ता गया, जबकि HA-Y और HA-S के प्रभाव में यह "युवा" संस्कृति के स्तर तक कम हो गया। एपी -1 साइक्लिन डीएल, साइक्लिन ए, साइक्लिन ई, पी53, पी21 सीआईपीएल, पीएल6इंक4ए और पी19एआरएफ जैसे सेल साइकल रेग्युला-टॉर्स की अभिव्यक्ति और कार्य को नियंत्रित कर सकता है, जिससे सेल प्रसार प्रक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है।

यह पाया गया है कि एपी-1 फोटो-गिंग के दौरान कोलेजन प्रकार I के संश्लेषण को कम करने की प्रक्रियाओं में शामिल है। यह इस प्रकार होता है: सूर्य का यूवी विकिरण प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) को उत्पन्न करता है, जो त्वचा के फाइब्रो-ब्लास्ट पर साइटोकिन्स के विकास कारक और रिसेप्टर्स को सक्रिय करता है। सक्रिय रिसेप्टर्स p38 और JNK को उत्तेजित करते हैं; MAPK सिग्नलिंग कैस्केड सदस्य और c-Fos और c-Jun फिर AP बनाने के लिए गठबंधन करते हैं -1 जो मैट्रिक्स मेटल-लोप्रोटीनेज (MMP) ट्रांसक्रिप्शन (MMP) को उत्तेजित करता है। 18 MTH की उच्च अभिव्यक्ति { {10}} "पुरानी" संस्कृतियों में एचए-एस और एचए-वाई की कार्रवाई के तहत प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के खिलाफ रक्षा तंत्र को सक्रिय करने का प्रमाण प्रदान करता है जो उम्र बढ़ने के साथ जमा हो रही हैं।

वर्तमान में, ऐसे कुछ अध्ययन हैं जो MTH-1 को उम्र बढ़ने के मार्कर के रूप में जांचते हैं। चूंकि इस एंजाइम का कार्य ऑक्सीकृत प्यूरीन का हाइड्रोलिसिस है, यह सीधे प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के माध्यम से उम्र बढ़ने के नियमन में शामिल है। MTH-1 पर अधिकांश अध्ययन इसी से निपटते हैं। योशिमुरा एट ऑल" ने मानव फाइब्रोब्लास्ट संस्कृति पर प्रदर्शित किया है कि एमटीएच-1 पेरोक्साइड (H2O2) के साथ ऑक्सीडा-टियन के कारण होने वाले डीएनए क्षति को बहाल कर सकता है।

The Clock marker expression was higher in a mixed culture of fibroblasts and keratinocytes when adding HA-Y to the medium. This marker regulates cell metabolism, being a kind of "intracellular clock" that regulates the activities of the cell.>इस तरह की वृद्धि ने फाइब्रोब्लास्ट संस्कृतियों और बड़े पैमाने पर जीव दोनों के जीवन विस्तार में योगदान दिया।

मानव त्वचा कोशिकाओं में घड़ी और पर्ल जीन की अभिव्यक्ति, जैसे कि केराटिनोसाइट्स, मेलानोसाइट्स, और त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट, उसमें सर्कैडियन लय की उपस्थिति की पुष्टि करते हैं। 20 सर्कैडियन लय जीवित जीवों के अनुकूली तंत्र हैं, जो दिन और रात के विकल्प से जुड़े होते हैं। जिसका मुख्य उद्देश्य चयापचय विनियमन है। अध्ययनों ने विभिन्न प्रकार की त्वचा कोशिकाओं में सर्कैडियन लय की तुलना की है और निष्कर्ष निकाला है कि त्वचा न केवल केंद्रीय सुप्राचैस्मैटिक न्यूक्लियस क्लॉक के प्रभाव में है, बल्कि प्रत्येक प्रकार की कोशिकाओं (केराटिनोसाइट्स, मेलानोसाइट्स, और फाइब्रोब्लास्ट्स)।2

CLOCK प्रोटीन सेल आसंजन से जुड़े ICAM-I, VCAM-I, और CCL-2 जीन की अभिव्यक्ति को विनियमित करने में शामिल है। 22 उम्र बढ़ने पर CLOCK प्रोटीन की कमी के प्रभाव का चूहों में अध्ययन किया गया है। केंद्रीय घड़ी में सर्कैडियन रिदम का कार्य बंद नहीं हुआ, क्योंकि क्लॉक ट्रांसक्रिप्शन कारक को एनपीएएस 2 से बदला जा सकता है, लेकिन परिधीय भागों में ऐसा प्रतिस्थापन असंभव है। ' इस बात पर जोर दिया जाना चाहिए कि त्वचा भी एक परिधीय अंग है।

निष्कर्ष

प्राप्त परिणामों से संकेत मिलता है कि हयालूरो-निक एसिड फेशियल फिलर के साथ उपचार एंटी-एजिंग मार्करों की अभिव्यक्ति को प्रभावित करता है और इस प्रकार उनका हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभाव होता है। सेल कल्चर परीक्षण सिंथेटिक गतिविधि की सक्रियता दिखाते हैं, त्वचा कोशिकाओं के एंटीऑक्सीडेंट गुणों में वृद्धि करते हैं, और HA फिलर्स Novacutan®）.R के प्रभाव से कोशिकाओं की समय से पहले उम्र बढ़ने से सुरक्षा प्रदान करते हैं।

यह लेख क्लिनिकल, कॉस्मेटिक और इन्वेस्टिगेशनल डर्मेटोलॉजी से निकाला गया है