स्पर्मिडाइन ऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर और माइटोकॉन्ड्रियल गुणवत्ता नियंत्रण भाग 1 को नियंत्रित करके चूहों में अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया-प्रेरित नवजात मायोकार्डियल माइटोकॉन्ड्रियल क्षति को कम करता है।

अमूर्त

पृष्ठभूमि: अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया (IUH) से संतानों में हृदय रोगों का खतरा बढ़ जाता है। एक प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) स्वेवेंजर के रूप में, पॉलीमाइन स्पर्मिडाइन (एसपीडी) भ्रूण और भ्रूण के अस्तित्व और विकास के लिए आवश्यक है। हालाँकि, एसपीडी सुरक्षा और संतानों में आईयूएच-प्रेरित हृदय क्षति के तंत्र पर आगे के अध्ययन की आवश्यकता है।

सिस्टैंच का ग्लाइकोसाइड हृदय और यकृत के ऊतकों में एसओडी की गतिविधि को भी बढ़ा सकता है, और प्रत्येक ऊतक में लिपोफसिन और एमडीए की सामग्री को काफी कम कर सकता है, विभिन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन रेडिकल्स (ओएच-, एच₂ओ₂, आदि) को प्रभावी ढंग से हटा सकता है और डीएनए क्षति से बचा सकता है। ओएच-रेडिकल्स द्वारा। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में मुक्त कणों की एक मजबूत सफाई क्षमता होती है, विटामिन सी की तुलना में उच्च कम करने की क्षमता होती है, शुक्राणु निलंबन में एसओडी की गतिविधि में सुधार होता है, एमडीए की सामग्री कम होती है, और शुक्राणु झिल्ली समारोह पर एक निश्चित सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड डी-गैलेक्टोज के कारण प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों के एरिथ्रोसाइट्स और फेफड़ों के ऊतकों में एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, साथ ही फेफड़ों और प्लाज्मा में एमडीए और कोलेजन की सामग्री को कम कर सकते हैं और इलास्टिन की सामग्री को बढ़ा सकते हैं। डीपीपीएच पर एक अच्छा सफाई प्रभाव, वृद्ध चूहों में हाइपोक्सिया का समय बढ़ाना, सीरम में एसओडी की गतिविधि में सुधार करना, और प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों में फेफड़ों के शारीरिक अध: पतन में देरी करना, सेलुलर रूपात्मक अध: पतन के साथ, प्रयोगों से पता चला है कि सिस्टैंच में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है और त्वचा की उम्र बढ़ने वाली बीमारियों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए एक दवा बनने की क्षमता रखती है। साथ ही, सिस्टैंच में इचिनाकोसाइड में डीपीपीएच मुक्त कणों को साफ़ करने की एक महत्वपूर्ण क्षमता है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को साफ़ करने और मुक्त कट्टरपंथी-प्रेरित कोलेजन गिरावट को रोकने की क्षमता है, और थाइमिन मुक्त कट्टरपंथी आयन क्षति पर भी अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ता है।

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उद्देश्य: इस अध्ययन का उद्देश्य नवजात चूहों में आईयूएच-प्रेरित हृदय क्षति और इसके अंतर्निहित माइटोकॉन्ड्रियल-संबंधी तंत्र पर प्रसव पूर्व एसपीडी उपचार के निवारक प्रभावों की जांच करना है।

तरीकों: IUH का चूहा मॉडल अवधि से सात दिन पहले 10 प्रतिशत O2 के संपर्क में आने से स्थापित किया गया था। इस बीच, सात दिनों तक, गर्भवती चूहों को एसपीडी (5 mg.kg-1.d-1; ip) दिया गया। विकास विकास, हृदय क्षति, कार्डियोमायोसाइट्स प्रसार, मायोकार्डियल ऑक्सीडेटिव तनाव, सेल एपोप्टोसिस और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन सहित कई मापदंडों का आकलन करने के लिए एक दिवसीय संतान चूहों की बलि दी गई और माइटोकॉन्ड्रियल गुणवत्ता नियंत्रण (एमक्यूसी) किया गया, जिसमें माइटोफैगी, माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस और शामिल हैं। माइटोकॉन्ड्रियल संलयन/विखंडन। इन विट्रो प्रयोगों में, प्राथमिक कार्डियोमायोसाइट्स को 24 घंटों के लिए एसपीडी के साथ या उसके बिना हाइपोक्सिया के अधीन किया गया था।

परिणाम: IUH ने शरीर के वजन, हृदय के वजन, कार्डियक Ki67 अभिव्यक्ति, SOD की गतिविधि, और CAT और एडेनोसिन 5'- ट्राइफॉस्फेट (ATP) के स्तर को कम किया और BAX/BCL2 अभिव्यक्ति और TUNEL-पॉजिटिव नाभिक संख्या में वृद्धि की। इसके अलावा, IUH ने माइटोकॉन्ड्रियल संरचना में असामान्यता, शिथिलता और माइटोफैगी में कमी (माइटोफैगोसोम की संख्या में कमी), माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस में गिरावट (एसआईआरटी की अभिव्यक्ति में कमी, पीजीसी, एनआरएफ, सात%) का भी कारण बना। टीएफएएम), और मायोकार्डियम में विखंडन/संलयन असंतुलन (माइटोकॉन्ड्रियल टुकड़ों का प्रतिशत बढ़ा, डीआरपी1 अभिव्यक्ति में वृद्धि, और एमएफएन2 अभिव्यक्ति में कमी) का कारण बना। आश्चर्यजनक रूप से, एसपीडी उपचार ने आईयूएच-प्रेरित मापदंडों में भिन्नता को सामान्य कर दिया। इसके अलावा, एसपीडी ने हाइपोक्सिया-प्रेरित आरओएस संचय, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली संभावित क्षय और कार्डियोमायोसाइट्स में माइटोफैगी कमी को भी रोका।

निष्कर्ष: मातृ एसपीडी उपचार ने एंटी-ऑक्सीडेशन और एंटी-एपोप्टोसिस के माध्यम से मायोकार्डियल माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में सुधार और एमक्यूसी को विनियमित करके नवजात संतान चूहों में आईयूएच-प्रेरित हृदय क्षति का कारण बना।

1। पृष्ठभूमि

महामारी विज्ञान और पशु अध्ययनों से संकेत मिलता है कि एक सलाह अंतर्गर्भाशयी वातावरण वयस्कता में हृदय रोगों के बढ़ते जोखिम से जुड़ा है (1)। प्रसवपूर्व हाइपोक्सिया, सबसे आम प्रतिकूल अंतर्गर्भाशयी वातावरण, भ्रूण को आनुवंशिक रूप से निर्धारित विकास क्षमता का एहसास करने में असमर्थ बना सकता है, जो कि ऑफ-स्प्रिंग (2) में विकास मंदता और अंग कार्य की चोट के रूप में प्रकट होता है। क्रोनिक भ्रूण हाइपोक्सिया अक्सर गर्भावस्था से उत्पन्न होता है जिसमें प्लेसेंटल संवहनी प्रतिरोध में वृद्धि होती है जैसे कि प्री-क्लैम्पसिया, उच्च ऊंचाई पर अंतर-गर्भावस्था, या मातृ श्वसन रोग। अधिक महत्वपूर्ण बात यह है कि उनमें से एक तिहाई देर से गर्भावस्था में ऑब्सट्रक्टिव स्लीप एपनिया हाइपोवेंटिलेशन सिंड्रोम (ओएसएएचएस) से प्रभावित होते हैं, और यह जेस्टेशनल हाइपरटेंशन सिंड्रोम के विकास से भी जुड़ा होता है। सबसे महत्वपूर्ण पैथोफिजियोलॉजिकल परिवर्तनएसएएचएस क्रोनिक आंतरायिक हाइपोक्सिया (3, 4) है। कई पशु मॉडलों में, अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिक (आईयूएच) से हृदय की कार्यक्षमता में कमी, डायस्टोलिक और सिस्टोलिक शिथिलता, हाइपरट्रॉफिक वृद्धि, कार्डियोमायोसाइट प्रसार में कमी, और भ्रूण और नवजात हृदय में कार्डियोमायोसाइट परिपक्वता में देरी होती है, जिससे वयस्क संतानों में हृदय विकारों का खतरा बढ़ जाता है ( 5). क्रोनिक हाइपोक्सिया का प्रोग्रामिंग प्रभाव मुख्य रूप से हृदय के विकास के महत्वपूर्ण चरणों में तंत्र की व्याख्या कर सकता है, जिससे कार्डियक ऑक्सीडेटिव तनाव में वृद्धि होती है और संतानों में सेल एपोप्टोसिस में वृद्धि होती है (6-9)। विकासात्मक प्रोग्रामिंग की अवधारणा समझ में आती है क्योंकि प्रारंभिक जीवन के दौरान हमारा शरीर विज्ञान बहुत अधिक लचीला और लचीला होता है। अंतर्गर्भाशयी स्थिति हमारे जीवन के शरीर विज्ञान और चयापचय की अवधारणाओं को निर्धारित और प्रोग्राम करती है। तदनुसार, आईयूएच के प्रति भ्रूण की अनुकूली प्रतिक्रिया से वयस्क हृदय रोगों का विकास होता है (10)। माइटोकॉन्ड्रिया जटिल अंग हैं जो सेलुलर ऊर्जा-उत्पादन और असंख्य सेलर सिग्नलिंग घटनाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। माइटोकॉन्ड्रिया की संरचनात्मक और कार्यात्मक अखंडता कार्डियोमायोसाइट्स के अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण है, और जब समझौता किया जाता है, तो माइट-होंड्रियल होमियोस्टैसिस के विघटन के परिणामस्वरूप कैरैक रोगों का विकास होता है। हाल ही में, कई अध्ययनों ने संतानों के हृदय क्षति की मध्यस्थता में क्रोनिक प्रीनेटल हाइपोक्सिया-उत्प्रेरण माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन की भूमिका पर ध्यान केंद्रित किया है। यह बताया गया है कि माइटोकॉन्ड्रियलिरेटरी फ़ंक्शन ख़राब हो गया था, और कई माइटोकॉन्ड्रियल मोल नियमों की अभिव्यक्ति ने IUH (11) के संपर्क में आने वाले प्रसवकालीन हृदय को बदल दिया। इसके अलावा, आईयूएच मायोकार्डियल इस्किमिया (12) के बाद अधिकांश संतानों में माइटोकॉन्ड्रियल कॉम्प्लेक्स एंजाइम गतिविधि और हृदय की शिथिलता को कम करता है। तदनुसार, इस अध्ययन का उद्देश्य नई संतानों में प्रसव पूर्व हाइपोक्सिया, ऑक्सीडेटिव तनाव, माइटोकॉन्ड्रियल डिस एक्शन और हृदय की चोट के बीच आणविक लिंक की खोज करना था (13)।

मायोकार्डियम में इस उच्च-मात्रा माइटोकॉन्ड्रियल प्रणाली का विकास और परिपक्वता मुख्य रूप से प्रसवकालीन और प्रसवोत्तर विकास चरणों में होती है, मुख्य रूप से जन्म के बाद एडेनोसिन 5'-ट्राइफॉस्फेट (एटीपी) पीढ़ी के लिए ग्लूकोज ओ फैटी एसिड का उपयोग करने से हृदय चयापचय में बदलाव के कारण होता है। (14). उभरते साक्ष्य से पता चलता है कि माइटोकॉन्ड्रियल गुणवत्ता नियंत्रण (एमक्यूसी) तंत्र कार्डियोमायोसाइट्स की परिपक्वता के लिए महत्वपूर्ण निर्धारक हैं (15)। माइटोकॉन्ड्रियल गुणवत्ता नियंत्रण, जिसमें मुख्य रूप से माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस, डायनेमिक्स के साथ माइटोफैगी, एक बारीक ट्यून किया गया नियामक नेटवर्क शामिल है, माइटोकॉन्ड्रिया की मात्रा और गुणवत्ता को व्यवस्थित करता है और तनाव की स्थिति में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और कार्डियोमायोसाइट अस्तित्व में सुधार करता है (16)। पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़ेरेटर्स-एक्टिवेट रिसेप्टर्स (पीपीएआर) कोएक्टीवेटर 1 (पीजीसी-1) ​​हृदय में माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस और कार्य को चलाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं (17)। पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़ेरेटर्स-सक्रिय रिसेप्टर्स कोएक्टीवेटर 1 / (-/-) चूहों के दिल परिपक्वता संबंधी दोष और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और घनत्व (18) में गंभीर असामान्यता के लक्षण प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, माइटोफैगी-मध्यस्थ पार्किन को हटाने से नवजात चरण (19) में रूपात्मक और कार्यात्मक माइटोकॉन्ड्रिया परिपक्वता को रोका जा सकता है। माइटोकॉन्ड्रिया अत्यधिक गतिशील अंग हैं, जो अपने कार्य से जुड़े निरंतर विखंडन और संलयन घटनाओं से गुजरते हैं। देर से भ्रूण की अवधि में, चूहों में एमएफएन1 और एमएफएन2 में माइटोकॉन्ड्रियल फ्यूजन प्रो का कार एसी-विशिष्ट आनुवंशिक पृथक्करण जन्म के बाद गंभीर माइटोकॉन्ड्रियल शिथिलता प्रदर्शित करता है और कार्डियोमायोपैथी (20) विकसित करता है। आश्चर्यजनक रूप से, एक हालिया अध्ययन से पता चला है कि क्रोनिक हाइपो आईए ने भ्रूण के अग्रमस्तिष्क (21) में माइटोकॉन्ड्रियल गतिशीलता को बाधित कर दिया है। तदनुसार, एमक्यूसी आईयूएच नवजात संतानों में मायोकार्डियम चोट के विकास में केंद्र बिंदु के रूप में कार्य कर सकता है। हालाँकि, नवजात हृदय MQC प्रणाली पर प्रसव पूर्व हाइपोक्सिया के प्रभाव और नवजात हृदय स्वास्थ्य पर MQC शिथिलता के प्रभाव के बारे में बहुत कम जानकारी है। इस अध्ययन ने नई संतानों में आईयूएच-प्रेरित मायोकार्डियल क्षति के माइटोकॉन्ड्रियल-संबंधित तंत्र का पता लगाने और आईयूएच की हृदय संबंधी चोट को कम करने के लिए निवारक रणनीतियों का पता लगाने के लिए इस मिशन को संभाला।

पुट्रेसिन (पीयू), स्पर्मिडीन (एसपीडी), और स्पर्मिन (एसपी) सहित पॉलीमाइन्स (पीए), लगभग सभी जीवित जीवों में मौजूद हैं और भ्रूण और भ्रूण के जीवित रहने, वृद्धि और विकास के लिए आवश्यक हैं (22-24) . अध्ययनों में पाया गया कि IUH के संपर्क में आने वाली भेड़ें बहिर्जात पॉलीमाइन्स (25, 26) को पूरक करके भ्रूण डिसप्लेसिया में सुधार कर सकती हैं। इसके अलावा, साहित्य का बढ़ता संग्रह मुक्त कणों को ख़त्म करने और डीएनए, प्रोटीन और लिपिड को ऑक्सीडेटिव तनाव के हानिकारक नुकसान से बचाने में पॉलीमाइन्स की भूमिका को इंगित करता है। यह भी पता चला है कि पॉलीमाइन अनुपूरण मॉडल जीवों में एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-इंफ्लेमेटरी और माइटोफैगी-उत्प्रेरण प्रो-ट्राईज़ (27-29) के माध्यम से जीवन काल को बढ़ाता है। हाल के अध्ययनों से पता चला है कि आहार में एसपीडी के साथ पूरक कार्डियोप्रोटेक्टिव है और माइटोफैगी और माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन को उत्तेजित करके और हृदय समारोह में सुधार करके चूहों और मनुष्यों दोनों में जीवनकाल बढ़ाता है (30, 31)। इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि हमने पहले बताया था कि भ्रूण के विकास के अंतिम चरण के दौरान मातृ हाइपोक्सिक एक्सपोज़र के परिणामस्वरूप डेज़्ड एना सूची और नवजात चूहों के कैराक ऊतक में पॉलीमाइन्स की अपचय में वृद्धि हुई है। एसपीडी ने माइटोकॉन्ड्रियल मेंशन (32) को रोककर आईयूएच के संपर्क में आने वाले वेन-डे संतान चूहों में दिल की चोट को रोका।

2. उद्देश्य

इस अध्ययन में, आईयूएच को ऑक्सीडेटिव तनाव को बढ़ाकर और नवजात संतानों के दिल में एमक्यूसी तंत्र को नष्ट करके माइटोकॉन्ड्रियल संरचना और कार्य घाटे को प्रेरित करने के लिए परिकल्पना की गई है, और गर्भाशय में मातृ एसपीडी उपचार माइटोकॉन्ड्रिया के विकास कार्यक्रम को कम करके मायोकार्डियल चोट को कम करने के लिए माना जाता है। यह अध्ययन वयस्क हृदय रोगों को रोकने के लिए IUH संतानों के लिए निवारक या चिकित्सीय रणनीतियों के विकास में योगदान दे सकता है।

3. तरीके

3.1. जानवरों

नर और मादा विस्टार चूहों (3 महीने के) को हार्बिन मेडिकल यूनिवर्सिटी के प्रयोगशाला पशु विभाग से खरीदा गया था। सभी प्रक्रियाओं को हार्बिन मेडिकल यूनिवर्सिटी (चीन) की एथिक्स रिव्यू कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया था, और सभी प्रयोग राष्ट्रीय स्वास्थ्य दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित किए गए थे। 2:1 के नर-मादा अनुपात वाले चूहों को संभोग के लिए एक पिंजरे में यादृच्छिक रूप से रखा गया था। योनि प्लग या योनि स्मीयर में शुक्राणु की उपस्थिति का पता लगाने के लिए अगले दिन योनि स्मीयर किया गया, जिसे गर्भावस्था के शून्य-दिन के रूप में पुष्टि की गई थी। गर्भवती चूहों को नियंत्रित आर्द्रता (60 प्रतिशत) और नियंत्रित तापमान (21 डिग्री) वाले कमरे में रखा गया था, और प्रकाश-अंधेरे का चक्र 12:12 घंटे था।

3.2. अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया मॉडल

गर्भावस्था के 15वें से 21वें दिन तक, हाइपोक्सिया समूह (एन=10) की चूहों को एक बंद प्लेक्सीग्लास कक्ष में रखा गया, हवा और नाइट्रोजन इंजेक्ट किया गया, और एक ऑक्सीजन विश्लेषक (प्रो ओएक्स12{{13) द्वारा निगरानी की गई। }}; बायोस्फेरिक्स, न्यूयॉर्क, यूएसए), और प्रति दिन चार घंटे तक 10 प्रतिशत ऑक्सीजन सामग्री के साथ साँस ली जाती है। धमनी रक्त के नमूने दाहिनी ऊरु धमनी से लिए गए थे, रक्त गैस और पीएच मान को धमनी ऑक्सीजन के आंशिक दबाव को 50 - 55 mmHg बनाए रखने के लिए मापा गया था, रक्त ऑक्सीजन संतृप्ति को 80 - 85 प्रतिशत पर बनाए रखा गया था, और विशिष्ट प्रक्रियाएं पहले वर्णित (32) के अनुसार निष्पादित की गईं। प्रयोगात्मक मादा चूहों को यादृच्छिक रूप से चार समूहों में विभाजित किया गया था: नियंत्रण समूह (नियंत्रण), अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया समूह (एचपीएक्स), अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया प्लस स्पर्मिडीन समूह (एचपीएक्स-एसपीडी), और अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया प्लस स्पर्मिडीन प्लस अवरोधक समूह (एचपीएक्स-एसपीडी-डीएफएमओ) ). गर्भावस्था के 15वें दिन प्रति समूह छह चूहों को अंतःपरिटोनियल इंजेक्शन लगाया गया। चूहों को नियंत्रण और एचपीएक्स समूहों में 0.9 प्रतिशत खारा (1 एमएल/किग्रा/दिन), एचपीएक्स-एसपीडी समूह में एसपीडी (5 मिलीग्राम/किग्रा/दिन) और एसपीडी (5 मिलीग्राम/किग्रा/दिन) और डिफ्यूरोमेथी दिया गया। -एल-ऑर्निथिन (डीएफएमओ, पॉलीमाइन संश्लेषण ओडीसी के प्रमुख एंजाइम का अवरोधक) (5 मिलीग्राम/किग्रा/दिन) क्रमशः एचपीएक्स-एसपीडी-डीएफएमओ समूह में। प्रसव के बाद, एक दिन के नवजात शिशुओं की बलि दे दी गई, और अनुवर्ती प्रयोगात्मक अध्ययन के लिए उनके दिल निकाल लिए गए।

3.3. हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण

चूहों के बाएं वेंट्रिकुलर ऊतक को <1 सेमी की मोटाई में काटा गया, 4 प्रतिशत पैराफॉर्मल्डिहाइड के साथ तय किया गया, शराब के साथ निर्जलित किया गया, और पैराफिन में एम्बेडेड किया गया। एम्बेडेड पैराफिन को 5 मिमी मोटी स्लाइस में काटा गया, फिर 60 डिग्री के निरंतर ओवन तापमान पर सुखाया गया, ज़ाइलीन के साथ डीवैक्स किया गया, और उसके बाद हेमेटोक्सिलिन-एओसिन (एचई) को धुंधला कर दिया गया। एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप (एक्लिप्स E200; निकॉन, टोक्यो, जापान) के साथ हृदय की आकृति विज्ञान और संरचनाओं में परिवर्तन का आकलन करने के लिए ऊतक के टुकड़ों को देखा गया।

3.4. इम्यूनोफ्लोरेसेंस विश्लेषण

Ki67 इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधलापन पहले वर्णित (33) के अनुसार किया गया था। संक्षेप में, चूहों के बाएं वेंट्रिकुलर ऊतक को पैराफिन में एम्बेडेड 4 प्रतिशत फॉर्मेलिन में तय किया गया था; सबसे पहले डीवैक्सिंग, हाइड्रेशन और एंटीजन मरम्मत का काम पूरा किया गया। उन ऊतकों को 2 घंटे के लिए 0.5 प्रतिशत गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन के साथ अवरुद्ध किया गया और फिर रात भर में 4 डिग्री पर Ki67 रैबिट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (1: 100, एएफ 1738, बेयोटाइम, चीन) के साथ ऊष्मायन किया गया। पीबीएस से धोने के बाद, ऊतक को बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी (1: 500, ए 0468, बेयोटाइम, चीन) लेबल वाले एलेक्सा फ्लोर के साथ इनक्यूबेट किया गया और नाभिक के लिए डीएपीआई के साथ काउंटरस्टेन किया गया। छवियों को लेजर कन्फोकल माइक्रोस्कोपी (ओलंपस, एफवी1000, जापान) के तहत देखा और स्कैन किया गया। सॉफ़्टवेयर का उपयोग मर्ज की गई छवियों के कोलोकलाइज़ेशन का विश्लेषण करने के लिए किया गया था।

3.5. फाइब्रोसिस की मात्रा

मैसन के ट्राइक्रोम स्टेनिंग द्वारा कार्डिएक फाइब्रोसिस का मूल्यांकन किया गया था। जैसा कि ऊपर वर्णित है, नवजात चूहों के हृदय ऊतक वर्गों को मानक तरीकों से डीवैक्स किया गया और हाइड्रेट किया गया और फिर प्रोटोकॉल के अनुसार मैसन के ट्राइक्रोम के साथ दाग दिया गया। प्रत्येक हृदय के लिए दो गैर-आसन्न क्रॉस-सेक्शन का उपयोग किया गया। कुल बाएं वेंट्रिकुलर मायोकार्डियल क्षेत्र में फ़ाइब्रोटिक क्षेत्र का प्रतिशत ImageJ सॉफ़्टवेयर, vl.52 (NIH, बेथेस्डा, एमडी) का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था।

3.6. टीडीटी-मध्यस्थता डीयूटीपी निक एंड लेबलिंग और एपोप्टोटिक सेल माप

एक दिन के नवजात चूहे के दिल में एपोप्टोटिक कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए एक TdT-मध्यस्थता dUTP निक एंड लेबलिंग (TUNEL) परख का उपयोग किया गया था। निर्माता के निर्देशों के अनुसार सेल डेथ डिटेक्शन किट (रोश, जर्मनी) का उपयोग करके हमारी पहले वर्णित प्रक्रिया का पालन करते हुए हृदय के ऊतकों का इलाज किया गया था। एपोप्टोटिक कोशिकाओं के प्रतिशत के लिए प्रत्येक ब्लॉक से तीन स्लाइडों का मूल्यांकन किया गया। चार स्लाइड फ़ील्ड की 200×आवर्धन के साथ यादृच्छिक रूप से जांच की गई। कुल मिलाकर, प्रत्येक क्षेत्र में 100 कोशिकाएँ गिनी गईं।

3.7. एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम गतिविधि का मापन

सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी) और कैटालेज (सीएटी) गतिविधि को एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (पर्किन-) के साथ वाणिज्यिक किट (एसओडी: ए 001-3- 1 और सीएटी: ए 007-1-1; जियानचेंग बायो। इंस्टीट्यूट, नानजिंग, चीन) का उपयोग करके मापा गया था। एल्मर, नॉरवॉक, सीटी, संयुक्त राज्य अमेरिका)। निर्माता के निर्देशों के अनुसार, ऑपरेशन पूरा हो गया था, और मानक (34) के रूप में गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (बीएसए) के साथ बाइसीनकोनिक एसिड विधि (पियर्स, रॉकफोर्ड, संयुक्त राज्य अमेरिका) का उपयोग करके प्रोटीन एकाग्रता को मापा गया था।

3.8. एडेनोसिन 5'-ट्राइफॉस्फेट सामग्री का मापन

हृदय के ऊतकों में एटीपी सामग्री को एटीपी परख किट (एस0026बी, बायोटाइम, बायो इंस्टीट्यूट, चीन) का उपयोग करके मापा गया था। निर्माता के निर्देशों के अनुसार, लाइसेट को ऊतक के वजन के अनुसार अनुपात में जोड़ा गया था, एक ग्लास होमोजेनाइज़र के साथ समरूप बनाया गया था, और फिर 4 डिग्री 12000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। सतह पर तैरनेवाला लिया गया था, और प्रत्येक नमूने में एटीपी की सामग्री का पता ल्यूमिनोमीटर (नैनोड्रॉप, नैनोड्रॉप2000, थर्मो, यूएसए) बीसीए किट (पी0012एस, बेयोटाइम, बायो इंस्टीट्यूट, चीन) से लगाया गया था। प्रोटीन सांद्रता निर्धारित करने और फिर एटीपी की सांद्रता को एनएमओएल/जी प्रोटीन में परिवर्तित करने के लिए बाइसिनकोनिक एसिड विधि का उपयोग किया गया था।

3.9. ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

कार्डियक एपिकल ऊतक को लगभग 1 मिमी × 1 मिमी × 1 मिमी छोटे टुकड़ों में विच्छेदित किया गया और फिर 4 डिग्री पर ग्लूटाराल्डिहाइड फॉस्फेट बफर में तय किया गया। नियमित निर्जलीकरण, भिगोने, एम्बेडिंग, और धुंधला होने के बाद, 50 - 70 एनएम के अति पतले खंड बनाए गए थे। कार्डियक ऊतक की अल्ट्रास्ट्रक्चर को ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (टीईएम) के तहत देखा गया और फोटो खींचा गया (एच 600 हिताची, टोक्यो, जापान)। एकल माइटोकॉन्ड्रिया और मायोफिलामेंट्स को इमेज जे सॉफ्टवेयर संस्करण 1.80 (राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान) के साथ 10000 गुना आवर्धन की स्थिति के तहत मैप किया गया था, और उनके क्षेत्रों को प्रत्येक हृदय (35) से मापा गया था। इस बीच, माइटोकॉन्ड्रियल टुकड़े <1 µm3, जो विभाजित नहीं थे (आमतौर पर गोल), की पहचान की गई, और दृश्य क्षेत्र में माइटोकॉन्ड्रियल टुकड़ों का औसत प्रतिशत माइटोकॉन्ड्रियल विखंडन सूचकांक (एमएफआई) का उपयोग करके गिना गया था।

3.10. माइटोकॉन्ड्रियल अलगाव

माइटोकॉन्ड्रिया अलगाव किट (बायोटाइम बायोटेक्नोलॉजी, शंघाई, चीन) के साथ अंतर सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग करके माइटोकॉन्ड्रिया को 4 डिग्री पर अलग किया गया था। संक्षेप में, ताजा हृदय ऊतक को ऊतक के टुकड़ों में काटा गया था और पूर्व-ठंडे पीबीएस के 10 संस्करणों के साथ सेंट्रीफ्यूज किया गया था, सतह पर तैरनेवाला को हटा दिया गया था, अवक्षेप को 20 मिनट के लिए ट्रिप्सिन के साथ पचाया गया था, अतिरिक्त अलगाव बफर ए को सेंट्रीफ्यूज किया गया था, सतह पर तैरनेवाला को दूसरे में स्थानांतरित किया गया था ट्यूब, फिर से सेंट्रीफ्यूज किया गया, और अवक्षेपित अंश पृथक माइटोकॉन्ड्रिया था। अंतिम कार्डियक माइटोकॉन्ड्रियल गोली को होमोजेनाइजिंग बफर में फिर से निलंबित कर दिया गया, बर्फ पर संग्रहीत किया गया, और 4 घंटे के भीतर माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन समारोह पर प्रयोगों के लिए उपयोग किया गया।

3.11. माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीजन की खपत का मापन

माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीजन की खपत को माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन बफर में क्लार्क-प्रकार ऑक्सीजन इलेक्ट्रोड (हैंसटेक इंस्ट्रूमेंट्स, नॉरफ़ॉक, यूके) द्वारा मापा गया था। पाइरूवेट (5 एमएम) और मैलेट (5 एमएम) का उपयोग 500 माइक्रोग्राम प्रोटीन/एमएल की अंतिम सांद्रता पर जटिल आई-युक्त माइटोकॉन्ड्रिया के लिए सब्सट्रेट के रूप में किया गया था। ADP-उत्तेजित ऑक्सीजन खपत (राज्य 3 श्वसन) को 200 µM ADP की उपस्थिति में मापा गया था, और ADP-स्वतंत्र ऑक्सीजन खपत (राज्य 4 श्वसन) की निगरानी की गई थी। श्वसन नियंत्रण अनुपात (आरसीआर, अवस्था 3 को अवस्था 4 से विभाजित) फॉस्फोराइलेशन (युग्मन) द्वारा ऑक्सीजन की खपत को दर्शाता है। प्रक्रियाएं जारी रहीं, जैसा कि पहले बताया गया है (36)।

3.12. वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

हृदय के ऊतकों का नमूना एकत्र किया गया और उसे -80 डिग्री पर संग्रहित किया गया। जमे हुए बाएं वेंट्रिकुलर कार्डियक ऊतकों को बर्फ-ठंडे आरआईपीए लिसीस बफर (बायोटाइम इंक, शंघाई, चीन P0013B) में समरूप बनाया गया था। प्रोटीन सांद्रता को BCA प्रोटीन परख किट (Beyotime Inc., शंघाई, चीन P0006C) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। कुल प्रोटीन वाले नमूनों को 10 प्रतिशत (w/v) एसडीएस-पेज द्वारा अलग किया गया और एक पीवीडीएफ झिल्ली (मिलिपोर, बेडफोर्ड, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) पर स्थानांतरित किया गया। निम्नलिखित एंटीबॉडी का उपयोग किया गया: GAPDH के लिए एंटीबॉडी (1:2000,10494-1-एपी), एमएफएन2 (1:1000,12186-1- एपी), एसआईआरटी-1 (1:1000,{{16) }}एपी), एनआरएफ-2 (1:600,16396-1-एपी), टीएफएएम (1:1000,19998-1-एपी), और बीएएक्स (1.1000,509599-2-आईजी) प्रोटीनटेक (वुहान, चीन) से खरीदे गए थे, बीसीएल2 (1: 2000, एससी -7382) और डीआरपी1 (1:1000, एससी {{34 }}) सांता क्रूज़ बायोटेक्नोलॉजी (डलास, TX) और पीजीसी से खरीदे गए थे -1 (1:1000, एबी106814, एबकैम, कैम्ब्रिज, एमए, यूके)। द्वितीयक एंटीबॉडी (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-लेबल बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी) बेयोटाइम कॉर्पोरेशन (शंघाई, चीन) से थी। प्रोटीन बैंड की तीव्रता को फ्लोर केम केमिलुमिनसेंस जेल इमेजिंग सिस्टम (प्रोटीन सिंपल, यूएसए) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। प्रोटीन बैंड के ऑप्टिकल घनत्व का विश्लेषण इमेज जे सॉफ्टवेयर संस्करण एल.52 (एनआईएच, बेथेस्डा, एमडी) के साथ किया गया था।

3.13. हाइपोक्सिक कार्डियोमायोसाइट मॉडल

जैसा कि पहले बताया गया है, नवजात चूहे के कार्डियोमायोसाइट्स (एनआरएमसी) को मानक तरीकों से अलग और सुसंस्कृत किया गया था। संक्षेप में, तीन दिवसीय नवजात चूहों के दिलों को निकाला गया, कीमा बनाया गया, सुसंस्कृत किया गया, और फिर 0.25 प्रतिशत ट्रिप्सिन और 0.02 प्रतिशत EDTA (बायोटाइम बायोटेक्नोलॉजी, शंघाई, चीन) में पचाया गया। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, अवक्षेपों को 10 प्रतिशत भ्रूण बछड़ा सीरम (बायोलोट, रूस) के साथ पूरक डीएमईएम में स्थानांतरित किया गया और 5 प्रतिशत 2 युक्त आर्द्र हवा में ऊष्मायन किया गया। बीजारोपण के तीन दिन बाद, कोशिकाओं को एक ग्लास हाइपोक्सिक कक्ष (बायोस्फेरिक्स ऑक्सीसाइक्लर सी 42) में रखा गया था , रेडफील्ड, एनवाई), और अवशिष्ट ऑक्सीजन का निर्वहन करने के लिए 8 मिनट के लिए नाइट्रोजन से भरा हुआ। इन कार्डियोमायोसाइट्स को यादृच्छिक रूप से निम्नलिखित समूहों में विभाजित किया गया था: (1) नियंत्रण समूह (नियंत्रण), सामान्य ऊष्मायन स्थितियों के तहत संवर्धित कोशिकाएं; (2) हाइपोक्सिया (एचपीएक्स) समूह, कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए हाइपोक्सिक कक्ष में रखा जाता है और फिर 24 घंटे के लिए सामान्य रूप से सुसंस्कृत किया जाता है; (3) एचपीएक्स-एसपीडी समूह, कोशिकाओं को हाइपोक्सिक कक्ष में रखा गया और 24 घंटे के लिए 10 µmol/L SPD के साथ इनक्यूबेट किया गया; (4) Hpx-SpdDFMO समूह, कोशिकाओं को एक हाइपोक्सिक कक्ष में रखा जाता है और 24 घंटे के लिए 10 µmol/L SPD प्लस 2 mmol/L DFMO के साथ इनक्यूबेट किया जाता है।

3.14. प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों का मापन

आरओएस पीढ़ी को डायहाइड्रोएथिडियम (डीएचई) स्टेनिंग परख (कैट नंबर एस0063, बेयोटाइम, चीन) द्वारा मापा गया था। संक्षेप में, प्राथमिक कार्डियोमायोसाइट्स को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पर 5 µmol/L DHE के साथ इनक्यूबेट किया गया, पीबीएस से धोया गया, और फिर प्रतिदीप्ति तीव्रता में परिवर्तन का निरीक्षण करने के लिए माइक्रोस्कोप के नीचे ले जाया गया। छवियां ओलंपस फ़्लूव्यू FV1000 प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (ओलंपस ऑप्टिकल कंपनी लिमिटेड, ताकाचिहो, जापान) के साथ 535 एनएम की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य पर ली गईं, और अधिकतम उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 610 एनएम, n > 20 कोशिकाएं प्रति समूह थीं।

3.15. माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का निर्धारण

डाई टेट्रामिथाइलरोडामाइन एथिल एस्टर (टीएमआरई) सकारात्मक रूप से चार्ज होता है और इसे चुनिंदा रूप से माइटोकॉन्ड्रिया में स्थित किया जा सकता है। माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता (∆Ψm) निर्धारित करने के लिए इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। संक्षेप में, 200 μmol/L की सांद्रता पर TMRE स्टेनिंग वर्किंग सॉल्यूशन को समूहीकृत उपचारित कार्डियोमायोसाइट्स में जोड़ा गया, अच्छी तरह मिलाया गया, और 20 मिनट के लिए 37 डिग्री पर सेल इनक्यूबेटर में रखा गया। सतह पर तैरनेवाला को एस्पिरेट किया गया था, और कोशिकाओं को पीबीएस से धोया गया था और प्रतिदीप्ति तीव्रता में परिवर्तन का निरीक्षण करने के लिए एक उल्टे माइक्रोस्कोप में ले जाया गया था। उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 549 एनएम था, और उत्सर्जन प्रकाश 579 एनएम था। लाल प्रतिदीप्ति तीव्रता ने प्रति समूह ∆Ψm, n > 20 कोशिकाओं के परिवर्तन का संकेत दिया।

3.16. माइटोकॉन्ड्रियल और लाइसोसोमल स्थानीयकरण प्रयोग

निर्देश के अनुसार, मिटो-ट्रैकर ग्रीन (NO.C1048, बेयोटाइम, चीन) और लिसो-ट्रैकर रेड (NO.C1046, बेयोटाइम, चीन) ने माइटोकॉन्ड्रियल और लाइसोसोमल कोलोकलाइज़ेशन विश्लेषण का उपयोग किया। प्रयोगों से पहले 30 मिनट के लिए एनआरसीएम को एचबीएसएस में 200 एनएम मिटोट्रैकर ग्रीन एफएम और 50 एनएम लिसोट्रैकर रेड के साथ लोड किया गया था, कोशिकाओं को पीबीएस से धोया गया था, और फिर ओलंपस फ्लुओव्यू एफवी1000 प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करके सेल छवियां प्राप्त की गईं। मिटोट्रैकर ग्रीन प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए 488 एनएम लेजर लाइन का उपयोग किया गया था, जिसे 505 और 515 एनएम के बीच मापा गया था। LysoTracker Red के लिए, 590 एनएम की माप के साथ 577 एनएम लेजर लाइन का उपयोग किया गया था। लाल और हरे रंग की पिक्सेल तीव्रता ओवरले को निकॉन एक्लिप्स माइक्रोस्कोप पर परिमाणीकरण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, प्रति समूह n > 20 कोशिकाएं।

3.17. सांख्यिकीय विश्लेषण

प्रायोगिक समूहों के सभी डेटा की तुलना वन-वे एनोवा का उपयोग करके की गई, जिसके बाद ग्राफपैड प्रिज्म सॉफ्टवेयर संस्करण 8 (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर इंक, ला, जोला.सीए) और एसपीएसएस सॉफ्टवेयर संस्करण 17.1 (एसपीएसएस, शिकागो, आईएल, यूनाइटेड) के साथ बोनफेरोनी पोस्ट हॉक परीक्षण किया गया। राज्य)। डेटा को माध्य ± SEM के रूप में व्यक्त किया गया था, और महत्व स्तर P <{4}}.05 निर्धारित किया गया था।

4. परिणाम

4.1. संतान एवं हृदय के लक्षण

शरीर का वजन (बीडब्ल्यू) और हृदय का वजन (एचडब्ल्यू) मापा गया, और एचडब्ल्यू से बीडब्ल्यू अनुपात (एचडब्ल्यू/बीडब्ल्यू) की गणना की गई (चित्र 1)। परिणामों से पता चला कि नवजात चूहों का BW और HW कम हो गया, और अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया के कारण उनका HW/BW बढ़ गया। IUH समूह की तुलना में, SPD समूह में नवजात चूहों के BW और HW में वृद्धि हुई (P < 0.05), और HW/BW में कमी आई (P < {{5%)। 05); एसपीडी समूह की तुलना में, डीएफएमओ उपचार समूह के बीडब्ल्यू और एचडब्ल्यू दोनों में कमी आई (पी <0.05), और एचडब्ल्यू/बीडब्ल्यू में उल्लेखनीय वृद्धि हुई (पी <0.05)।

4.2. मायोकार्डियल मॉर्फोलॉजिकल स्ट्रक्चर, सेल प्रसार, और फाइब्रोसिसिन नवजात संतानों पर एसपीडी का प्रभाव

कार्डियक एचई स्टेनिंग परिणामों से पता चला कि आईयूएच के संपर्क में आने वाली एक दिवसीय संतानों के दिल में सूजन और शिथिल रूप से व्यवस्थित मायोकार्डियल फाइबर दिखाई देते हैं। हालाँकि, एसपीडी से उपचारित आईयूएच हृदयों ने एक स्वीकार्य मायोकार्डियल ऊतक संरचना (चित्र 2ए) बनाए रखी। इसके बाद, हमने एचई-सना हुआ ऊतक स्लाइस के साथ द्वि-परमाणु कार्डियोमायोसाइट्स की संख्या का मूल्यांकन किया; आईयूएच समूह में नियंत्रण समूह (पी <{3}}.05) की तुलना में द्विपरमाणु कार्डियोमायोसाइट्स की संख्या अधिक थी। IUH समूह की तुलना में, SPD उपचार समूह में द्वि-परमाणु कार्डियोमायोसाइट्स का अनुपात काफी कम हो गया (P < 0.05); डीएफएमओ ने एसपीडी के प्रभाव को कम कर दिया (पी <0.05) (चित्र 2सी)। हमने इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधि का उपयोग करके चूहे के मायोकार्डियम में Ki67 (कोशिका प्रसार का एक मार्कर) की अभिव्यक्ति का पता लगाया। Ki67 की अभिव्यक्ति जितनी अधिक होगी, लाल और नीले रंग के विलय से गुलाबी प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होगी (चित्र 2ई)। परिणामों से पता चला कि नियंत्रण समूह की तुलना में, IUH समूह में Ki67 की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई (P < {{23 }}.{{25 }}5), SPD प्रशासन के बाद Ki67 की अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि हुई (P < { {28}}.05), और एसपीडी का प्रभाव डीएफएमओ (पी <0.05) (चित्रा 2एफ) द्वारा समाप्त कर दिया गया था। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि एसपीडी आईयूएच द्वारा प्रेरित कोशिका चक्र से कार्डियोमायोसाइट्स की समय से पहले वापसी को रोक सकता है और आईयूएच के संपर्क में आने वाली नई संतानों में कार्डियोमायोसाइट्स के प्रसार को बढ़ावा दे सकता है। फिर हमने मायोकार्डियल कोलेजन सामग्री में परिवर्तन का पता लगाने के लिए मैसन स्टेनिंग का उपयोग किया और कोलेजन क्षेत्र माप (चित्र 2BandD) द्वारा मायोकार्डियल फाइब्रोसिस का आकलन किया। हमने पाया कि IUH के संपर्क में आने वाले नवजात चूहों के हृदय में मायोकार्डियल कोलेजन जमाव बढ़ गया (पी <0.05), जिसका स्तर नियंत्रण समूह की तुलना में अधिक था। इसके विपरीत, एसपीडी उपचार के बाद मायोकार्डियल फाइब्रोसिस का क्षेत्र काफी कम हो गया (पी <0.05)। हालाँकि, एसपीडी उपचार समूह की तुलना में, HpxSpd-DFMO समूह (पी <0.05) में फाइब्रोसिस क्षेत्र में काफी वृद्धि हुई है।

4.3. अंतर्गर्भाशयी हाइपोक्सिया के संपर्क में आने वाले नवजात शिशुओं में मायोकार्डियल माइटोकॉन्ड्रियल संरचना, श्वसन क्रिया और एडेनोसिन 5'-ट्राइफॉस्फेट सामग्री पर स्पर्मिडीन का प्रभाव

कार्डियक ऊतक और माइटोकॉन्ड्रियल विशेषता के अल्ट्रास्ट्रक्चरल संरचना परिवर्तनों का विश्लेषण टीईएम (चित्रा 3 ए) द्वारा किया गया था। इमेज जे सॉफ्टवेयर का उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल सामग्री प्रतिशत (पूरे सेल क्षेत्र में माइटोकॉन्ड्रियल क्षेत्र) और माइटोकॉन्ड्रियल क्षेत्र (आंकड़े 3 बी और सी) को निर्धारित करने के लिए किया गया था। परिणामों से पता चला कि नियंत्रण समूह में, मायोकार्डियल मायोफिलामेंट्स को व्यवस्थित रूप से व्यवस्थित किया गया था, सार्कोमियर संरचना स्पष्ट थी, माइटोकॉन्ड्रिया कॉम्पैक्ट थे, मैट्रिक्स सघन था, और माइटोकॉन्ड्रियल क्राइस्ट व्यवस्थित रूप से व्यवस्थित थे। हालाँकि, माइटोकॉन्ड्रिया में सूजन आ गई, और IUH समूह के कुछ कार्डियोमायोसाइट्स में ढीला मैट्रिक्स और कम घनत्व देखा गया। नियंत्रण समूह की तुलना में, कार्डियोमायोसाइट्स में माइटोकॉन्ड्रिया का अनुपात और माइटोकॉन्ड्रिया का क्षेत्र दोनों कम हो गए थे (पी < 0.05)। हालांकि, एसपीडी उपचार के चूहे के दिल में, मायोकार्डियल मायोफिलामेंट्स साफ थे, सार्कोमियर संरचना स्पष्ट थी, माइटोकॉन्ड्रियल मैट्रिक्स कॉम्पैक्ट था, और माइटोकॉन्ड्रियल सूजन कम हो गई थी। आईयूएच समूह की तुलना में, कार्डियोमायोसाइट्स में माइटोकॉन्ड्रिया का अनुपात बढ़ गया (पी <{6}}.05), और माइटोकॉन्ड्रिया का क्षेत्र बढ़ गया (पी <0.05)। डीएफएमओ ने इन एसपीडी-प्रेरित प्रभावों (पी <0.05) को रोक दिया।

हमने माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन क्रिया का मूल्यांकन करने के लिए सब्सट्रेट के रूप में पाइरूवेट/मैलेट का उपयोग किया, जिसमें राज्य 3 और 4 श्वसन दर और आरसीआर (चित्र 3डी - एफ) शामिल हैं। हमने देखा कि नियंत्रण समूह की तुलना में, अवस्था 3 और 4 में श्वसन दर और IUH समूह की RCR सभी काफी कम थी (P < 0.{{10}}5)। दिलचस्प बात यह है कि राज्य 3 और 4 का आरसीआर एसपीडी उपचार के बाद ठीक हो गया (पी <{14}}.05)। इसके विपरीत, इन एसपीडी प्रभावों को डीएफएमओ उपचार समूह (पी <{19}}.05) में काफी हद तक बाधित किया गया था। इसी प्रकार, नियंत्रण समूह की तुलना में, IUH समूह में मायोकार्डियल एटीपी सामग्री काफी कम हो गई (पी <0.05)। आईयूएच समूह की तुलना में, एसपीडी-उपचारित समूह (पी <0.05) में एटीपी सामग्री उल्लेखनीय रूप से बढ़ गई, और डीएफएमओ ने एसपीडी (पी <0.05) (चित्र 3जी) के प्रभावों को कम कर दिया। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि एसपीडी मायोकार्डियल माइटोकॉन्ड्रियल संरचना और कार्य क्षति की रक्षा कर सकता है और आईयूएच के संपर्क में आने वाले नवजात संतान चूहों में एटीपी स्तर की गिरावट को रोक सकता है।

【अधिक जानकारी के लिए:george.deng@wecistanche.com / व्हाट्सएप:86 13632399501】