एसीओएक्स1 - सीपीटी2 अभिव्यक्तियों को विनियमित करने के आधार पर उच्च वसा वाले आहार वाले चूहों के एपोई - / - के यकृत में लिपिड चयापचय पर रूचोंगरोंग (सिस्टैंच डेज़र्टिकोला) से फेनिलथेनोइड ग्लाइकोसाइड अर्क के सुधार प्रभावों पर अध्ययन

सार उद्देश्य:पता लगाने के लिएफेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स अर्क के प्रभावसेसिस्टान्चे डेज़र्टिकोला(PGCD) उच्च वसा वाले आहार द्वारा प्रेरित ApoE-/- चूहों के जिगर में लिपिड चयापचय पर। विधियाँ: उच्च वसा वाले आहार से खिलाए गए 70 नर ApoE-/- चूहों को 5 समूहों में विभाजित किया गया, मॉडल (MOD) समूह, सकारात्मक नियंत्रण समूह के चूहों को एटोरवास्टेटिन [20 mg / (kg·d)] + एज़ेटिमीब [20 mg / (kg·d)] (A + E) दिया गया, PGCD कम, मध्यम और उच्च खुराक वाले समूहों को दिया गयापीजीसीडी[250, 500, 1000 मिलीग्राम / (किग्रा·दिन)]; अन्य 14 नर C57BL/ 6J चूहों को आचो आहार के साथ सामान्य नियंत्रण (CON) समूह के रूप में सेट किया गया था। 12वें सप्ताहांत पर, ऑपरेटिंग निर्देशों के अनुसार सीरम और यकृत ऊतक में TG की सामग्री और ALT, और AST की गतिविधियों का पता लगाया गया। ताजा यकृत ऊतक को समरूप बनाया गया और फैटी एसिड सिंथेस (FAS), लंबी-श्रृंखला एसाइल-सीओए डिहाइड्रोजनेज (LCAD) और ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (GSH-Px) की सामग्री का पता लगाया गया।सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (एसओडी)गतिविधियों का परीक्षण एलिसा विधि द्वारा किया गया, इस बीच, मैलोनडायल्डिहाइड (एमडीए) और लिपिड पेरोक्साइड (एलपीओ) की सामग्री का पता किड विधियों द्वारा लगाया गया। एसाइल-कोएंजाइम ए ऑक्सीडेज 1 (एसीओएक्स1) और कार्निटाइन पामिटोइलट्रांसफेरेज़ 2 (सीपीटी2) के एमआरएनए अभिव्यक्तियों का पता आरटी-पीसीआर प्रयोगों द्वारा लगाया गया।

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परिणाम:मॉडल समूह के विपरीत,तीन खुराक वाली पीजीसीडी ने टीजी के स्तर को कम कर दियाखुराक पर निर्भर तरीके से लीवर और सीरम में, और सीरम में ALT और AST की गतिविधियों को कम कर दिया। तीन-खुराक PGCD ने खुराक पर निर्भर तरीके से FAS की सामग्री को कम कर दिया और लीवर में LCAD की सामग्री को काफी हद तक बढ़ा दिया।पीजीसीडी को बढ़ावा दिया गयाजीएसएच-पीएक्स और एसओडी की गतिविधियों ने लीवर में एमडीए और एलपीओ की मात्रा को काफी हद तक कम कर दिया। आरटी-पीसीआर प्रयोगों से पता चला कि पीजीसीडी ने लीवर के ऊतकों में एसीओएक्स1 और सीपीटी2 के एमआरएनए स्तरों को बढ़ा दिया।

निष्कर्ष:पीजीसीडी लिपिड चयापचय और ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रिया को बेहतर कर सकता है, और ACOX1 और CPT2 के mRNA अभिव्यक्तियों को विनियमित करके यकृत ऊतक में लिपिड जमाव को कम कर सकता है।

कीवर्ड:सिस्टांच डेज़र्टिकोला से फेनिलेथेनोइड ग्लाइकोसाइड्स अर्क; ACOX1; CPT2;लिपिड चयापचय;ऑक्सीडेटिव तनाव; एपोई- / - चूहे

गैर अल्कोहल वसा यकृत रोग(एनएएफएलडी) दुनिया में सबसे व्यापक यकृत रोगों में से एक है, सामान्य आबादी में लगभग 30% की व्यापकता है। चीन में फैटी लिवर रोग 0.594% की वार्षिक दर से बढ़ रहा है [1]। एनएएफएलडी की घटना और विकास शरीर के अत्यधिक कैलोरी सेवन से निकटता से संबंधित हैं। उच्च वसा वाले आहार से यकृत में वसा का अत्यधिक संचय होता है और एनएएफएलडी [2] प्रेरित होता है, और इसके रोगजनन में प्रारंभिक चरण यकृत कोशिकाओं में ट्राईसिलग्लिसरॉल (टीजी) का जमाव होता है [2] 3]। आज तक, एनएएफएलडी के रोगजनन को लक्षित करने वाली कोई विशिष्ट चिकित्सीय दवाएं नहीं हैं। एनएएफएलडी की रोकथाम और उपचार के लिए स्पष्ट तंत्र के साथ सुरक्षित, प्रभावी दवाओं को खोजना शोधकर्ताओं के लिए एक महत्वपूर्ण कार्य बन गया है। इसका मुख्य घटक, फेनिलथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स, शरीर की प्रतिरक्षा क्रिया को बढ़ाने, एंटी-एजिंग, एंटी-रेडिएशन, एंटीऑक्सीडेंट और हेपेटोप्रोटेक्टिव, और अन्य प्रभावों के कार्य करता है[4-5]। इस अध्ययन का उद्देश्य इसके तंत्र पर एक प्रारंभिक अध्ययन करना हैसिस्टान्चे डेज़र्टिकोला से फेनिलएथेनोइड ग्लाइकोसाइड्स(पीजीसीडी) लिपिड चयापचय में सुधार करने में सहायक है।

1 प्रायोगिक सामग्री

1.1 प्रायोगिक औषधियाँ

सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला के मांसल तने (नमी मात्रा 8.5%) को हॉटन डिचेन फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया; फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (मुख्य घटक वर्बास्कोसाइड और इचिनेसियासाइड) संदर्भ पदार्थ (दोनों शुद्धता > 98%) को मैनस्टर, चेंग्दू, सिचुआन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया; एटोरवास्टेटिन: फाइजर शंघाई; एजेटिमिब: मर्क फार्मास्युटिकल्स कंपनी लिमिटेड।

1.2 प्रायोगिक पशु

6 से 8 सप्ताह के नर C57BL/6J चूहे और ApoE-/- चूहे, शरीर का वजन (20 ± 2) ग्राम, चांगझोउ कैविंस एक्सपेरीमेंटल एनिमल कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया, लाइसेंस नंबर: SCXK (Su) 2016-0010, 12 घंटे / 12 घंटे प्रकाश चक्र, तापमान (22 ± 1) डिग्री, आर्द्रता 50% ~ 60%, भोजन और पानी का मुफ्त सेवन। प्रयोग से पहले, चूहों को अनुकूलन के लिए 1 सप्ताह के लिए एक मानक आहार खिलाया गया था। सभी पशु देखभाल और प्रयोग शेडोंग फर्स्ट मेडिकल यूनिवर्सिटी (नैतिकता संख्या: W202107080303) की प्रायोगिक पशु नैतिकता समिति के नियमों का पालन करते हैं।

1.3 प्रायोगिक पुनःएजेंट

उच्च वसायुक्त आहार: हरलान टेक्लाड; टीजी, एएलटी, एएसटी किट: बीजिंग सोलेबाओ बायोटेक्नोलॉजी कं., लिमिटेड; एफएएस, एलसीएडी किट: शंघाई लैंगटन बायोटेक्नोलॉजी कं., लिमिटेड; जीएसएच-पीएक्स किट: शंघाई जीनिंग बायोटेक्नोलॉजी कं., लिमिटेड; एसओडी, एमडीए, एलपीओ, बीसीए किट: नानजिंग जियानचेंग बायोटेक्नोलॉजी कं., लिमिटेड; ट्राइजोल किट: इंविट्रोजन, कार्ल्सबैड, सीए; एसीओएक्स1 और सीपीटी2 प्राइमर: सांगोन बायोइंजीनियरिंग (शंघाई) कं., लिमिटेड द्वारा डिजाइन किया गया।

1. 4 प्रायोगिक उपकरण हेई - वीएपी विशेषज्ञ रोटरी इवेपोरेटर: जर्मनी

हीडॉल्फ; वैरियोस्कैन लक्स बहुक्रियाशील माइक्रोप्लेट रीडर: थर्मोफिशर; एफडी8508 वैक्यूम फ्रीज ड्रायर: इल्शिन, दक्षिण कोरिया; एफ6/10 होमोजेनाइजर: शंघाई फ्लोरोको; एजिलेंट1260 उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफ, कैरी 3500 यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर: एजिलेंट टेक्नोलॉजीज लिमिटेड; क्वांट स्टूडियो5आरटी - पीसीआर उपकरण: थर्मो फिशर बायोकेमिकल्स, इंक.

2.3.1 शारीरिक द्रव्यमान और यकृत सूचकांक

12वें सप्ताह के अंत में, चूहों को उपवास कराया गया और उनका वजन लिया गया। चूहों को सोडियम पेंटोबार्बिटल से बेहोश किया गया और उन्हें मार दिया गया। लिवर इंडेक्स की गणना करने के लिए उनके लीवर को निकाला गया।

2.3.2 सीरम सूचक पहचान

सीरम लें और किट संचालन के अनुसार क्रम में सीरम एस्पार्टेट एमिनोट्रांस्फरेज (एएसटी) और एलेनिन एमिनोट्रांस्फरेज (एएलटी) गतिविधियों का पता लगाएं; बीसीए सीरम में प्रोटीन सामग्री निर्धारित करता है और टीजी सामग्री का पता लगाता है।

2.3.3 यकृत ऊतक में लिपिड चयापचय से संबंधित कारकों का पता लगाना

4 डिग्री की परिस्थितियों में, ताजे लीवर की उचित मात्रा का वजन करें और इसे PBS में होमोजीनाइज करें, होमोजीनट को 1 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें (सेंट्रीफ्यूज त्रिज्या 7.5 सेमी, 3 000 r/min), सुपरनेटेंट लें, और BCA द्वारा लीवर ऊतक की प्रोटीन सामग्री को मापें। ऊतक में TG सामग्री, लीवर ऊतक में फैटी एसिड सिंथेस (FAS) और लंबी-श्रृंखला एसाइल-CoA डिहाइड्रोजनेज (LCAD) सामग्री का पता लगाने के लिए ELISA विधि।

2.3.4 यकृत ऊतक से संबंधित ऑक्सीडेटिव कारकों का पता लगाना

4 डिग्री की परिस्थितियों में, ताजे लीवर की उचित मात्रा का वजन करें और इसे PBS में होमोजीनाइज करें, होमोजीनट को 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें (सेंट्रीफ्यूगल रेडियस 7.5 सेमी, 3 000 आर/मिनट), सुपरनेटेंट लें और BCA के साथ लीवर ऊतक की प्रोटीन सामग्री को मापें। अभिकर्मकों का पालन करें बॉक्स निर्देश सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (एसओडी) और ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (जीएसएच-पीएक्स) गतिविधियों का पता लगाते हैं, और साथ ही साथ मैलोनडायल्डिहाइड (एमडीए) और लिपिड पेरोक्साइड (एलपीओ) के स्तर का पता लगाते हैं।

2. 3. 5 आरटी-पीसीआर जांच

यकृत ऊतक में ACOX1/CPT2 mRNA अभिव्यक्ति: ताजा यकृत ऊतक की एक उचित मात्रा लें, कुल यकृत ऊतक mRNA निकालने के लिए ट्राइज़ोल किट का उपयोग करें, cDNA को संश्लेषित करने के लिए MuLV रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करें, और वास्तविक समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक PCR (Qpcr) का पता लगाने के लिए cDNA को एक टेम्पलेट के रूप में उपयोग करें। प्रतिक्रिया की स्थितियाँ थीं: 2 मिनट के लिए 95 डिग्री पर पूर्व विकृतीकरण; 10 एस के लिए 95 डिग्री पर विकृतीकरण, एनीलिंग: 30 एस के लिए 60 डिग्री, 35 एस के लिए 72 डिग्री पर विस्तार, 34 चक्र, और अंत में 5 मिनट के लिए 72 डिग्री पर विस्तार, और एक स्वचालित विश्लेषक द्वारा वास्तविक समय मात्रा का ठहराव। ACOX1 और CPT2 mRNA अभिव्यक्ति। प्रयोगों के प्रत्येक समूह को समानांतर में > 3 बार किया गया। प्राइमर अनुक्रम इस प्रकार हैं: GAPDH, अपस्ट्रीम: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', डाउनस्ट्रीम: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, अपस्ट्रीम: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' डाउनस्ट्रीम: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, अपस्ट्रीम: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' डाउनस्ट्रीम: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 सांख्यिकीय विधियाँ

डेटा का विश्लेषण करने के लिए SPSS 20.0 सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया। माप डेटा को (x ± s) के रूप में व्यक्त किया गया। समूहों के बीच तुलना के लिए विचरण का एकतरफा विश्लेषण इस्तेमाल किया गया। P < 0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर माना गया।