अवसादग्रस्त चूहों के सेरेब्रल कॉर्टेक्स में कैंप सिग्नलिंग मार्ग पर ज़ियाओयाओसन का प्रभाव

 

अमूर्त

उद्देश्य:अवसादग्रस्त चूहों के सेरेब्रल कॉर्टेक्स में सीरम प्रोस्टाग्लैंडीन ई2 (पीजीई2) और पदार्थ पी (एसपी) और चक्रीय एडेनोसिन मोनोफॉस्फेट (सीएमपी) और सीएमपी प्रतिक्रिया तत्व-बाध्यकारी प्रोटीन 1 (सीआरईबी1) की एमआरएनए अभिव्यक्ति में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए, और आणविक तंत्र का पता लगाने के लिए जिसके द्वारा ज़ियाओयाओसन अवसादरोधी प्रभाव डालता है।

विधियाँ: अड़तालीस नर एसडी चूहों को बेतरतीब ढंग से चार समूहों (प्रत्येक एन=12) को सौंपा गया था: सामान्य, मॉडल, ज़ियाओयाओसन, और फ्लुओक्सेटीन। क्रोनिक इमोबिलाइजेशन स्ट्रेस (सीआईएस) का उपयोग करके एक अवसाद मॉडल स्थापित किया गया था। ज़ियाओयाओसन को 21 दिनों के लिए दैनिक मॉडलिंग से 30 मिनट पहले गैवेज द्वारा प्रशासित किया गया था। एंटीडिप्रेसेंट जैसे प्रभावों का मूल्यांकन मैक्रोस्कोपिक व्यवहार अवलोकन, सुक्रोज वरीयता परीक्षण, खुले क्षेत्र परीक्षण और मजबूर तैराकी परीक्षण द्वारा किया गया था। कॉर्टिकल सीएमपी और सीआरईबी1 एमआरएनए स्तर वास्तविक समय प्रतिदीप्ति क्यूपीसीआर द्वारा निर्धारित किए गए थे। सीरम पीजीई2 और एसपी को एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) द्वारा मापा गया था।

परिणाम: मॉडल समूह की तुलना में, ज़ियाओयाओसन और फ्लुओक्सेटीन दोनों ने अवसाद जैसे व्यवहार को काफी हद तक कम कर दिया; सुक्रोज की बढ़ी हुई खपत, ऊर्ध्वाधर पालन संख्या, क्षैतिज क्रॉसिंग, और खुले क्षेत्र के परीक्षण में संवारना; और जबरन तैराकी परीक्षण में संचयी गतिहीनता का समय कम हो गया। दोनों उपचारों ने कॉर्टिकल हिस्टोपैथोलॉजी में सुधार किया, सेरेब्रल कॉर्टेक्स में उन्नत सीएमपी और सीआरईबी1 एमआरएनए अभिव्यक्ति, और सीरम पीजीई2 और एसपी स्तर (पी <0.01) को कम किया।

निष्कर्ष:ज़ियाओयाओसन उदास चूहों में स्पष्ट अवसादरोधी प्रभाव डालता है, संभावित रूप से कॉर्टिकल सीएमपी सिग्नलिंग मार्ग के विनियमन के माध्यम से।

कीवर्ड: ज़ियाओयाओसन; अवसाद; शिविर; CREB1; प्रोस्टाग्लैंडीन E2 (PGE2); पदार्थ पी (एसपी)

 

परिचय

अवसाद दुनिया भर में रुग्णता और विकलांगता का एक प्रमुख कारण है, जो जीवन की गुणवत्ता को गंभीर रूप से ख़राब कर रहा है। ज़ियाओयाओसन, एक शास्त्रीय बहु-जड़ी बूटी पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) फार्मूला, ने सामान्य अवसादग्रस्तता प्रस्तुतियों में नैदानिक ​​​​उपयोगिता का प्रदर्शन किया है, जो वनस्पति चिकित्सा के रूप में इसके निरंतर विकास का समर्थन करता है।

यांत्रिक रूप से, सीएमपी-प्रोटीन काइनेज ए (पीकेए)-सीआरईबी सिग्नलिंग कैस्केड मूड और भावनात्मक व्यवहार के नियमन के लिए केंद्रीय है। इस मार्ग का डाउनरेगुलेशन अवसादग्रस्त फेनोटाइप को बढ़ावा दे सकता है। सीआरईबी को अवसाद के पैथोफिज़ियोलॉजी में शामिल किया गया है, और सीएमपी द्वारा सक्रियण डाउनस्ट्रीम जीन के प्रतिलेखन को बढ़ाता है; इस अक्ष में बहुरूपता और कार्यात्मक कटौती को अवसाद संवेदनशीलता कारक माना गया है।

सूजन पैदा करने वाले मध्यस्थ भी अवसाद में योगदान करते हैं। प्रोस्टाग्लैंडीन E2 (PGE2) सूजन संबंधी प्रतिक्रियाओं में मध्यस्थता करता है, और बढ़ा हुआ PGE2 अवसादग्रस्ततापूर्ण व्यवहार उत्पन्न कर सकता है। पदार्थ पी (एसपी), तनाव और प्रभाव से जुड़ा एक न्यूरोपेप्टाइड, अक्सर अवसाद के रोगियों के सीरम में बढ़ा हुआ होता है। इस प्रकार, उन्नत सीरम पीजीई2 और एसपी के साथ परिवर्तित कॉर्टिकल सीएमपी और सीआरईबी1 एमआरएनए अभिव्यक्ति अवसाद में कॉर्टिकल चोट के अंतर्निहित आणविक तंत्र का प्रतिनिधित्व कर सकती है।

यद्यपि अवसादरोधी तंत्रों के लिए कई टीसीएम यौगिक सूत्रों की जांच की गई है, सीएमपी मार्ग पर अधिकांश सूत्रों का प्रभाव अस्पष्ट बना हुआ है। चूहों में अवसाद जैसे व्यवहार को प्रेरित करने के लिए क्रोनिक इमोबिलाइजेशन स्ट्रेस (सीआईएस) प्रतिमान का उपयोग करते हुए, यह अध्ययन ज़ियाओयाओसन के अवसादरोधी तंत्र की जांच करता है और इसकी तुलना फ्लुओक्सेटीन से करता है, जिसका उद्देश्य वनस्पति चिकित्सा विज्ञान के भविष्य के विकास को सूचित करना और अवसाद के लिए मदद चाहने वाले लोगों के लिए कार्रवाई योग्य अंतर्दृष्टि प्रदान करना है।

टीसीएम हर्ब सप्लीमेंट्स प्रोस्टेटाइटिस के लक्षणों से कैसे राहत दिलाते हैं

सामग्री

 

पशु

अड़तालीस एसपीएफ़-ग्रेड स्वस्थ वयस्क नर स्प्रैग-डावले चूहे (8 सप्ताह पुराने, 200-220 ग्राम) बीजिंग विटन लिहुआ एक्सपेरिमेंटल एनिमल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे। [लाइसेंस संख्या: एससीएक्सके (बीजिंग) 2016-0006]। चूहों को 22 ± 2 डिग्री, सापेक्षिक आर्द्रता 35%-55%, 12 घंटे प्रकाश/12 घंटे अंधेरा (7:00-19:00), प्रति पिंजरे में चार चूहों, 7 दिनों के अनुकूलन के साथ गुइझोउ यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन की बैरियर पशु सुविधा में रखा गया था। नैतिकता अनुमोदन: टीसीएम की गुइझोऊ यूनिवर्सिटी (संख्या. 20210142)।

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बिक्री के लिए टीसीएम जड़ी बूटी की खुराक

सूची विवरण

 

 

 

ड्रग्स

ज़ियाओयाओसन फॉर्मूला ने ताइपिंग हुइमिन हेजी जू फैंग अनुपात का पालन किया। कच्ची जड़ी-बूटियाँ बीजिंग टोंगरेंटांग (बोझोउ) डेकोक्शन पीस कंपनी लिमिटेड से खरीदी गईं: बुप्लुरम (चाइहू), व्हाइट पेनी (बैशाओ), एंजेलिका साइनेंसिस (डांगगुई), स्टिर-फ्राइड एट्रैक्टिलोड्स (बैझू), पोरिया (फुलिंग), हनी-फ्राइड लिकोरिस (झिगानकाओ), मेंथा (बोहे), और ताजा अदरक (शेंगजियांग), के अनुपात में संयुक्त 5:5:5:5:5:4:1:5. काढ़ा और सांद्रण टीसीएम हस्तक्षेप के रूप में काम करते हुए, हुनान जिउझिटांग द्वारा पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना के फार्माकोपिया के 2020 संस्करण के अनुसार तैयार किया गया था। चूहों के लिए खुराकों को परिवर्तित किया गया, विआयनीकृत पानी में घोला गया और निलंबन के रूप में तैयार किया गया।

फ्लुओक्सेटीन हाइड्रोक्लोराइड कैप्सूल (पाथियन फ्रांस; एली लिली सूज़ौ फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड द्वारा पैक किया गया; बैच नंबर . 6663बी; 20 मिलीग्राम/कैप्सूल) का उपयोग संदर्भ अवसादरोधी के रूप में किया गया था।

अभिकर्मकों

ExTaq (TAKARA, बिल्ली. DRR100A); एसवाईबीआर ग्रीन/फ्लोरेसिन क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स (2×) (फेरमेंटस, कैट. #K0242); प्राइमर (किंगके बायो); रैट पीजीई2 और एसपी एलिसा किट (शंघाई युआनजू बायोटेक्नोलॉजी सेंटर, बिल्ली। CK-E30697 और CK-E30122)।

 

उपकरण

7900 वास्तविक समय प्रतिदीप्ति क्यूपीसीआर प्रणाली (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, यूएसए); माइक्रोपिपेट्स (एप्पेंडॉर्फ); पैराफिन माइक्रोटोम (HY1508, जिंहुआ हुइयौ); एक्वाप्रो अल्ट्राप्योर जल प्रणाली (AJY-0501, ऐकेपु)।

तरीकों

 

समूहीकरण और मॉडलिंग
चूहों को बेतरतीब ढंग से सामान्य, मॉडल, ज़ियाओयाओसन और फ्लुओक्सेटीन समूहों (n=12 प्रत्येक) को सौंपा गया था। सामान्य समूह को छोड़कर, सभी समूहों को 21 दिनों के लिए यादृच्छिक समय पर 3 घंटे/दिन के लिए सीआईएस से गुजरना पड़ा। सामान्य चूहों को नियंत्रित नहीं किया गया था, लेकिन उसी समय के दौरान उन्हें भोजन और पानी से वंचित रखा गया था।

 

औषध प्रशासन

पूर्व अध्ययनों के आधार पर, ज़ियाओयाओसन को गैवेज द्वारा 2.22 ग्राम क्रूड ड्रग·किग्रा−1·दिन−1 पर प्रशासित किया गया था; फ्लुओक्सेटीन 2.0 mg·kg−1·day−1 पर। दवाओं को विआयनीकृत पानी में घोल दिया गया था। खुराक की गणना शरीर की सतह क्षेत्र रूपांतरण द्वारा की गई थी; गैवेज की मात्रा 10 एमएल/किग्रा थी, जो प्रत्येक दैनिक संयम सत्र से 30 मिनट पहले दी गई थी। सामान्य और मॉडल समूहों को समान मात्रा में विआयनीकृत पानी प्राप्त हुआ।

 

परिणाम उपाय और प्रक्रियाएं

 

3.1 स्थूल अवलोकन

दैनिक अवलोकनों में मानसिक स्थिति, हरकत और सामान्य उपस्थिति दर्ज की गई।

 

3.2 सुक्रोज वरीयता परीक्षण

चूहों को 3 दिनों तक प्रशिक्षित किया गया। दिन 1: प्रति पिंजरा 1% सुक्रोज की दो बोतलें। दिन 2: एक बोतल को समान मात्रा में डबल-आसुत पानी से बदला गया। 24 घंटे के भोजन और पानी की कमी के बाद, प्रत्येक चूहे को 1 घंटे के लिए 1% सुक्रोज की एक बोतल और डबल-आसुत पानी की एक बोतल दी गई। सुक्रोज वरीयता (%) की गणना करने के लिए बोतलों का वजन किया गया: सुक्रोज सेवन / (सुक्रोज + पानी का सेवन) × 100%।

 

3.3 ओपन-फील्ड परीक्षण

एक शांत कमरे में एक काली दीवार वाले खुले मैदान (125 सेमी × 125 सेमी × 50 सेमी) का उपयोग किया गया था। चूहों को केंद्र में रखा गया था; 5 मिनट में, ऊर्ध्वाधर पालन गणना, क्षैतिज ग्रिड क्रॉसिंग और संवारने की घटनाओं को दर्ज किया गया। परीक्षणों के बीच मैदान को 75% इथेनॉल और पानी से साफ किया गया।

 

3.4 जबरन तैरना परीक्षण

चूहों को व्यक्तिगत रूप से 20 ± 2 डिग्री पर 35 सेमी पानी के साथ ग्लास सिलेंडर में रखा गया था। विसर्जन से, व्यवहार को उच्च-रिज़ॉल्यूशन वाले कैमरे से 5 मिनट तक रिकॉर्ड किया गया। 5 मिनट से अधिक की संचयी गतिहीनता का समय मापा गया (गतिहीनता को नाक को पानी से ऊपर रखने के लिए न्यूनतम गति, संतुलन के लिए शरीर का हल्का सा लचीलापन) के रूप में परिभाषित किया गया है। जानवरों के बीच पानी बदला जाता था।

3.5 हिस्टोपैथोलॉजी

चूहों को 3% सोडियम पेंटोबार्बिटल (0.15 एमएल/100 ग्राम) से बेहोश किया गया। प्रति समूह छह चूहों को 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड के साथ ट्रांसकार्डियल छिड़काव से गुजरना पड़ा, इसके बाद निर्धारण, सिर काटने और मस्तिष्क निष्कर्षण के लिए 0.9% खारा मिला। मस्तिष्क को 72 घंटे के लिए 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड (4 डिग्री) में डुबोया गया, पैराफिन-एम्बेडेड, ट्रिम किया गया, और ~5 माइक्रोन पर विभाजित किया गया। अनुभागों को 48 डिग्री पर तैराया गया, माउंट किया गया, 4 घंटे के लिए 60 डिग्री पर पकाया गया, डीपैराफिनाइज़ किया गया और पुनर्जलीकरण किया गया, हेमेटोक्सिलिन के साथ रंगा गया, विभेदित किया गया, धोया गया, ईओसिन के साथ प्रतिरंजित किया गया, निर्जलित किया गया, साफ किया गया और सूक्ष्म परीक्षण के लिए कवर किया गया। प्रति समूह शेष छह चूहों को इच्छामृत्यु दे दी गई; सेरेब्रल कॉर्टेक्स को तेजी से बर्फ पर विच्छेदित किया गया और आरएनए निष्कर्षण के लिए -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

 

3.6 एमआरएनए मात्रा का ठहराव

लक्ष्य अनुक्रम एनसीबीआई से प्राप्त किए गए थे और प्राइमर 6.0 के साथ प्राइमर डिजाइन किए गए थे।

शिविर: फॉरवर्ड 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; रिवर्स 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 बीपी.

CREB1: फॉरवर्ड 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; रिवर्स 5′-GGATACCTGGGCTAATGTGGCA-3′; 105 बी.पी.

GAPDH: फॉरवर्ड 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; रिवर्स 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 बीपी.

क्यूपीसीआर स्थितियाँ: 30 सेकंड के लिए पूर्व-विकृतीकरण 90 डिग्री; 95 डिग्री 10 सेकेंड, 60 डिग्री 30 सेकेंड, 72 डिग्री 30 सेकेंड के 45 चक्र। पिघल-वक्र विश्लेषण: 95 डिग्री 1 मिनट, 55 डिग्री 1 मिनट, 95 डिग्री 1 मिनट।

 

3.7 सीरम सूजन कारक

एलिसा के लिए: (i) मानक और नमूने निर्धारित करें; मानक कुओं में श्रेणीबद्ध सांद्रता पर 50 μL मानक जोड़ें; (ii) रिक्त और नमूना कुओं में 40 μL नमूना मंदक जोड़ें, फिर 10 μL नमूना और मिश्रण; (iii) रिक्त स्थान को छोड़कर सभी में 100 μL एंजाइम संयुग्म जोड़ें; (iv) सील करें और 1 घंटे के लिए 37 डिग्री पर सेते रहें; (v) पतला सांद्रित वॉश बफर 1:20; (vi) 5 बार धोएं और थपथपाकर सुखाएं; (vii) 50 μL सब्सट्रेट ए और फिर 50 μL सब्सट्रेट बी जोड़ें, 15 मिनट के लिए प्रकाश से संरक्षित 37 डिग्री पर सेते हैं; (viii) स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ें; (ix) रिक्त स्थान को शून्य पर सेट करके 450 एनएम पर अवशोषण पढ़ें।

 

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा का विश्लेषण एसपीएसएस 26.0 में किया गया और माध्य ± एसडी के रूप में व्यक्त किया गया। भिन्नता की सामान्यता और एकरूपता की पुष्टि करने के बाद, एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। पी <0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

अभ्यासकर्ताओं और सहायता चाहने वाले लोगों के लिए पाठक का नोट

वनस्पति/टीसीएम एंटीडिपेंटेंट्स के डेवलपर्स के लिए: अध्ययन एक शास्त्रीय सूत्र को एक विशिष्ट न्यूरोबायोलॉजिकल मार्ग (सीएएमपी-सीआरईबी) और सूजन मध्यस्थों (पीजीई2, एसपी) से जोड़ता है। इस तरह के दोहरे मॉड्यूलेशन-न्यूरोप्लास्टी सिग्नलिंग प्लस सूजन-समकालीन अवसाद जीव विज्ञान के साथ संरेखित होते हैं और फ्लुओक्सेटीन जैसे एसएसआरआई के साथ फॉर्मूला अनुकूलन, बायोमार्कर चयन और संयोजन रणनीतियों का मार्गदर्शन कर सकते हैं।

अवसाद के लिए सहायता तलाशने वाले व्यक्तियों के लिए: प्रीक्लिनिकल परिणाम चिकित्सा देखभाल की जगह नहीं ले सकते हैं, लेकिन उनका सुझाव है कि ज़ियाओओसन मस्तिष्क सिग्नलिंग को सामान्य करके और सूजन संबंधी संकेतों को कम करके अवसादग्रस्त व्यवहार में सुधार कर सकता है। यदि आप हर्बल विकल्पों पर विचार करते हैं, तो बातचीत से बचने और खुराक और गुणवत्ता नियंत्रण सुनिश्चित करने के लिए एक योग्य चिकित्सक से परामर्श लें, खासकर यदि आप अवसादरोधी दवाएं ले रहे हैं।

 

संक्रमणकालीन टेकअवे

ज़ियाओयाओसन ने सीआईएस-प्रेरित अवसादग्रस्त चूहों में व्यवहार, मस्तिष्क ऊतक विज्ञान और आणविक मार्करों में सुधार किया, संभवतः परिधीय पीजीई2 और एसपी को कम करते हुए कॉर्टिकल सीएमपी/सीआरईबी सिग्नलिंग को अपग्रेड करके। इस पर आधारित, अगला अध्ययन सीएमपी के अपस्ट्रीम नियामकों (उदाहरण के लिए, एडेनिल साइक्लेज आइसोफोर्म और फॉस्फोडिएस्टरेज़) को विच्छेदित करेगा और यह निर्धारित करेगा कि क्या ज़ियाओओसन सीधे इन लक्ष्यों को नियंत्रित करता है या मुख्य रूप से सीआरईबी पर परिवर्तित होने वाले विरोधी भड़काऊ मार्गों के माध्यम से कार्य करता है।